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HPLC分析虫草发酵制品中多种核苷及碱基
目的:建立高效液相色谱定量分析虫草制品中8种核苷及碱基的方法.方法:用HPLC测定虫草制品超声提取液中的尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷、腺苷和3'-脱氧腺苷含量.色谱条件:Kromasil C8柱(200mm×4.6 mm,5 μm),采用梯度洗脱,流动相甲醇-双蒸水(2:98)10 min0.2min→(15:85)25 min,流速1 mL·min-1,柱温30℃,检测波长260 nm,进样量20 μL,灵敏度0.01 AUFS.结果:此法成功应用于不同来源虫草制品中核苷及碱基的测定,在相应浓度范围内各组分线性相关系数均高于0.9988,精密度和重复性试验的RSD值都小于5.0%,8种组分的回收率为95.8%～102.5%,含量8 h内稳定.实验表明不同菌种、培养方法所得虫草产品及同一发酵产物的不同部位其核苷、碱基含量有较大差异.结论:本测定方法快速、简便,能用于不同来源虫草及其发酵品中多种核苷、碱基的同时测定,对于全面评估虫草制品的质量有重要意义.
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RP-HPLC法测定板蓝根药材中核苷类成分的含量
目的:建立了中药材板蓝根中尿苷、腺苷和鸟苷的反相高效液相色谱含量测定方法.方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18分析柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为10 mmoL·L-1磷酸二氢钠(1%磷酸调pH 2.9)-甲醇(3:97);柱温25℃;流速0.8 mL·min-1;检测波长254 nm.结果:尿苷、腺苷和鸟苷的线性范围分别为10.7～107.0,10.1～101.1,10.6～106.0μg·mL-1;相关系数分别为0.9996,0.9996,0.9995.平均回收率(n=3)分别为97.2%,101.6%,97.3%;RSD分别为1.1%,3.3%,1.2%.结论:采用反相高效液相色谱法同时测定板蓝根中尿苷、腺苷和鸟苷3种成分的含量,方法简便、快速、准确,结果可靠.
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一测多评法同时测定冬虫夏草中5个核苷类成分的含量
目的:建立一测多评法同时测定冬虫夏草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、2'-脱氧腺苷含量,并验证方法准确性.方法:采用RP-HPLC进行含量测定,使用Agilent ZOBAX SB-AQ C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0～5 min,0％A;5～15 min,0％A→10％A;15～30 min,10％A),流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,检测波长260 nm,进样量5 μL.以腺苷为参照物,建立其对尿苷、肌苷、鸟苷、2'-脱氧腺苷的相对校正因子,并用该校正因子进行尿苷、肌苷、鸟苷、2'-脱氧腺苷的含量计算,实现一测多评;同时采用外标法测定冬虫夏草中5个核苷的含量,并比较计算值与实测值的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性.结果:尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、2'-脱氧腺苷进样量分别在4.945～98.90、1.852～37.04、4.795～95.90、5.175～103.5和1.892～37.84 μg· mL-1范围内呈现良好线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为98.3％(RSD=1.6％)、101.3％(RSD=1.3％)、100.6％(RSD=1.1％)、98.8％(RSD=1.4％)和101.1％(RSD=1.7％).尿苷、肌苷、鸟苷、2'-脱氧腺苷相对于腺苷的相对校正因子分别为1.41、1.90、1.74和0.964;且在不同实验条件下重现性良好(RSD＜3.0％);一测多评法的计算结果与外标法实测值之间无显著差异.20批冬虫夏草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和2'-脱氧腺苷的含量范围分别为0.101％～0.210％、0.037％～0.135％、0.066％～0.203％、0.015％～0.102％和0.001 8％～0.013％.结论:建立的一测多评法可作为冬虫夏草中5个核苷类化学成分的含量测定方法.
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RP-HPLC同时测定暗紫贝母中10个核苷及碱基类成分的含量
目的:建立RP-HPLC-DAD同时测定暗紫贝母药材中5个核苷类活性成分(尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷、肌苷)及5个游离的碱基(腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶)含量的方法.方法:采用Agilent Zorbax Bonus-RP C18色谱柱(4.6 mum×250mm,5 μm)；流动相为甲醇和水,梯度洗脱,流速1 mL·min-；检测波长260 nm；柱温30℃.结果:胞嘧啶、尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷、腺嘌呤、肌苷、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、尿嘧啶的质量浓度分别在1.78～56.80mg·L-1、1.84～59.00mg·L-1、1.58～50.60 mg·L-1、1.73 ～55.30 mg·L-1、1.78～57.10 mg·L-1、1.63～52.10 mg·L-1、1.79～57.20 mng·L-1、1.80～57.70 mg·L-1、1.63 ～52.30 mg·L-1、1.63～52.30 mg · L-范围内与峰面积呈良好线性关系,平均回收率为97.7％～103.2％,RSD ≤2.2％.结论:建立了RP-HPLC-DAD同时测定暗紫贝母药材中10个核苷及碱基类成分含量的方法,该方法简单,重复性好,准确可靠；暗紫贝母药材中鸟苷、尿苷、胸苷、腺苷含量较高；青海久治、大通产暗紫贝母药材中核苷含量均高于四川松潘；青海2个产地比较,大通产暗紫贝母药材中核苷含量又明显高于久治.
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高效液相色谱法测定北虫草中6个核苷含量
目的:建立同时测定北虫草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)腺苷含量的高效液相色谱法.方法:采用Grace Prevail Select C18(4.6 mm×150 mm,3μm)分析柱,以水(A)-甲醇(B)为流动相二元梯度洗脱(0 ～6.0min,0→5％B;6.0～15.0 min,5％B→25％B;15.0 ～22.0 min,25％ B→100％B),流速1 mL·min-,检测波长260 nm,柱温25℃,进样量5 μL.结果:尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)腺苷质量浓度分别在1.0 ～ 192.0μg· mL-1(r=0.999 9)、1.0～191.0 μg·mL-(r=0.999 9)、0.6～110.0 μg·mL-1 (r=1.000 0)、1.0～186.0 μg·mL-1(r=1.000 0)、1.0～194.0 μg·mL-1(r=0.9999)和0.8～160.0 μg·mL-1(r=0.999 9)范围内线性关系良好,加样回收率(n=6)分别为100.6％(RSD=3.2％)、98.4％ (RSD=4.8％)、99.2％ (RSD=4.6％)、99.4％ (RSD=2.5％)、101.4％ (RSD =2.1％)和99.2％ (RSD=3.2％);不同来源北虫草产品核苷含量差别较大.虫草属特征性成分N6-(2-羟乙基)腺苷的含量仅次于含量丰富的虫草素,肌苷在所有样品中均未检出.5个核苷类成分在总含量高的样品中分别为0.68、0.84、1.22、11.12和5.32 mg.g-1.结论:本文将虫草属的6个主要核苷类特征性成分同时作为评价指标,对市场中的北虫草样品进行了检测分析.本文建立的方法能够快速、简便地测定北虫草中主要核苷的含量,可用于北虫草的质量检测.
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用于耐药肿瘤细胞代谢组学的细胞内核苷类组分离子对色谱分析法
目的:建立测定K562及K562/A细胞内核苷类代谢物含量的高效液相色谱法,用于两者代谢组学研究.方法:采用1.2 mol·L-1HClO4沉淀蛋白,用苯硼酸柱进行固相萃取富集样品中的核苷酸.色谱柱为汉邦C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相由两种缓冲液组成,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1.A相缓冲液含10 mmol·L-1四丁基氢氧化铵,10 mmol·L-1KH2PO4及0.25%甲醇,pH7.0;B相缓冲液含5.6 mmol·L-1四丁基氢氧化铵,50 mmol·L-1KH2PO4及30%甲醇,pH7.0.柱温25℃,检测波长260 nm.结果:各种核苷类代谢物分离良好,内源性物质无干扰,K562及K562/A细胞内核苷类代谢物平均回收率分别为88.3%～109.2%、84.5%～115.6%.结论:该法简便及重现性好,可同时测定肿瘤细胞中核苷、单核苷酸、二核苷酸及三核苷酸含量.分析结果表明,K562与K562/A细胞核苷类代谢物组存在明显差异.
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高效液相色谱法测定不同产地棘托竹荪中4个核苷含量
目的:运用高效液相色谱法分析棘托竹荪中尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷的含量.方法:采用Grace Prevail Select C18(4.6mm×150mm,3μm)分析柱,以水(A)-甲醇(B)为流动相二元梯度洗脱(0～6.0 min,0→5％B;6.0 ～ 15.0 min,5％B→25％B;15.0～20.0 min,25％ B--100％B),流速1 mL·min-1,检测波长254 nm,柱温25 ℃,进样量10 μL.结果:尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷浓度分别在2.0～181.0μg·mL-1(r=1.000)、1.5 ～190.0μg·mL-1(r=0.9999)、0.8～126.4 μg·mL-1(r=0.9999)和1.0～171.2μg·mL-1(r=1.000)范围内线性关系良好,加样回收率(n=6)分别为100.7％ (RSD=3.4％)、98.5％(RSD＝4.2％)、99.5％ (RSD =3.6％)和99.1％(RSD=3.8％);采自不同产地的棘托竹荪核苷含量差别较大,四川青川木鱼产的竹荪中尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷4个核苷类成分含量是所有测试样品中高的,含量分别为0.77、0.06、1.19和1.60 mg·g-1.结论:本法能够快速、简便地测定棘托竹荪中主要核苷的含量,为其质量控制提供保证.
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板蓝根药材中3种核苷高效液相法测定含量分析
目的:分析板蓝根药材中3种核苷(尿苷、鸟苷、腺苷)高效液相法测定的含量.方法:用高效液相法测定板蓝根中尿苷、鸟苷、腺苷的含量,保持柱温在30℃,检测波长为254nm,梯度洗脱,流速保持在每分钟0.8mL.结果:尿苷在10.6～265.0mg/L范围内线性关系良好,鸟苷在10.4～260.0mg/L范围内线性关系良好.腺苷在10.8～270.0mg/L范围内线性关系良好.平均回收率尿苷为101.2％,鸟苷为100.8％,腺苷为101.4％.测定精密度、重视性以及稳定性全部良好.结论:高效液相法测定板蓝根药材中3种核苷快速并且灵敏,检测方法简单,重视性理想,能够用于板蓝根药材的质量控制.
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核苷聚合酶抑制剂Sofosbuvir联合利巴韦林治疗丙型肝炎
治疗丙型肝炎病毒感染的标准方案是干扰素治疗，但干扰素需皮下注射且可能发生较难处理的不良反应。新西兰的科学家评估了一种口服核苷聚合酶抑制剂Sofosbuvir在干扰素减量组和未用干扰素组中对丙型肝炎病毒（HCV）感染的治疗作用。共有8组患者接受了开放性治疗。40例之前未接受治疗的HCV基因型2型或3型患者被随机分为4组，4组患者均接受Sofosbuvir（400 mg/次，每日1次）和利巴韦林治疗12周，其中3组分别联合聚乙二醇干扰素α-2a治疗4、8、12周；另有2组接受初始治疗的HCV基因型2型或3型患者单一应用Sofosbuvir治疗12周或Sofosbuvir联合聚乙二醇干扰素α-2a及利巴韦林治疗8周；2组HCV基因型1型的患者接受Sofosbuvir和利巴韦林治疗12周，其中一组为对前期治疗无应答的10例患者，另一组为初始治疗的25例患者。总结治疗24周后各组持续病毒应答率。结果：在第24周时，随机分组的40例患者，包括10例（100%）接受Sofosbuvir和利巴韦林治疗而未用干扰素的患者以及30例（100%）接受Sofosbuvir、利巴韦林和干扰素治疗的患者均获得了持续病毒应答。HCV基因型为2型或3型的其他患者中，应用Sofosbuvir联合聚乙二醇干扰素α-2a和利巴韦林治疗8周的10例（100%）患者在第24周时也全部获得了持续病毒应答；而单用Sofosbuvir治疗的10例患者有6例（60%）获得了持续病毒应答。在HCV基因型1型的患者中，25例初次接受治疗的患者中，有21例（84%）在第24周获得持续病毒应答；而10例对前期治疗无反应的患者中，仅有1例（10%）在第24周获得持续病毒应答。常见的不良发应包括头痛、疲乏、失眠、恶心、皮疹和贫血。研究者由此得出结论，对于初次接受治疗的HCV基因型1、2、3型患者，应用Sofosbuvir联合利巴韦林治疗12周可能有效。
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肝移植术后乙肝复发合并新发自身免疫性肝炎的诊治体会
乙肝肝移植术后需要使用核苷（酸）类似物联合定期注射人乙肝免疫球蛋白预防乙肝复发，停用其中的任何一种治疗，都会大幅度地增加乙肝复发的风险，即使是术前为乙肝“小三阳”、HBV-DNA阴性的患者，术后2年后停用核苷（酸）类似物，单独使用定期注射人乙肝免疫球蛋白预防乙肝复发，也存在着一定程度的乙肝复发的风险。
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恩替卡韦治疗乙肝相关性肝病的临床研究进展
迄今为止,HBV感染仍为全球肝病的主要致病因素,病毒复制活跃的慢性乙肝(chronic hepatitis B,CHB))易进展为慢加急性肝衰竭(约占慢乙肝的1％)、肝硬化(约占慢乙肝的2％～10％)及肝细胞癌(约占慢乙肝的1％ ～5％)等严重肝病[1].全球每年约有100万人死于以上严重肝病.目前全球已批准用于治疗慢性乙型肝炎(CHB)的药物仍然仅有干扰素类(IFN)和核苷(酸)类似物.
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核苷和核苷酸类药物治疗乙型肝炎肝硬化失代偿期患者效果观察
目的 观察核苷和核苷酸类药物治疗乙型肝炎肝硬化失代偿期患者效果.方法 选取我院2017年7月-2018年11月收治的84例乙型肝炎肝硬化失代偿期患者进行研究,分为对照组和研究组,对照组实施常规治疗,研究组实施核苷和核苷酸类药物治疗,比较两组患者的临床疗效以及并发症发生情况.结果 研究组的治疗总有效率明显高于对照组,临床疗效明显优于对照组(p<0.05);研究组的并发症发生率明显低于对照组(p<0.05).结论 核苷和核苷酸类药物治疗乙型肝炎肝硬化失代偿期患者效果显著,患者并发症发生率低,值得进行临床推广.
关键词： 乙型肝炎肝硬化失代偿期 核苷 核苷酸
