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组蛋白去乙酰化酶2在异烟肼致大鼠肝损伤中的作用
目的 探讨氧化应激作用下组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase2,HDAC2)参与到异烟肼致大鼠肝损伤的可能机制.方法 SD大鼠56只,雌雄各半,随机分为实验组48只和对照组8只,实验组予以异烟肼55 mg/kg·bw连续灌胃3、7、10、14、21和28 d,对照组给予等容积蒸馏水灌胃.心脏取血检测ALT、AST变化,肝脏组织检测HDAC2、SOD、MDA、IL-8和TNF-α表达水平.结果 连续给药后大鼠血清ALT、AST明显高于对照(F=27.02,F=8.37,均P＜0.01);肝组织中总SOD活力呈下降趋势(F=11.15,P＜0.01),在28d低;MDA含量在14d后处于高水平状态(F=7.42,P＜0.01);HDAC2蛋白表达量呈上升趋势,且差异具有统计学意义(F=58.34,P＜0.01);IL-8、TNF-α总体上调,趋势基本一致(F=40.23,F=41.562,均P＜0.01).相关性分析结果表明:HDAC2与IL-8、TNF-α、MDA呈正相关(r=0.74;r =0.75;r =0.700,均P＜0.01),与SOD呈负相关(r=-0.53,P＜0.01).结论 异烟肼引发的氧化还原反应导致HDAC2上调,提示HDAC2可能参与异烟肼致大鼠肝损伤过程中,但作用程度还需进一步证明.
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二陈汤加味对COPD大鼠转化生长因子-β1,组蛋白去乙酰化酶2基因表达的影响
目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体(TGF-βRⅡ)基因表达,外周血单个核细胞(PBMCs)中组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因表达及活性的影响.方法:采用烟熏加脂多糖方法制备COPD大鼠模型.随机分为正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量组(20,10,5 g-kg-1).正常组、模型组灌胃生理盐水(10 g·kg-1),二陈汤加味高、中、低剂量组分别灌胃,连续14 d.荧光酶联免疫法测定PBMCs中HDAC2活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定肺组织匀浆中TGF-β1及PBMCs中HDAC2含量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肺组织匀浆中TGF-β1 mRNA及PBMCs中HDAC2 mRNA表达;免疫组化检测TGF-β1与TGF-βRⅡ蛋白在肺组织的原位表达,光镜观察组织结构.结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织匀浆中TGF-1含量升高(P＜0.05);肺组织中TGF-β1 mRNA,TGF-β1与TGF-βRⅡ蛋白表达均显著增强(P＜0.01);模型组大鼠PBMCs中HDAC2 mRNA表达、含量及其活性均明显减低(P＜0.05,P＜0.01),差异均有统计学意义.与模型组比较,二陈汤加味高、中剂量组肺组织匀浆中TGF-β1 mRNA表达(P＜0.01)和TGF-β1蛋白含量均显著降低(P＜0.05,P＜0.01),免疫组化检测肺组织中TGF-β1与TGF-βRⅡ蛋白表达均显著弱于模型组(P＜0.01),PBMCs中HDAC2 mRNA表达、含量及其活性均升高(P ＜0.05,P＜0.01),肺组织结构明显改善.结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用.其机制可能与增强PBMCs中HDAC2基因表达,提高HDAC2活性,抑制TGF-β1及其受体基因的表达有关.
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吸烟对致敏大鼠气道组蛋白去乙酰化酶2及血清中白介素8表达的影响
目的 通过研究吸烟对致敏大鼠气道组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylasese2,HDAC2)及血清中白介素8(interleukin-8,IL-8)表达的影响,探讨吸烟支气管哮喘(简称哮喘)气道炎症的特点.方法 雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、致敏组和吸烟致敏组,每组10只.后两组应用卵白蛋白(OVA)致敏并长期(10周)吸人激发,制备哮喘模型.在激发第3周开始,将吸烟致敏组大鼠置于自制熏箱内进行被动吸烟.采用免疫组织化学法及双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测各组大鼠气道HDAC2蛋白及血清IL-8的表达.结果 ①吸烟致敏组气道HDAC2蛋白表达(0.339±0.050)明显低于致敏组(0.417±0.044)和对照组(0.472±0.047),差异有统计学意义(P值均＜0.05).致敏组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).②吸烟致敏组血清IL-8表达(63.04±7.06)ng/L明显高于致敏组(55.97±7.09)ng/L和对照组(47.25±4.94)ng/L,差异有统计学意义(P值均＜0.05).致敏组高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).③HDAC2蛋白表达与IL-8表达呈负相关(r=-0.59,P＜0.05).结论 吸烟可使致敏大鼠气道HDAC2蛋白表达水平降低,血清IL-8表达水平增高,且二者呈负相关,提示吸烟可以进一步加重哮喘的气道炎症.
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小鼠组蛋白去乙酰化酶2多肽抗血清的制备
目的 利用人工合成小鼠组蛋白去乙酰化酶2 (histone deacetylase 2,HDAC2)多肽制备特异性抗HDAC2抗血清,用于相关疾病的体内外诊断.方法 根据HDAC2基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA、Western blot及免疫组织化学方法鉴定.结果 ELISA检测表明所制备的抗血清可同多肽抗原发生阳性反应,效价1∶4000；Western blot结果显示抗血清可与多肽抗原及APP/PS1转基因小鼠的脑组织发生反应；免疫血清1∶100,1∶200,1∶400,1∶800四个稀释度均能与小鼠脑组织中的HDAC2反应.结论 所制备的多肽抗血清可识别组织及血清中的HDAC2,可应用于相关领域的体内外研究.
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香烟对大鼠肺白介素-8、谷胱甘肽及组蛋白去乙酰化酶2的影响
目的：探讨香烟暴露及戒烟对大鼠肺白介素-8、谷胱甘肽（GSH）及组蛋白去乙酰化酶2（HDAC2）的影响。方法：健康雄性SD大鼠40只随机分对照组、吸烟组（1月、2月组）、戒烟组（1月、2月组）。每组8只，吸烟组及戒烟组大鼠每天给予烟熏两次，吸烟组烟熏1月、2月取材；戒烟组烟熏2月后再继续饲养1月和2月后取材，分别检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中白介素-8和GSH、肺组织HDAC2的表达。结果：比较吸烟组、戒烟组和对照组BALF中白介素-8含量升高、GSH浓度下降，戒烟后GSH渐升高，但仍不能达到正常；吸烟组肺组织HDAC2含量逐渐降低，戒烟后HDAC2又逐渐升高，但与对照组比较，仍有下降。结论：香烟暴露可诱导气道氧化应激反应，导致GSH减少，HDAC2减少，戒烟可有所改善。
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肺腺癌组织中HDAC2、IL-8、TNF-α的表达及其与吸烟的关系
目的 探讨肺腺癌组织中组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)的表达及其与吸烟的关系.方法 收集广西医科大学第一附属医院和附属肿瘤医院2014年4月至2015年3月术后病理确诊为肺腺癌的病例73例,患者术前均行肺功能检查.癌组织及癌旁肺组织均用锋利刀片切取后立即放于液氮中冻存,取材时间不超过30 min.将累积吸烟＞100支或每周至少有1d以上(＞15 min/d)吸人香烟燃烧产生的烟雾＞3年定义为吸烟.根据有无吸烟及肺功能将病例分为3组:吸烟无慢阻肺组(33例)、不吸烟无慢阻肺组(19例)、吸烟慢阻肺组(21例).实时定量PCR检测各组癌组织和癌旁肺组织HDAC2mRNA、IL-8 mRNA、TNF-α mRNA的表达,Western印迹检测各组癌组织和癌旁肺组织HDAC2蛋白的表达,并进行统计学分析.结果 肺腺癌HDAC2、IL-8、TNF-α的表达及TNM分期的分布在性别、年龄方面差异均无统计学意义(均P＞0.05).73例肺腺癌组织与癌旁肺组织相比,肺腺癌组织中HDAC2 mRNA、HDAC2蛋白的表达显著下调(t=4.185、8.006,均P＜0.01),IL-8 mRNA、TNF-α mRNA的表达均上调(t=-4.252、-5.576,均P＜0.01).吸烟无慢阻肺组、吸烟慢阻肺组癌组织中HDAC2 mRNA和蛋白表达均显著低于不吸烟无慢阻肺组(0.38 ±0.11、0.35±0.12比0.45±0.10和0.26±0.09、0.24±0.06比0.33±0.10;均P＜0.05),其中吸烟慢阻肺组下调明显;吸烟无慢阻肺组、吸烟慢阻肺组癌组织IL-8 mRNA和TNF-α mRNA表达均显著高于不吸烟无慢阻肺组(0.96 ±0.19、1.10±0.18比0.71±0.13和0.62±0.21、0.64±0.20比0.45 ±0.14;均P＜0.05),其中吸烟慢阻肺组上调明显.与不吸烟(不吸烟无慢阻肺组)患者相比,吸烟(吸烟无慢阻肺组和吸烟慢阻肺组的总和)患者TNM分期较高(P =0.038).结论 肺腺癌组织中HDAC2表达下调,IL-8、TNF-α表达上调,且均受吸烟的影响,合并慢阻肺者表现更明显.
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粒细胞活化、组蛋白去乙酰化酶2与重症哮喘关系的临床研究
目的 了解粒细胞活化和组蛋白去乙酰化酶2 (histone deacetylase 2,HDAC2)表达与重症哮喘的关系,以探索早期预测和辨别重症哮喘的生物标志物.方法 采用ELISA法测定受试者血清粒细胞活化标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)及嗜酸粒细胞阳离子蛋白(eosinophil cationicprotein,ECP)水平,Western-blot测定外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs) HDAC2活性,分别比较重症哮喘组、轻中度哮喘组及健康对照组各指标并进行统计学分析.结果 ①重症哮喘组受试者粒细胞活化指标MPO[(102.43±28.19)μg/L]、MMP-9[(992.97±176.44) ng/L]、NE[(9.40±0.99)μg/L]及ECP[(232.85±48.37) μg/L]浓度值均显著高于轻中度哮喘组[MPO、MMP-9、NE及ECP分别为:(48.56±8.78) μg/L、(554.35±99.03) ng/L、(8.01±1.27) μg/L、(105.30±26.93) μg/L,P值均＜0.05]和正常对照组[MPO、MMP-9、NE及ECP分别为:(37.46±9.93) μg/L、(374.00±79.08) ng/L、(4.66±0.64) μg/L、(40.87±15.35) μg/L,P＜0.05];轻中度哮喘组受试者外周血MMP-9、NE及ECP浓度值显著高于正常对照组(P＜0.05);轻中度哮喘组与正常对照组比较MPO浓度值差异无统计学意义(P＞0.05);②重症哮喘组PBMCs HDAC2活性(HDAC2/GAPDH:0.19±0.09)较轻中度哮喘组(0.60±0.08)及正常对照组(1.09±0.26)均显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);轻中度哮喘组PBMCs HDAC2活性较正常对照组低,差异有统计学意义(P＜0.05);③MPO、MMP-9、NE及ECP与FEV1％ pred之间呈负相关,双侧Pearson检验差异有统计学意义(r值分别为:-0.60、-0.75、-0.43和-0.67,P＜0.01);与FEV1/FVC之间呈负相关,双侧Pearson检验差异有统计学意义(r值分别为:-0.52、-0.60、-0.42和-0.50,P＜0.05);与ACT之间呈负相关,双侧Pearson检验差异有统计学意义(r值分别为:-0.69、-0.67、-0.50和-0.70,P＜0.01);④HDAC2与FEV1％pred及FEV1/FVC之间呈正相关,双侧Pearson检验差异有统计学意义(r值分别为0.68和0.61,P＜0.01);与ACT之间呈正相关,双侧Pearson检验差异有统计学意义(r=0.68,P＜0.01).结论 粒细胞活化指标MPO、MMP-9、NE和ECP升高提示重症哮喘患者存在中性粒细胞和嗜酸粒细胞活化,其程度显著高于轻中度哮喘患者;PBMCs HDAC2在重症哮喘组明显降低提示该类患者的皮质激素敏感性降低,激素治疗的效果可能不佳.
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红霉素对香烟烟雾刺激的人巨噬细胞组蛋白去乙酰化酶2表达降低的抑制作用
目的 探讨红霉素对香烟烟雾刺激的人巨噬细胞组蛋白去乙酰化酶2(H DAC2)表达的影响及其机制研究.方法 体外培养人类单核细胞系U937细胞,用佛波脂将其诱导分化为人巨噬细胞.按传统方法制备好香烟烟雾提取物(CSE)用于实验.将传代后的细胞分组:对照组、CSE组、红霉素+CSE组、HDAC的特异性抑制剂曲古霉素A(TSA)组.应用流式细胞仪检测人巨噬细胞活性氧(ROS)的含量;应用蛋白印迹实验(Western blot)检测HDAC2和核因子κB(NF-κB)蛋白表达;通过酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度.结果 CSE可刺激人巨噬细胞释放ROS,具有浓度依赖性和时间依赖性;红霉素(1 mg/L)预孵育24 h可以增强1％ CSE抑制的人巨噬细胞HDAC2蛋白表达;红霉素(1 mg/L)预孵育24 h可以下调1％ CSE诱导的NF κB的活性;红霉素(1 mg/L)预孵育24 h可以抑制1％CSE诱导的TNF-α的合成和释放.结论 红霉素通过提高HDAC2蛋白表达进而抑制香烟烟雾诱导氧化应激导致的NF-κB活性增强和炎症介质TNF-α的合成和释放.
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HDAC2 siRNA转染人胰腺癌细胞对Bax和Bcl-2基因表达的影响
目的 :探讨组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)转染人胰腺癌细胞Pa-Tu8988对凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法:培养人胰腺癌细胞PaTu8988,将其随机分为三组:空白对照组、Negative SiRNA组、HDAC2 SiRNA组,合成针对HDAC2基因的siRNA,利用阳离子脂质体(Lipofectamine 2000)将HDAC2 siRNA瞬时转染人胰腺癌细胞PaTu8988,应用免疫印迹法(Western blot)检测Bax和Bcl-2的表达.结果:与对照组和Negative SiRNA组对比,HDAC2 siRNA组的Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白的表达降低(P<0.01).结论:采用siRNA干扰沉默人胰腺癌细胞HDAC2基因,可增加Bax的表达,抑制Bcl-2的表达.
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组蛋白去乙酰化酶2基因在苯并(a)芘致神经细胞凋亡中的量效和时效表达
[目的]通过体外培养细胞途径研究组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因在苯并(a)芘[B(a)P]所致神经细胞凋亡中的量效和时效表达.[方法]大鼠原代培养的神经元细胞分为两批:第一批分4个组,以B(a)P同时加入S9对细胞染毒,分别为二甲基亚砜(DMSO)组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,使其终浓度为0、10、20、40μmol/L,继续培养48h;第二批分5个组,以20μmol/L B(a)P染毒,分别于染毒0、6、12、24、48h处理细胞.用流式细胞术检测神经细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR法检测caspase-3,HDAC2基因的量效和时效表达情况.[结果]①流式细胞术结果显示,与DMSO组相比,中、高剂量组神经细胞的凋亡率明显增加(P<0.05);与低剂量组相比,高剂量组凋亡率增加(P<0.05).与0 h组相比,染毒24、48 h组神经细胞的凋亡率明显增加(P<0.05).②与DMSO组相比,高剂量组caspase-3、HDAC2mRNA的表达量明显增加(P<0.01);与低剂量组相比,高剂量组caspase-3 mRNA表达量明显增加(P<0.05).与Oh组相比,染毒48h组caspase-3、HDAC2 mRNA表达量明显升高(P<0.01,P<0.05).[结论]B(a)P可引起神经细胞凋亡,HDAc2基因表达上升,该基因可能在B(a)P所导致的神经细胞凋亡中起重要作用.
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组蛋白去乙酰化酶1和2在前列腺癌中的表达及临床意义
目的:检测组蛋白去乙酰化酶l(HDAC1)和组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)在前列腺癌中的表达情况,并探讨其临床意义. 方法:选取82例临床资料完整的前列腺癌组织石蜡标本,免疫组化染色检测HDAC1和HDAC2蛋白的表达情况,分析其与Gleason分级、术前PSA水平、术后生存时间等指标的相关性. 结果:免疫组化染色显示,前列腺癌组织中HDAC1和HDAC2的表达率分别为59.7％ (49/82)、70.7％(58/82),定位于细胞核;Gleason评分高的患病组中HDAC1和HDAC2的表达高于Gleason评分低组,且在不同Gleason分级中表达差异有显著性(P均＜0.05);HDAC1和HDAC2的表达在不同术前PSA水平、不同年龄分组中差异无统计学意义(P＞0.05);单因素分析显示HDAC2、术前PSA水平、临床分期及Glesaon分级是影响前列腺癌患者生存的重要因素(P均＜0.05);多因素回归分析表明HDAC2在前列腺癌中具有独立的预后意义(P=0.017,HR=2.265,95％CI:1.145 ～4.775). 结论:HDAC2在前列腺癌组织中表达升高并且具有独立的预后意义,为HDACs抑制剂在前列腺癌诊断中的应用和患者预后的判断提供了理论依据.
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HDAC2 siRNA转染对人胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响
目的:探讨RNA干扰沉默组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)基因表达对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:培养人胰腺癌PaTu8988细胞株,并将其随机分为5组:空白对照组,20 nmol/L HDAC2 siRNA阴性组,40 nmoL/L HDAC2 siRNA阴性组,20 nmol/L HDAC2 siRNA组,40 nmol/L HDAC2 siRNA组.合成针对HDAC2基因的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA),利用阳离子脂质体将HDAC2 siRNA瞬时转染人胰腺癌PaTu8988细胞,分别采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测HDA C2基因及蛋白的表达;MTT比色法检测细胞的增殖率;流式细胞术测定细胞凋亡率.结果:与空白对照组和阴性siRNA组对比,HDAC2 siRNA组的HDAC2基因和蛋白的表达水平均明显下降(P均＜0.05),细胞增殖率减慢(P＜0.01),凋亡率明显升高(P＜0.01).结论:采用RNA干扰沉默人胰腺癌细胞HDAC2基因表达,可抑制癌细胞增殖和诱导其凋亡.
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脑卒中前敲减HDAC2改善光照脑缺血模型小鼠的行为学缺陷
目的:探讨脑卒中前蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)对于光诱导血栓形成性脑缺血模型小鼠行为学缺陷的作用.方法:通过微量给药系统将腺相关病毒AAV-CAG-EGFP-Cre(2μL)注射至HDAC2~鼠的运动皮层用以敲减HDAC2,通过免疫荧光以及免疫印迹(Western blot)分析确证病毒AAV-CAG-EGFP-Cre与对照病毒AAV-CAG-EGFP的表达.7d后进行光诱导血栓形成性脑缺血造模,并于造模前第3天以及造模后第8天采用网格实验和圆筒实验分别检测造模前后AAV-CAG-EGFP-Cre组与AAV-CAG-EGFP组行为学的改变.结果:病毒AAV-CAG-EGFP-Cre相较于对照AAV-CAG-EGFP能特异性地敲减HDAC2,免疫荧光表现为GFP与HDAC2双阳性细胞数减少,Western blot显示针孔周围区HDAC2表达水平降低(P＜0.05).脑缺血前后的行为学检测表明病毒干预后,HDAC2的下调对缺血前行为学无影响,但显著降低了脑缺血后网格实验的失足率(P＜0.001)与圆筒实验的不对称指数(P＜0.001),促进了行为学改善.结论:脑卒中前通过重组病毒敲减HDAC2,可以改善脑卒中后小鼠行为学缺陷.
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孕早期母体丙泊酚暴露对子代学习记忆和组蛋白去乙酰化酶的影响
目的 孕期母体丙泊酚暴露对子代学习记忆有明显的损害作用,然而其具体机制尚未明确.文中旨在探讨孕早期母体丙泊酚暴露对子代大鼠学习记忆功能以及组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的影响. 方法 取孕5~7d的SD大鼠20只,采用随机数表法随机分为对照组(等渗盐水)和丙泊酚组(丙泊酚),每组10只.子鼠出生后,丙泊酚组每只母鼠所产子鼠分为丙泊酚SAHA组(n=50,注射90mg/kg HDAC抑制剂SAHA)和丙泊酚溶媒组(n=47,注射等量溶媒DMSO);对照组每只母鼠所产子鼠分为对照SAHA组(n=48,注射90mg/kg SAHA)和对照溶媒组(n=45,注射等量溶媒DMSO).各组进行Morris水迷宫实验.处死后取海马组织,采用免疫荧光法检测HDAC2蛋白的表达水平. 结果 丙泊酚溶媒组水迷宫实验第5、6天子鼠逃避潜伏期[(65.93±30.42)、(50.72±24.72)s]较对照溶媒组[(29.32±16.38)、(21.34±13.79)s]、丙泊酚SAHA组[(42.52±20.43)、(24.28±13.41)s]明显延长,穿越平台次数减少(P<0.05).丙泊酚溶媒组HDAC2蛋白表达水平(1.37±0.03)较对照溶媒组(1.00±0.02)、丙泊酚SAHA组(1.08±0.02)明显升高(P<0.05). 结论 孕早期丙泊酚暴露可引起子代大鼠学习记忆功能损害,其机制与上调子代大鼠海马区HDAC2蛋白表达有关.
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组蛋白去乙酰化酶2在慢性阻塞性肺疾病急性加重期诊疗中的意义
目的：探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）患者外周血组蛋白去乙酰化酶2（HDAC2）浓度与C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）及肺功能的关系。方法选择60例AECOPD患者为研究对象，选择年龄、性别相近的40名健康体检者为对照组。测定患者治疗后0、3、7和10 d的HDAC2、CRP、PCT浓度并进行肺功能、血气分析。结果 AECOPD患者在治疗后0、3、7和10 d，外周血 CRP、PCT水平均逐渐下降，而HDAC2浓度逐渐升高（P＜0.05）。以上4个时间点检测的HDAC2值，与对应时间点检测的CRP、PCT浓度均呈负相关（rCRP ＝－0.316、－0.435、－0.498和－0.547，rPCT ＝－0.332、－0.414、－0.481和－0.523，P＜0.01）。AECOPD患者HDAC2浓度与同期肺功能呈正相关（rFEV1＝0.594，rFEV1／预计值％＝0.561，P＜0.01）。结论HDAC2可能是AECOPD患者炎症反应的负调控因子，且与患者气流阻塞程度相关。
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重组组蛋白去乙酰化酶2-pEGFP-C2质粒的构建及表达
目的：将组蛋白去乙酰化酶2( HDAC2)基因克隆入pEGFP-C2载体,探讨构建的质粒转染进非洲绿猴肾成纤维细胞COS-7株相关蛋白和mRNA的表达及蛋白分布部位的情况。方法从人肝癌细胞( HepG2)中获得组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的cDNA,采用Xho I和 BamH I双酶切,用T4连接酶将该 cDNA 连接 pEGFP-C2质粒,将构建成功的pEGFP-C2-HDAC2质粒经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定后转染非洲绿猴肾成纤维细胞( COS-7),荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达, RT-PCR和Western blot鉴定HDAC2的表达。结果双酶切鉴定可见HDAC2质粒片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,PCR结果可检测到HDAC2 mRNA表达,同时 Western blot可检测 HDAC2蛋白和GFP 蛋白的表达。结论成功构建了重组 pEGFP-C2-HDAC2表达质粒,HDAC2蛋白可与绿色荧光蛋白在COS-7细胞中融合表达。
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脂质体转染HDAC2siRNA 对人肝癌细胞HepG2增殖的影响
目的 探讨靶向沉默组蛋白去乙酰化酶2(histone deacethylase 2,HDAC2)对人肝癌细胞HepG2增殖的影响.方法根据 HDAC2 的碱基序列设计并合成小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),通过脂质体LipofectamineTM 2000 转染到 HepG2细胞内,荧光倒置显微镜观察细胞的转染效率,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HepG2细胞的增殖变化;流式细胞术检测HepG2细胞周期变化;RT-PCR检测HDAC2、CyclinD1、CDK4 mRNA的表达;Western blot检测HDAC2、CyclinD1、CDK4 蛋白的表达.结果将HDAC2-siRNA转染进HepG2细胞内,HDAC2基因及蛋白水平明显降低;同时CyclinD1、CDK4 mRNA及蛋白水平亦明显降低;靶向封闭HDAC2基因的表达可明显抑制HepG2细胞的增殖.结论 靶向封闭HDAC2基因的表达可明显抑制HepG2细胞的增殖,HDAC2可能是潜在抗癌药物的治疗靶点.
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组蛋白去乙酰化酶2在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶2( HDAC2)在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化和原位杂交法检测80例宫颈鳞癌组织及25例正常宫颈黏膜组织中HDAC2蛋白及mRNA的表达情况,并分析其表达与宫颈鳞癌临床病理学特征的关系.结果 HDAC2蛋白在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率(65.0％)显著高于正常宫颈黏膜组织(16.0％)(P＜0.001).在TNM Ⅰ期宫颈鳞癌组织中HDAC2蛋白的阳性表达率(37.8％)显著低于TNMⅡ期者(88.4％)(P＜0.001)；在有淋巴结转移宫颈鳞癌组织中HDAC2蛋白的阳性表达率(87.1％)显著高于无淋巴结转移者(51.0％)(P=0.001)；HDAC2蛋白表达与癌的分化程度无关(P=0.158).HDAC2 mRNA在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率(57.5％)显著高于正常宫颈黏膜组织(8.0％)(P＜0.001).在TNM Ⅰ期宫颈鳞癌组织中HDAC2mRNA的阳性表达率(29.7％)显著低于TNMⅡ期者(81.4％)(P＜0.001)；在有淋巴结转移组中HDAC2 mRNA的阳性表达率(80.6％)显著高于无淋巴结转移者(42.9％)(P=0.001)；HDAC2 mRNA表达与癌的分化程度无关(P=0.351).HDAC2蛋白及mRNA的表达呈正相关关系(r=0.482,P＜0.001).结论 HDAC2的过表达可能与宫颈鳞癌的发生、发展有关,并对判断宫颈鳞癌患者的生物学行为有一定意义.
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HDAC2siRNA转染对卵巢癌ovcar3细胞中p53和乙酰化p53k320表达的影响
目的:探讨靶向沉默组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)对人卵巢癌ovcar3细胞中p53乙酰化位点k320表达的影响.方法:将ovcar3细胞随机分为空白组、对照组和实验组3组,实验组以HDAC2 siRNA转染细胞,对照组转染对照siRNA,空白组不处理,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测3组细胞中HDAC2 mRNA和蛋白的表达,Western blot检测3组细胞中p53、乙酰化p53k320蛋白的表达.结果:与空白组及对照组相比,实验组HDAC2 mRNA和蛋白的表达降低(P＜0.05),p53蛋白和乙酰化p53 k320蛋白表达均升高(P＜0.05).结论:下调HDAC2的表达可使p53和乙酰化p53k320表达增加.
关键词： 组蛋白去乙酰化酶2 P53 乙酰化p53k320 OVCAR3细胞株 卵巢肿瘤 -
组蛋白去乙酰化酶2在脑胶质瘤中的表达及其临床意义
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)在星形细胞瘤中的表达及其临床意义.方法 收集283例WHO Ⅱ～Ⅳ级原发性星型细胞瘤标本和52例复发病例肿瘤标本,其中Ⅱ级59例,Ⅲ级26例,Ⅳ级250例.运用免疫组织化学和免疫荧光法探讨HDAC2在星型细胞瘤中的表达和分布.提取肿瘤组织、肿瘤干细胞和胶质瘤细胞株细胞RNA进行半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析HDAC2表达水平.结果 约85.6％的肿瘤细胞核阳性表达HDAC2,大约33.5％的肿瘤中有超过75.0％的肿瘤细胞阳性表达HDAC2.在10组WHO病理级别升高的标本中,可见HDAC2的表达强度在1例中减弱,在7例中增强,在其他2例中的差异无统计学意义(P＞0.05).在23组WHO病理级别无差异的复发肿瘤标本中,可见HDAC2的表达强度在6例中减弱,在10例中增强,在其他7例中差异无统计学意义(p＞0.05).HDAC2仅仅表达于肿瘤细胞,内皮细胞和小胶质细胞都没有HDAC2的表达.HDAC2的表达与细胞核增殖抗原(Ki-67)的表达密切相关(P＜0.01).在WHOⅣ级病例中,HDAC2的表达与患者预后临界相关[风险比(HR)=0.7343,95％可信区间(CI)(0.5252～1.0470)；P＞0.05].低于75.0％瘤细胞HDAC2表达的病例的中位生存时间为425 d,远远高于超过75.0％瘤细胞表达HDAC2的病例的350 d.结论 HDAC2在星形细胞瘤细胞增殖中发挥了重要作用.
