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EV71-2A突变质粒的构建及体内外功能初探
目的:构建pcDNA3.1-EV71-2A的突变质粒(EV71-2Amut),并对其功能进行检测,为进一步研究肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)2A蛋白酶的活性位点及其生物学功能奠定实验基础。方法利用聚合酶链式反应(PCR)定点诱变技术,定点突变编码EV71-2A第21His、39Asp 和110Cys 氨基酸的位点,构建EV71-2Amut,并测序鉴定。将所构建突变质粒与巨细胞病毒( Cytomegalovirus,CMV)启动子介导的真核细胞荧光素酶报告基因( pRL-CMV)共转染人横纹肌肉瘤细胞( RD细胞),通过观察转染组的EV71-2Apro 和EV71-2Amut 对pRL-CMV荧光强度的影响,判断突变质粒的细胞内酶活性。将EV71-2Apro 或EV71-2Amut 质粒转染BALB/c小鼠股四头肌,用RT-PCR检测局部相应质粒的mRNA水平,并观察局部肌肉组织的病理变化。结果构建的突变质粒EV71-2Amut 经测序及比对,结果与预计突变位点一致;在细胞学水平检测到的pRL-CMV荧光强度,EV71-2Amut 组比EV71-2Apro 组显著增高( P<0.05);小鼠股四头肌注射局部均检出 EV71-2Apro 和 EV71-2Amut 的 mRNA 表达,且与 EV71-2Apro 组相比,EV71-2Amut 注射组的肌肉组织的肌肉凝固性坏死、炎症反应病理损伤较轻。结论成功构建了突变的EV71-2Amut 质粒,为研究EV71-2A蛋白酶的生物学功能奠定了实验基础。
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G蛋白β3亚单位基因多态性与高血压及肥胖的关系
三磷酸鸟苷酸结合蛋白(GTP-binding protein,G)偶联型受体是与信号转导有关的主要的胞膜受体,肾上腺素、血管紧张素Ⅱ等血管活性物质受体多属该类.G蛋白位于细胞膜内侧,与胞膜外侧的受体及胞内的效应蛋白相偶联,在信号传递过程中起中介、转换作用.当激素与受体结合后,G蛋白将胞外信号转导至胞内的信号蛋白,信号蛋白通过调节腺苷酸环化酶(AC)活性、参与受体介导的三磷酸肌醇(IP3)的水解,以及调控Ca2+、K+通道,使胞内第二信使CAMP、IP3、Ca2+、K+等浓度发生改变,后者经过一系列传递、逐级放大,激活多种蛋白水解酶,催化多种底物蛋白,终将信号传至核内,诱导原癌基因表达,参与细胞生长调控及其它生物学效应.由此可见,G蛋白在信号传导中起"分子开关"作用.当G蛋白结构、含量、功能异常时,可以放大或缩小神经递质、激素的效应.
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高原眼病
在医学上, 高原是指使人体产生明显生物学效应的海拔3 000m以上的地域[1].我国海拔在3000m以上的高原和高山地区占全国总面积的1/6,人口约6 000万(1980年).高原病是发生于高原低氧环境的一种特发性疾病.高原低压性低氧是致病的主要因素[2].高原地区气压低、缺氧、气候干燥寒冷、日照时间长、太阳红外线及紫外线辐射较强、部分地区终年积雪,这些独特环境对人体与视觉器官均有着不同的影响.
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高原失血性休克的救治研究现状
高原一般是指发生明显生物学效应的海拔3 000m以上地区,我国高原地区较多,海拔3 000m以上地区约占全国总面积的1/6.高原地区由于海拔高,有其特有的地理条件和自然环境,其中影响人体主要的因素是氧分压低.
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低强度氦氖激光治疗脑梗死的疗效观察及护理
激光具有多方面的生物学效应,低强度氦氖激光血管内照射血液(IL2B)可治疗多种疾病.我们从1997年6月开始至今用IL2B治疗40例脑梗死患者,取得了较好的效果,现介绍如下.
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胰岛素抵抗的中医证候研究进展
胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的定义是:正常剂量的胰岛素产生低于正常生物学效应的一种状态,即机体组织或靶细胞对胰岛素作用缺乏正常反应,其敏感性和(或)反应性降低的一种病理生理状态.
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白细胞介素-1生物学效应的基础研究
白细胞介素-1(IL-1)是一种多功能细胞因子,是细胞因子网络中的关键因子.在中枢神经系统,IL-1与发热、食欲不振、慢波睡眠有关;在脉管系统,IL-1可引起血管扩张,诱导粘附分子和趋化因子表达,促进中性粒细胞外渗;在肝脏中,IL-1可诱发急性时相蛋白合成;在结缔组织中,IL-1可致骨吸收和胶原酶合成,促进成纤维细胞、角质细胞增生和组织重建.此外,IL-1可作用于多种免疫活性细胞并扩大其功能,在排除外来微生物感染(抗感染免疫)及维持机体内环境的平衡(免疫自稳)中均起着重要作用[1].本文就IL-1生物学效应的基础研究作一简要综述.
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维生素D与肿瘤相关疾病的研究进展
数十年来对维生素D的研究主要集中在钙磷代谢的调节作用,近年来维生素D被证实具有更为广泛的生物学效应,包括抑制多种类型细胞的增殖,诱导细胞调亡和分化,调节机体免疫系统的功能等.
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嗜酸性粒细胞趋化因子eotaxin及其受体CCR3与呼吸道变应性炎症
变应性鼻炎(allergic rhinotis-AR)是耳鼻咽喉-头颈外科的常见病之一,虽非重症疾病,却改变了患者的社会生活,严重影响了其生活质量,加重了经济负担,其发病率高,且流行性不断增长,同时也是影响另一种主要呼吸道变应性疾病支气管管哮喘(BA)的重要因素,已成为21世纪严重的全球性健康问题.AR发病机制的研究日益得到重视,随着对呼吸道变应性炎症认识的加深,明确了其主要的病理改变是慢性炎症反应,嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)及肥大细胞等炎性细胞浸润,特别是EOS的浸润程度与病情呈正相关[1].呼吸道内EOS聚集机制相当复杂,主要包括骨髓中EOS从祖细胞分化成熟,继而向外周循环释放迁移,通过滚动、粘附、渗出及与内皮细胞相互作用,选择性在气道局部组织中大量聚集并被激活,发挥生物学效应.在此过程中有许多细胞因子参与了对EOS的调控,其中趋化因子选择性趋化嗜酸性粒细胞是主要的环节,也是近几年的研究热点.本文对嗜酸性粒细胞趋化因子eotaxin及其受体CCR3(CC chemokine receptor 3)的基本概况及其在呼吸道变应性炎症研究中的意义综述如下.
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Apelin的新研究进展
Apelin是孤儿G蛋白偶联受体APJ天然配体,一种新发现的具有重要生物学作用的心血管活性多肽,与血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)具有31%同源性,属于肾素-血管紧张素系统(reunin-angliotensis system,RAS)新的组分.具有扩张血管、正性肌力、减少抗利尿激素释放、降低血压、调节垂体激素释放、调整生物节律和抑制人类免疫缺陷病毒侵入等多种生物学效应.
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新疆维吾尔族、汉族代谢综合征患者血清抵抗素水平差异及相关因素分析
代谢综合征(MS)是心、脑血管病的多种代谢危险因素在同一个体内集结的状态,发病率持续升高且存在民族差异[1],抵抗素是一种主要由脂肪细胞分泌的多肽类激素,目前认为,其主要的生物学效应是拮抗胰岛素的作用,是肥胖、胰岛素抵抗(1R)和2型糖尿病(T2DM)之间的桥梁[2],抵抗素水平升高和MS发病互为因果关系.
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胰岛素抵抗与高血压病相关进展的研究
胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)是指胰岛素靶组织器官(肝脏、肌肉、脂肪组织等)对胰岛素生理反应的敏感度降低,需要较高的胰岛素分泌水平才能维持胰岛素正常生理功能,高胰岛素血症和继发的胰岛素分泌相对或绝对不足将产生一系列代谢病理生理变化.IR是由先天性遗传因素与后天环境因素共同作用的结果.按胰岛素产生正常生物学效应的全过程,可按IR发生机理分为受体前缺陷、受体缺陷、受体后缺陷三个水平.
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子宫内膜异位症GnRH治疗新进展
1 GnRH的结构及其受体的分类和生理学效应1.1 GnRH的结构
促性腺激素释放激素(gonadetrophin. Releasing hormone,GnRH)是由下丘脑弓状核合成和释放的10肽,通过垂体门静脉系统进入脑垂体刺激释放LH和FSH。研究人员通过改变天然GnRH的第6位和(或)第10位上的氨基酸衍生出GnRH-a,其化学结构与 GnRH 极其相似,而与 GnRH 受体(GnRH-R)[2]的亲和力大大增强,其生物学效应较天然GnRH高数十倍[3],即开始为升调作用。若继续长期连续应用GnRH-a,垂体的GnRH-R被耗尽,将对垂体产生相反的降调作用,即垂体分泌的促性腺激素减少,从而导致LH和FSH和E2显著下降,使异位的内膜明显退化萎缩而不是消失,出现暂时性绝经,即“药物性卵巢切除”[4]。 -
PTEN基因对人胃癌细胞SGC-7901的生物学效应
目的研究PTEN基因对人胃癌细胞SGC-7901增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法将携带有PTEN基因的真核表达载体pBabe-Puro-PTEN以及pBabe-Puro,以脂质体介导的基因转染方法转入SGC-7901细胞系中,嘌呤霉素筛选获得稳定表达PTEN基因的转染细胞,通过细胞活力实验、流式细胞仪和DNA凝胶电泳,观察PTEN基因对SGC-7901细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.结果稳定转染PTEN基因的SGC-7901细胞中PTEN蛋白稳定表达,转染PTEN基因的SGC-7901细胞生长速度较对照组明显减慢.流式细胞仪显示,细胞周期发生G1期阻滞.转染PTEN的细胞在透射电镜下可出现典型的凋亡形态学的改变;细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的"梯状"条带,而对照组没有出现.结论外源性PTEN基因导入SGC-7901细胞后,可引起SGC-7901细胞G1期阻滞,抑制肿瘤细胞增殖,并促进凋亡的发生.
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血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂的临床应用
业已证明肾素-血管紧张素系统(RAS)在调节人体血压、电解质、血容量、心血管结构的改变及心血管疾病的发生、发展方面起到极其重要的作用,而血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在RAS中起到极其关键的作用[1,2].研究表明,AngⅡ只有在与特异性血管紧张素受体结合才能发挥其生物学效应[3].血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(ARB)就是通过阻滞了AngⅡ受体才使得AngⅡ不能发挥其生物学效应,从而达到降压,对心脑血管及肾脏起到保护作用[1~3].
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中药改善胰岛素抵抗的研究进展
胰岛素抵抗(IR)是2型糖尿病(T2DM)发生发展的重要危险因素[1].IR是指整体、器官或组织对胰岛素的敏感性及反应性降低,使正常量的胰岛素分泌低于正常的生物学效应.胰岛素生理作用减低可导致一系列的代谢异常,包括胰岛素介导的外周组织葡萄糖摄取能力减低,对脂肪分解的抑制能力减低,血浆中游离脂肪酸(FFA)水平升高,对肝脏糖异生及糖原分解的抑制能力减低等,使葡萄糖去路受阻,来源增加,终导致血糖升高.IR可由胰岛素受体前水平、受体水平和受体后水平的障碍所致.
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产科超声的生物学效应及安全性评价
目的 评估产科超声的生物学效应和安全性.结果 概述在何种情况下应当关注产科超声的安全性问题.证据检索了Medline数据库,回顾分析了加拿大卫生部的专门文件和其他相关文献.评估标准由主要作者及加拿大妇产科协会下属影像诊断委员会对相关内容进行评估.证据等级由加拿大定期健康检查工作小组评定.利益、危害及代价仅出于医学原因时,方可行产科超声检查.因为超声检查过程中存在潜在的组织热损伤,所以在保证检查效果的前提下应尽量减少超声波的暴露(ALARA原则,下同).还特别注意到以下情况可使超声波暴露量更大,即:使用脉冲式多普勒、彩色血流检查,妊娠早期经腹超声检查(径线大于5cm),妊娠中、晚期超声检查胎儿骨骼发育情况,或者超声检查低灌注组织(胚胎组织)、发热孕妇的胎儿等.检查人员可以通过减少检查的时间,减少暴露于超声中的结构和仔细地分辨超声图像中的信息来减少上述风险.
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特异性IgY防治烧伤小鼠肠源性内毒素血症
烧伤后,肠黏膜机械屏障破坏,肠道内固有菌群失调,肠腔内sIgA水平下降,导致肠腔内毒素(LPS)移位入血,重者形成内毒素血症,进而导致全身性感染及多器官功能障碍.目前尚无满意的拮抗LPS的药物应用于临床.为此,笔者以LPS为抗原免疫产蛋母鸡,用水溶法提纯蛋黄中的特异性卵黄抗体(IgY),在体外生物学效应已取得满意结果[1]的情况下,以烧伤后肠源性内毒素血症小鼠为模型,探讨IgY对烧伤小鼠肠源性内毒素血症的防治作用.
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血管内皮生长因子的作用及其在烧伤创面修复中的意义
血管内皮生长因子(VEGF)是一种特异性作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子,它能引起血管通透性增加、细胞外基质成分改变,诱导新生血管形成.VEGF的生物学效应是通过特异的膜受体flt1、KDR及flt4等介导实现的,内皮细胞是VEGF的靶细胞[1].烧伤是常见的创伤之一,烧伤创面的修复反映了从血管损伤、通透性增加,到新生血管形成及过度增殖的变化过程,临床表现为体液渗出、创面愈合、瘢痕形成.大量研究证实各个阶段均有VEGF参与,现检索相关文献并综述如下.
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1及其介导的活性氧在创伤修复细胞中的作用研究进展
活性氧是一类含有未配对电子的氧原子或氧原子团,主要由超氧阴离子、过氧化氢和羟自由基等组成,具有信号转导、免疫调节和激素合成等生物学功能。活性氧被认为是细胞增殖和分化过程中信号级联反应的第二信使,参与基因表达、细胞生长和细胞凋亡等生物学效应的信号转导。信号级联反应过程中的活性氧大多来源于质膜氧化酶,主要是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸( NADPH)氧化酶(Nox)。Nox1是Nox蛋白家族的重要成员之一,其产生的活性氧作为信号分子,在创面修复中起重要作用。本文主要就Nox1及其介导的活性氧在表皮细胞、Fb和内皮细胞等创伤修复细胞中的作用进行综述。