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肿瘤靶向DNA载体--转铁蛋白-多聚乙烯亚胺体外介导小鼠IL-12基因转染小鼠骨肉瘤细胞的实验研究
目的评价转铁蛋白-多聚乙烯亚胺(Transferrin-polyethylenimine,Tf-PEI)靶向性转染小鼠骨肉瘤细胞的可行性.以Tf-PEI为载体,将小鼠IL-12基因导入小鼠骨肉瘤细胞.方法以Tf-PEI为载体,将荧光素酶基因和小鼠IL-12基因分别导入小鼠骨肉瘤细胞,并检测其转染效率.以游离转铁蛋白竞争性拮抗Tf-PEI,并观察其对转染效率的影响.结果Tf-PEI可以高效的、靶向性的转染小鼠骨肉瘤细胞.当N/P比值为5时,Tf-PEI的转染效率高.游离转铁蛋白能够显著的拮抗Tf-PEI的转染.Tf-PEI还可以成功地将小鼠IL-12基因导入小鼠骨肉瘤细胞.结论Tf-PEI是一种高效、低毒、肿瘤靶向性的基因转染载体,它能成功地将mIL-12基因导入骨肉瘤细胞,广泛应用于体内外恶性肿瘤基因治疗的实验.
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藻酸盐/PEI/DNA复合载体作为一种新型基因递送系统
目的克服多聚乙烯亚胺(PEI,polyethlenimine)/DNA载体对细胞的毒性以及在含血清培养基里对癌细胞基因的转移率低的问题.方法利用具有水溶性、可生物降解的、并带有负电的藻酸盐(alginate)对PEI/DNA载体进行包衣,制备出复合载体,并在体外含50%血清培养基里,与PEI/DNA载体比较对C3癌细胞转染率.结果在含50%血清的培养基里,藻酸盐包衣制备的复合体载体[alginate:DNA,0.15(w/w);PEI:DNA,N:P=10]与PEI/DNA载体相比,对C3癌细胞基因转染率高出10～30倍,而且其表面正电荷数比PEI/DNA载体减少了一半,颗粒较小,并降低对细胞毒性和红血球集聚反应.结论作为新型的藻酸盐包衣制备的复合载体能提高在体外含高浓度血清培养基里对C3癌细胞的转染率,并能减少其对细胞毒性.
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多聚乙烯亚胺介导基因转染的体外研究
目的 考察并确定多聚乙烯亚胺(PEI)佳的体外细胞转染条件,评价PEI作为基因转染试剂的可行性.方法 以MTT法检测不同相对分子质量PEI的细胞毒性.以PEI为载体,在不同的N/P比值条件下,将绿色荧光蛋白基因导入人Ⅱ型肺上皮A549细胞,以荧光显微镜及荧光分光光计系统检测其转染效率.结果 相对分子质量为25×103的PEI,当N/P比值为10时,其转染效率高.结论 PEI是一种价格低廉、低毒性、高效率的基因转染载体,可应用于体内外基因治疗.
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多聚乙烯亚胺介导基因转染的试验研究
目的确定多聚乙烯亚胺佳的转染条件,评价PEI替代其它转染试剂的可能性.方法以MTT法检测PEI的细胞毒性.以PEI为载体,在不同的N/P比值的条件下,将绿色荧光蛋白基因和荧光素酶基因分别导入小鼠骨肉瘤细胞,以荧光显微镜酶检测系统检测其转染效率.结果PEI的细胞毒性较低.当N/P比值为8时,PEI的转染效率高.结论PEI是一种价格低廉、低毒性、高效率的基因转染载体,可以广泛应用于体内外基因治疗.
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转铁蛋白-多聚乙烯亚胺体外转染小鼠骨肉瘤细胞的实验研究
目的评价转铁蛋白-多聚乙烯亚胺(transferrin-polyethylenimine,Tf-PEI)靶向性转染小鼠骨肉瘤细胞的可行性,并确定佳的转染条件.方法以Tf-PEI为载体,将绿色荧光蛋白基因和荧光素酶基因分别导入小鼠骨肉瘤细胞,用荧光显微镜及荧光素酶检测系统检测其转染效率.以游离转铁蛋白竞争性拮抗Tf-PEI,并观察它对转染效率的影响.结果Tf-PEI可以高效的、靶向性的转染小鼠骨肉瘤细胞.当N/P比值为5时,Tf-PEI的转染效率高.游离转铁蛋白能够显著的拮抗Tf-PEI的转染.结论Tf-PEI是一种高效率、低毒性、肿瘤靶向性的基因转染载体,它可以作为体外恶性肿瘤基因治疗试验的一个有效工具.
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多聚乙烯亚胺介导肿瘤细胞基因转染
目的:利用阳离子多聚物多聚乙烯亚胺(PEI)纳米凝胶将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)转入同步化的肿瘤细胞中并检测绿色荧光蛋白的表达率,探讨PEI作为载体介导肿瘤细胞基因转染中细胞周期对转染效率的影响.方法:通过6MVX线照射及药物阻滞使Hela及A549细胞同步化,在5个PEI/DNA梯度比(2/2、4/2、6/2、8/2、10/2μ/μg)下利用PEI介导EGFP报告基因转染进入上述同步化细胞,流式细胞仪和荧光显微镜下测定绿色荧光蛋白表达率,通过梯度试验分析细胞周期时相与表达率之间的关系.结果:在不同增殖状态及PEI/DNA比值梯度下,一定剂量-时间的X射线和顺铂可以使Hela细胞同步化于S期,一定剂量-时间的艾素可以使A549细胞同步化于G2/M期,而血清饥饿法培养则可以使细胞阻滞于G0/G1期,在不同细胞周期时相下EGFP的转染效率不同,两种同步化细胞均表现出S期及G2/M期细胞的转染率显著高于对照组(P＜ 0.05)和G0/G1期细胞(P＜ 0.0001).结论:PEI导入基因的表达效率受细胞周期制约,PEI介导的基因转染受到宿主细胞摄取、转运入核及转录能力的影响,而该进程都是细胞周期依赖性的.
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多聚乙烯亚胺介导IL-12基因增强裸鼠抗骨肉瘤免疫
目的:观察以多聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)为载体,体内转染小鼠白细胞介素12(interleukin-12,mIL-12)基因,治疗裸鼠骨肉瘤模型的疗效.方法:以PEI为载体,体外转染mIL-12基因入人骨肉瘤细胞,并观察此基因表达情况.建立裸鼠骨肉瘤动物模型,将PEI包裹mIL-12基因直接注入肿瘤局部,检测此基因的蛋白表达情况和小鼠脾脏自然杀伤细胞(NK)活性.结果:在PEk/DNA治疗组小鼠的肿瘤局部,mIL-12蛋白水平明显升高,小鼠脾NK细胞活性增强.结论:PEI可以成功的将mIL-12基因导入裸鼠骨肉瘤模型,mIL-12基因治疗可提高机体的抗肿瘤免疫应答.
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肿瘤靶向DNA载体转铁蛋白-多聚乙烯亚胺体外转染
目的 评价转铁蛋白-多聚乙烯亚胺(Tf-PEI)靶向性转染小鼠骨肉瘤细胞的可行性.以Tf-PEI为载体,将小鼠白细胞介素(IL)-12基因导入小鼠骨肉瘤细胞.方法 以Tf-PEI为载体,将绿色荧光蛋白基因和小鼠IL-12基因分别导入小鼠骨肉瘤细胞,并检测其转染效率.以游离转铁蛋白竞争性拮抗Tf-PEI,并观察它对转染效率的影响.结果 Tf-PEI可以高效的、靶向性的转染小鼠骨肉瘤细胞.当N/P比值为5时,Tf-PEI的转染效率高.游离转铁蛋白能够显著的拮抗Tf-PEI的转染.Tf-PEI还可以成功的将小鼠IL-12基因导入小鼠骨肉瘤细胞.结论 Tf-PEI是一种高效率、低毒性、肿瘤靶向性的基因转染载体,可以广泛应用于恶性肿瘤靶向性基因治疗的试验.
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FasL基因转染对大鼠同种异体心脏移植的影响
目的 观察转染FasL基因在心脏移植中是否可以诱导出一定程度的免疫耐受.方法 取SD大白鼠为受体,Wistar大白鼠为供体,各68只,分成3组,Ⅰ组:20只,心脏直接进行移植；Ⅱ组:20只,单用多聚乙烯亚胺(PEI)转染心脏后移植；Ⅲ组:28只,供心移植前用PEI介导克隆大鼠FasL(rFasL)基因转染,质粒DNA(μg)∶PEI(μl)=20∶40.分别检测移植心脏存活时间、心肌组织的苏木素-伊红(HE)染色、FasL的表达、原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测心肌组织的原位细胞凋亡、Western blot法检测FasL蛋白水平.结果 (1)Ⅲ组移植心脏的存活时间为(17.8 ±0.6)d,较另2组明显延长(P＜0.01).(2)Ⅰ组和Ⅱ组心肌组织的FasL水平渐升高,但前3d均未超过40％,Ⅲ组FasL水平在移植后3 d即达较高水平(63.65 ±3.31)η％ (P ＜0.01).(3)随着移植时间的延长,Ⅲ组心肌组织细胞凋亡指数由(13.40 ±3.46)细胞数/mm2终升至(48.90±6.91)细胞数/mm2(P＜0.05),凋亡细胞大多为浸润的炎性细胞,但Ⅰ组和Ⅱ组有大量的心肌细胞凋亡.(4)Ⅲ组FasL mRNA的转录强度和蛋白表达均比Ⅰ、Ⅱ组明显升高.结论 适当浓度的FasL基因转染移植心脏,可以诱导出一定程度的免疫耐受.
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肿瘤靶向性载体介导的IL-12基因增强裸鼠抗骨肉瘤免疫
目的观察以转铁蛋白-多聚乙烯亚胺(Transferrin-polyethylenimine,Tf-PEI)为靶向性载体,体内转染小鼠白细胞介素12(murine interleukin-12,mIL-12)基因,治疗裸鼠骨肉瘤模型的疗效.方法以Tf-PEI为载体,体外转染mIL-12基因入人骨肉瘤细胞,并以游离转铁蛋白竞争性拮抗Tf-PEI,观察基因表达情况.将Tf-PEI包裹mIL-12基因直接注入荷瘤裸鼠的肿瘤局部,检测此基因在肿瘤细胞中的表达情况和小鼠脾脏自然杀伤细胞(NK)活性.结果Tf-PEI可以靶向性的将mIL-12基因导入人骨肉瘤细胞.在Tf-PEI/DNA治疗组小鼠的肿瘤局部,mIL-12蛋白水平明显升高,小鼠脾细胞NK活性增强.结论Tf-PEI是一种高效率的肿瘤靶向性基因转染载体,它可以成功的将mIL-12基因导入裸鼠骨肉瘤模型,mIL-12基因治疗可提高机体的抗肿瘤免疫应答.
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多聚乙烯亚胺介导小鼠IL-12基因转染人骨肉瘤细胞的细胞
目的确定多聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)佳的转染条件.以PEI为载体,将mIL-12基因导入MG63细胞.方法以MTT法检测PEI的细胞毒性.以PEI为载体,在不同的条件下,将荧光素酶基因和mIL-12基因导入MG63细胞,分别检测其转染效率.结果 PEI的细胞毒性较低.当N/P比值为8时,PEI的转染效率高.PEI可以成功的将mIL-12基因导入MG63细胞.结论 PEI是一种低毒性、高效率的DNA载体,可以广泛应用于体内外基因治疗的试验.
