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危重感染患儿血清可溶性肿瘤坏死因子受体的变化
有研究发现,可溶性肿瘤坏死因子受体(soluble tumor necrosis factor receptors, STNFRs)在重症肺炎患儿中明显升高,且能反应疾病的严重程度。许多实验发现,细菌感染如化脓性脑膜炎、败血症、尿路感染等均有STNFRs升高,并且与感染严重程度及疾病预后相关[1-4]。STNFRs系肿瘤坏死因子膜受体的胞外段脱落形成,共有两类,为STNFRⅠ和STNFRⅡ。本实验通过观察STNFRs在儿科感染性疾病中的变化,以评价STNFRs在儿科危重感染中的应用价值。
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鼻咽癌CNE1细胞株中EB病毒LMP1 cNDA的克隆及LMP1胞外段稳定性研究
目的:克隆鼻咽癌细胞株CNE1中EBV-LMP1 cDNA,载入质粒载体pGEM中,并检测CNE1细胞株LMP1胞外肽段表达的稳定性.方法:运用免疫组化的方法检测CNE1细胞潜伏膜蛋白(LMP1)的表达情况,通过RT-PCR技术从CNE1细胞中扩增EBV-LMP1基因全长,并载入质粒载体pGEM,转化JML09菌.提取质粒,利用引物上的BamH1与Hind3酶切位点限制性内切酶消化,琼脂糖凝胶电泳鉴定.扩增CNE1细胞中含有LMP1三段胞外段的序列并测序.结果:免疫组化显示CNE1细胞高表达LMP1,扩增的LMP1 cDNA长度为1158 bp,测序结果与已知序列有部分变异.连续传代的CNE1细胞LMP1胞外段表达稳定.结论:成功克隆了EBV-LMP1 cDNA,并载入质粒载体,证实LMP1胞外段表达稳定,为研究LMP1在鼻咽癌致病机制中的作用,并进一步研制LMP1胞外段特异性单克隆抗体,为其在鼻咽癌放疗靶区功能显像的研究中奠定基础.
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瘦素与肥胖、胰岛素抵抗的关系
瘦素(Leptin)为脂肪细胞分泌的保持机体能量平衡的激素,是ob基因的表达产物,能抑制摄食,促进能量消耗,编码Leptin的基因发生变异(OB/OB小鼠),可导致Leptin缺乏,而编码Leptin受体的基因变异,如db/db大鼠由于OB-Rb胞内段缺陷使信号传导下降;而fa/fa大鼠的OB-Rb胞外段缺陷使亲和力下降,可导致Leptin抵抗.以上均可引起Leptin的作用受损,Leptin和受体的作用障碍,可导致肥胖、胰导素抵抗等能量代谢异常.
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可溶性白细胞介素2受体在肿瘤检测中的应用价值
可溶性白细胞介素2受体(Soluble interleukin 2 receptor, sIL-2R)是一种具有N,O键合糖和唾液酸的复合蛋白质,主要成分与膜白细胞介素2受体mIL-2R相似[1].sIL-2R是经位点特异性蛋白酶的裂解,使IL-Ra胞外段脱落后形成的42 kD片段,该片段存在于血液循环中[2],在正常人体液中有一定含量,但在恶性肿瘤等疾病中则显著升高[3].本文报道690例恶性肿瘤病人血清sIL-2R含量,并对sIL-2R值大于1 000 U/ml和小于600 U/ml的患者各选50例进行为期一年的动态观察,以探讨该法在肿瘤诊断和疗效判定中的实用价值.
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促甲状腺激素受体胞外段基因突变与Graves病的相关研究
Graves病(GD)是一种器官特异性自身免疫性甲状腺疾病,患者体内存在着多种自身抗体,GD的发病中以促甲状腺激素受体抗体(TRAb)为重要,而TRAb所对应的抗原是TSH受体(TSHR).国外有学者报道GD的发生与TSHR基因突变有关,但另有学者认为与TSHR基因突变无关.本研究探讨中国人Graves病的发病与TSHR基因突变之间的关系.
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Neuregulin-1/ErbBs信号系统与慢性心力衰竭的研究进展
Neuregulin-1是心脏内皮细胞表达的一种跨膜蛋白,其胞外段被蛋白酶酶切后,以旁分泌方式与心肌细胞表面酪氨酸激酶受体(ErbB4)结合,诱导形成ErbB 2/ErbB 4异源二聚体,通过活化下游的MAPK、Akt、PI3激酶等信号分子,启动一系列生物学反应,包括抗凋亡、促进心肌细胞存活和有序排列、加强心肌间连接等.越来越多的研究显示NRG-1/ErbB信号系统与心脏结构形成、功能维持、心衰的发生发展密切相关.
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恶性淋巴增殖性疾病患者血浆可溶性CD44水平的检测
CD44是一种广泛分布在细胞表面的跨膜糖蛋白,包括标准型(CD44s)和各种变异体(CD44v),绝大部分造血细胞表达CD44s,其分子量90KD.作为一种黏附分子,参与细胞-细胞、细胞与基质间相互作用,影响肿瘤的发生和转移.CD44分子胞外段的脱落则是循环中可溶性CD44(sCD44)的主要来源,分子量约70~80KD,被证实同样具有CD44的生物学功能.我们对20例急性淋巴细胞白血病(ALL)、10例非霍奇金淋巴瘤(NHL)和4例多发性骨髓瘤(MM)患者血浆sCD44水平进行检测,并初步探讨了其临床价值.
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血清人表皮生长因子受体2的临床检测价值与检测方法研究进展
人表皮生长因子受体2(HER2/ErbB2/p185)蛋白是一个跨膜受体包括胞外段、跨膜区域段及胞内的络氨酸激酶区域段[1]。越来越多的研究发现HER2在乳腺癌、胃癌、卵巢癌中高表达且肿瘤组织中HER2的发现已成为肿瘤临床诊断与治疗的独立指标。检测HER2的创伤性组织学方法包括免疫组织化学(IHC)、荧光原位杂交(FISH)等。近期发现存在于血清中的HER2包外区域段可以用酶联免疫法(ELISA)检测到,而且乳腺癌病人血清中HER2的水平与组织中HER2表达的水平是正相关的。此种方法已受到了FDA 的认证。
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LRIG1基因在人星形细胞瘤中的表达下调与意义
LRIG1是新近发现的一种人类基因组成员,与鼠LIG-1及果蝇Kek1同源,编码一种胞外段含多亮氨酸重复区(LRR)和免疫球蛋白(Ig)样区的细胞表面跨膜蛋白.目前人类对LRIG1了解甚少,对人类肿瘤中LRIG1的研究刚刚展开.我们设计、制作了LRIG1三相寡核苷酸探针,并用原位杂交方法检测了16例人星形细胞瘤肿瘤组织及其周边脑组织中LRIG1 mRNA的表达,旨在研究LRIG1的表达谱并探讨它在肿瘤中的作用.
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人生长激素结合蛋白的结构及功能
随着医学界对人生长激素(human gowth hormone,hGH)促生长、发育等生理机制研究的深入,生长激素-胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)轴的功能、机制也越来越被人们所重视.现已证实,GH在体内的生理功能主要是通过结合人生长激素受体(human growth hormone receport,hGHR),受体二聚后启动信号转导来完成.但还涉及到与人生长激素结合蛋白(human growth hormone binding protein,hGHBP)的功能联系,则需进一步探讨.hGHBP由hGHR胞外段经蛋白水解酶水解获得[1,2].
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鼻咽癌CNE1细胞株中EB病毒LMP1胞外肽段稳定性的研究
目的 检测鼻咽癌CNE1细胞株潜伏膜蛋白1(LMP1)胞外肽段表达的稳定性.方法 运用免疫组化的方法检测CNE1细胞LMP1的表达情况,通过RT-PCR技术扩增CNE1细胞中含有LMP1三段胞外段的序列并测序.结果 免疫组化显示CNE1细胞高表达LMP1, 扩增LMP1胞外段的序列并测序,测序结果显示与已知序列相同,连续传代的CNE1细胞LMP1胞外段表达稳定.结论 证实LMP1胞外段表达稳定,为进一步研制LMP1胞外段特异性单克隆抗体,并为其在确定鼻咽癌放疗靶区的功能显像的研究奠定基础.
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LRIG1基因功能域载体的构建及亚细胞定位
目的构建含LRIG1胞外段+跨膜段(ET)及跨膜段+胞内段(TC)基因的真核表达载体, 并研究它们的亚细胞定位.方法以人LRIG1全长的质粒p3XFLAG-CMV-9-LRIG1为模板, PCR扩增出3XFLAG-LRIG1-ET和LRIG1-TC, 并将之分别亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP-N1和p3XFLAG-CMV-9中. 酶切和DNA测序鉴定, 脂质体法将构建的质粒转染U251细胞, 观察标记基因荧光蛋白EGFP的表达, 间接免疫荧光检测标记基因3XFLAG的表达. 结果构建的质粒序列正确, 转染细胞后可检测到EGFP和3XFLAG基因的表达; LRIG1-ET和LRIG1-TC均主要表达在U251的胞膜上, 少量表达在胞浆. 结论包含LRIG1亚单位ET和TC的真核表达载体均构建成功, 其表达产物均主要位于胞膜, 少量位于胞浆.
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人清道夫受体A胞外段的原核表达
目的 获得具有生物学活性的人清道夫受体A(SRA)胞外段蛋白.方法 从人外周血单个核细胞(PBMC)中提取RNA,逆转录为cDNA,采用PCR技术从PBMC-cDNA中扩增出目的基因片段,将其克隆至原核表达载体pET41a(+),经PCR、限制性酶切和测序确证后,以IPTG诱导其在大肠杆菌中的表达.包涵体经变性、复性后以Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,以SDS-PAGE、Western blotting进行分析鉴定.FCM及ELISA方法检测SRA胞外段对Con A诱导PBMC细胞增殖及分泌细胞因子IL-2的影响.结果 PCR扩增得到长约1100bp的目的基因片段,插入pET41a(+)载体所获重组表达载体pET41a-SRAECD的酶切图谱和序列与预期的一致.重组子经诱导表达,表达产物主要以包涵体形式存在.以Ni-NTA亲和层析柱纯化获得约75 000 Mr的SRA胞外段融合蛋白.纯化的人SRAECD蛋白能与抗人SRA单克隆抗体特异性结合并具有活性,可抑制T细胞增殖及细胞因子IL-2的分泌.结论 获得了具有生物学活性的人SRA胞外段蛋白,为进一步探索SRA的效应功能提供了实验材料.
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含ITIM的新型膜蛋白分子LLIR及其跨膜缺失突变体的克隆与功能研究
树突状细胞(dendritic cells, DCs)是重要的抗原提呈细胞,其部分功能需要通过膜受体来介导,研究DCs表面的受体是了解抗原提呈功能机制的途径之一.研究得较早的与DCs功能相关的膜表面分子有DEC-205和MMR,这两个分子都是Ⅰ型跨膜蛋白,胞外含有数个C型lectin结构域,对于DCs摄取抗原的功能很重要.另外,也有带lectin结构域的Ⅱ型跨膜分子被发现,如CLEC-1、CLEC-2、Dectin-1、Dectin-2,这些分子的胞外段都含有一个CRD,除了在DCs表达以外,也在髓系细胞和单核细胞中表达.
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肾损伤分子1及其在肾脏疾病中的研究现状
肾损伤分子1(kidney injury molecule-1,KIM-1)是I型跨膜糖蛋白,在正常肾脏几乎不表达,急性肾损伤(AKI)时显著高表达于近端肾小管上皮细胞.随后研究发现,在多种急、慢性肾损伤动物模型及人类肾脏疾病中,肾小管上皮细胞KIM-1均有高表达的现象.由于其结构特点,KIM-1的胞外段可以脱落并在尿液中检测出来,因而作为肾脏损伤的生物标志物被广泛关注.近年来发现KIM-1介导肾小管上皮细胞吞噬凋亡及坏死细胞并可能调控AKI的免疫炎性反应,使人们开始关注KIM-1在肾脏疾病损伤修复和进展中的作用.本文将目前KIM -1在肾脏疾病中的研究概况作一综述.
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SARS 冠状病毒S2蛋白胞外段的原核表达及其细胞膜融合效应研究
目的 构建SARS冠状病毒S2蛋白胞外段( S2ED)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白表达质粒,获得在原核细胞中表达的目的 蛋白.方法 在生物信息学预测基础上,利用PCR方法 扩增S2ED和EGFP的编码序列,插入到质粒pET-14b中构建融合表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白His-S2ED-EGFP.采用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白可溶部分,利用SDS-PAGE和免疫印迹的方法 鉴定纯化后的蛋白,通过荧光显微镜考察S2ED与Hela细胞胞膜能否发生融合效应.结果 重组质粒pET-14b-S2ED- EGFP的构建正确无误,并能够在BL21(DE3)中高效表达.纯化后的蛋白与Hela细胞孵育后,未观察到蛋白通过膜融合的过程内化进入细胞.结论 S2ED的绿色荧光蛋白融合表达载体构建成功,并在原核细胞中获得了部分可溶的表达和有效的纯化.虽然原核表达的重组蛋白未能在Hela细胞上发挥预期的生物学效应,但是该工作将为加深S2蛋白介导的胞膜融合过程的认识以及未来进行以特异性细胞结合肽为基础的定向靶细胞转运系统研究奠定重要的基础.
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特发性矮小生长激素受体基因与生长激素结合蛋白的研究进展
生长激素(GH)是促进生长发育的重要因子之一,它首先需要与靶细胞表面生长激素受体(GHR)结合,GHR基因突变导致的GHR结构与功能异常都会抑制GH发挥正常生理作用,终影响成人身高.近年来关于GHR基因单核苷酸多态性(SNP)与特发性矮小(ISS)遗传易感性关系的研究越来越多,并发现了一些与ISS相关的SNP位点.生长激素结合蛋白(GHBP)是通过蛋白水解酶水解细胞GHR胞外段形成的,可反映体内GHR的水平.现将近来对于GHR基因SNP,GHBP的研究及其与ISS的关系进行简要综述.
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抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对小鼠溃疡性结肠炎外周血和肠系膜淋巴结CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞表达的影响
目的 观察抗小鼠Toll样受体2(Toll-like receptor 2)胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对溃疡性结肠炎小鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞表达的影响.方法 采用硫酸葡聚糖钠(C6H7Na3O14S3,DSS)制备溃疡性结肠炎小鼠模型(UC模型),将实验小鼠随机分成四组:正常对照(NC)组、模型(MD)组、TSP-2治疗组和兔IgG治疗组.除NC组外,其他实验组均给予5% DSS造模7d后停用造模药,药物治疗组给予后续干预治疗7d.记录分析疾病活动指数(DAI),14 d后处死小鼠,取结肠组织行HE染色;流式细胞仪检测外周血和肠系膜淋巴细胞中表达CD4+ CD25+Foxp3+的Treg细胞的百分比率,并进行统计学分析.结果 TSP-2治疗组小鼠第9~14天DAI明显低于MD组(P<0.05);MD组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞占CD4+T细胞的百分率明显低于NC组(P<0.05); TSP-2治疗组外周血和肠系膜淋巴细胞CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg 细胞占CD4+T细胞的百分率明显高于MD组(P<0.05);兔IgG治疗组与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 TSP-2可以提高CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg数量,调节机体和肠道免疫功能,对UC发挥治疗作用.
关键词: 抗小鼠TLR2 胞外段 单表位抗体TSP-2 溃疡性结肠炎 -
异种同源表皮生长因子受体EGFR胞外段在毕赤巴斯德酵母中的表达
目的实现异种同源表皮生长因子受体EGFR胞外段在毕赤巴斯德酵母中的分泌性表达.方法将鼠和人的EGFR胞外段目的基因(mer,her)与分泌型毕赤酵母表达载体pPICZaA重组,构建了相应的重组表达质粒pPICZaA-mer和pPICZaA-her,用Sac I将重组质粒线性化后,电穿孔转化酵母菌株GS115,利用Zeocin筛选阳性克隆,挑出阳性克隆用甲醇小规模诱导表达后,进行SDS-PAGE分析及Western-blot检测,筛选高表达量的克隆作大规模诱导表达.结果获得了鼠和人的EGFR胞外段目的蛋白在毕赤巴斯德酵母中的分泌性表达,SDS-PAGE分析及Western-blot检测得到预期条带,相对分子质量约为95×103.免疫印迹分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性.结论pPICZaA-mer和pPICZaA-her重组质粒在甲醇营养型酵母中可经甲醇诱导表达鼠和人的EGFR胞外段目的蛋白.
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异种表皮生长因子受体胞外段的表达及其抗肿瘤效果研究
目的:构建异种EGFR蛋白疫苗并研究其抗肿瘤效果.方法:用PCR方法获得鸡EGFR胞外片段, 与pGEX- 4T-2载体连接, 并在E.coli BL21(DE3)中表达鸡的EGFR胞外片段与GST的融合蛋白, 融合蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化、复性后, 免疫小鼠, 免疫3次后, 接种小鼠Lewis细胞, 观测肿瘤生长情况, ELISA检测小鼠血清中抗EGFR蛋白的抗体效价.结果:成功构建了EGFR胞外段基因的原核表达载体; SDS-PAGE显示成功表达了目的融合蛋白; 融合蛋白免疫小鼠后, ELISA法检测到特异性抗EGFR抗体; 实验组与对照组肿瘤体积的比较结果显示, 融合蛋白疫苗能够在一定程度上抑制肿瘤的生长.结论:异种EGFR蛋白能够克服免疫耐受问题, 诱导机体产生抗体, 有一定的抗肿瘤效果, 为后续的肿瘤疫苗研究打下了基础.