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深低温冷冻家兔皮质骨生物力学及骨形态计量改变的实验研究
目的探讨深低温冷冻法对家兔皮质骨的生物力学变化及骨形态计量的影响.方法将 150只家兔随机分为新鲜标本组(对照组)30只,深低温冷冻4周、8周、12周、16周各30只,取左股骨皮质骨测定极限弯曲强度(BS)、极限压缩强度(CS).取右胫骨进行骨形态计量分析.结果深低温冷冻后家兔皮质骨的生物力学(极限弯曲强度和极限压缩强度)及骨形态计量分析(骨小梁体积、宽度以及平均骨小梁间距)均无明显改变.结论深低温冷冻骨的生物力学稳定,骨形态计量无明显改变,且随冷冻时间延长亦无改变,为深低温冷冻骨库的建立提供了有力的实验依据.
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深低温冻储消减气管抗原的实验研究
目的研究深低温冻储消减气管抗原,用于同种异体移植的可行性及所需冻储的短时间.方法通过纤维支气管镜检查、黏膜血流量的测量、病理学检查、血管造影以及存活率和通畅度的计算,分别研究以犬单侧胸头肌瓣和双侧胸骨舌骨肌-胸骨甲状肌联合瓣包裹自体移植气管和未冻储、冻储不同时间的同种异体移植气管术后的存活情况.结果未冻储和冻储1 d,2、4周的同种异体气管,移植后第1周时黏膜外观以及黏膜血流量与冻储6周和8周的同种异体移植气管相同,但在第2周时大部分黏膜呈现灰黑色,部分软骨环外露.大部分移植气管在术后短期内坏死.显微镜下见移植气管内有大量单核细胞浸润,病理变化尤以未冻储、冻储1d和2周组为重.而冻储6周和8周的气管移植后与自体移植的气管无明显差别,未见有单核细胞浸润,可长期存活.结论气管经深低温冻储6周以上才可以消减其抗原性,同种异体移植后不发生免疫排斥反应,移植气管可长期存活.
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应用同种异体肌腱重建前交叉韧带的研究进展
前交叉韧带(ACL)是膝关节容易损伤的韧带结构,损伤后严重影响膝关节的功能,远期可致膝关节退变.ACL损伤后重建可以有效地改善膝关节功能,延缓病程进展.重建材料的选择是影响重建临床效果及远期预后的重要因素.同种异体肌腱是ACL重建的可选材料之一,随着技术的发展和研究的深入,射线照射和深低温冷冻等的应用使感染和免疫排斥反应得到了有效控制,同种异体肌腱是ACL重建的临床应用逐渐得到认可,但是全面的推广应用仍需要进一步的研究.
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深低温冷冻骨的形态学及免疫组织化学检测
背景:深低温冷冻技术能够降低同种异体骨的免疫原性,对修复骨缺损具有重要意义.目的:观察深低温冷冻对骨材料中骨形态发生蛋白2表达的影响.方法:18只新西兰兔随机分为3组,深低温冷冻3个月组,深低温冷冻6个月组,新鲜骨对照组,取右侧胫骨中上1/3,分别于-80 ℃保存保存3个月,6个月及不保存,进行苏木精-伊红染色和骨形态发生蛋白2免疫组织化学染色.结果与结论:深低温冷冻后骨材料形态学,与新鲜骨差异不大;深低温冷冻3个月及6个月骨组织中骨形态发生蛋白2均有表达,但较新鲜骨降低.
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快速冷冻与慢速冷冻条件下复合组织血管内皮的生物活性
背景:恢复良好血供对于复合组织保存及再植至关重要,但不同冷冻方法对血管活性影响不同.目的:比较快速冷冻与慢速冷冻方法对复合组织血管内皮活性的影响.方法:新西兰大白兔后肢分别进行快速冷冻与慢速冷冻,快速冷冻的兔后肢直接放入液氮中,慢速冷冻组经4 ℃,-20 ℃,-80 ℃冷冻后再投入到液氮中,各组依次保存12 h,3 d,7 d后快速复温,并设对照组.所有新西兰大白兔后肢均经甲醛溶液固定后行苏木精-伊红染色及免疫组织化学染色检测各组血管内皮的病理变化.结果与结论:快速冷冻组和慢速冷冻组冷冻12 h,3 d,7 d时兔血管组织形态评分均低于对照组(P < 0.05).快速冷冻组冷冻12 h,3,7 d时血管内皮组织血管内皮生长因子评分低于慢速冷冻组(P < 0.05).证实,慢速冷冻法能更好的维持复合组织中的血管内皮细胞的生物学活性.
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异体肌腱材料选择及应用Tibial-inlay技术重建膝关节后交叉韧带17例
背景:自体肌腱移植重建后交叉韧带存在供体区域并发症等问题,虽然人工腱的研制与组织工程腱的研究有了长足的进展,但在临床应用上尚存在一些问题.自20世纪80年代起,同种异体肌腱移植的相关研究逐渐被人们所重视.目的:同种异体肌腱材料的选择及其应用于重建膝关节后交叉韧带的效果.方法:17例膝关节后叉韧带损伤患者均使用深低温冷冻同种异体肌腱应用Tibial-inlay技术重建后交叉韧带.术中将用庆大霉素盐水浸泡过15min的两束异体肌腱对折,肌腱的一端套入松质骨螺钉加垫片固定在后叉韧带的胫骨附着点处,另一端通过牵引线引入关节内,修复切开的后关节囊.变换体位为平卧位,患膝屈曲90°,从关节内将移植物的另一端引入股骨隧道,前抽屉拉紧后由外向内拧入挤压螺钉固定.结果与结论:术前后抽屉试验均>2+,其中3+程度7例,4+程度6例,术后后抽屉试验结果0为4例,1+为8例,2+为4例,3+为1例,显示患者膝关节的后移程度较术前有明显改善.患者术前的Lysholm关节评分为(48.5±4.3)分,术后Lysholm关节评分为(88.3±5.4)分.说明深低温冷冻异体肌腱应用Tibial-inlay技术修复膝关节后交叉韧带不损伤正常的自身结构,可恢复后交叉韧带的功能,治疗效果满意.
关键词： 同种异体肌腱 Tibial-inlay 后交叉韧带 深低温冷冻 生物材料 -
深低温冻存毛囊的实验研究
目的 建立一种长时间体外保存毛囊的方法.方法 取自愿捐献的成人头皮标本,在显微镜下分离成毛囊单位,随机分为3组.一组直接行毛囊培养;另外两组分别用常规冻存法和玻璃化冻存法液氮中保存21 d,复温后行毛囊培养,观测各组毛囊存活及生长情况.结果 玻璃化冻存组的毛囊解冻后,其存活及生长情况与直接培养组相近,优于常规冻存组.结论 使用玻璃化冻存法长时间保存毛囊,对其存活和特性无明显影响,为临床应用提供了实验基础.
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深低温冷冻同种异体月骨移植临床应用6例报告
目的研究深低温冷冻同种异体月骨移植治疗月骨无菌性坏死的临床疗效.方法应用深低温冷冻同种异体月骨移植治疗月骨无菌性坏死6例,随访10年以上.结果6例患者切口一期愈合,术后无明显排异反应及手术并发症.随访10年以上,摄X线片显示月骨轮廓清晰,大小正常,骨小梁排列整齐,整个月骨密度均匀一致无明显脱钙,腕关节活动无疼痛,活动范围屈和(或)伸30～0～25.能完成日常劳动,病人关节功能恢复满意.结论.深低温冷冻同种异体月骨移植治疗月骨无菌性坏死疗效满意.
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不同脱敏方法治疗牙本质过敏症的临床疗效观察
目的观察2种不同脱敏方法治疗牙本质过敏症的作用,并探讨其作用机制.方法随机抽样,取牙本质过敏症患牙160颗,分成2组.试验组80颗为深低温冷冻组,对照组用熨热疗法治疗.结果试验组近期有效率96.4%,而对照组仅为75%,其间有显著性差异(P＜0.01).结论深低温冷冻是一种安全、有效的治疗牙质过敏症的好方法.
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深低温同种异体关节软骨帽移植的实验研究
目的观察经深低温冷冻保存的同种异体关节软骨帽移植修复关节软骨缺损(Articular Cartilage,AC)的实验效果.方法取成年新西兰大白兔36只,其中12只作为关节软骨帽供体,另24只兔作为关节软骨帽受体,将受体动物随机分为A、B两组,严格无菌条件下A组12只肱骨头行深低温冷冻软骨帽移植,B组12只肱骨头行新鲜软骨帽移植.术后常规抗感染3 d,两组分别于6、12周取肱骨头作相关观察与检测.结果术后6周大体观察,光镜,电境A、B两组无明显区别,移植物无明显移位,表面光滑、有光泽.软骨细胞形态基本正常,细胞核形态基本正常.S-100(β亚链)蛋白免疫组化染色无差异.12周时,A、B两组移植物外形良好,移植物表面颜色为乳白色,中心负重区可见明显塌陷.移植软骨有退行性改变.在电镜观察上,两个时间点上均无统计学差异(P>0.05). 结论 (1)大块软骨组织中的软骨细胞在经过深低温冷冻处理后,仍可保持较好的生物活性,可以用于长期库存和移植使用.(2)大块深低温冷冻保存和新鲜同种异体软骨移植的近期效果良好,但远期效果有待进一步研究.
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两种不同移植物重建膝前交叉韧带的临床疗效比较
[目的]探讨自体髌腱与深低温冷冻同种异体髌腱重建膝关节前交叉韧带的临床疗效差异.[方法]72例ACL断裂患者于术前应用电脑随机抽样方法分为两组:A组36例为自体髌腱组,B组36例为单纯深低温冷冻保存同种异体髌腱组.两组病例均由同一术者采用标准关节镜技术完成前交叉韧带重建.通过一般情况比较、轴移试验、Lachman试验、Daniel单腿水平跳跃试验、IKDC评分、Lysholm-Tegner运动水平评分及KT-2000检测评价临床疗效.[结果]70例患者获得随访,平均随访时间A组(36例)39.5个月、B组(34例)36.3个月,2例失访.A组发生术中髌骨骨折1例、术后髌前痛2例,B组出现迟发感染1例.A组平均手术时间较B组长,术后发热天数较B组短.两组住院时间无差异.A、B两组轴移试验、Lachman试验及KT-2000检测的差异无统计学意义.A、B两组ACL重建失败率分别为8%、9%,差异无统计学意义.两组间Daniel单腿水平跳跃试验、IKDC评分及Lysholm-Tegner运动水平评分的差异无统计学差异.[结论]单纯深低温冷冻同种异体髌腱与自体髌腱相比较,重建前交叉韧带的术后短期疗效接近,可作为自体移植物重建前交叉韧带的一个良好的移植替代物.
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新鲜和深低温冷冻同种异体骨软骨移植长期转归实验研究
[目的]观察和比较新鲜和深低温冷冻同种异体骨软骨移植后的长期转归情况,为同种异体骨软骨移植治疗关节软骨缺损进一步提供理论基础.[方法]建立兔膝关节软骨缺损模型,行新鲜和深低温冷冻同种异体骨软骨移植.在术后12个月和18个月,骨软骨移植物取材进行关节软骨蛋白多糖、软骨细胞活性检测和软骨细胞超微结构观察.[结果]新鲜和冷冻骨软骨移植物中蛋白多糖阿尔新蓝染色强度和存活软骨细胞比率术后均下降,且在各时间点新鲜移植组的结果优于冷冻移植组,有统计学差异(P<0.05).超微结构显示软骨细胞退行性改变.[结论]新鲜和深低温冷冻同种异体骨软骨在移植术后较长时间均出现严重退变,冷冻骨软骨移植物退变较严重,其作为关节软骨缺损治疗方法目前是不可行的.
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深低温冷冻异体肌腱移植的组织学和生物力学研究
[目的]探讨深低温冷冻同种异体肌腱替代自体肌腱进行移植治疗肌腱缺损的可行性及移植后异体肌腱的形态学和生物力学性能的动态变化.[方法]采用兔跟腱缺损修复模型,经深低温冷冻的同种异体跟腱为实验组.自体跟腱移植为对照组,分别在术前及术后2、4、8周时对实验组同种异体跟腱及对照组自体跟腱进行大体观察、组织学检查和生物力学测试.[结果]同种异体跟腱与自体跟腱在移植前和移植后2、4、8周时其大体观察、组织学检查和生物力学测试等各项指标均无明显差异,显示同种异体跟腱和自体跟腱有相类似的结构及愈合过程.另外,同种异体跟腱在移植后其力学性能(除衰竭应变外)均比移植前明显降低.随时间推进有上升的趋势,但8周时仍明显低于移植前水平.[结论]深低温冷冻同种异体肌腱可替代自体肌腱应用于移植修复肌腱缺损.同时,由于移植后肌腱力学性能明显下降,需给予适当保护,防止过度牵拉而导致衰竭.
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深低温冷冻同种异体骨移植的临床应用
在骨科临床实践中,骨移植早多取自自体,虽然骨生成力强,容易愈合,但来源有限,且增加手术创伤,其应用受到限制.
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玻璃化深低温冷冻保存气管的实验研究
玻璃化深低温冷冻在降温过程中大大减少冰晶的形成,极大的减轻了冷冻保存过程中对组织、细胞的损伤,前景广阔.本文旨在研究玻璃化快速降温对气管组织结构的影响,实验分为玻璃化快速降温组、程控缓慢降温组、新鲜未冷冻组3组,通过HE染色、TUNEL染色、透射电镜及扫描电镜等检查,评价不同冷冻方法对气管软骨和纤毛结构影响.结果显示,玻璃化快速降温组的气管软骨板结构完整,黏膜上皮及其纤毛结构、软骨细胞形态保持良好,与传统程控缓慢降温相比,快速降温冷冻对软骨细胞损伤轻,有更高的软骨细胞存活率和纤毛上皮的覆盖率,获得较高的软骨复苏率,较好地保持形态结构完整,其保存效果优于传统缓慢降温的保存效果.
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深低温冷冻同种异体骨移植修复良性骨肿瘤及骨折术后骨缺损临床效果观察
目的 探讨深低温冷冻贮存同种异体骨临床应用的可行性和优点.方法 将经过无菌处理后贮存于-80℃冰箱进行深低温冷冻储存的健康异体骨,移植于17例因良性骨肿瘤或骨折术后形成的骨缺损区域、大段移植或不稳定者,并加以内或外固定.结果 17例患者,平均随访28个月,16例愈合良好(占92.16%).结论 深低温冷冻同种异体骨修复骨缺损患者术后功能恢复良好,无严重并发症.
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深温冷冻对大鼠髌腱组织内肌腱干细胞生物学特性影响的研究
目的 探讨深低温冷冻处理对大鼠髌腱组织中肌腱干细胞(tendon-derived stem cells,TDSCs)的成活、细胞活力、早期凋亡、迁移能力及肌腱相关基因表达的影响.方法 取12只4月龄雄性SD大鼠双侧髌腱组织,其中6只大鼠12条髌腱组织(实验组)进行深低温冷冻处理;剩余髌腱组织(对照组)不作处理,作为正常对照.取两组髌腱组织用0.3％Ⅰ型胶原酶消化获得有核细胞,分别用锥虫蓝染色检测有核细胞成活率、结晶紫染色检测有核细胞克隆形成能力;取两组髌腱组织分离培养TDSCs,并传至第3代,采用Alamar Blue法检测细胞体外增殖能力;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测细胞早期凋亡率;Transwell法检测细胞迁移能力;实时荧光定量PCR检测细胞肌腱相关基因Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,Col1α1)、scleraxis (Scx)和tenomodulin (Tnmd) mRNA表达.结果 与对照组(91.00％±3.63％)比较,实验组原代有核细胞成活率为61.65％±4.76％,差异有统计学意义(t=12.010,P=0.000).两组有核细胞接种后,均呈克隆样生长;培养12d,实验组每1 000个有核细胞克隆集落形成数为(8.41±0.33)个,较对照组(15.19±0.47)个显著减少(t=28.910,P=0.000).实验组TDSCs占活性有核细胞比例为1.37％±0.09％,较对照组1.67％±0.10％显著减少(t=5.508,P=0.003).第3代TDSCs培养14d内两组细胞生长趋势一致;两组各时间点吸光度(A)值比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).实验组及对照组TDSCs早期凋亡率分别为1.67％±0.06％、1.63％±0.06％,比较差异无统计学意义(t=0.707,P=0.519).镜下见,两组均有TDSCs黏附于Transwell小室下室,实验组细胞数为(445.00±9.70)个,对照组为(451.50±12.66)个,比较差异无统计学意义(t=0.998,P=0.342).实验组Col1α1、Scx、Tnmd的mRNA相对表达量分别为3.498±0.065、0.062±0.002、(4.211±0.211) ×10-5,对照组分别为3.499±0.113、0.062±0.001、(4.341±0.274) ×10-5,比较差异均无统计学意义(t=0.013,P=0.991;t=0.042,P=0.969;t=0.653,P=0.549).结论 大鼠肌腱组织经深低温冷冻后其有核细胞成活率降低,但肌腱组织仍保留大量有活性TDSCs,且细胞增殖能力、早期凋亡率、体外迁移能力及成肌腱分化能力未见明显异常.
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深低温冷冻骨库的建立及临床应用
目的:研究修复骨缺损的材料.方法:采用同种异体骨经深低温冷冻后应用于临床需植骨的病例,其中骨良性肿瘤15例,开放性骨折骨压缩、缺损8例,瘤样病变7例,骨折后骨不愈合5例.结果:临床应用35例,无1例感染,无明显排斥反应.其中28例经4-24月随访,平均随访13月,所有患者无异常感觉和反应;其中25例患者巳达到临床愈合,3例显示有骨愈合趋势.结论:深低温冷冻骨具有良好的骨诱导能力,来源广泛,是临床修复骨缺损较好的一种材料.
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深低温冷冻对鼠异体气管移植的免疫调节作用
0 引言 通过大鼠冷冻气管移植术后为同时间段移植体的大体及病理改变,了解深低温冷冻对气管移植体各组织活性及免疫原性影响,为今后冷冻气管移植临床应用提供依据.
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同种异体肌腱的研究进展
肌腱损伤是手部常见的损伤之一,而肌腱缺损在肌腱损伤中也占相当大的比例.目前一般首选的治疗方案是自体肌腱移植.当肌腱缺损范围大,自体肌腱移植材料受限,不能满足临床需要,给修复重建肌腱带来困难.同种异体肌腱移植是目前修复多条肌腱缺损的为理想的方法.与自体肌腱移植相比,异体肌腱移植具有:来源丰富,取材方便;不破坏宿主的正常结构,保持其原有生物结构特性;能满足重建及修复手术对供体量与质的要求;减少切口与出血;缩短了手术时间等优点.国内外学者对异体肌腱的获取、保存、处理,免疫学特性,临床应用和预后方面做了大量的研究工作.为我们临床工作中的肌腱移植提供了理论支持和应用经验.
