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PCNA、E2F-1、RASSF1A蛋白表达与胃癌生物学关系研究
目的：本研究旨在探讨PCNA、E2F-1、RASSF1A在胃癌组织中的表达情况及其临床意义。方法：采用免疫组化技术( SP法)检测60例胃癌组织及正常胃黏膜中PCNA、E2F-1、RASSF1A蛋白的表达情况。结果：胃癌组织中PCNA蛋白的阳性表达率为80.0%，正常胃黏膜组织中为20.0%，两组比较具有统计学意义( P<0.01)；PCNA蛋白的表达与分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关( P<0.05)。胃癌组织中E2F-1阳性表达率为73.3%，正常胃黏膜中为8.3%，两者比较有显著性差异( P<0.01)；E2F-1在癌组织中的表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移及肿瘤浸润深度无相关性(P>0.05)。RASSF1A在胃癌中的阳性表达率为40.0%，在癌旁正常黏膜中为100.0%，两者比较差异显著( P<0.01)；RASSF1A在癌组织中的表达与胃癌分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度及TNM分期具有相关性( P<0.05)。结论：PCNA、E2F-1、RASSF1A在胃癌细胞中异常表达，共同参与了胃癌的发生发展。
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慢病毒介导E2F-1基因过表达抑制人胃癌MGC-803细胞增殖的分子机制
目的 探索E2F-1基因过表达抑制人胃癌MGC-803细胞增殖的分子机制.方法 用携带E2F-1基因的重组慢病毒颗粒(LV-E2F-1-GFP)感染人胃癌MGC-803细胞,作为实验组(LV-E2F-1-GFP组);以对照慢病毒颗粒(LV-GFP)感染人胃癌MGC-803细胞,作为阴性对照组(LV-GFP组);空白对照组常规培养,不做任何处理.用RT-PCR和Western blot技术检测细胞中Skp2、Bax、Bcl-2和survivin基因的表达.结果 与LV-GFP组和空白对照组比较,LV-E2F-1-GFP组人胃癌MGC-803细胞Skp2、Bcl-2和survivin基因的mRNA和蛋白的表达降低(P＜0.05),Bax基因的mRNA和蛋白的表达上调(P＜0.05).结论 慢病毒介导E2F-1基因过表达可能通过降低Skp2、survivin、Bcl-2 基因表达和上调Bax基因表达来抑制人胃癌MGC-803细胞增殖.
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E2F-1诱导细胞凋亡研究进展
E2Fs转录因子具有调控细胞增殖、分化和凋亡相关基因转录的重要作用.迄今为止,在哺乳动物中已确定的E2F转录因子家族成员有7个,即E2F-1、E2F-2、E2F-3、E2F-4、E2F-5、E2F-6和E2F-7,每个E2F家族成员都有特定的功能.近年来,许多研究表明E2F-1具有特异性地诱导细胞凋亡的功能,其诱导凋亡作用与P53、P73、APAF-1、CASPASE-3、CASPASE-7、BCL-2家族、DIP、SIVA和NF-κB等因子有关.根据诱导细胞凋亡是否依赖于P53,E2F-1诱导凋亡机制分为P53依赖性和P53非依赖性方式.因此,E2F-1已成为肿瘤基因治疗的新靶点.
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E2F-1蛋白在大鼠泌乳素瘤中的表达
目的 通过检测腺病毒F2启动子结合因子1(E2F-1)在大鼠泌乳素(PRL)瘤中的表达来探讨E2F-1在PRL瘤发生发展过程中的作用.方法 用皮下植入17β-雌二醇的方法诱发大鼠PRL瘤;免疫组化SP方法检测两组大鼠E2F-1蛋白的表达.结果 雌二醇作用10周后,据垂体重量、垂体组织学变化和血清PRL水平证实PRL瘤诱导成功.PRL瘤组中,E2F-1蛋白明显高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 E2F-1在大鼠PRL瘤中呈现高表达,提示E2F-1的高表达促进了大鼠PRL瘤的发生发展.
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MCM5和E2F-1在脑胶质瘤中的表达及其临床病理意义
目的 探讨MCM5和E2F-1在脑胶质瘤中的表达及其与病理分级的关系.方法 选取手术切除的脑胶质瘤组织43例(其中高分化20例,低分化23例)及正常脑组织10例,应用免疫组织化学SP法检测各组织中MCM5和E2F-1的表达,并分析其表达情况.结果 MCM5和E2F-1在正常脑组织中均呈阴性表达;MCM5在胶质瘤高分化组中阳性表达率为55.0％,在低分化组中阳性表达率为86.9％,两组差异有统计学意义(P＜0.05);E2F-1在胶质瘤高分化组中阳性表达率为50.0％,在低分化组中阳性表达率为82.6％,两组差异有统计学意义(P＜0.05);MCM5和E2F-1在胶质瘤组织中的表达呈正相关(rs=0.247,P＜0.05).结论 MCM5和E2F-1在胶质瘤中呈阳性表达,且分化程度越低表达越强,说明二者参与了胶质瘤的发生、发展及侵袭过程;可作为判断胶质瘤恶性程度的一种生物学标志物.
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E2F-1基因过表达对胃癌细胞动力学影响机制
目的:了解E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖、生长和细胞周期的影响,并探讨E2F-1对胃癌细胞动力学影响的分子机制.方法:对稳定转染E2F-1的胃癌MGC-803/E2F-1细胞(实验组)、转染空载体的MGC-803/EV(阴性对照组)及未转染的MGC-803细胞进行MTT法检测,绘制生长曲线和计算细胞增殖率; 流式细胞仪检测各组细胞周期分布.提取各组细胞的总RNA,逆转录成cDNA,用荧光探针与含有21 522条人类基因表达谱芯片进行杂交.采用LuxScan 10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,应用LuxScan 3.0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析.结果:与两个对照组相比,胃癌MGC-803/E2F-1细胞的生长受到明显抑制,增殖率下降(26.61%±5.19% vs 93.4%±10.29%,100%±0.00%,均P <0.05); 细胞周期阻滞在G0/G1期.在检测的21 522条基因中,与细胞增殖、生长和细胞周期相关的差异性表达基因有20条,上调基因9条,下调基因11条.结论:E2F-1基因过表达抑制胃癌细胞的增殖和生长,细胞周期停滞在G0/G1期,其分子机制可能与筛选出来的20条差异表达基因有直接的关系.
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慢病毒介导的E2F-1沉默对人胃癌细胞MGC803中药人参黄芪复方药物敏感性的影响
目的:利用重组慢病毒介导的E2F-1基因沉默载体感染人胃癌MGC-803细胞,观察其对中药人参黄芪复方药物敏感性的影响.方法:将胃癌MGC-803细胞接种于培养板中分为4组:正常组(正常培养基)、空白对照组(中药培养基)、阴性对照LV-RNAi组(中药培养基+感染空载体慢病毒颗粒2.0×109 TU/mL)、E2F-1-RNAi-LV组(中药培养基+感染E2F-1基因重组慢病毒颗粒2.0×109 TU/mL),分别采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测E2F-1 mRNA及蛋白表达；MTT方法检测细胞的增殖抑制率；Giemsa染色检测细胞的克隆形成;流式细胞仪检测细胞的凋亡;细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果:E2F-1基因沉默蛋白及mRNA表达水平均明显下降,差异有统计学意义(0.384±0.036vs 0.883±0.051和0.923±0.049,0.220±0.056vs 0.729±0.021和0.712±0.037,P＜0.05).中药人参黄芪复方能抑制人胃癌MGC-803细胞生长、诱导胃癌细胞凋亡、抑制细胞克隆形成及迁移；与空白对照组及阴性对照组相比较,E2F-1基因沉默组MGC-803细胞增殖抑制率、细胞凋亡率显著提高,其细胞克隆形成、细胞迁移面积显著降低,差异均有统计学意义(0.789±0.013 vs 0.484±0.060和0.454±0.006,0.383±0.027 vs 0.114±0.038和0.089±0.051,0.024±0.003 vs 0.036±0.004和0.052±0.002,0.553±0.038 vs 0.897±0.020和0.928±0.051,P＜0.05).结论:重组慢病毒载体介导的E2F-1基因沉默能有效增强中药人参黄芪复方对人胃癌MGC-803细胞的药物敏感性.
关键词： 中药人参黄芪复方 E2F-1 人胃癌MGC803细胞 药物敏感性 -
E2F-1蛋白在肺鳞状细胞癌及腺癌中的表达及临床病理学意义
目的:研究E2F-1蛋白在肺鳞状细胞癌及腺癌中的表达情况,探讨其在肺癌发生发展中的作用机制及其与临床病理学特征问的关系.方法:应用免疫组化ElivisionTM super二步法检测71例肺鳞状细胞癌、腺癌及相应癌旁组织中E2F-1蛋白的表达情况.结果:肺鳞状细胞癌及腺癌组织中E2F-1蛋白的阳性表达率为83.1%(59/71),显著高于癌旁组织中的8.5%(6/71)(P<0.05);E2F-1蛋白表达随癌组织分化程度的减低有升高的趋势,在肺腺癌组织中(91.4%)的表达虽高于鳞状细胞癌中的表达(75.O%),但与组织分化、组织类型差异均无统计学意义,且与患者年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移及TNM分期等差异无统计学意义(P>0.05).结论:E2F-1的过表达与肺鳞状细胞癌及腺癌的发生发展密切相关.
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转录因子E2F-1的研究进展
目的:总结国内外关于E2F-1在细胞增殖、凋亡及其在肿瘤中的作用的研究进展.方法:应用Medline及CNKI期刊全文数据库系统,以"E2F-1、细胞增殖、凋亡及肿瘤为关键词,检索1999-01-2009-12的相关文献,共检索英文文献1453篇、中文文献29篇.纳入标准:1)E2F-1的来源和分子结构特征;2)E2F-1与细胞周期的关系;3)E2F-1和细胞增殖的关系;4)E2F-1和凋亡的关系;5)E2F-1和肿瘤的关系.根据纳入标准,附合分析条件的文献有52篇,后纳入分析33篇.结果:E2F-1是细胞周期调节的关键因子,具有调节细胞增殖和凋亡的双重作用,在肿瘤中表现出抑癌基因和癌基因的功能.结论:E2F-1可能是抗肿瘤研究的靶点.
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E2F-1对胃癌细胞侵袭转移影响的观察
目的:探讨E2F-1对人胃癌细胞MGC-803生物学行为的影响.方法:利用脂质体将pCMV-E2F-1-HA质粒和pCMV-HA质粒分别转染人胃癌细胞MGC-803,应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测MOC-803细胞中E2F-1基因的表达;应用体外侵袭实验、迁移实验、细胞基质黏附实验和克隆实验分别检测E2F-1对胃癌细胞MGC-803的侵袭力、迁移力、黏附能力和增殖力的影响.结果:转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞检测到E2F-1的表达;转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞的侵袭力、迁移能力和增殖力较转染pCMV-HA质粒的MGC-803细胞和未转染的MGC-803细胞明显降低(P<0.05),细胞黏附能力未见明显变化,P=0.072.结论:E2F-1高表达对人胃癌细胞MGC-803的生物学特性有较大的影响,具有抑制其侵袭转移的作用.
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p14ARF蛋白及E2F-1蛋白在肺鳞癌组织中的表达及意义
目的 检测肺鳞癌组织中P14arf蛋白及E2F-1蛋白的表达,探讨二者在肺鳞癌发生和发展中的作用及临床应用价值.方法 采用免疫组织化学方法检测56例肺鳞癌组织和13例对照组(来自于肺炎标本)中P14arf蛋白和E2F-1蛋白的表达.结果 ①在肺鳞癌和对照组中P14arf蛋白表达的阳性率分别为41.1%和76.9%,肺鳞癌组远低于对照组,差异有显著性(χ2＝5.435,P=0.020).②E2F-1蛋白在肺鳞癌和对照组中阳性表达率分别为55.4%和7.7%,肺鳞癌组远高于对照组,差异有显著性(χ2＝9.639,P=0.002).E2F-1蛋白在肺鳞癌组织中阳性表达率随组织分化程度的降低而升高;在淋巴结已转移组的阳性表达率显著高于淋巴结未转移组,差异有显著性(χ2＝5.396,P=0.020).③ P14arf蛋白和E2F-1蛋白表达呈负相关(rs=-0.359, P<0.05).结论 P14arf蛋白和E2F-1蛋白的表达异常可能与肺鳞癌的发生发展有关,P14arf蛋白和E2F-1蛋白的联合检测可能为诊断肺鳞癌以及临床判断组织恶性程度提供参考.
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胃癌中E2F-1的表达及其临床意义
目的探讨胃癌中E2F-1的表达及其临床意义.方法采用免疫组化技术对49例人原发性胃癌癌组织与癌旁正常黏膜中E2F-1的表达进行检测,通过统计学方法分析其表达情况以及与肿瘤分期、病理分型、淋巴结转移、侵袭深度之间的相互关系.结果 E2F-1在癌组织与癌旁正常黏膜中的阳性表达率分别为79.6%(39/49)和26.5%(13/49),差异有显著性(P<0.001).癌组织、癌旁正常黏膜中E2F-1的表达在不同的临床病理特征之间差异无显著性(P>0.05).结论胃癌中E2F-1超表达和反常表达与胃癌的发生有关.
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子宫腺肌病组织中Bcl-2、E2F-1蛋白的表达及其意义
目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-2、转录因子E2F-1在子宫腺肌病发生发展中的作用.方法 用免疫组化技术(SP法)检测58例子宫腺肌病组织和30例正常子宫内膜组织中Bcl-2、E2F-1蛋白的表达情况.结果 子宫腺肌病组织中Bcl-2、E2F-1蛋白的表达较正常子宫内膜组织均明显增加,两组比较有显著性差异(P＜0.05).异位内膜组与在位内膜组间Bcl-2、E2F-1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 子宫腺肌病组织中Bcl-2和E2F-1的过度表达与异位内膜组织的过度增生有关.提示Bel-2和E2F-1参与了子宫腺肌病的发生发展.
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E2F-1基因对HepG2肝癌细胞增殖影响的研究
目的 了解转录因子E2F-1对肝癌细胞HepG2增殖的影响.方法脂质体LipofectamineTM 2000将pCMV-E2F-1-HA2载体转染HepG2肝癌细胞,然后用含G418的培养液筛选获得具有Genectin抗性的过表达E2F-1的肝癌细胞株.通过MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖的变化.结果 MTT和克隆形成实验结果显示,过表达E2F-1的HepG2/E2F-1细胞组与HepG2/EV细胞组和HepG2细胞组相比,其增殖速度明显减慢(P<0.01).结论 E2F-1基因过表达可抑制HepG2肝癌细胞的增殖.
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Bax和E2F-1在子宫腺肌病中的表达及意义
目的:研究在子宫腺肌病发生过程中凋亡调节蛋白Bax及转录因子E2F-1的病理生理作用.方法:运用免疫组化技术(SP法)检测子宫腺肌病组织(72例)和正常子宫内膜组织(55例)中Bax及E2F-1的表达情况.结果:Bax及E2F-1的表达在子宫腺肌病组织中均明显高于正常子宫内膜组织,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);而子宫腺肌病异位内膜组与原位内膜组比较,Bax及E2F-1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:Bax及E2F-1的持续表达与子宫腺肌病组织中异位内膜的过度增殖有关,提示其与子宫腺肌病的发生及发展有密切关系.
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转录因子E2F-1与垂体肿瘤转化基因(PTTG)在大鼠PRL瘤中的表达
目的 通过检测垂体肿瘤转化基因(PTTG)与腺病毒E2启动子结合因子1(E2F-1)在大鼠催乳素(PRL)瘤中的表达来探讨两者在PRL瘤发生发展过程中的作用.方法 40只大鼠随机分为两组:实验组(E组,n=20):皮下植入17β-雌二醇的方法诱发大鼠PRL瘤;对照组(C组,n=20):皮下植入空白硅胶管.雌激素诱导10周后处死大鼠,心脏穿刺取血,4%多聚甲醛体内灌流取出脑垂体,称重,ELISA方法检测两组大鼠血清PRL水平,垂体组织行病理组织学观察,免疫组化SP方法检测两组大鼠垂体组织中PTTG蛋白质、E2 F-1蛋白质的表达.结果 雌二醇作用10周后,据垂体重量、垂体组织学变化和血清PRL水平证实PRL瘤诱导成功.PRL瘤组中,PTTG蛋白质、E2F-1蛋白质均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P <0.01);且PTTG蛋白质和E2F-1蛋白质的表达呈明显正相关(γ=0.764,P<0.01).结论 PTTG与 E2F-1在大鼠PRL瘤中共同过度表达,参与了大鼠PRL瘤的发生发展.
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云南个旧及宣威地区肺癌p14ARF和E2F-1水平的改变
目的 探讨阅读框架基因p14ARF和核转录因子E2F-1在云南个旧地区矿工肺癌,宣威地区农民肺癌组织中的表达及相互关系,寻找肺癌早期诊断特异性标记物及为治疗提供实验依据.方法 采用免疫组化S-P法,检测30例个旧地区矿工肺癌和30例宣威地区农民肺癌及20例正常肺组织中p14ARF和E2F-1蛋白的表达;采用原位分子杂交方法 随机检测上述标本中25例个旧地区矿工肺癌、25例宣威地区肺癌及10例正常肺组织中E2F-1mRNA的表达.两种检测结果 应用HPIAS-100计算机图文分析系统进行定量分析.结果 个旧和宣威地区肺癌组织的p14ARF蛋白表达明显低于正常肺组织,而E2F-1蛋白表达和mRNA表达均明显高于正常肺组织.p14ARF和E2F-1蛋白表达的阳性单位在个旧肺癌组为16.44+4.85和47.39～5.43,宣威肺癌组为16.79～3.55和48.15～9.11,与正常肺组织组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).个旧肺癌组E2F-1mRNA表达的阳性单位为48.58～7.75,宣威肺癌组为49.41～8.53,明显高于正常肺组织组,差异有统计学意义(P<0.01).在个旧、宣威肺癌组和正常肺组织组中,E2F-1mRNA和E2F-1蛋白表达的阳性单位呈正相关(r=0.833,P<0.01),p14ARF和E2F-1蛋白表达的阳性单位呈负相关(r=-0.830,P<0.01).结论 个旧和宣威两地区肺癌组织中存在E2F-1基因的表达上调和p14ARF基因的表达下调.
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E2F-1基因过表达影响胃癌MGC-803细胞对化疗药物敏感性的研究
目的:构建E2F-1真核表达载体,建立稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株,探讨E2F-1基因过表达对胃癌MGC-803细胞化疗敏感性的影响.方法:应用Trizoi法从胃癌的癌组织中提取mRNA逆转录合成cDNA,按Gene-Bank公布的E2F-1基因序列设计带有酶切位点的引物并行扩增获得E2F一1的ORF片段;然后经限制性内切酶EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选.用脂质体Lipofectamine2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株.实时定量PCR(real-timequantitative PCR)和蛋白印迹(Western blotting)技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况.四唑蓝(MTT)法检测MGC-803/E2F-1组(实验组)、MGC-803/EV组(阴性对照组)和MGC-803组(未转染组)细胞对化疗药物的敏感性.结果:重组载体pCMV-E2F-1-HA2经EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的E2F-1基因之ORF完全一致.证明目的基因已成功克隆入真核表达载体,获取具Genectin抗性的细胞克隆,并进行了扩增.RT-PCR和Westernblotting实验证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1.MTT法检测发现,5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)对MGC-803/E2F-1组细胞的抑制率分别为71.45%、74.03%、76.72%,均明显高于MGC-803/EV组(45.58%、53.69%、54.58%)和MGC-803组(53.70%、54.67%、55.05%)(P<0.05).结论:成功构建了真核表达载体pCMV-E2F-1-HA2,并建立了稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株MGC-803/E2F-1.E2F-1过表达增强了胃癌细胞对化疗药物的敏感性.
关键词： E2F-1 转染 MGC-803胃癌细胞 药敏试验 -
E2F-1在胃癌组织中的突变表达及其意义
E2F-1是细胞周期相关性转录因子E2F家族八个成员之一,在细胞周期进展过程中具有重要的调节作用.有文献报道E2F-1在转基因动物的角质形成细胞中可引起成纤维母细胞转化为肿瘤细胞[1],林福地等[2]发现随着肺癌分期的提高E2F-1表达也增高.本实验采用PCR-SSCP和免疫组织化学法,观察E2F-1在胃癌中的基因突变、表达情况,分析E2F-1在胃癌发生发展中的可能作用.
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子宫内膜癌中E2F-1和Survivin的表达及相关性
目的 检测子宫内膜癌组织中E2F-1和Survivin的表达情况并探讨其意义.方法 采用免疫组织化学S-P法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中E2F-1和Survivin的表达.结果 子宫内膜癌组织中E2F-1和Survivin阳性表达率分别为58%(35/60)和55%(33/60),明显高于正常子宫内膜组织0、0(P均＜0.05).两者的表达与肌层浸润程度、淋巴结转移、临床分期及病理分期有关 (P均＜0.05);在子宫内膜癌组织中E2F-1表达和Survivin两者之间表达呈正相关(P＜0.05).结论 E2F-1和Survivin在子宫内膜癌呈高表达,且与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关.
