首页 > 文献资料
-
互补于hTERT关键区段的反义RNA抑制肝癌细胞
目的研究针对人类端粒酶催化亚单位(hTERT)调控区C-MYC结合位点的反义RNA抑制肝癌细胞生长.方法细菌内同源重组构建反义RNA腺病毒(rAd-asmycb),转染HepG2.2.15肝癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,透射电镜下观察凋亡细胞形态,聚合酶链反应-酶联免疫分析(PCR-ELISA)、逆转录-PCR(RT-PCR)分别检测细胞端粒酶活性及mRNA水平上hTERT表达.结果反义RNA抑制肝癌细胞生长,细胞凋亡率为40.7%,显示特征性凋亡细胞形态,能够显著降低细胞端粒酶活性,在mRNA水平上抑制hTERT表达.结论hTERT调控区C-MYC结合位点可能是肝癌基因治疗的有效靶位.
关键词： 人类端粒酶催化亚单位 C-MYC结合位点 肝细胞癌 基因治疗 -
5-AZA抑制肝癌细胞BEL7402代谢方式转换
目的 研究去甲基化药物5-AZA对miR-34a和miR-34c在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞糖酵解的分子机制.方法 用real-time PCR法检测肝癌细胞系中miR-34a/c的表达以及糖酵解途径关键酶的表达;在肝癌细胞中过表达miR-34a、miR-34c或用5-AZA处理肝癌细胞,用乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒分析miR-34a/c及5-AZA对肝癌细胞BEL7402糖酵解的影响;设计拯救实验研究5-AZA、miR-34a/c与肝癌细胞糖酵解调控的关系.结果 5-AZA可以诱导BEL7402肝癌细胞内源性miR-34a、miR-34c的表达上调(P＜0.01);过表达miR-34a/c可以抑制糖酵解关键酶LDH-A的表达(P＜0.05);LDH-A是miR-34a/c的潜在靶基因;敲低miR-34a/c的表达可以降低5-AZA对肝癌细胞BEL7302糖酵解途径的抑制作用.结论 5-AZA通过诱导miR-34a/c表达上调,发挥抑制肝癌细胞代谢方式转换的功能.
-
华蟾素注射液抗肝癌细胞多药耐药性的蛋白质组学分析
目的 在蛋白表达水平上探讨华蟾素注射液对抗人肝癌多药耐药的机制.方法 体外培养人肝癌耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-7402/FU,MTT法测定华蟾素注射液细胞毒性及耐药逆转作用.双向凝胶电泳与质谱技术检测0.26 mg/L华蟾素注射液作用于耐药细胞株前后的差异表达蛋白,Western blot验证质谱鉴定的蛋白FAK、CRT和TMOD3表达情况.结果 华蟾素注射液对细胞Bel-FU的IC5o为0.66 mg/L,浓度为0.08、0.16及0.32 mg/L华蟾素注射液的耐药逆转倍数分别为1.56、2.18及2.99倍;0.26 mg/L华蟾素注射液作用后,耐药细胞中13个蛋白点表达下调,另有1个蛋白点表达上调.华蟾素注射液下调耐药细胞中FAK、CRT和TMOD3表达与双向凝胶电泳及质谱技术检测的差异表达蛋白变化一致.结论 华蟾素注射液可引起耐药相关蛋白表达变化而逆转多药耐药.
-
5-FU诱导人肝细胞癌MDR的比较蛋白质组学研究
目的 寻找与人肝细胞癌多药耐药相关的蛋白质分子,为进一步研究人肝细胞癌多药耐药机制提供依据.方法 体外培养人肝癌细胞Bel-7402及其耐5-氟尿嘧啶(5-FU)细胞Bel-FU,MTF法检测Bel-FU的多药耐药性,双向凝胶电泳技术分析细胞Bel-7402与Bel-FU之间的差异表达蛋白,经MALDI-TOF/TOF质谱鉴定.Western blot验证2-DE及质谱的检测结果.结果 与Bel-7402比较,Bel-FU中有24个蛋白表达上调,其中包括FAK、TM3、ORP150、CRT、hnRNP K、80K-H protein、EF-1-D、phosphoprotein等,12个蛋白表达下调.Western blot法检测到蛋白FAK、CRT在Bel-FU中高表达,与2-DE结果一致.结论 通过建立人肝癌细胞Bel-7402及其耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-FU的2-DE图谱筛选了多药耐药相关的差异蛋白,为人肝细胞癌MDR的分子机制研究奠定了基础.
-
E-cadherin的表达与肝细胞癌侵袭和转移的关系
目的研究上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)在人肝细胞癌(HCC)中的表达情况,探讨其与肝癌的相关性.方法 选择56例有完整随访资料的肝细胞癌及相应癌旁组织标本、20例正常肝组织标本,用RT-PCR方法检测E-cadherinmRNA的表达;用免疫组织化学方法检测E-cadherin的表达.结果①E-cadherin在肝细胞癌组织中的表达显著低于癌旁组织和正常组织(P＜0.05),而在癌旁组织和正常组织中的表达无差异;②E-cadherin在肝癌组织中的表达与术后复发时间呈正相关(P＜0.05),与病理分期呈负相关(P＜0.05);③癌组织中E-cadherin表达与肝外转移呈负相关(P＜0.05);④癌旁组织中E-cadherin表达与术后复发时间呈正相关(P＜0.05).结论 E-cadherin表达缺失或下调与肝癌的分化程度、侵袭转移能力和复发倾向相关,对肝癌临床转归的评估有一定指导意义.
-
肝细胞癌患者肝组织中JAB1和P27kip1的表达变化及其临床意义
目的 研究肝细胞癌(HCC)组织中C-JUN激活域连接蛋白1(JAB1)的表达及与P27kip1(P27)间的关系,探讨JAB1与临床病理及预后的关系.方法 免疫组化检测HCC及相应癌旁肝组织中JABl和P27的表达.Western blot及免疫沉淀榆测JAB1和P27的表达及相互作用.结果 HCC中,JAB1的表达高于癌旁肝组织,P27表达低于癌旁组织.JAB1的表达与组织分化程度、甲胎蛋白(AFP)值及转移相关(P<0.05).HCC中JABl与P27的表达呈负相关(r=-0.7077,P<0.001),并且能免疫共沉淀.结论 JAB1的表达与P27负相关,JAB1作为P27的负性调控因子,可能与HCC的恶性进展及预后相关.
-
羟基红花黄色素A抑制H22小鼠肝癌移植瘤血管生成及减少MMP-3的表达
目的：研究红花组分羟基红花黄色素A（ HSYA）对H22小鼠肝癌移植瘤组织新血管生成的抑制作用及对基质金属蛋白酶-3（ MMP-3）的影响。方法建立H22小鼠肝癌移植瘤模型，第2天将小鼠随机分为对照组、索拉非尼组及HSYA组（1.125和2.25 mg／kg），HE观察肝癌移植瘤组织病理；用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD34的表达，计数微血管密度（ MVD）；免疫组化和Western blot分别检测瘤组织中MMP-3的表达。结果与对照组相比， HSYA组（1.125和2.25 mg／kg）的MVD显著降低（P＜0.01），MMP-3蛋白在移植瘤组织中的表达明显减少（P＜0.01），以HSYA组（2.25 mg／kg）效果为显著，但不及索拉非尼组。结论 HSYA在一定浓度范围内抑制H22小鼠肝癌移植瘤血管生成，其作用可能与降低基质金属蛋白酶-3的蛋白表达有关。
-
曲古霉素A抑制肝癌细胞的糖酵解
目的 研究表观遗传药物组蛋白去乙酰化抑制剂曲古霉素A(TSA)对miR-34家族(miR-34a/b/c)在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞糖酵解的分子机制.方法 在肝癌细胞系中分别转染miR-34模拟物或相应阴性对照,用real-time PCR法检测miR-34a/b/c的表达以及糖酵解途径关键酶的表达;在肝癌细胞中分别转染miR-34b模拟物、相应阴性对照,或用TSA、DMSO处理肝癌细胞,用乳酸检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒分析miR-34b及TSA对肝癌细胞HepG2、PLC/PRF/5糖酵解途径的影响;设计拯救实验在HepG2细胞中研究TSA、miR-34b与肝癌细胞糖酵解调控的关系.结果 TSA可以诱导HepG2、PLC/PRF/5肝癌细胞内源性miR-34b的表达上调(P＜0.01);过表达miR-34b可以抑制糖酵解关键酶LDH-A的表达(P＜0.05);miR-34b可以抑制含有LDH-A 3’非翻译区的报告基因活性;敲低miR-34b的表达可以降低TSA对肝癌细胞HepG2糖酵解途径的抑制作用.结论 TSA通过诱导miR-34b表达上调发挥抑制肝癌细胞的代谢转换.
-
NS-398抑制肝癌SMMC-7721细胞及组织MVD值、VEGF、MMP-9的表达
目的 探讨NS-398对肝细胞癌MVD值、VEGF、MMP-9表达的影响.方法 采用RT-PCR和流式细胞术检测肝癌SMMC-7721细胞VEGF、MMP-9表达.采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤MVD,ELISA法测定血清中PGE2水平.结果 在体外,NS-398可以呈剂量和时间依赖性显著抑制SMMC-7721细胞的VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白表达;在体内,可显著降低裸鼠移植瘤MVD、VEGF、MMP-9基因和蛋白表达(P＜0.001),并能降低裸鼠血清中PGE2水平(P＜0.001).结论 COX-2与肝细胞癌血管生成密切相关,NS-398可通过下调VEGF和MMP-9的表达而抑制肝细胞癌血管生成.
-
三氧化二砷抑制人肝癌细胞P27kip1 187位苏氨酸磷酸化
目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制与P27kipl第187位苏氨酸(P27Thr187)磷酸化的关系.方法 体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,2 μmol/L As2O3处理72 h,细胞计数法检测SMMC-7721生长,流式细胞仪检测细胞周期,核质分离、Western Blot及细胞免疫荧光技术检测P27、Thr187磷酸化的P27(p-P27T187)在SMMC-7721细胞中的表达及亚细胞定位.结果 2 ttmoVL As2O3明显抑制SMMC-7721的增殖,细胞周期阻滞在G2/M期.As2O3作用后P27蛋白总量增加,p-P27T187蛋白总量减少,并伴有Cdk2及cyclinE表达下降,同时P27发生从胞质向胞核的易位,p-P27T187核内表达减少.结论 As2O3可抑制P27T187的磷酸化,诱导P27在SMMCa721细胞核中的积聚.
-
应用基因芯片筛选人肝癌、肝硬化及正常肝组织中差异表达的基因
目的 探讨肝细胞癌、肝硬化及正常肝组织中差异表达的基因并对其进行生物学信息分析.方法 用Trizol一步法提取肝癌组织、肝硬化组织及正常肝组织的总RNA.并纯化mRNA,反转录合成荧光分子(Cy3/cy5)标记的cDNA探针,与含有4096个基因的芯片杂交;用GenePix Pro3.0图像分析软件分析肝硬化组织与正常肝组织,肝癌组织与正常肝组织的基因表达情况.结果 与肝癌关系密切的基因有141条,许多与细胞周期和信号转导方面有关,如MCM7、YWHAH等.其中23条与在肝硬化组织中的表达趋势相同.与正常肝组织比较,有2条基因在癌组织中下调而在肝硬化组织中上调,均属于金属硫蛋白基因家族成员.结论 在肝癌的发生、发展中,抑癌基因的失活、代谢相关酶类基因活性的异常及促使细胞进入增殖周期的相关基因的活化等因素发挥了重要的作用.系统的研究这些基因将有望发现新的早期诊断指标,为建立个体化治疗方案和预后评估系统提供帮助.
-
肝细胞癌唾液酸化的路易斯寡糖-X抗原和E-上皮钙粘蛋白的表达及其意义
探讨唾液酸化的路易斯寡糖-X抗原(sialyl Lewis-X,SLeX)和E-上皮钙粘蛋白(E-cadherin,ED)表达与肝细胞癌(HCC)转移和预后的关系.应用免疫组织化学方法,检测分析110例HCC组织中SLeX及ED蛋白表达,结合随访资料分析.结果显示,在HCC中,SLeX和ED阳性表达率分别为39.1%和44.5%.SLeX阳性表达的HCC转移率高(P＜0.05)、分化程度和患者＞5年生存率低(P＜0.05);ED阳性表达的HCC转移率低(P＜0.05)、分化程度和患者＞5年生存率高(P＜0.05).SLeX表达与ED表达呈负相关(r=-0.53,P＜0.001).SLeX和ED表达与HCC转移和患者生存期密切相关,检测SLeX和ED蛋白的表达可作为判断HCC预后的参考指标.
关键词： 肝细胞癌 唾液酸化的路易斯寡糖-X抗原 E-上皮钙粘蛋白 转移 预后 -
5-氟尿嘧啶通过促进miR-22表达抑制肝癌细胞增殖
目的 研究5-氟尿嘧啶(5-FU)对miR-22在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞增殖的分子机制.方法 用Real-time PCR法检测肝细胞癌组织及细胞系中miR-22的表达;用Real-Time PCR法检测经不同浓度5-FU处理的肝癌细胞HepG2和Huh7中miR-22及其初始转录产物pri-miR-22的表达;用miR-22类似物及5-FU处理肝癌细胞HepG2和Huh7,并用Western blot 法检测miR-22靶基因HDAC4的表达;设计拯救实验(rescue assay)研究5-FU、miR-22与肝癌细胞增殖的关系.结果 miR-22在肝细胞癌组织及细胞系中表达下调;5-FU可以诱导肝癌细胞系HepG2、Huh7内源性miR-22、pri-miR-22表达水平明显上调(P<0.01);miR-22过表达及5-FU处理可以抑制HepG2、Huh7,HDAC4蛋白表达水平(P<0.01).结论5-FU通过调控miR-22介导的HDAC4信号通路发挥抑制肝癌细胞增殖的作用.
-
微环境与肝癌发病机制的研究进展
肝细胞癌是一种在微环境刺激因素作用下由肝细胞基因组积累的突变所导致的常见原发性肝癌。肿瘤微环境是一个动态系统，由肿瘤细胞、间质组织、细胞外基质、组织低氧及饮食、胃肠道微生物群落和微泡等组成，肝脏微环境在肝细胞癌发生，发展和治疗中起重要作用，研究肝细胞癌微环境可为发现肿瘤生成机制和肝细胞癌治疗新靶点提供新的借鉴。
-
microRNA在肝脏非可控病毒感染性炎性反应恶性转化过程中的作用
非可控性炎性反应是指机体在感染或非感染因素的作用下,炎性反应无法从组织损伤模式转变至平衡稳定,而导致炎性反应持续进行的状态.miRNA与多种炎性因子相互作用,在肝脏非可控病毒感染性炎性反应恶性转化过程中发挥了重要的调控作用.深入研究miRNA与炎性因子在该过程中的作用将有助于揭示炎性反应与肿瘤的关系,为临床治疗非可控性炎性反应恶性转化类疾病提供新的思路.
-
原发性肝癌肝动脉树X线解剖学类型及介入治疗的临床研究
目的:研究原发性肝细胞癌肝动脉树的X线解剖学类型.方法:对100例原发性肝细胞癌肝动脉DSA造影资料分析研究,根据供血动脉在瘤体内的分布情况以及X线解剖学形态进行分型;根据不同的解剖学类型采用不同的介入治疗方法.结果:肿瘤组织内肝动脉树X线解剖学形态分为4种类型,即肝动脉瘘型、枯枝型(中血供)、柳枝型(少血供)、鸟巢型(多血供).4种不同解剖学类型采用不同的介入治疗方法显效率分别为31.3%、38.9%、44.8%、54.1%,总有效率为76%.结论:原发性肝癌的肝动脉供血主要表现为鸟巢型、柳枝型.根据不同解剖学类型采用不同的介入治疗术式是一种可行的方法.
-
肝细胞癌中血管内皮生长因子和cNOS与血管生成及细胞增殖的关系
目的观察血管内皮生长因子(VEGF)及含激酶插入区受体(KDR)在原发性肝癌中的表达情况及其与cNOS表达的相关性,探讨它们在肝癌肿瘤性血管生成、肿瘤细胞增殖和转移过程中的作用. 方法收集手术切除的80例原发性肝癌、40例肝硬化、20例正常肝组织标本,应用免疫组织化学和原位杂交的方法观察VEGF及其KDR、cNOS在肝细胞癌中的表达情况,分析VEGF及其受体KDR、cNOS与微血管密度(MVD)、肿瘤细胞增殖指数和转移的关系. 结果肝癌组织中癌细胞VEGF的表达与MVD、细胞增殖指数明显相关(P<0.01和P<0.05),与肝癌内皮细胞中cNOS mRNA的表达之间也有相关性(Pearson列联系数=0.2984,P<0.05).内皮细胞中cNOS mRNA与VEGF均阳性者微血管密度、细胞增殖指数均明显高于cNOS mRNA阴性和VEGF阳性者(P<0.01),也明显高于两者均阴性者(P<0.01). 结论肝细胞癌中癌细胞VEGF的表达与血管生成、细胞增殖和肝癌转移密切相关,且内皮细胞cNOS mRNA的表达可能参与VEGF的促血管生成作用.
-
肝细胞核因子-1α和肝细胞核因子-4α在人肝细胞癌中的表达及意义
目的 检测肝细胞癌(HCC)标本中肝细胞核因子-1α(HNF-1α)和肝细胞核因子-4α(HNF-4α)的表达,探讨其在肝癌发生、发展中的作用. 方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法检测HNF-1α、HNF-4α mRNA和蛋白质在肝癌组织和癌旁肝组织中的表达. 结果 HNF-1α mRNA在癌旁肝组织中的相对表达量0.818±0.371明显高于肝细胞癌组织0.383±0.102,差异有显著性(P＜0.05).HNF-4α mRNA在癌旁肝组织中的相对表达量0.846±0.384明显高于肝细胞癌组织0.397±0.105,差异有显著性(P＜0.05).HNF-1α和HNF-4α mRNA 的表达与肿瘤分化程度有关(P＜0.05).HNF-1α蛋白在癌旁肝组织中的阳性率(92.3%)明显高于肝细胞癌组织(42.3%),差异有显著性(P＜0.05).HNF-4α蛋白在癌旁肝组织中的阳性率(96.2%)明显高于肝细胞癌组织(50.0%),差异有显著性(P＜0.05).HNF-1α和HNF-4α蛋白的表达与肿瘤分化程度有关(P＜0.05).在肝细胞癌组织中HNF-1α与HNF-4α mRNA表达水平呈负相关关系. 结论 HNF-1α和HNF-4α在肝细胞癌中表达下调,这可能与肝癌的发生、发展相关
-
Grp78表达对人肝细胞癌细胞外信号调节激酶1/2活性和表达的影响
目的 通过检测葡萄糖调节蛋白78(Grp78)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2在肝细胞癌手术切除组织中的表达,并在SMMC-7721细胞中干预Grp78的表达,探讨Grp78对ERK1/2激酶的调控作用. 方法 应用免疫组织化学方法(IHC)和免疫印迹法检测47例肝细胞癌手术切除组织样本中Grp78,ERK1/2的表达和ERK1/2磷酸化水平;在高表达Grp78的肝细胞癌细胞系SMMC-7721中,通过用小RNA干扰Grp78的表达来探讨Grp78表达水平,改变对ERK1/2活性及表达的影响. 结果 在肝细胞癌组织样本中,Grp78的表达情况与ERK1/2和磷酸化ERK1/2的表达明显呈正相关.在SMMC-7721细胞中Grp78高表达促进ERK1/2的磷酸化,应用RNA干扰特异性下调Grp78高表达细胞中Grp78水平可以抑制ERK1/2的磷酸化. 结论 Grp78参与调解ERK1/2信号通路,并且在肝细胞癌临床治疗方面可能成为潜在的治疗靶点.
-
丙型肝炎病毒相关性肝细胞癌的基因表达分析
目的 分析慢性丙型肝炎发展为肝细胞癌(HCC)过程中的差异表达基因谱.方法 以GEO数据库的基因表达谱数据GDS4880、GDS4887为分析材料,采用Qlucore Omics Explorer 3.0软件筛选慢性丙型肝炎与丙型肝炎病毒(HCV)相关性肝细胞癌芯片数据的差异表达基因,结合生物信息学工具PANTHER、DAVID、STRING、Cytoscape对差异表达基因及其相互作用关系进行分析.结果 筛选出共差异表达基因328个,其中上调表达133个,下调表达195个.这些差异表达基因主要涉及代谢过程、生物调节、定位等生物过程,p53信号通路、胰岛素信号通路、磷脂酰肌醇信号系统、细胞凋亡等信号通路.差异表达基因编码蛋白间的相互作用主要集中在14个蛋白质(CYP2B6、CYP2E1、AKT1、CDK16、RELA、CDC27、PIK3CA、GNB1、FOXO1、FYN、PDPK1、SCAND1、SGOL1、RPH3AL).结论 CYP2E1等14个基因可能与HCV相关性肝细胞癌的发生发展相关.
