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高效毛细管电泳法测定四维灵芝液中核苷类成分的含量
目的:建立毛细管电泳测定液体制剂--四维灵芝液中核苷类成分的方法.方法:熔融石英毛细管柱75 μm id×57 cm (有效长度50 cm);缓冲体系 20 mmol*L-1硼砂含30 mmol*L-1 SDS,添加5%乙醇(95%),pH 10.0(1 mol*L-1NaOH调节);气动进样时间15 s;分离电压10 kV(恒压方式);柱温 20 ℃;检测波长 254 nm .结果:回归方程腺苷:Y=0.0705+0.01707X(r=0.9995);鸟苷:Y=0.0232+0.01864X(r=0.9999).平均回收率(n=5):腺苷为99.22%,RSD=3.66%;鸟苷为104.3%,RSD=1.91%.根据建立的方法,测定了9批样品腺苷与鸟苷的含量.结论:方法简便、快速、准确、重现性好,可用于样品核苷类成分测定.
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苦碟子药材及其注射液中化学成分的HPLC-ESI-MSn分析
应用HPLC-ESI-MSn建立1种苦碟子药材及其注射液的快速定性分析方法.通过与对照品保留时间、多级质谱信息对照,快速定性分析苦碟子药材及其注射液中的化学成分.共鉴定出33个化合物,核苷类3个、有机酸类16个、黄酮类7个以及倍半萜内酯类7个,其中通过对照品比对准确鉴定了12个化合物,11个化合物为首次在苦碟子中发现.结合已知化合物的裂解规律和未知化合物的多级质谱信息,对5个同分异构体的化合物结构进行了预测.所建立的苦碟子HPLC-ESI-MSn定性分析方法简单、快速、高效,可以为苦碟子的质量控制和评价提供有效依据.
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高效液相色谱定量分析比较4种虫草药材的核苷类成分
为比较4种常见虫草类药材(冬虫夏草、蛹虫草、虫草菌丝体和蝉花)中核苷类成分的差异,该研究以0.5%磷酸溶液提取样本,色谱柱为Zorbax SB-Aq(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为0.04 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(A)和乙腈(B),梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,检测波长260 nm,柱温30℃,对4类药材产品进行分析.已知核苷以外标一点法进行计算,未知成分以腺苷为对照进行计算,并对测定结果进行聚类分析,同时利用指纹图谱相似度软件对不同样本进行了比较.结果显示,冬虫夏草、蛹虫草、虫草菌丝体、蝉花4种药材中的核苷类成分差异较大,聚类分析和指纹图谱分析均可有效区分冬虫夏草和其他3种虫草药材.该研究建立的核苷测定方法准确可靠,可用于虫草类产品的品质评价.
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基于特征图谱及多指标成分含量的冬虫夏草野生与人工繁育品比较研究
采用高效液相色谱法建立冬虫夏草野生及人工繁育品的特征图谱,并同时测定4种主要核苷的含量.以尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷等4种成分为对照品,采用Waters XSelect HSS T3 C18(4.6 mm×250 mm,5μm);水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~5 min,0% B;5 ~ 15 min,0 ~ 10%B,15 ~ 30 min,10% ~20%B;30~33 min,20% ~50%B;33 ~ 35 min,50% ~0% B;35 ~40 min,0%B),流速0.6 mL · min-1,检测波长为260 nm,柱温30℃,进样量5μL,建立冬虫夏草野生品和人工繁育品的特征图谱,并同时测定4种主要核苷的含量.冬虫夏草人工繁育品和野生品之间特征图谱和4种主要核苷含量均无显著性差异,该研究能够为冬虫夏草人工繁育品的进一步开发利用提供科学依据.
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UFLC-QTRAP-MS-MS同时测定蚁巢伞属3种鸡中氨基酸核苷含量及PCA分析
建立高分离度快速液相色谱质谱联用(UFLC-QTRAP-MS-MS)同 时测定蚁巢伞属3种鸡中15种氨基酸和12种核苷类成分的方法.采用Waters XBridge Amide 色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5 μm),流动相为0.2%甲酸水-0.2%甲酸乙腈,梯度洗脱,柱温30 ℃,流速0.6 mL·min-1,采用电喷雾正离子源(ESI+),多反应离子 监测(MRM)模式进行检测.采用PCA主成分分析法对不同品种的蚁巢伞属鸡 进行综合评价.结果15种氨基酸成分和12种核苷成分在一定浓度范围内均呈良好的线性关系,相关 系数均大于0.997 3,精密度,重复性和稳定性良好;加样回收率在95.14%~105.0%,RSD均小于 5.0%.PCA分析显示在氨基酸中,鸡综合评价指数分高;在核苷中,黄鸡 综合评价指数高.所建立的方法准确、重复性好,可用于蚁巢伞属3种鸡 中15种氨基酸和12种核苷类成分的同时测定,为蚁巢伞属鸡资源内在质量的综合评价、全面控制以及合理开发应用提供新的方法参考.
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疾病干预的新靶点:嘌呤与嘧啶受体
内源性核苷、核苷酸通过嘌呤与嘧啶受体(P受体),参与机体组织器官多种功能的调节.在肿瘤、细胞凋亡、局部缺血、伤口愈合、骨质疏松、药物毒性、炎症及痛觉等病理状态下,P受体的内源性配体核苷与核苷酸发挥保护作用,P1、P2受体及其受体亚型的选择性激动剂和拮抗剂具有宽广的临床应用前景.
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乙型肝炎DNA疫苗的动物试验与临床试验研究进展
乙型肝炎病毒( hepatitis B virus, HBV)感染是世界范围内的公共卫生难题。目前,治疗乙肝的常用药物是干扰素和核苷类似物。干扰素作为广谱抗病毒抑制剂,可以选择性杀灭被病毒感染的细胞,但会产生一些副作用且实际疗效不够理想,许多患者不得不放弃治疗。而核苷类似物主要有拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦和替诺福韦等,可以抑制DNA多聚酶和逆转录酶的活性,发挥抗病毒作用,但是疗程不稳定,病毒耐药性变异的出现还会使原来的治疗方案失效[1]。因此,许多科研人员致力于探索辅助治疗HBV感染的新方式, DNA疫苗就是其中的一种。
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PCR检测氨基糖苷类修饰酶基因
耐氨基糖苷类药物的重要原因为细菌产氨基糖苷类修饰酶(AMEs).根据AMEs的修饰活性可分3类,即乙酰转移酶(aac基因编码)、磷酸转移酶(aph基因编码)和核苷转移酶(ant基因编码).
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核苷(酸)类似物治疗慢性乙型肝炎研究进展
目前,乙型肝炎病毒(HBV)感染依然是一个国际性的公共卫生难题,估计影响全球近4亿人.高达40%的慢性乙型肝炎(CHB)患者可能因之出现肝硬化(LC)/肝细胞癌(HCC)[1] 等并发症.目前用于治疗CHB的抗病毒药物有干扰素(包括普通干扰素和聚乙二醇干扰素)和口服核苷(酸)类似物(NAs)两类[2].前者除具有直接抑制HBV作用外,还可上调被感染肝细胞主要组织相容性复合抗原(MHC-1)的表达以及激活和调节各种免疫途径和细胞因子来抑制HBV复制.其优点是兼有免疫调节作用且与NAs无交叉耐药性和可限(1~1.5年)的治疗疗程,但因存在显著的副作用和需要通过注射方式给药等弊端,不易为患者所接受[3].因NAs可弥补此类不足,在临床得到日趋广泛的应用.本文将目前上市的几种NAs临床应用情况简介如下.
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关于乙型肝炎病毒预存耐药变异的认识
核苷(酸)类似物长期抗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)治疗面临的重要问题之一是HBV的耐药性问题[1].目前口服的核苷(酸)类似物,包括拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦和替比夫定,治疗过程中均可出现耐药性.特别是近年来发现慢性乙型肝炎患者在核苷(酸)类似物治疗前即存在耐药位点突变,即预存耐药变异(pre-existing antiviral resistance mutation),引起了临床医师的高度关注.一、HBV预存耐药变异的基础.
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抗乙型肝炎病毒核苷(酸)类似物研制现状、未来
核苷(酸)类似物已成为继干扰素之后的又一类用于抗乙型肝炎病毒(HBV)的药物,运用至今已经10余年.由于对其基本的结构认识不足或误区,临床广泛运用后出现的问题也日益显示出来,例如相当一部分患者首选仍为拉米呋啶(LAM)及阿德福韦酯(ADV)特别是近过多地强调联合应用,将来可能会出现一些难以解决的问题.本文就核苷(酸)类似物基本结构及抗HBV治疗中现状和未来谈几点个人肤浅的看法.
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适配子技术在自身免疫性疾病研究中的应用
适配子是能通过特定三维结构与多种靶标紧密结合的寡核苷酸或肽.由于具有亲和力高,特异性好,分子量小,免疫原性低,结构稳定,易合成等优点,适配子替代传统抗体,在多种疾病的基础研究、药物筛选、临床诊断及疾病治疗中具有广泛的应用前景.现对适配子技术在自身免疫性疾病的诊断、治疗和致病机制研究中的应用现状及进展进行阐述.
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双环醇在慢性乙型肝炎联合治疗中的应用
目前普遍认为,HBV病毒水平是慢性乙型肝炎病程转归的决定因素,因此抗病毒治疗正成为慢性乙型肝炎治疗的主流趋势;同时,病理生理机制研究目前还不能完全清楚地揭示肝脏炎症触发后的确切变化过程,传统的非特异性抗炎治疗逐渐被边缘化.干扰素和核苷(酸)类似物的应用使得血清病毒标志物和HBV DNA水平有了改善,但在慢性乙型肝炎的治疗方面,仍然存在缺憾:
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乙型肝炎病毒对拉米夫定耐药的研究进展
拉米夫定(lamivudine,LMV)是第一种用于治疗慢性乙型肝炎(乙肝)新的核苷(酸)类似物,可明显抑制乙肝病毒(HBV)DNA复制,提高HBeAg血清转换率,并使患者获得肝脏生物化学和组织学改善,但临床上部分患者可表现为无应答,或随用药时间延长出现反弹,即对LMV产生耐药.近期研究结果表明,HBV对LMV产生耐药可能涉及病毒、宿主及治疗方案等多因素的相互作用,存在复杂的机制.
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慢性乙型肝炎抗病毒治疗之我见
1乙型肝炎抗病毒治疗的策略1.1针对病毒的治疗干扰素;核苷类似物及非核苷类似物等化疗药物;靶向抗病毒治疗.
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核苷(酸)类似物治疗慢性乙型肝炎耐药研究进展
核苷(酸)类似物是临床治疗慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者的重要药物,疗效已经得到肯定,但因对HBV cccDNA无直接作用,须长期使用,且易导致乙型肝炎病毒(HBV)产生耐药变异,所以,临床医师应了解各种核苷(酸)类似物的特点,合理制定抗病毒治疗方案,减少耐药变异的发生机率.同时,通过监测病毒耐药变异,及时采取有效措施,避免或减轻临床耐药带来的不良反应.
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亚太地区肝病学会2008年《慢性乙型肝炎治疗共识》导读
自2005年亚太地区肝病学会(APASL)第3版<慢性乙型肝炎治疗共识>(2005版共识)[1]发表以来,新的治疗药物如聚乙二醇干扰素α-2α、恩替卡韦和替比夫定先后在亚太地区许多国家上市,而且,近年来对核苷(酸)类似物的耐药机制、预防和处理的研究也有了很大进展.
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慢性乙型肝炎的免疫调节治疗:挑战与机遇
慢性乙型肝炎的抗病毒治疗药物主要包括核苷类似物和干扰素,其中核苷类似物主要抑制HBV复制;普通干扰素以抑制病毒为主,兼有免疫调节作用[1-2].值得关注的是长效干扰素(PEG-IFN α 2a)在5%~8%的HBeAg转阴并发生HBeAh转换的慢性乙型肝炎患者治疗中,出现HBsAg血清转换,显示其可能具有通过诱导免疫应答来清除病毒的作用.
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聚乙二醇干扰素α-2b单药或聚乙二醇干扰素α-2b联合拉米夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的多中心、随机、双盲、对照试验
与干扰素非应答者相比,应答的慢性乙型肝炎(乙肝)患者发生肝硬化、肝衰竭及肝细胞癌的可能性明显下降[1,2].然而,大部分慢性乙肝患者不能获得应答.在已经获得批准治疗慢性乙肝的药物中,常用的是干扰素和核苷类似物,如拉米夫定或阿德福韦.
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拉米夫定停药后复发的慢性乙型肝炎的抗病毒治疗
乙型肝炎病毒(HBV)的感染是重要的传染病之一.拉米夫定现仍是治疗慢性乙型肝炎的一线药物,但由于疗程短及耐药株的出现可引起停药后复发.对于这些患者可以拉米夫定再治疗,联合IFNα或其他核苷类似物或免疫调节剂治疗,及新药治疗,但这些方法各有优缺点,不能完全解决慢性乙型肝炎的治疗问题.尚需开发更加有效的药物.