南京医科大学学报(自然科学版)杂志
Journal of Nanjing Medicial University 남경의과대학학보(자연과학판)
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透析间期体重增幅并不能影响患者的营养
目的:探讨长期血透患者营养状态与透析间期体重增加(interdialytic weight gain,IDWG)之间的关系,为临床预防长期血透患者的营养不良提供方向.方法:收集本院血液净化中心2010年8月~2011年7月间慢性肾脏疾病终末期维持性血液透析的患者123例,选择6项血清学标志物(肌酐、白蛋白、前白蛋白、血钾、血磷、总胆固醇)及6项客观人体学参数作为评价患者营养状态的指标.采用回顾性研究的方法将所有入选患者按照IDWG%分成3组:A组:IDWG%<3%;B组:3%<IDWG%<5%;C组:IDWG%>5%.取3个时间点:研究前(研究之初)、研究中(第6个月末)和研究后(第12个月末)测量患者的营养指标进行单因素方差分析比较各组间有无统计学意义上的差异并对IDWG%与各营养指标之间的关系进行等级相关分析.结果:研究之初、研究中、研究终末3组患者分别进行各营养指标的比较,单因素方差分析结果没有发现显著统计学意义上的差异(P>0.05).等级相关性分析结果提示不同的IDWG%与各营养指标无明显统计学意义上的相关性(P>0.05).结论:IDWG与患者的营养状态没有关系,IDWG%与各营养指标之间也没有明确的统计学意义上的相关关系,控制患者IDWG%在相对较低的水平不会影响患者的长期营养状况.
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以微型剪分解粘连为主综合治疗宫腔粘连性不孕
目的:探讨宫腔镜下以微型剪分解粘连为主综合治疗宫腔粘连性不孕的方法和效果.方法:回顾性分析122例宫腔粘连性不孕病例的治疗效果,所有病例均在超声监护下、宫腔镜直视下用微型剪分解粘连,术后放置宫内绝育器,并给予戊酸雌二醇治疗3个月,3个月后随访月经改变,再次行宫腔镜检查了解宫腔形态,取出绝育环,仍然粘连病例给予再次分解手术.结果:患者月经量明显增加,月经总正常率68.0%,109例患者宫腔恢复正常,有效率89.3%,10例轻度粘连、3例中度粘连需要再次手术,术后1年内妊娠率52.8%.结论:超声监护下、宫腔镜直视下以微型剪分解粘连联合置环术配合激素周期治疗可以获得良好的治疗效果.
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子宫全切术预防性应用抗生素两种方法的比较
目的:探讨经济合理的子宫全切术预防性应用抗生素的方法.方法:对60例子宫全切术病例随机分成两组,研究组30例术前至术后第1天给药;对照组30例术前至术后第3天给药.观察术后的体温、腹部切口愈合情况、阴道残端炎、人均使用抗生素量、人均使用抗生素时间、住院时间及住院费用等标准.结果:术后的体温、腹部切口愈合、阴道残端炎比较,两组无统计学差异(P> 0.05),住院费用、抗生素使用量研究组与对照组对比有显著差异(P< 0.001).结论:子宫全切术前至术后第1天用药经济合理,值得推广.
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婴幼儿RetCamⅡ眼底检查大样本结果分析
目的:分析早产儿及婴幼儿眼底检查结果,探讨婴幼儿早期眼底检查的重要性.方法:分析2006年11月~2012年4月在南京医科大学附后南京儿童医院眼科接受RetCamⅡ系统检查的3 000例早产儿及婴幼儿的眼底筛查结果,统计早产儿视网膜病变及各种先天性眼底异常的构成比.结果:3 000例婴幼儿中发现明显眼底病变者296例(9.86%).早产儿1936例,发现早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)征象184例(9.50%),4例发现眼底异常;婴幼儿1 064例,发现眼底异常者96例(9.02%).结论:0~3岁婴幼儿的眼底检查对儿童眼病的早期诊断极为重要,RetCamⅡ系统可以作为早产儿、婴幼儿眼底筛查的工具之一.
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宫腔镜下子宫纵隔切除手术对妊娠及产科结局的影响
目的:探讨宫腔镜下子宫纵隔切除术(transcervical resection of septum,TCRS)对患者的妊娠及产科结局的影响.方法:2006年3月~2011年5月使用宫腔镜电切术治疗166例子宫纵隔患者.利用病历资料、手术记录及电话随访,分析术前、术后妊娠结局并总结患者产科结局.结果:术中无严重并发症发生,术后首次妊娠距二探取环后短1个月即妊娠,自然流产率从术前的64.53%降至术后的15.25%(P< 0.01),活产率从术前的1.89%上升至术后的72.03%(P< 0.01).术后剖宫产率80%,无指征剖宫产达到总剖宫产数的41.12%,产后出血率23.53%,其中需要输血的占45%,1例先兆性子宫破裂.结论:宫腔镜下子宫纵隔切除术可以明显改善患者的妊娠结局,术后可尽快妊娠,加强孕期监督、分娩方式指导及预防产后出血发生可进一步改善其产科结局.
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Provisional支架术分支球囊扩张对临床预后的影响
目的:探讨Provisional支架术中分支开口严重受累的病例续行球囊扩张对患者临床预后的影响.方法:冠状动脉分叉病变常规行Provisional支架术,分支受累开口狭窄≥50%且血流TIMI 3级患者1 94例,其中1 15例采用单纯球囊行分支扩张术,为球囊扩张组(BD组),79例采用分支导丝保护技术未行分支扩张术,为对照组(C组).主要研究终点为术后9个月内的主要不良心脏事件(MACE),包括心源性死亡、心肌梗死、再发心绞痛、再次靶血管重建,次要终点为9个月血管造影主支血管再狭窄率和分支TIMI血流分级.结果:BD组与C组的MACE分别为15例(13.0%)和7例(8.9%),主支血管再狭窄分别为12例(10.4%)和5例(6.3%),两组间MACE差异统计学意义(P>0.05).C组的分支血流TIMI 3级比例为96.2%,显著高于BD组87.8%(P<0.05).结论:Provisional支架术中分支开口严重受累病例,如果血流良好,行分支球囊扩张术并不能进一步改善患者的临床预后.
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不同分子量的羟乙基淀粉体外不同浓度血液稀释对凝血功能的影响
目的:研究两种不同分子量的羟乙基淀粉溶液130/0.4和200/0.5在体外对人体血液不同浓度的稀释对凝血功能的影响.方法:选择24例接受择期手术的患者,随机分为用HES 130/0.4稀释的万汶组(V组)和用HES 200/0.5稀释的贺斯组(H组).入室开放上肢静脉后,在未给予任何液体之前抽取患者的静脉血样,迅速用羟乙基淀粉溶液稀释为25%、50%及75%的血样,运用血栓弹力图描记仪(TEG)对血样进行凝血功能检测.测试指标包括反应时间(R值)、凝固时间(K值)、血栓大幅度(MA值)、凝固角(α角)及30 min后纤溶活动(LY30).结果:75%稀释时,二组间R时间、K时间、α角、MA的差异均无统计学意义(P>0.05);50%稀释时,H组的R值、K值均显著长于V组(P<0.05),α角、MA均显著小于V组(P<0.05);25%稀释时,H组的R值、K值均更加显著长于V组(P< 0.01),α角、MA均显著小于V组(P< 0.01).二组间及组内各个浓度间的LY30差异均没有统计学意义.结论:在轻度血液稀释时HES130/0.4与HES200/0.5对凝血功能的影响差异没有统计学意义,但中、重度血液稀释时,HES 130/0.4对凝血功能的影响显著小于HES200/0.5.
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密闭式吸痰预防新生儿呼吸机相关性肺炎的临床研究
目的:探讨密闭式吸痰能否降低新生儿呼吸机相关性肺炎(VAP).方法:100例机械通气的新生儿随机分为对照组(开放式吸痰)50例和实验组(密闭式吸痰)50例,比较2种不同吸痰方式对机械通气时间、呼吸机相关性肺炎发生率、发生时间的影响.结果:密闭式吸痰组VAP的发生率为24%,开放式吸痰组VAP的发生率为44%,两组相比有统计学差异(P<0.05);密闭式吸痰组总机械通气时间(121.48±92.02 h),开放式吸痰组总机械通气时间(140.2±119.12 h),两组相比无统计学差异(P>0.05);VAP发生时间密闭式吸痰组为(80.0±27.4 h),开放式吸痰组为(82.0±26.0 h),两组相比无统计学差异(P>0.05).结论:密闭式吸痰比传统开放式吸痰方式有助于降低VAP的发生率,在新生儿重症监护室机械通气中值得临床推广.
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脂肪细胞因子与肥胖的关系
目的:研究脂肪细胞因子chemerin、血清瘦素、抵抗素、脂联素水平及其相互关系,探讨肥胖的发生发展机制.方法:通过体格测量测定正常对照组和肥胖组的腰围、臀围;另通过生化法检测瘦素、抵抗素、脂联素、chemerin的水平、空腹血糖(FBS)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹胰岛素(FINS),同时计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).结果:①肥胖组血清抵抗素、瘦素及chemerin水平高于正常对照组,而脂联素水平明显降低(P<0.05);②相关性分析显示血清抵抗素、chemerin与脂联素呈负相关而与腰围、腰臀比、瘦素呈正相关.结论:肥胖患者抵抗素及瘦素、chemerin明显升高,而脂联素降低,其表达水平与肥胖类型(尤其中心性肥胖)及程度密切相关.
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持续性操作测验在学龄前儿童注意缺陷多动障碍诊断中应用价值探讨
目的:探讨4~5岁儿童注意力持续测试软件(Conners' kiddie continuous performance test,K-CPT)在诊断学龄前儿童注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)中的临床应用价值.方法:以美国精神障碍诊断和统计手册第4版(DSM-IV)为诊断标准,对41例临床诊断ADHD的儿童,进行Conners'父母用简明症状问卷(parent symptom questionnaire,PSQ)调查和K-CPT评估.结果:K-CPT评估结果与DSM-IV诊断标准比较,在ADHD检出率方面无显著性差异(P>0.05).K-CPT诊断学龄前ADHD的灵敏度为73.3%,特异度为81.8%,假阳性率为18.2%,假阴性率为26.7%,符合率为75.7%,Kappa值为0.470 (P< 0.001),K-CPT与金标准之间存在中度一致性.K-CPT和PSQ在患儿阳性检出率方面,差异均无显著性(P>0.05).结论:K-CPT测试结果可作为客观诊断指标,用于学龄前ADHD的协助诊断.
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保留神经的全子宫切除术对绝经前后妇女排尿排便功能的影响
目的:通过与传统全子宫切除术的比较,探讨保留神经的改良全子宫切除术对绝经前、后妇女排尿、排便功能的影响.方法:选择150例实施保留神经的改良手术的患者为研究对象,并以另150例实施传统全子宫切除术的患者为对照.于两组切除的子宫标本上分别取主韧带、骶韧带、膀胱宫颈韧带的切缘行S-100抗体的测定;根据患者是否绝经及绝经年限在两组内均分为绝经前期组、绝经早期组及绝经晚期组,分别比较术后1个月、1年的排尿及排便功能情况.结果:改良手术组的3组韧带切缘S-100阳性区域所占的面积比例均显著低于传统手术组;两组患者的手术时间、术中出血量及术后住院日比较无显著差异(P均> 0.05);改良手术组患者术后1个月、1年的尿频、排尿等待、尿失禁以及便秘发生率均低于传统组;其中绝经前、绝经早期的两组患者比较,除绝经早期患者术后1个月尿频、排尿等待的发生率有统计学意义,其余均无统计学意义(P> 0.05),而绝经晚期的患者改良手术组术后1个月、1年的尿频、排尿等待以及便秘发生率与传统手术组相比较均有显著差异.结论:改良子宫切除术较传统手术能减少支配膀胱直肠神经的损伤,降低患者术后尿频、排尿等待以及便秘的发生率,对绝经晚期的老年患者效果尤为显著.
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α-2a干扰素联合小剂量泼尼松治疗眼Behcet病疗效随访研究
目的:观察α-2a干扰素联合泼尼松治疗眼Behcet病的疗效及随访效果.方法:2002年~2011年间本科应用α-2a干扰素联合泼尼松对27例眼Behcet病患者进行治疗,观察其疗效,视力、复发等情况.结果:27例眼Behcet病患者的复发率40.74%,好于对照组常规应用泼尼松联合环孢素治疗的15例(复发率73.33%);视力恢复至1.0及以上者占65.38%,0.6以上者占86.54%.结论:α-2a干扰素对眼Behcet病的疗效优于环孢素免疫抑制剂,不良反应小且复发率低,视力下降者少.
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经鼻持续正压通气对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者血管功能的影响
目的:探讨经鼻持续正压通气(nCPAP)治疗对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)患者血管功能的影响.方法:对28例中重度OSAS患者行nCPAP治疗4个月,比较治疗前后的呼吸暂停低通气指数(AHI)、血糖、血脂、血清胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、颈股动脉脉搏波传导速度(cfPWV)及内皮依赖性舒张功能(FMD)等.结果:经nCPAP治疗后,AHI由治疗前的56±22降低到5.0±2.0,cfPWV由治疗前的(1 124±212) cm/s降低到(987±171)cm/s(P< 0.05),FMD由治疗前的(6.32±2.18)%升高到(7.54±3.04)%(P<0.05),同时治疗后的FINS、HOMA-IR、hs-CRP也较治疗前显著降低,其差异均具有统计学意义,而其他指标无显著变化.结论:nCPAP治疗能够显著改善OSAS患者的血管功能,从而降低心血管并发症的风险.
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泻火养阴颗粒治疗肺胃热盛型寻常痤疮临床观察
目的:观察泻火养阴颗粒治疗肺胃热盛型寻常痤疮的临床疗效和安全性.方法:将门诊痤疮患者120例采用随机分组的方法分为治疗组(60例)和对照组(60例).治疗组给予泻火养阴颗粒,每日1剂,1日2次,分早晚冲服;对照组口服丹参酮4粒/次,3次/d.两组治疗期间不合并外用治疗药物,治疗前后记录皮损变化和综合证候变化,并观察不良反应.结果:治疗组总有效率为95.0%,对照组总有效率为56.7%,治疗组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).治疗组未见明显的不良反应.结论:泻火养阴颗粒治疗肺胃热盛型寻常痤疮疗效明显优于丹参酮,且无明显不良反应,具有良好的临床疗效和安全性.
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2型糖尿病患者慢性肾脏病相关心血管危险因素分析
目的:探讨2型糖尿病患者慢性肾脏病(chronic kindey disease,CKD)的患病率及其相关心血管危险因素.方法:收集自2008年1月~2009年12月在江苏省省级机关医院门诊就诊的2型糖尿病患者资料,采用MDRD公式评估肾小球滤过率(eGFR),CKD定义为存在白蛋白尿或者eGFR< 60 ml/(min· 1.73 m2).白蛋白尿定义为尿白蛋白/肌酐比值(ACR)≥30 mg/g.采用Logistic回归分析2型糖尿病患者并发CKD的危险因素.结果:研究共纳入1 521例2型糖尿病患者,平均年龄(63.9±12.0)岁,平均病程(6.6±2.4)年,CKD及白蛋白尿的患病率分别为31.0%和28.9%,调整性别、年龄后,高血压、糖尿病病程及贫血为2型糖尿病患者并发CKD的危险因素,OR值分别为1.932 (95%CI=1.275~2.929,P=0.002)、1.029 (95%CI=1.001~1.058,P=0.040)及1.696 (95%CI=1.089~2.639,P=0.019).结论:2型糖尿病患者CKD及白蛋白尿高发,高血压、糖尿病病程及贫血与糖尿病患者发生CKD有关,为了预防或延缓CKD的发生与进展,应在糖尿病早期采取降糖、降压、改善贫血等综合性措施.
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左乙拉西坦添加治疗儿童难治性癫痫的临床研究
目的:观察左乙拉西坦(LEV)添加治疗儿童难治性癫痫的临床疗效和安全性.方法:对48例难治性癫痫患儿进行LEV添加治疗的开放性自身对照研究,观察其对癫痫不同发作类型的有效率及治疗前后发作频率的改变.结果:LEV添加治疗总有效率达70.9%,无发作比例为16.7%.添加治疗后患儿月发作频率减少41.3%,治疗前后有显著差异(P<0.05).不同发作类型间总有效率无统计学差异(P>0.05).不良反应轻微.结论:LEV添加治疗儿童难治性癫痫有良好疗效,且不良反应轻.
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两种早产儿视网膜病筛查模式的对比分析
目的:探讨适合中小城市的早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)的筛查模式.方法:对2005年4月~2009年4月在连云港市第一人民医院新生儿重症监护室(NICU)住院的340例符合ROP筛查标准的患儿进行登记记录.按筛查工作模式的不同分为以眼科为中心的筛查模式组(Ⅰ组,n=101)和以新生儿重症监护为中心的筛查模式组(Ⅱ组,n=239).对比两组间ROP的筛查完成率差异.结果:Ⅰ组、Ⅱ组的筛查率分别为95.05%(96/101)、92.89%(222/239)(x2=0.549,P=0.459).Ⅰ组、Ⅱ组的筛查完成率分别为24.75%(25/101)、73.64%(176/239)(x2=83.0,P=0.000).符合筛查标准并完成ROP筛查的201例患儿中,39例患有ROP,发病率为19.4%.结论:这种以NICU为中心的ROP筛查模式适合在中小城市推广,ROP防治指南出台后,连云港地区ROP发病率为19.4%.
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儿童医源性睾丸下降不全25例临床分析
目的:探讨小儿医源性睾丸下降不全的病因、治疗特点和防治措施.方法:回顾分析本院收治的25例医源性睾丸下降不全的患儿,其中腹股沟斜疝术后17例,鞘膜积液术后6例,腹股沟区局部药物注射治疗后2例.结果:所有病例均行再次睾丸下降固定术.术中见精索粘连严重,瘢痕化并短缩,其中20例存在不同程度的睾丸萎缩,经充分游离后25例均将睾丸下降固定于阴囊内.术后随访16例,睾丸均在阴囊内,未再萎缩.结论:不恰当的腹股沟区操作是医源性睾丸下降不全的原因,一旦发生应尽早行手术治疗.手术要点是将睾丸自正常组织向瘢痕处推进,注意保护睾丸血供,充分游离腹膜后精索长度.
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胸腔功能性副神经节瘤2例诊治并文献复习
目的:总结胸腔功能性副神经节瘤的临床特征及诊疗方法.方法:回顾性分析2例胸腔功能性副神经节瘤患者的临床资料,并复习相关文献.结果:例1患者行胸腔镜手术时快速病理示副神经节瘤,予中止手术,充分准备后择期开胸行肿瘤切除术,例2患者腹腔镜探查时腹膜后未探及肿瘤,继而转为开胸切除肿瘤.病理诊断均为副神经节瘤.2例患者术后高血压症状均消失,行胸片及胸部CT分别随访2年余肿瘤无复发.结论:胸腔功能性副神经节瘤发病率低,临床表现缺乏特异性,常因诊断经验不足而延误诊断,手术切除为主要治疗手段.
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IPS e.max Press全瓷修复材料在后牙全冠修复中的临床应用
目的:评价IPS e.max Press热压铸瓷修复材料在后牙人造冠修复中的临床效果.方法:为200例患者的后牙制作IPS e.maxPress全瓷冠修复体(共241颗),戴用6~12个月后进行复查,从修复体完整度、边缘适合度、牙龈炎性反应、舒适度、颜色匹配等方面评价临床效果.结果:98.3%冠完整,1.7%冠折裂;98.3%冠边缘适合度好;93.8%冠牙龈健康,3.7%出现轻微牙龈炎症,0.8%有明显牙龈红肿、出血;96.3%舒适度良好,无明显牙本质过敏,2.1%出现明显牙本质过敏,戴牙后症状减轻或消失;72.6%颜色匹配良好,24.5%个别处颜色匹配不佳,1.2%多处颜色出现不协调.结论:IPS e.max Press全瓷修复系统应用于后牙全瓷冠修复能够取得良好的临床效果,可以在后牙全冠修复中进行应用推广.
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经尿道电切治疗15例后尿道瓣膜临床分析
目的:探讨儿童后尿道瓣膜症的临床表现特点、诊疗方法及效果.方法:回顾分析本院2006年8月~2011年6月诊治的19例后尿道瓣膜患者.所有患儿均有不同程度的排尿困难,合并肾积水18例,膀胱输尿管反流10例.15例行经尿道后尿道瓣膜电切术,于12点处切开至足够口径,术后留置导尿6~30 d,随访1~42个月时间.2例给予留置导尿引流,1例自行好转,1例自动出院.结果:行后尿道瓣膜电切术15例中12例有好转,无明显术后并发症,排尿困难症状明显缓解,反复尿路感染控制.术后9例随访肌酐、尿素氮恢复明显(P<0.05).结论:早期发现后尿道瓣膜并行切开手术对缓解患者排尿症状,挽救肾功能作用巨大.
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海绵窦区硬脑膜动静脉瘘的诊断与治疗探讨
目的:探讨海绵窦区硬脑膜动静脉瘘的临床表现及治疗方法.方法:回顾性分析南京医科大学附属无锡第二医院2005年1月~2011年6月收治的10例海绵窦区硬脑膜动静脉瘘病例的临床资料及随访情况.2例行颈动脉压迫治疗,4例经动脉入路采用Onyx栓塞治疗,4例经静脉入路栓塞治疗,其中1例采用单纯微弹簧圈栓塞,1例采用单纯Onyx栓塞,2例采用Onyx结合微弹簧圈栓塞.所有患者随访6个月~3年.结果:2例压颈治疗患者症状体征完全消失,6个月后复查DSA见瘘已消失,4例经动脉入路治疗患者瘘口完全闭塞,4例经静脉入路患者中3例瘘口完全闭塞,1例有轻度残留,但症状好转.结论:海绵窦区硬脑膜动静脉瘘的临床表现以眼部症状为主,易误诊.供血单纯、流量低的患者可通过压颈治疗治愈.血管内栓塞治疗安全、效果好,应根据DSA表现个体化选择栓塞入路.
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醛固酮与肾素比值对原发性醛固酮增多症的筛查与诊断价值
目的:评价生化检查、影像学和选择性肾上腺静脉取血对原发性醛固酮增多症(原醛)分型诊断方法的价值及影响预后的因素.方法:采用回顾性研究,对124例原醛患者的临床相关检查、术后病理结果及术后随访结果进行分析.结果:①91.1%的原醛患者血钾<3.5 mmol/L;81.5%的患者血浆醛固酮/血浆肾素活性比值(ARR)> 50;②与结节样增生组比较,醛固酮腺瘤(APA)组的激发血浆肾素活性显著降低、血醛固酮和ARR显著增高(P< 0.05);APA和结节样增生组的血醛固酮和ARR均显著高于增生组(P<0.05);③肾上腺B超诊断APA的敏感性14.3%,特异性23.1%;肾上腺CT诊断APA的敏感性85.7%,特异性21.7%;④APA手术治愈率为40.9%,有效率为50.0%;特发性醛固酮增多症(IHA)手术治疗有效率8.3%.结论:ARR可用于原醛的筛查;结节样增生可能是APA和IHA之间的中间型;肾上腺CT是原醛定位诊断的主要方法,但对APA诊断的准确性并不高;病理类型是影响预后的主要因素.
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人SMOC1重组腺病毒载体的构建及其在主动脉瓣间质细胞中的表达
目的:利用AdEasyTM vector system构建携带人SMOC1基因的重组腺病毒表达载体,感染人主动脉瓣间质细胞(hAVICs)并检测外源性SMOC1在细胞中的表达和对细胞增殖的影响.方法:用PCR的方法扩增SMOC1 cDNA,将其克隆到pGEM-T Easy载体中并测序鉴定.经NotⅠ和Xho Ⅰ双酶切后接入pShuttle-CMV穿梭载体,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-CMV-SMOC1.将经PmeⅠ线性化的pShuttle-CMV穿梭载体与pAdEasyTM DNA电穿孔共转化BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒pAdEasy-SMOC1,再将经PacⅠ线性化的重组病毒骨架质粒转染HEK293A包装细胞,包装并扩增重组腺病毒(Ad-SMOC1).用Ad-SMOC1感染hAVICs,以Western blot法和免疫荧光染色法检测重组SMOC1在hAVICs中的表达与定位,用MTS法检测SMOC1对主动脉瓣间质细胞增殖的影响.结果:成功构建并包装表达SMOC1蛋白的重组腺病毒,该重组腺病毒在体外能有效感染hAVICs并高表达SMOC1蛋白,且其介导表达的SMOC1蛋白主要定位于hAVICs的胞浆和胞膜上,MTS分析表明重组SMOC1能够显著促进主动脉瓣间质细胞的增殖.结论:成功地构建了携带入SMOC1基因的重组腺病毒,并证实SMOC1具有促进增殖的作用.本研究为进一步研究SMOC1在瓣膜间质细胞中的作用奠定了实验基础.
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GST Pulldown技术检测HEK293T细胞活化的Rab35
目的:运用GST pulldown技术建立真核细胞中活化的Rab35的可靠检测方法.方法:构建GST-RUN的原核表达载体,并使其在大肠杆菌B L21中大量表达.用GST pulldown和Western blot技术分别检测HEK293T细胞中活化的Rab35及Rab35蛋白的表达.结果:成功构建了GST-RUN的原核表达载体,并使其在原核细胞中大量表达融合蛋白GST-RUN,用GSTPulldown和Western blot技术证实了HEK293T细胞中有活化的Rab35和Rab35总蛋白的表达.结论:本工作所建立的GSTPulldown技术可以检测HEK293T细胞中活化的Rab35,从而为进一步深入研究Rab35在真核细胞中的功能提供了技术保障.
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应用ERKO小鼠研究雌激素受体在MPTP致帕金森病模型中的作用
目的:探讨雌激素受体(estrogen receptors,ERs)在帕金森病(Parkinson's disease,PD)中的作用特点.方法:应用经典化学毒素MPTP腹腔注射制备小鼠PD模型,WT、αERKO和βERKO雄性小鼠随机分为Saline组和MPTP组,爬竿试验观察行为学改变,荧光定量PCR法检测纹状体和中脑ERα、ERβ、TH、DAT和VMAT2mRNA表达的变化.结果:与WT相比,αERKO 小鼠中多巴胺缺失程度更大,爬竿试验显示αERKO 小鼠更早出现行为学异常.αERKO和βERKO小鼠中脑TH、DAT和VMAT2 mRNA表达均降低.WT小鼠MPTP染毒致PD模型后,纹状体和中脑ERα mRNA表达增加,ERβ mRNA表达降低.MPTP致PD模型后,αERKO和βERKO小鼠TH和DAT mRNA表达变化情况与WT小鼠不同,βERKO小鼠VMAT2 mRNA表达变化情况与WT小鼠相同,但αERKO小鼠VMAT2 mRNA表达变化情况与WT小鼠不同.结论:ERs在黑质纹状体DA系统中有神经保护作用,ERα亚型在此过程中发挥着更重要的作用.
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螺内酯对高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激的影响
目的:观察螺内酯对高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激的影响,并且探讨该作用是否与MAPKs家族信号通路相关.方法:采用高糖和(或)螺内酯处理人肾小球系膜细胞株(HMC)后,DHE荧光染色检测细胞内活性氧(ROS)水平,NBT试剂盒法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot法检测MAPKs家族ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化及总蛋白水平.结果:DHE染色结果显示,高糖可明显增加HMC内ROS含量,而给予螺内酯干预处理后,细胞内ROS水平明显降低,与高糖刺激组相比,螺内酯干预组细胞内SOD活性明显增加(P< 0.05);Western blot结果表明,高糖可明显增加HMC细胞内ERK及p38MAPK的磷酸化水平,给予螺内酯处理后可逆转高糖的上述作用(P<0.05),而各组之间磷酸化JNK及总ERK、p38MAPK、JNK蛋白水平无明显变化.结论:螺内酯可能通过下调MAPK家族信号蛋白的磷酸化水平,降低细胞内ROS含量,增加SOD活性,拮抗由高糖所引起的氧化应激,从而起到保护肾小球系膜细胞,延缓肾小球硬化的作用.
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甲状旁腺激素对去卵巢大鼠牙槽骨吸收的抑制作用
目的:观察甲状旁腺激素(human parathyroid hormone,PTH)对去卵巢大鼠牙槽骨的影响.方法:选用60只5月龄雌性大鼠随机分3组,其中两组作为药物治疗组和对照组均行全麻手术去除卵巢(ovariectomized,OVX),建立骨质疏松模型,另一组假手术组(sham-ovariectomized,sham-OVX)作为空白对照.6周后药物治疗组(PTH组)每日皮下注射入重组甲状旁腺激素(1-34)[recombinant human parathyroid hormone,rhPTH (1-34)],模型组(OVX组)和空白对照组(sham-OVX组)每日注射定量生理盐水,40 d后处死各组大鼠制取下颌骨标本.分析X线投照影像比较各组牙槽骨丧失程度;观察第一磨牙周围牙槽骨组织形态;检测牙槽骨破骨细胞数目进行比较.结果:影像学显示OVX组第一磨牙远中牙槽骨丧失(1.34±0.89)mm多于PTH组骨丧失量(0.78±0.62)mm和sham-OVX组骨丧失量(0.67±0.54)mm,差异具有统计学意义(P均<0.05);组织形态学染色显示OVX组牙槽骨骨质吸收较PTH组和sham-OVX组骨质吸收多;破骨细胞计数显示OVX组破骨细胞数(38.6±20.2)个分别多于PTH组(23.3±13.0)个和sham-OVX组(25.0±11.4)个,差异具有统计学意义(P均<0.01).结论:PTH对骨质疏松大鼠牙槽骨的吸收有抑制作用.
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抗LINGO-1抗体可促进小鼠脊髓损伤后运动纤维再生及抑制感觉纤维萎缩
目的:观察抗LINGO-1抗体对小鼠脊髓损伤后下行运动与上行感觉纤维的保护作用.方法:采用LISA脊髓损伤造模仪制作小鼠第9胸髓背侧切割伤模型(深度1.1 mm),术后腹腔注射抗LINGO-1抗体,运用免疫组化与免疫荧光观察在脊髓损伤后,生物素化葡聚糖胺(BDA)标记的下行皮质脊髓束(CST)轴突和霍乱毒素B亚单位(CTB)标记的上行感觉纤维的变化.结果:抗LINGO-1抗体注射组动物,可见少量BDA阳性纤维长入或越过损伤部位,且在尾侧白质内前行,远可达损伤部位尾侧端1.5 mm;同时,在切口尾侧缘可见较对照组更多的CTB阳性纤维,但未见CTB阳性纤维长入或越过损伤切口.接受IgG注射的对照组动物,未发现任何BDA或CTB阳性纤维长入或越过损伤部位.结论:系统注射抗LINGO-1抗体可促进小鼠脊髓损伤后CST轴突再生,同时能抑制CTB标记的上行感觉纤维萎缩.提示抗LINGO-1抗体可作为一种新的药物用于脊髓损伤后促进轴突再生的治疗学研究.
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小鼠NOMO1基因RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究
目的:构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,比较其对P19细胞NOMO1基因的抑制效率,以研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系.方法:利用Designer3.0软件设计小鼠NOMO1基因干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pGPU6/Hygro载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒扩增,质粒DNA抽提,使用Pst Ⅰ、BamH Ⅰ进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆.将小鼠NOMO1基因RNA干扰载体转染P19细胞,以RT-PCR技术验证NOMO1基因在P19细胞中的mRNA表达.以DMSO诱导分化方案诱导P19细胞向心肌细胞分化,采用定量RT-PCR技术检测P19细胞中α-MHC等基因mRNA的表达,评估NOMO1与P19于细胞向心肌细胞方向分化的关系.结果:双酶切证实shRNA正确插入质粒,测序结果表明插入的序列正确.载体转染的P19细胞筛选稳定表达株,经RTPCR和Western blot验证4个位点设计的干扰质粒对NOMO1在P19细胞中的mRNA表达均具有较高的抑制效率.转染后P19细胞的α-MHC基因mRNA表达则显著下调(P<0.05).结论:成功构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,为研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系提供了稳定的转染细胞工具,NOMO1可能通过诱导α-MHC等基因表达,促进P19干细胞向中胚层的分化.
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人源抗EB病毒潜伏膜蛋白1特异性基因工程抗体Fab的筛选与特性
目的:应用噬菌体展示技术制备抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latert membrare protern 1,LMP1)特异性、高亲和力的全人抗体Fab片段.方法:利用稳定转染表达LMP1的SUNE-1细胞及原核表达的LMP1胞外区蛋白作为抗原对大容量人源Fab抗体库进行差减筛选及固相筛选,经过5轮细胞筛选和3轮固相筛选,随机挑选30个克隆经酶联免疫吸附法鉴定,阳性克隆进行可溶性表达,用LMP1阳性表达的人鼻咽癌细胞株HNE2/LMP1鉴定抗LMP1抗体Fab的结合活性.结果:Western blot、免疫荧光结果显示,从大容量人源Fab抗体库中筛选出1株抗LMP1抗体Fab,细胞ELISA、荧光激活细胞分类术、免疫荧光分析、免疫组化检测结果显示Fab与人鼻咽癌细胞表面LMP1分子有较好的结合活性.结论:从人源Fab抗体库中筛选的Fab抗体能够与鼻咽癌细胞表面LMP1分子特异性结合,为研制用于EBV相关肿瘤如鼻咽癌生物治疗的靶向药物,提供了候选分子.
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p53基因真核表达质粒PLJM1-p53-GFP构建及其应用
目的:构建小鼠p53基因真核表达质粒PLJM1-p53-GFP,研究其对前列腺癌细胞株PC3侵袭、增殖能力的影响.方法:从小鼠3T3-L1细胞提取总RNA,经RT-PCR获得cDNA,扩增p53基因,经酶切纯化后的产物与双酶切后的PLJM1-NRG1-GFP慢病毒载体连接,得到PLJM1-p53-GFP慢病毒载体并转化感受态细菌DH5α,通过PCR筛选阳性克隆,抽提质粒并测序鉴定.将PLJM1-p53-GFP质粒瞬时转染到PC3细胞中,提取RNA,定量PCR鉴定p53高表达水平,采用细胞侵袭实验观察高表达p53的前列腺癌细胞株PC3的侵袭能力,采用流式细胞及划痕试验研究p53对前列腺癌细胞株PC3增殖活性的影响.结果:测序证实,目的基因p53插入完全正确且无任何突变;高表达p53的PC3细胞的侵袭能力、增殖能力明显下降.结论:成功构建小鼠p53基因真核表达质粒PLJM1-p53-GFP,为深入研究肿瘤等相关疾病提供了有效的工具.
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南通市2009~2011年5种食源性致病菌监测结果分析
目的:了解南通市市售食品中5种食源性致病菌的污染状况,对食源性疾病进行预警,为制定预防控制食源性疾病发生和流行的措施提供科学依据.方法:依据《江苏省食品污染物监测网工作方案》,参照国家标准和病原微生物检验规程对市售食品中可能存在的沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)、副溶血性弧菌和空肠弯曲菌进行检测.结果:2009~2011年共检测样品363件,检出致病菌34株,总检出率为9.37%(34/363),其中沙门氏菌的检出率为4.96%(18/363),单核细胞增生李斯特菌的检出率为2.79%(9/323),副溶血性弧菌的检出率为17.50%(7/40),EHEC O157∶H7和空肠弯曲菌未检出.结论:南通市市售食品中沙门氏菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌是主要污染的食源性致病菌.生禽畜肉、海水产品污染状况较严重.加强对生禽畜肉、海水产品的管理,对南通市控制食源性疾病的传播具有重要意义.
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江苏省2008~2010年哨点监测隐性梅毒病例诊断和治疗情况分析
目的:对836例隐性梅毒病例进行分析,为完善针对隐性梅毒诊断的标准提供依据.方法:收集江苏省6个国家级性病区域监测点2008~2010年诊断的隐性梅毒病例相关资料,并收集这些病例的血清,开展非梅毒螺旋体抗原血清学(TRUST)和梅毒螺旋体抗原血清学试验(ELISA)的复核.结果:836例隐性梅毒病例平均年龄为(42.65±13.26)岁,87.92%(735/836)诊断病例来源于综合性医疗机构,82.66%(691/836)病例由住院和术(输血)前筛查检出,55.86%(467/836)的病例首选青霉素药物治疗,ELISA和TRUST同时阳性者占92.35%(772/836),TRUST阳性且滴度>1∶8的为27.28%(212/777).结论:要提高非性病诊疗机构人员隐性梅毒的实验室诊断能力和临床治疗的规范性,为实现《中国预防与控制梅毒规划(2010-2020年)》的目标奠定基础.
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姜堰市娱乐场所女性性工作者性病感染情况及相关因素分析
目的:了解姜堰市娱乐场所女性性工作者HIV、梅毒、丙型肝炎感染情况,为艾滋病行为干预工作提供科学依据.方法:采取匿名问卷调查方式,对娱乐场所女性性工作者进行询问,获取AIDS相关行为、知识、态度,同时抽取静脉血,进行HIV、梅毒和丙肝抗体检测.结果:调查对象817例,检测出HIV抗体阳性1例、梅毒抗体阳性24例及丙肝抗体阳性1例,其感染率分别为0.1%、2.9%、0.1%;AIDS知识知晓率为79.7%;近1次与客人发生性行为时使用安全套率84.5%,近1个月与客人发生性行为时每次均使用安全套率77.4%.在性服务时未使用安全套的女性性工作者梅毒感染率较使用安全套的高(x2=4.64,P<0.05).结论:娱乐场所女性性工作者HIV及丙肝感染处于较低水平、梅毒感染处于较高水平,这部分人群存在对艾滋病流行的认知不足,安全套使用率低等多种危险行为,应在娱乐场所女性性工作者中广泛开展艾滋病防治知识宣传教育和推广使用安全套行为干预工作,消除危险因素,防止艾滋病由高危人群向一般人群蔓延,减少性病艾滋病通过性接触传播.
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miR-181a/b靶向抑制多种抗凋亡蛋白表达对肺癌细胞顺铂耐药的影响
目的:研究miR-181a/b在肺癌细胞顺铂耐药形成中的作用.方法:运用miRNA实时定量PCR方法检测miR-181a/b在肺癌顺铂耐药细胞A549/CDDP与母代A549细胞中的表达差异,运用Western blot检测A549/CDDP细胞与母代细胞抗凋亡蛋白BCL2、MCL1和XIAP的表达差异,分别构建BCL2、MCL1和XIAP的3'UTR荧光素酶报告质粒验证miR-181a/b的靶基因,在耐药细胞中瞬时转染miR-181a/b模拟物以检测上调miR-181a/b对A549/CDDP细胞中BCL2、MCL1和XIAP蛋白表达及耐药性的影响,并运用流式细胞术检测转染后耐药细胞对CDDP(Cisplatin,顺铂)诱导凋亡的影响.结果:在A549/CDDP细胞中miR-181a/b均呈低表达,而抗凋亡蛋白BCL2、MCL1和XIAP则呈高表达,荧光素酶报告实验证实BCL2、MCL1和XIAP是直接受miR-181a/b调控的靶基因,在耐药细胞中上调miR-181a/b显著抑制BCL2、MCL1和XIAP蛋白表达水平,显著增加耐药细胞对顺铂的敏感性,并显著增加耐药细胞对顺铂诱导的凋亡.结论:miR-181a/b靶向抑制多种抗凋亡蛋白表达可显著增加A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性.
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多聚乙烯亚胺介导肿瘤细胞基因转染
目的:利用阳离子多聚物多聚乙烯亚胺(PEI)纳米凝胶将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)转入同步化的肿瘤细胞中并检测绿色荧光蛋白的表达率,探讨PEI作为载体介导肿瘤细胞基因转染中细胞周期对转染效率的影响.方法:通过6MVX线照射及药物阻滞使Hela及A549细胞同步化,在5个PEI/DNA梯度比(2/2、4/2、6/2、8/2、10/2μ/μg)下利用PEI介导EGFP报告基因转染进入上述同步化细胞,流式细胞仪和荧光显微镜下测定绿色荧光蛋白表达率,通过梯度试验分析细胞周期时相与表达率之间的关系.结果:在不同增殖状态及PEI/DNA比值梯度下,一定剂量-时间的X射线和顺铂可以使Hela细胞同步化于S期,一定剂量-时间的艾素可以使A549细胞同步化于G2/M期,而血清饥饿法培养则可以使细胞阻滞于G0/G1期,在不同细胞周期时相下EGFP的转染效率不同,两种同步化细胞均表现出S期及G2/M期细胞的转染率显著高于对照组(P< 0.05)和G0/G1期细胞(P< 0.0001).结论:PEI导入基因的表达效率受细胞周期制约,PEI介导的基因转染受到宿主细胞摄取、转运入核及转录能力的影响,而该进程都是细胞周期依赖性的.
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CEACAM6介导上皮间质转化增强胰腺癌细胞侵袭能力和耐药性的研究
目的:研究CEACAM6对胰腺癌细胞株SW1990侵袭能力和耐药性的影响,并探讨上皮间质转化(EMT)在其中的作用.方法:筛选及鉴定过表达CEACAM6的稳定转染SW1990-CEACAM6细胞株,通过定量PCR和Western blot方法检测SW1990细胞株中EMT相关表型标志物的改变.通过Transwell实验检测过表达CEACAM6对SW1990细胞株侵袭的影响,MTT法检测耐药指数(RI).结果:定量PCR及Western blot验证过表达CEACAM6细胞株SW1990-CEACAM6成功建立,其倾向于向间质细胞转化:波形蛋白(Vimentin)表达明显上调,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达下降.功能实验证实过表达CEACAM6具有促进SW1990胰腺癌细胞株侵袭作用,同时细胞株耐药性增强.结论:CEACAM6能够促进SW1990胰腺癌细胞株上皮间质转化,从而促进胰腺癌细胞的恶性转化.
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苏皖地区汉族人群XRCC4 rs6869366多态性与前列腺癌易感性的关系
目的:研究中国苏皖地区汉族人群X线修复交叉互补组4(XRCC4) rs6869366多态性与前列腺癌(prostate cancer,PCa)易感性的关系.方法:采用病例-对照研究,提取187例PCa患者(病例组)和210例非肿瘤患者(对照组)外周血基因组DNA,应用聚合酶链反应-连接酶特异检测技术(polymorphism chian reaction and ligase detection reaction,PCR-LDR)分析两组XRCC4 rs6869366位点的多态性,比较不同基因型与PCa易感性的关系.结果:以携带TT基因型的对象为参照组,携带GT基因型者患PCa的风险是携带TT基因型的1.15倍(OR=2.15,95%CI:1.02~4.53).结论:XRCC4 rs6869366与苏皖地区汉族人群PCa的易感性有关,GT可能是PCa的易感基因型.
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化疗药物对甲状腺未分化癌耐药基因表达的影响
目的:评价阿霉素和顺铂化疗药物对甲状腺未分化癌耐药相关基因MDR1和MRP1表达的影响.方法:分别用阿霉素和顺铂诱导人甲状腺未分化癌耐药细胞HTh74/DOX和HTh74/DDP.利用荧光定量RT-PCR检测耐药细胞中MDR1和MRP1的表达情况,并观察MDR1和MRP1抑制剂联合阿霉素或顺铂对耐药细胞进行干预的疗效.结果:HTh74/DOX细胞与亲代相比高表达MDR1而MRP1基因上调不明显;HTh74/DDP细胞与亲代相比高表达MRP1基因而MDR1基因上调不明显,且HTh74/DOX对顺铂缺乏交叉耐药,HTh74/DDP对阿霉素缺乏交叉耐药.MDR1和MRP1抑制剂分别能部分恢复HTh74/DOX和HTh74/DDP对阿霉素和顺铂的敏感性.结论:不同化疗药物可能上调不同ABC跨膜转运蛋白耐药相关基因而导致甲状腺未分化癌细胞耐药性增强.临床可能通过检测各种ABC跨膜转运蛋白或基因的表达量来预测不同化疗药物的疗效,并选用适当ABC跨膜转运蛋白抑制剂联合化疗药物进行个体化治疗方案的制定.
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组织芯片技术检测MRP1/CD9在胃癌中的表达
目的:探讨运动相关蛋白-1(MRP1/CD9)在胃癌组织中的表达与胃癌生物学行为之间的相关性.方法:采用组织芯片技术及免疫组化方法对223例胃癌组织的MRP1/CD9蛋白表达进行研究.结果:在胃癌组织中MRP1/CD9表达的阳性率为58.3%,其表达与患者的性别、年龄、浸润深度、胃癌分期无关,而与肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关.其中高-中分化组表达高于低分化组,差异有显著性(P<0.05);无淋巴结转移组表达高于淋巴结转移组,亦具有显著性(P<0.01).二元Logistic回归前进法显示:淋巴结转移先进入方程,是影响MRP1/CD9表达显著的因素,其次是分化.结论:胃癌组织中MRP1/CD9表达改变与肿瘤的分化、淋巴结转移密切相关.
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高能聚焦超声刀治疗晚期胰腺癌疼痛208例临床观察
目的:探讨高能聚焦超声刀治疗晚期胰腺癌疼痛的疗效及安全性.方法:对208例伴有疼痛的晚期胰腺癌患者给予高能聚焦超声刀治疗,观察疼痛缓解情况、不同时间点KPS评分变化以及并发症发生情况.结果:治疗后1周、1个月及3个月,总缓解率分别为77.4%、75.9%和48.9%.精神、睡眠、营养状况等有所改善,1个月后及3个月后KPS评分较治疗前明显改善(P<0.05).23例(11.1%)患者出现局部皮肤硬结,26例(12.5%)出现治疗部位烧灼样疼痛,8例(3.8%)出现肢体远端湿冷、出虚汗、心慌,5例(2.4%)出现轻度消化道并发症,经对症治疗后,短期内好转.结论:高能聚焦超声刀是一种安全、有效的治疗晚期胰腺癌疼痛的辅助治疗手段,并能有效地改善患者的生活质量.
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组织芯片检测肝细胞肝癌中ARF6蛋白的表达及临床意义
目的:探讨二磷酸腺苷核糖基化因子6(ADP-ribosylation factor 6,ARF6)在肝细胞肝癌(简称肝癌)组织中的表达及临床意义.方法:收集肝癌手术切除标本150例,以癌旁肝硬化组织作对照,制作组织芯片,用组织芯片技术结合免疫组化法,检测肝癌组织和癌旁肝硬化组织ARF6的表达,探讨ARF6表达与临床病理特征及预后之间的关系.结果:肝癌组织中ARF6的阳性表达率为48.7%(73/150),在癌旁肝硬化组织中ARF6的阳性表达率为8.3%(4/48),两者比较差异有统计学意义(P<0.05).肝癌组织中ARF6阳性表达与门静脉癌栓、临床分期、肿瘤直径及甲胎蛋白(AFP)水平相关(P<0.05).ARF6表达阴性的肝癌患者在肝切除术后的无瘤中位存活时间为45个月,1、3、5年无瘤生存率分别为(93.22±7.93)%、(58.91±6.18)%、(24.59±6.80)%;ARF6表达阳性患者的无瘤中位存活时间为36个月,1、3、5年无瘤生存率分别为(88.91±3.70)%、(41.61±5.93)%、(19.03±4.94)%.ARF6表达阴性与表达阳性的肝癌患者的无瘤生存时间差异有统计学意义(P=0.019 1).结论:肝癌组织中ARF6的表达与预后密切相关,ARF6不仅可作为肝癌预后不良的判断指标,还有望成为一种新的肝癌预后判断的标志物和潜在的治疗靶标.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |