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肝细胞癌中磷酸化p27kip1与JAB1的表达及意义
p27kip1(p27)是重要的细胞周期负性调控因子,其蛋白表达水平和亚细胞分布改变与肝细胞癌的发生密切相关[1-2].在肿瘤细胞中存在多种转录后途径抑制p27蛋白的表达,磷酸化是重要的途径之一[3].
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小鼠高低转移性肝癌细胞系基因组不稳定性的研究
肝细胞癌(HCC)的发生和发展过程中涉及染色体杂合性丢失(loss of heterozygosity, LOH)和微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI)、染色体转位、点突变和基因扩增等多步遗传改变[1,2].近交系小鼠由于其具有高度的遗传学稳定性、表型均一性,所有等位基因均为纯合性等特点,为研究肿瘤不同阶段分子遗传学的可比性、可重复性和准确性提供了保证.为此我们应用微卫星多态性标记对小鼠高低转移性肝癌细胞系的基因组不稳定性进行了研究.
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提高组织芯片切片成功率的方法和体会
Kononen等[1]于1998年创立了真正意义的组织芯片或称组织微阵列(tissue microarry,TMA)技术,将直径0.6 mm的乳腺癌小组织样本,以阵列方式包埋于同一块20 mm×45 mm的石蜡块中,然后进行切片,用于同一实验指标的研究.而由此产生的蜡块切片可同时用于DNA、RNA或蛋白水平的原位组织学研究,使基因、蛋白水平的研究与组织形态学特征相结合.目前已应用到肿瘤的进展、预后、早期诊断以及与cDNA基因芯片相结合,进行高表达基因的定位研究,研究报道的有乳腺癌[1-3]、前列腺癌[4-6]、脑肿瘤[7]、肾癌[8]以及膀胱癌[9].我们教研室已成功构建肝细胞癌、胰腺癌和各种混合性肿瘤的芯片,并进行HE和免疫组织化学十几种抗体的检测.我们在本文将重点介绍组织芯片构建的原则,怎样提高TMA的切片成功率,包括切片石蜡的改进、切片过程中应注意的问题等.
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肝细胞癌少见类型介绍
肝原发性肿瘤的病理类型有100余种以上,以肝细胞癌(HCC)为常见[1].HCC常见的组织学类型有梁索型、假腺管型、实体型和硬化型等.但近年来由于肝细胞特异性抗体Hep Par 1的面世,以及对CD34和细胞角蛋白(CK)19等标志物组合使用水平的提高,使得许多少见形态的HCC得以明确诊断[2,3],而这些少见组织和细胞类型的HCC与肝其他原发性和继发性肿瘤的鉴别诊断是日常病理外检工作中经常遇到的实际问题[1,4].结合我们的一些工作体会,以下简述少见类型HCC的病理诊断及鉴别诊断.
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CD34在肝细胞癌血窦中的表达以及微血管密度与预后的关系
一、材料和方法1.标本来源:HCC 31例,男29例,女2例;HCC 伴慢性胆囊炎14例,男9例,女5例;肝细胞癌伴结节性肝硬化24例,男22例,女2例;HCC伴结节性肝硬化、慢性胆囊炎23例,男21例,女2例.标本分别取自第三军医大学附属西南医院,华西医科大学附属一院.局灶性结节状增生30例,男26例,女4例;再生性结节状增生27例,男19例,女8例,肝细胞不典型增生36例,男30例,女6例.标本取自第四军医大学西京医院和唐都医院,标本均经常规石蜡包埋,4 μm连续切片.
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HBV相关性肝细胞癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数差异分析
目的 分析慢性乙型肝炎相关性肝细胞癌(HCC)患者肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数差异.方法 利用Taqman real-time PCR检测27例肝细胞癌患者肝癌切除术后石蜡包埋肝癌组织和癌旁组织PDCD1基因(PDCD1)拷贝数.结果 肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数之间无显著差异(P>0.05);肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数与术前AFP水平无显著相关性(P>0.05);肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数与肿瘤组织恶性程度无显著相关性(P>0.05).结论 PD1在肿瘤免疫逃逸反应中起作用,但肝癌组织及癌旁组织中其基因PDCD1的拷贝数变异并不是影响慢性乙型肝炎相关性肝细胞癌发生发展的因素.
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干扰素敏感决定区在干扰素治疗丙型肝炎病毒感染中的意义
据国内外报道,丙型肝炎病毒(HCV)感染率为0.5%~4%,其中约80%发生慢性化,经20年以上形成肝硬化或肝细胞癌(HCC),预后恶劣[1]。α-干扰素(IFN-α)是目前唯一公认对HCV感染有效的药物。但HCV感染病人对IFN-α治疗反应不一,平均应答率不足50%,且停药后复发率较高。目前认为耐药原因在于:①治疗前HCV RNA呈现高滴度;②HCV作为一种RNA病毒,其RNA聚合酶缺乏校正功能,易形成基因突变,甚至在同一宿主体内形成多个准种(quasispecies),在IFN选择性压力下,优势株消长变化,影响了干扰素的治
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乙肝成体转基因小鼠模型的建立及应用
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属于嗜肝DNA病毒科,其感染可导致人类急慢性肝炎,尽管预防性乙肝疫苗的广泛接种,极大的降低了HBV感染的发病率,但由慢性乙型肝炎及其导致的肝硬化和肝细胞癌等仍严重危害人类的健康[1].
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聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性乙肝25例分析
聚乙二醇α-2a干扰素作为抗病毒的主要药物之一,具有清除和抑制乙型肝炎病毒(HBV)、减轻肝脏炎症、阻止肝纤维化的发生与发展、预防肝细胞癌的发生,我科于2004年8月至2006年2月使用聚乙二醇干扰素α-2a治疗CHB25例,观察其疗效及不良反应,现报道如下.
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加强HBV相关肝细胞肝癌的基础及临床研究
肝细胞癌( hepatocellular carcinoma,HCC)是危害人类健康的重要恶性肿瘤之一,全球发病率和死亡率逐年增长,发病率居于恶性肿瘤的第5位,死亡率位居第3位.全球每年大约有60万例新增患者,并有超过50万例患者死于肝细胞癌.肝细胞癌的发生和发展是多因素、多步骤的演变过程.HBV感染已被公认是HCC发病主要的危险因素之一,与正常人群相比,HBV感染者尤其是慢性感染者患HCC的相对危险度升高100多倍.抗病毒药物的广泛应用,在某种程度上大大降低了HCC的发生率,但即使在代偿性肝硬化患者进行抗病毒治疗3年后,仍有3.7%患者进展为HCC.因此,对此深入开展基础及临床研究对该疾病的预防和治疗有着重要意义.
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丙型肝炎患者干扰素治疗前血清HCV RNA水平对疗效的影响
丙型肝炎(丙肝)是由丙型肝炎病毒(HCV)感染机体后引起的肝脏炎症,约85%的急性丙肝可转变为慢性肝炎,20%演变为肝硬化,1%~5%发展为肝细胞癌.
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IL-37在慢性乙型肝炎中表达水平与HBeAg血清学转换关系的研究
乙型肝炎病毒( HBV )感染是一个全球关注的健康问题,每年约有100万多人死于肝炎病毒感染所致的肝硬化和肝细胞癌。 IL-37在慢性乙型肝炎( CHB)中的表达水平及所起的作用,目前尚无相关报道。本研究旨在通过检测IL-37在HBeAg阳性的CHB患者外周血中的表达水平,分析其与HBeAg血清学转换的关系,并观察与ALT、HBV DNA、IL-6、CRP临床指标的相关性。
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AFP增强型四元复合体介导N-ras反义RNA抑制HepG2.2.15细胞成瘤性的研究
目的观察AFP增强型四元复合体介导的N-ras反义RNA转移系统对HBV转基因肝癌细胞系HepG2.2.15致瘤性的体内外抑制作用.方法构建含有N-ras反义RNA的AFP增强型四元复合体,体外瞬时转染HBV转基因HepG2.2.15细胞,流式细胞术检测转染前后N-ras蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞周期的变化,同时建立稳定表达N-ras反义RNA的肝癌细胞系HepG2.2.15/as-ras,绘制转染前后生长曲线.体内抑瘤试验分别以HepG2.2.15或HepG2.2.15/as-ras细胞制备荷瘤裸鼠模型,比较二者成瘤率.HepG2.2.15成瘤组局部瘤内注射N-ras反义RNA四元复合体,研究其对肿瘤的抑制作用.结果 AFP增强型四元复合体介导N-ras反义RNA体外瞬时转染HepG2.2.15细胞可显著降低胞内N-ras蛋白的表达水平(P<0.05),使细胞生长停滞于G0/G1期,且可诱导细胞凋亡.体内抑瘤实验显示,HepG2.2.15/as-ras细胞注射组成瘤率(40%)显著低于HepG2.2.15细胞注射组(100%).瘤内注射N-ras反义RNA四元复合体可使肿瘤体积明显缩小.结论 AFP增强型四元复合体介导的N-ras反义RNA转移系统可降低HBV转基因肝癌细胞HepG2.2.15 N-ras蛋白的表达水平,逆转其恶性行为,体内外均可有效抑制肿瘤的生长增殖.
关键词: 肝细胞癌 N-ras癌基因 反义RNA AFP增强型四元复合体 肝癌靶向性 -
HBV整合的致癌性研究
HBV的4个亚基因产物中,HBx具有反式激活、介导细胞凋亡作用,HBs具有反式激活因子的作用.肝细胞癌(HCC)的发生与HBV的整合及整合后染色体重排有关.为探讨HBV整合及HBx、HBs亚基因在HCC发生中的可能作用,我们制备了HBV亚基因探针,并以此对肝细胞癌中HBV整合及亚基因转录进行了研究,以期为阐明HBV感染后HCC发生机制提供一定的实验资料和依据.
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丙型肝炎病毒核心蛋白在HepG2细胞中的表达及其对端粒酶活性的影响
目的建立HCV核心蛋白细胞表达模型,并探讨其对细胞端粒酶活性的影响. 方法用PCR法扩增出HCV核心基因cDNA,将其插入真核表达载体pBK-CMV的HindⅢ和BamHⅠ位点间,构建重组质粒pBK-HCVc.再将重组质粒pBK-HCVc和空载体分别导入肝癌细胞株HepG2中,G418筛选,RT-PCR、免疫组化和蛋白印迹鉴定HCV核心蛋白表达.PCR-ELISA法检测端粒酶活性. 结果构建的pBK-HCVc质粒在HepG2细胞中有稳定表达.表达HCV核心蛋白的细胞HepG2-C的端粒酶活性较转染空载体的细胞HepG2-CMV明显升高. 结论 HCV核心蛋白上调了端粒酶活性,可能是HCV诱发肝细胞癌的一种途径.
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Th1/Th2细胞相关因子对肝癌家族聚集性的影响研究
目的 探讨机体Th1/Th2细胞相关因子及免疫状态在肝癌发生及家族聚集性中的作用.方法 以IFN-γ和IL-2代表Th1类细胞因子,IL-4和IL-10代表Th2类细胞因子,利用酶联免疫吸附试验检测95对经配对设计的肝癌高发家族成员和无癌家族成员外周血IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10的水平.结果 肝癌高发家族成员中肝癌患者的Th1细胞因子水平显著高于无癌家族成员,Th2细胞因子水平显著低于无癌家族成员(P<0.05);肝癌高发家族中未患肝癌的家族成员,Th1/Th2细胞相关因子与无癌家族成员相比无明显差异(P>0.05).结论 肝癌高发家族中的肝癌患者存在Th1/Th2平衡失调,向Th2方向漂移,抗乙型肝炎病毒(HBV)感染及抗肿瘤免疫功能低下导致HBV长期慢性感染,进而引起肝癌,在HBV感染家族聚集的基础上发生肝癌的家族聚集.肝癌高发家族中未患肝癌的成员Th1/Th2细胞因子水平无明显变化.推测肝癌的免疫功能异常是肝细胞癌变后逐渐形成的,而不是癌变前存在的免疫异常导致了癌变.
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丙型肝炎疫苗研究的挑战与希望
丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)引起的慢性传染性疾病.我国HCV人群感染率约3.2%,估计全国受感染者在4000万以上.据报道,全球约有HCV感染者1.7亿~2.0亿.在多数西方国家HCV感染已成为引起慢性肝炎的常见病毒,也是引起终末期肝炎的主要病原.针对HCV,目前还没有特异有效的治疗方法,干扰素是目前有一定疗效的制剂,近来使用Peg化的干扰素(Pegylated Interferon)可以延长作用时间,并多和Ribavirin[1]合用以提高疗效,但仍有很高的复发率[2].因此感染者中绝大部分(70%~85%)可发展成慢性感染,病程可达20~30年,约有20%可发展成肝硬化,其中又有20%可转为肝细胞癌[3].除了肝功能障碍的症状以外,HCV感染常和多种自身免疫性疾病以及非柯杰金氏淋巴瘤等有关[4],严重影响生活质量.因此,目前亟需发展一种有效的疫苗来预防或有效药物用以治疗HCV感染.
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HLA-DR抗原在慢性乙型肝炎和肝细胞癌中的表达及其意义
目的探讨HLA-DR抗原在慢性乙型肝炎和肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义. 方法采用免疫组化技术对20例正常肝组织、36例慢性乙型肝炎和44例HCC中HLA-DR抗原的表达进行检测. 结果正常肝组织中肝细胞未见HLA-DR抗原表达.慢性乙型肝炎肝细胞HLA-DR抗原表达阳性率为27.8%,其中,中度和重度肝炎HLA-DR抗原阳性率明显高于轻度肝炎(阳性率分别为 37.5%和20%,χ2=13.6,P<0.01).HCC中肿瘤细胞HLA-DR抗原表达阳性率为43.2%.HLA-DR抗原表达与癌周淋巴细胞浸润(χ2=0.51,P>0.05)和转移(χ2=2.9,P>0.05)无关,但与癌组织分化程度有关(χ2=4.9,P<0.05). 结论 HLA-DR抗原的异常表达在慢性乙型肝炎免疫损伤、免疫保护和HCC发生、发展中起重要作用.
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急诊肝动脉栓塞治疗原发性肝癌自发性破裂出血
目的评价肝动脉栓塞(TAE)在原发性肝癌自发性破裂出血抢救治疗中的作用.方法 35例原发性肝癌自发性破裂出血患者,根据不同的治疗方法分为2组:TAE组23例和内科保守治疗组12例.结果 TAE组23例腹腔动脉造影,有14例可见造影剂外渗,其余是肿瘤血供染色明显,止血有效率91.3%,一年生存率为47.8%.内科保守治疗组止血有效率33.3%,一年生存率为0,两组差异有显著性(P<0.01).结论 TAE是原发性肝癌自发性破裂急诊止血的有效、安全措施.对可切除的肝癌患者,TAE后择期手术切除应作为首选的治疗方案.
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急诊肝动脉化疗栓塞术治疗肝癌破裂出血
目的评价急诊肝动脉化疗栓塞术治疗肝癌破裂出血的疗效.方法回顾分析36例肝癌破裂出血使用不同方法治疗的患者资料,其中急诊肝动脉化疗栓塞术11例,保守治疗7例,肝切除术12例,肝动脉结扎6例.结果 11例肝动脉化疗栓塞术治疗患者全部止血成功,无严重并发症,术后无复发出血.其1年生存率与肝切除组基本相似(P<0.05)而明显高于其他治疗方法组(P<0.05).结论肝动脉化疗栓塞术治疗肝癌破裂出血疗效显著.