您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
N-Rus文献资料
-
N-Ras基因表达沉默与二羟环氧苯并芘转化的人支气管上皮细胞生长的关系
目的 构建N-Rus基因小发卡结构RNA(shRNA)干扰真核表达质粒载体,并初步观察其对二羟环氧苯并芘(BPDE)转化的人支气管上皮细胞(16HBE-T)生长的影响.方法 根据GenBank提供的N-Ras cDNA序列,设计并合成shRNA寡核苷酸片段,与含U6启动子的pGPU6/GFP/Neo质粒定向连接,构建4个真核表达载体,并经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定.转染16HBE-T细胞48 h后,采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测重组质粒对N-Bus基因表达的影响;用噻唑蓝法(MTT)观察重组质粒对细胞生长的抑制作用.结果 构建了4个N-Ras shRNA真核表达载体,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致.构建的4个表达载体pGPU6/GFP/Neo-NBas-566、pGPU6/GFP/Neo-NRas-305、pGPU6/GFP/Neo-NRas-613和pGPU6/GFP/Neo-NRus-791分别转染16HBE-T细胞48 h后,RT-PCR显示N-Ras基因mRNA表达水平依次下调95%、70%、92%和60%;Western blot显示蛋白表达依次降低92%、45%、58%和34%.MTT发现16HBE-T细胞的生长受到明显抑制,且与N-Ras基因表达水平正相关.结论 成功构建了N-Ras基因特异性shRNA真核细胞表达载体,有效沉默了N-Rus在16HBE-T细胞中的表达,抑制了恶性转化细胞的生长.
