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Grp78表达对人肝细胞癌细胞外信号调节激酶1/2活性和表达的影响
目的 通过检测葡萄糖调节蛋白78(Grp78)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2在肝细胞癌手术切除组织中的表达,并在SMMC-7721细胞中干预Grp78的表达,探讨Grp78对ERK1/2激酶的调控作用. 方法 应用免疫组织化学方法(IHC)和免疫印迹法检测47例肝细胞癌手术切除组织样本中Grp78,ERK1/2的表达和ERK1/2磷酸化水平;在高表达Grp78的肝细胞癌细胞系SMMC-7721中,通过用小RNA干扰Grp78的表达来探讨Grp78表达水平,改变对ERK1/2活性及表达的影响. 结果 在肝细胞癌组织样本中,Grp78的表达情况与ERK1/2和磷酸化ERK1/2的表达明显呈正相关.在SMMC-7721细胞中Grp78高表达促进ERK1/2的磷酸化,应用RNA干扰特异性下调Grp78高表达细胞中Grp78水平可以抑制ERK1/2的磷酸化. 结论 Grp78参与调解ERK1/2信号通路,并且在肝细胞癌临床治疗方面可能成为潜在的治疗靶点.
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小RNA干扰Akt2对U87恶性胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨转染Akt2-siRNA表达载体阻断Akt2信号转导通路对U87恶性胶质瘤细胞运动、迁移和侵袭能力的影响. 方法 利用siRNA技术,稳定转染恶性胶质瘤细胞系U87;用RT-PCR和免疫印迹技术分别检测Akt2的mRNA和蛋白的表达;划痕实验和体外侵袭实验分别检测恶性胶质瘤细胞的运动和侵袭能力;用细胞黏附实验检测细胞的黏附能力,纤维型肌动蛋白(F-actin)聚合实验检测F-actin的聚合能力;免疫印迹技术检测LIMK的磷酸化,证明Akt2影响F-actin聚合的机制. 结果 稳定转染siAkt2载体后,Akt2的mRNA和蛋白水平均下降;细胞向划痕移动的速度比对照组慢(P<0.05);侵袭并穿透基质胶(Matrigel)的细胞数量比对照组少(P<0.01);细胞内F-actin聚合比对照组减少(P<0.05);黏附实验结果显示,黏附5min、15min后,低表达Akt2的细胞比对照组的黏附数量均减少(P<0.05). 结论 Akt2基因沉默可以通过降低F-actin聚合、降低黏附于细胞外基质的能力而降低恶性胶质瘤细胞的运动和侵袭能力.
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小RNA干扰联合电针治疗对脊髓损伤后结缔组织生长因子的沉默作用
目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)siRNA联合电针治疗对脊髓损伤(SCI)后CTGF阳性表达的沉默作用.方法 将SD大鼠随机分为对照(control)组、脊髓损伤(SCI)组、电针(EA)组、CTGF干扰(CTGF)组、CTGF干扰联合电针(EA +CTGF)组.制备SCI模型,将含有CTGF siRNA /invivofectamine的复合物植入CTGF、EA+CTGF组大鼠的脊髓(T10)损伤断端,SCI、EA组用invivofectamine转染试剂代替.EA、EA +CTGF组在模型制备后每天给予电针治疗.各组在3d、7d、14 d取损伤脊髓,应用Western blotting、RT-PCR测定CTGF、转化生长因子β-1(TGF-β1)及GFAP蛋白和mRNA表达变化,应用免疫荧光做形态学观察.结果 与SCI组相比,CTGF组、EA+CTGF组的CTGF、TGF-β1、GFAP蛋白表达下调,联合治疗效果更明显(P＜0.05);EA+ CTGF组CTGF、TGF-β1、GFAP mRNA表达明显低于SCI组、EA组和CTGF组(P＜0.01).免疫荧光发现,SCI组CTGF阳性细胞反应性增生;CTGF组CTGF表达减弱,阳性细胞数减少;EA+ CTGF组CTGF阳性细胞数明显减少.结论 CTGF siRNA联合电针治疗使损伤脊髓CTGF表达下调,胶质反应减轻,抑制瘢痕形成.
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VCAM-1基因敲减对小鼠间充质干细胞免疫调节能力的影响
目的:利用siRNA技术建立稳定低表达血管间粘附分子1(VCAM-1)基因的小鼠间充质干细胞系(C3H10T1/2)并探讨其对小鼠间充质干细胞免疫调节能力的影响.方法:利用基因重组技术构建逆转录病毒质粒GV118-VCAM-1-RNAi,应用酶切及测序方法进行相关鉴定,转染包装细胞系T293,收集病毒上清并感染C3H10T1/2细胞(C3),应用荧光倒置显微镜及流式细胞术检测转染效率,淋巴母细胞转化实验(LTT)和混合淋巴细胞反应(MLR)检测其免疫调节能力.结果:酶切和测序鉴定表明,成功构建了低表达VCAM-1的重组逆转录病毒载体GV118-VCAM-1-RNAi,感染C3H10T1/2细胞后,应用荧光显微镜和流式细胞术分选获得稳定低表达VCAM-1的间充质干细胞GV118-VCAM-1 /C3;LTT和MLR实验结果显示,低表达VCAM-1基因的MSC抑制T淋巴细胞增殖的能力显著下降,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:敲减VCAM-1可显著下调MSC抑制T淋巴细胞增殖的能力.这为进一步研究VCAM-1基因与MSC免疫抑制功能的相关性提供了可靠的实验基础.
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高迁移率族蛋白B 1在白细胞介素-2转录表达信号调控中的作用
目的 探讨高迁移率族蚩白B1(HMGB1)在白细胞介素-2(IL-2)转录表达信号调控机制中的可能作用.方法首先将HMGB1和NFAT2质粒共同转染Hela细胞,同时转染IL-2报告基因,逐步增加HMGB1的转染剂量,检测IL-2报告基因的表达活性.观察HMGB1质粒用量埘IL-2报告基凶活性的影响;然后应用sRNAi质粒对内源性及外源性HMGB1表达进行特异性抑制,观察对IL-2报告基因活性的影响,以期从反而论证HMGB1可促进IL-2转录表达.结果 在Hela细胞中,随着HMGB1质粒转染剂量增加,IL-2报告基因活性增加了2.12倍(P<0.01).应用sRNAi抑制293T细胞中外源性以及Hela细胞中内源性HMGB1表达水平后,IL-2报告基因活性分别下降1.7倍和4.76倍(P<0.05或P<0.01).结论 HMGB1在NFAT2介导IL-2报告基冈转录表达的信号调控过程中发挥重要作用.
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银屑病免疫生物学研究进展
银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤疾病,其发病机制不明确,药物治疗的安全性和长期疗效不理想.近年来,银屑病免疫学机制的研究取得了很大的进展,生物学制剂也成为了治疗银屑病药物的主要研发方向之一.研究发现,细胞因子作为细胞内的信号蛋白,在银屑病的发病机制中起到了重要的作用,以细胞因子作为药靶已经成为了银屑病治疗的新手段；微小RNA是基因转录后调控的重要因素,推测它是通过影响mRNA的翻译或降解来调控某些炎性细胞因子的水平,从而在银屑病的发生发展中发挥作用；基于该理论,学者们已开始尝试运用小干扰RNA技术来治疗银屑病且取得了较为理想的实验结果.
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小RNA干扰技术沉默血管内皮生长因子-C对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的体外研究
目的 用小RNA干扰(siRNA)技术在体外研究其对人肝癌HepG2细胞的增殖及凋亡作用.方法 将3组siRNA-VEGF-C质粒分别瞬时转染到HepG2细胞中,用qRT-PCR和免疫印迹法检测转染前后VEGF-C基因的表达,挑选干扰效率强的一组表达载体用于后续实验;在后续实验将细胞分为3组:空白对照组,阴性对照组,siRNA-VEGF-C1组.通过噻唑蓝比色法(MTT)检测HepG2细胞增殖情况;Hoechst 33258染色法检测HepG2细胞核形态变化;流式细胞仪检测人肝癌HepG2细胞周期及凋亡的变化.结果 各干扰组VEGF-C与空白对照组比较,基因和蛋白水平明显降低,siRNA-VEGF-C1抑制率高达80.0％,用siRNA-VEGF-C1进行后续实验.siRNA-VEGF-C1组的生长曲线平坦,细胞生长率低于对照组.空白对照组、阴性对照组,siRNA-VEGF-C1组的早期凋亡率分别是(0.25±0.09)％,(4.80±1.62)％,(20.10±3.41)％,siRNA-VEGF-C1组与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).空白对照组、阴性对照组,siRNA-VEGF-C1组的G0/G1期细胞数分别是(62.28±3.28)％,(62.20 ±4.81)％,(76.46±4.69)％,siRNA-VEGF-C1组与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 针对人VEGF-C基因的siRNA表达载体能抑制VEGF-C的基因表达,并可抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡.
关键词： 小RNA干扰 血管内皮生长因子-C 肝癌 基因表达 -
Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的研究
目的：探讨Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的意义。方法：采用免疫组织化学SP法检测90例胶质瘤组织中ARK5及Gab2表达。采用小RNA干扰转染LN-229细胞株，Western Blot检测瞬时转染后ARK5及Gab2表达。体外侵袭实验检测转染后侵袭能力变化及Western Blot检测Gab2下降后Akt和ARK5的磷酸化。结果：胶质瘤组织中ARK5和Gab2免疫组织化学阳性结果呈正相关且在高级别胶质瘤（WHO分级为Ⅲ、Ⅳ级）中表达明显高于低级别胶质瘤（WHO分级为Ⅰ、Ⅱ级）。转染ARK5、Gab2、ARK5-Gab2及SCR质粒的LN-229细胞分别称siARK5/LN-229、siGab2/LN-229、siARK5-siGab2/LN-229和SCR/LN-229。其中siARK5干扰效率为70%，siGab2的干扰效率为75%。转染后，与SCR/LN-229相比，siARK5/LN-229中ARK5表达降低， siGab2/LN-229中Gab2表达降低，siARK5-siGab2/LN-229中ARK5和Gab2表达均降低。siARK5/LN-229和siGab2/LN-229侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数均比对照组少（P<0.01），且siARK5-siGab2/LN-229细胞数减少更显著（P<0.01）。在IGF-1刺激下，siGab2/LN-229中Akt和ARK5的磷酸化减弱。结论：应用小RNA干扰技术降低ARK5或Gab2表达使LN-229细胞侵袭转移能力降低，同时Gab2表达降低抑制ARK5和Akt磷酸化，提示Gab2-Akt-ARK5通路参与胶质瘤细胞的侵袭。
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HDAC2 siRNA转染人胰腺癌细胞对Bax和Bcl-2基因表达的影响
目的 :探讨组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)转染人胰腺癌细胞Pa-Tu8988对凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法:培养人胰腺癌细胞PaTu8988,将其随机分为三组:空白对照组、Negative SiRNA组、HDAC2 SiRNA组,合成针对HDAC2基因的siRNA,利用阳离子脂质体(Lipofectamine 2000)将HDAC2 siRNA瞬时转染人胰腺癌细胞PaTu8988,应用免疫印迹法(Western blot)检测Bax和Bcl-2的表达.结果:与对照组和Negative SiRNA组对比,HDAC2 siRNA组的Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白的表达降低(P<0.01).结论:采用siRNA干扰沉默人胰腺癌细胞HDAC2基因,可增加Bax的表达,抑制Bcl-2的表达.
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RNA干扰沉默缺氧诱导因子1α逆转肺癌细胞耐药性
目的:观察RNA干扰沉默缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对肺癌细胞耐药性的影响.方法:构建靶向HIF-1α小干扰RNA基因,并转染到人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞中.逆转录聚合酶链反应RT-PCR)检测细胞的HIF-1α、多药耐药基因1(MDR-1)以多药耐药相关蛋白基因(MRP)mRNA变化,免疫细胞化学法观察干扰后HIF-1α、P-糖蛋白以及MRP蛋白的变化.MTT法检测不同浓度的顺铂作用下细胞死亡率.结果:HIF-1α siRNA组中HIF-1α、MDR-1、MRPmRNA水平显著降低(P＜0.05),且蛋白水平也显著下降(P＜0.05).HIF-1αsiRNA组细胞死亡率较未转染组均明显增高(P＜0.05),转染siRNA阴性组不影响肿瘤细胞的耐药性.结论:HIF-1αsiRNA可显著降低A549/DDP细胞中HIF-1α、MDR-1、MRP表达,从而起到逆转肺腺癌A549/DDP细胞的耐药作用.
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重组质粒pSUPER-HBs RNAi的构建及筛选
目的:利用pSUPER-RNAi载体系统进行HBs RNAi序列的初步筛选和干扰效果鉴定.方法:设计并合成针对HBs基因区的3条siRNA(HBs-siRNA1、HBs-siRNA2、HBs-siRNA3),构建3种重组载体pSUPER-HBs-siRNA,与HBV质粒同时瞬转人胚肾293T细胞,72 h后观察转染效果,实时定量PCR和ELISA法鉴定3种干扰序列对HBs的干扰效果,筛选佳干扰序列.结果:成功构建3种干扰质粒pSUPER-HBs-siRNA,能高效转染人胚肾上皮细胞293T,转染效率在70%以上;实时定量PCR和ELISA法结果均显示HBs-siRNA2可有效抑制HBs的表达,抵制率可达80%,而HBs-siRNA1、HBs-siRNA3干扰效果不显著,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:成功构建3种干扰质粒pSUPER-HBs-siRNA,筛选出其中能有效抑制HBs基因表达的pSUPER-HBs-siRNA2序列,为后续研究奠定了基础.
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RNA干扰VEGF-C基因下调COX-2、Bcl-2表达对乳腺癌细胞凋亡的影响
目的 利用人血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)小RNA干扰(siRNA)表达载体--重组质粒pSilencer3.0-VEGF-C/siRNA,研究VEGF-C基因下调抑制COX-2、Bcl-2表达及对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435的体外作用.方法 pSilencer3.0-VEGF-C/siRNA表达质粒和阴性对照质粒稳定转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435,RT-PCR和Western blot检测转染前后VEGF-C、COX-2基因和VEGF-C、COX-2、Bcl-2蛋白的表达;MTT法和流式细胞仪检测VEGF-C RNA干扰对细胞的作用.结果 pSilencer3.0-VEGF-C/siRNA转染乳腺癌细胞MDA-MB-435,VEGF-C基因和蛋白水平表达量明显降低,COX-2和Bcl-2表达下调,细胞体外活性下降,72 h后凋亡率达60%.结论 针对人VEGF-C基因的siRNA表达载体抑制VEGF-C表达的同时下调COX-2和Bcl-2的表达,促进乳腺癌细胞MDA-MB-435的凋亡.
关键词： 乳腺癌 血管内皮生长因子-C 小RNA干扰 COX-2 Bcl-2 -
ARK5与乳腺癌侵袭转移关系的研究
目的 探讨ARK5在乳腺癌侵袭和转移中的意义.方法 采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织和15例癌旁乳腺组织中MMP-2、MMP-9及ARK5表达.应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-435细胞株,采用Western blot法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况.通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化.ARK5下降后,再次进行Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达.结果 乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9和ARK5免疫组化阳性结果之间存在正相关性.转染后的细胞株命名:转染ARK5质粒的MDA-MB-435细胞称之为SiARK5/MDA-MB-435,转染对照质粒的MDA-MB-435细胞称之为Scr/MDA-MB-435.转染72 h后,与Scr/MDA-MB-435细胞相比,SiARK5/MDA-MB-435细胞的ARK5蛋白表达水平降低.ARK5表达降低的乳腺癌细胞侵袭并穿透Matrivgel膜基质的细胞数量比对照组少(P<0.01),且MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低.结论 应用小RNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使MDA-MB-435细胞侵袭转移能力降低,同时MMP-2、MMP-9蛋白表达降低,提示ARK5通过MMP-2、MMP-9在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用.
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siRNA 干扰降低 ARK5或 Gab2表达对 LN-229细胞侵袭的影响及作用机制
目的：探讨siRNA干扰降低ARK5或Gab2表达对LN-229细胞侵袭的影响及作用机制。方法采用小RNA干扰技术转染LN-229细胞株，并用Western blot分别检测转染前和瞬时转染后ARK5和Gab2蛋白表达。通过体外侵袭实验检测转染后侵袭能力的变化。 ARK5或Gab2下降后明胶酶谱分别检测MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果转染ARK5，Gab2及SCR质粒的LN-229细胞分别称SiARK5/LN-229，SiGab2/LN-229和SCR/LN-229。转染后，与SCR/LN-229及LN-229相比，SiARK5/LN-229中ARK5蛋白表达降低，SiGab2/LN-229中Gab2蛋白表达降低。 ARK5或Gab2降低的LN-229细胞侵袭并穿透 Matrigel 膜基质的细胞数量均比SCR/LN-229少（P＜0．01）。与SCR/LN-229细胞相比，SiARK5/LN-229和SiGab2/LN-229中MMP-2，MMP-9蛋白表达均降低。结论应用小RNA干扰技术降低ARK5或Gab2的表达使LN-229细胞侵袭力降低，同时MMP-2和MMP-9表达降低，提示ARK5和Gab2表达降低可通过调节MMP-2和MMP-9的表达影响LN-229细胞的侵袭。
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Smad3小分子干扰RNA在乳腺癌细胞中抑制转化生长因子-β诱导的基质金属蛋白激酶-9的表达
目的 观察应用Smad3特异性小分子干扰RNA(siRNA)在乳腺癌MDA-MB-231细胞中对MMP-9表达的影响.方法 化学合成Smad3 siRNA,并将其转染到MDA-MB-231细胞后行转化生长因子(TGF)-β(1μg/L)刺激.24 h后利用萤光素酶报告基因法测定Smad结合转写因子(4xSBE)的活性;48 h后应用Western blot法测定Smad3、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白水平表达;24 h后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察MMP-9 mRNA水平表达.结果 与对照组比较,Smad3 siRNA有意义地抑制Smad3蛋白的表达(0.5±0.1比1.0±0.2).Smad3 siRNA有意义地抑制TGF-β诱导的4xSBE活性(5.2±0.3比1.0±0.1;P＜0.05).Smad3蛋白的表达(0.5±0.1比1.0±0.2)与对照组比较TGF-β刺激组明显激活了MMP-9 mRNA和蛋白水平的表达(2.4±0.3比1.0±0.1和1.8±0.4比1.0±0.2),而Smad3 siRNA有意义地抑制了TGF-β激活的MMP-9mRNA和蛋白水平的高表达(1.3±0.2比2.4±0.3和1.1±0.2比1.8±0.4).结论 构建的Smad3siRNA能够抑制MDA-MB-231细胞中TGF-β诱导的MMP-9的表达.
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siRNA-FAM92A1-289对HeLa细胞增殖的影响
目的:研究RNA干扰(RNAi)沉默基因FAM92A1-289对HeLa细胞增殖和凋亡的影响.方法:化学合成法合成小干扰RNA(siRNA),阳离子脂质体转染FAM92A1-289 HeLa细胞;实时定量RT-PCR检测其mRNA表达,MTT法和流式细胞仪检测转染后HeLa细胞增殖、细胞周期和凋亡变化.结果:转染合成FAM92A1-289 siRNA后,HeLa细胞中FAM92A1-289 mRNA表达下降(P<0.01),细胞增殖均明显增强(P<0.01);细胞周期分布改变,s期细胞明显增多,而C2/M期细胞减少,凋亡率无变化.结论:FAM92A1-289基因调节细胞增殖活动.
关键词： 小RNA干扰 FAM92A1-289基因 Hela细胞 -
Cdc42在人乳腺癌细胞MCF-7阿霉素敏感株和耐药株中的表达
目的 探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在乳腺癌细胞MCF-7阿霉素敏感株和耐药株MCF-7/Adr中表达的变化以及对细胞耐药性的影响.方法 将Cdc42 siRNA转染MCF-7/Adr细胞株后,用RT-PCR和Weastem Blot方法检测MCF-7组,MCF-7/Adr组,MCF-7/Adr siRNA干扰组细胞Cdc42的转录以及蛋白的表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定siRNA处理后阿霉素(ADM)对MCF-7/Adr细胞的杀伤作用;用荧光分光光度计测定细胞内ADM药物浓度.结果 MCF-7/Adr细胞中Cde42 mRNA及蛋白表达量显著高于MCF-7细胞(P<0.05);siRNA干扰后Cde42表达受到明显抑制(P<0.05),并显著提高细胞内ADM的浓度(P<0.05).结论 特异性siRNA能明显抑制Cde42 mR-NA及蛋白表达,并逆转细胞耐药性.
关键词： 乳腺肿瘤 细胞分裂周期蛋白42 多药耐药 小RNA干扰 -
雷奈酸锶通过骨形态发生蛋白-2/Smad通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化
目的 探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)/Smad通路在雷奈酸锶(Sr)促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为成骨细胞过程中的作用.方法 体外分离培养大鼠BMSCs,根据实验目的加入不同浓度Sr、BMP-2的拮抗剂noggin及Smad1小干扰RNA(SiRNA).酶标法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红染色检测钙结节,Western blotting法检测磷酸化Smadl/5/8及Runt 相关转录因子-2(Runx2)蛋白的表达.结果 应用0.1～10 mmol/L Sr处理BMSCs细胞1h后,细胞内磷酸化Smad1/5/8表达增高,其中浓度为1 mmol/L时,表达达到高峰;在Sr处理BMSCs前,应用BMP-2拮抗剂noggm预处理细胞2h能抑制Sr对磷酸化Smadl/5/8表达的上调作用;应用0.1～5 mmol/L Sr处理细胞6h后,细胞内Rtmx2表达增高,其中浓度为1 mmol/L时,表达达到高峰;在Sr处理BMSCs前,应用Smadl SiRNA转染细胞后能下调Smadl/5/8、磷酸化Smadl/5/8的表达,并抑制Sr对Runx2表达的上调作用,还拮抗Sr对ALP活性及钙化结节形成的促进作用.结论 BMP-2/Smad通路参与了Sr促进BMSCs成骨分化.
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c-Jun调控成釉细胞Amelotin基因表达的研究
目的:通过过表达及knockdown c-Jun基因,观察小鼠成釉细胞中釉成熟蛋白(amelotin)的表达变化,以初步确定c-Jun对amelotin的调控作用.方法:①应用免疫组化和细胞免疫荧光方法观察体内外成釉细胞中的c-Jun及amelotin的表达情况;②RT-PCR获得c-Jun基因,克隆至pcDNA3.1/myc-hisA,瞬时转染成釉细胞,real time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响;③化学合成C-Jun siRNA,瞬时转染成釉细胞,real time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响.结果:①体内外成釉细胞中c-Jun和amelotin均有表达,c-Jun主要在成釉细胞胞核中表达,amelotin在成釉细胞和釉质全层均有表达;⑦成功构建c-Jun真核重组表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-c-Jun,转染成釉细胞后amelotin mRNA表达水平显著上升;③成功沉默c-Jun,amelotin在转染c-Jun siRNA组表达水平显著下降.结论:在成釉细胞中,c-Jun在转录水平调控amelotin基因的表达.
