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LRIG1过表达对神经胶质瘤细胞EGFR信号传导的抑制作用
目的 通过检测LRIG1在胶质瘤细胞中的亚细胞定位及LRIG1对EGFR的作用,探讨LRIG1对EGFR信号通路的抑制效应.方法 用Confocal法及Western blot法检测LRIG1质粒转染前后H4细胞中EGFR和LRIG1表达,MTT法检测LRIG1对细胞增殖的影响.结果 在H4细胞中LRIG1低表达,EGFR高表达,均主要为膜表达;转染LRIG1质粒后,LRIG1表达增强,EGFR表达下降;细胞的生长受抑制.结论 LRIG1主要位于胶质瘤细胞膜上,通过促进EGF受体的降解抑制其信号传导.
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在Eca109细胞中Lrig1对Survivin和Caspase-9的调控研究
目的 采用多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 (Lrig1)过表达的方式,确定在食管鳞癌细胞(Eca109细胞)中是否存在Lrig1对Survivin和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-9)的调控.方法 使用重组质粒GV-219-Lrig1转染Eca109细胞使其过表达Lrig1;采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法和蛋白质印迹法分别检测细胞中Lfig1、Survivin和Caspase-9的信使核糖核酸(mRNA)及蛋白的表达水平,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 重组质粒GV-219-Lrig1转染Eca109细胞24 h后,在mRNA水平,Lrig1表达量显著增高(P＜0.01),而Survivin和Caspase-9无明显变化(P＞0.05);在蛋白水平,Lrig1和Cleaved-Caspase-9表达量都显著增加(P＜0.05),而Survivin表达量无明显变化(P＞0.05);流式细胞仪检测结果显示,与GV-219(NC组)相比,重组质粒GV-219-Lrig1转染的Eca109细胞24 h细胞晚期凋亡率增加1.6％.结论 在Eca109细胞中,过表达Lrig1使其在转录和蛋白水平的表达量显著增加,可明显增加Cleaved-Caspase-9的蛋白水平.但对Survivin的表达没有影响.其调控机制尚待进一步研究.
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LRIG1在不同分化程度胃腺癌中的表达
探讨富亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域-1(LRIG1)在胃癌中的表达及其与分化程度的关系.采用免疫组化、Western blot、RT-PCR法检测LRIG1在不同分化程度胃癌组织和细胞株中的表达,并分析其表达与分化程度的关系.结果显示LRIG1在胃癌组织和细胞株中的表达低于癌旁正常胃组织和正常胃黏膜细胞株,差异有统计学意义(P＜0.01);LRIG1在MGC-803、SGC-7901和HGC-27中的表达量依次降低,差异有统计学意义(P＜0.01);LRIG1在胃癌的发生和发展中可能起着抑癌基因的作用.
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LRIG1、EGFR、E-Cadherin及N-Cadherin在胶质瘤中表达及其临床意义
目的 研究富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)、表皮生长因子受体(EGFR)、E-Cadherin及N-Cadherin在不同病理级别胶质瘤中表达差异,探讨LRIG1在胶质瘤恶性进展中可能的作用机制.方法 收集74例胶质瘤患者手术标本,包含12对原发及复发配对胶质瘤标本,采用qRT-PCR检测LRIG1、EGFR、E-Cadherin、N-Cadherin基因的表达,并采用免疫印迹检测LRIG1、EGFR、E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin蛋白表达情况.结果 随着胶质瘤病理级别的升高,LRIG1、E-Cadherin基因及蛋白表达水平降低,EGFR、N-Cadherin基因及蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05).WHOⅢ-Ⅳ组胶质瘤EGFR/LRIG1及N-Cadherin/E-Cadherin比值显著高于WHOⅠ-Ⅱ组(均P<0.05).EGFR/LRIG1与N-Cadherin/E-Cadherin变化之间存在正相关(r=0.56,P<0.05).对原发及复发配对胶质瘤标本的研究结果与上述一致.结论 胶质瘤中EGFR/LRIG1表达失衡,可能通过诱导上皮间质转化(EMT)促进胶质瘤细胞的恶性进展.LRIG1可能成为胶质瘤治疗的新靶点.
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LRIG1在恶性肿瘤中的研究进展
LRIG是新发现的一种基因，其家族成员包括LRIG1、LRIG2和LRIG3。目前研究较多的是LRIG1，且研究证实在人体正常组织内广泛表达而在大部分肿瘤中表达下调或缺失，提示其可能作为一种抑癌基因，调控肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭、转移［1］。现就近几年LRIG1与几种恶性肿瘤之间的研究予以综述。
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人前列腺LRIG1蛋白三维结构同源模建及其小分子激动剂的虚拟筛选
目的 LRIG1(tandem leucine-rich repeat sand immunoglobulin-like domains 1,LRIG1)是新近发现的抑癌基因,在前列腺癌中表达下降,通过对人前列腺LRIG1蛋白的三维结构进行同源模建,虚拟筛选出LRIG1的功能蛋白,试图为前列腺癌新靶点治疗提供新思路.方法 以LRIG1的同源蛋白LRRC4 C蛋白的晶体结构(PDB号3 ZYJ)为模型,通过MODELLER软件搭建LRIG1蛋白的三维空间结构;采用柔性对接的虚拟筛选技术,以荷兰SPECS公司的202490个化合物进行对接和打分,挑选出排名靠前的10个小分子化合物;通过AMBER软件分别进行20 ns的分子动力学模拟,并分析这10个小分子的结合模式、 动力学轨迹的RMSD、RMSF、 结合口袋的氢键以及它们的结合能量.结果 10个小分子化合物都具有一致的结合模式,而且都具有激活LRIG1活性的潜在能力.结论 发现与人LRIG1具有潜在特异结合能力的激动剂,可以为前列腺癌治疗新靶点的确立及开发具有药理活性的先导化合物提供理论依据.
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LRIG1和EGFR在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义
目的:探讨LRIG1和表皮生长因子受体(EGFR)在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义.方法:采用免疫组织化学SP法检测LRIG1和EGFR蛋白在52例膀胱移行细胞癌和8例正常膀胱组织中的表达情况,并结合临床资料进行分析.结果:52例膀胱癌组织中,LRIG1和EGFR蛋白的阳性表达率分别为38.5%(20/52)和65.4%(34/52).8例正常膀胱组织中,LRIG1均呈阳性表达,EGFR均呈阴性表达.随着膀胱癌病理分级和临床分期的增高,LRIG1表达显著减少,而EGFR表达增高.LRIG1蛋白阳性表达率在未复发组高于复发组,EGFR蛋白阳性表达率在未复发组低于复发组,差异有统计学意3L(P＜0.05).LRIG1与EGFR的表达强度之间呈明显负相关(r=-0.505,P=0.000).结论:LRIG1和EGFR可以作为判定膀胱移行细胞癌恶性程度及复发的参考指标.
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LRIG1对人脑胶质瘤放疗敏感性的作用及其机制
目的 探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1( LRIG1)对人脑胶质瘤细胞株U251放疗敏感性的影响及其机制.方法 应用脂质体介导的基因转染技术将PEGFP-N1、PEGFP-LRIG1 质粒分别转染人人脑胶质瘤U251细胞,G418( 1000 mg/L)筛选,建立稳定细胞株,采用克隆形成实验测定N1-U251及LRIG1-U251两组细胞的放射敏感性,Western blot法测定两组细胞中LRIG1及RAD51蛋白的表达差异,彗星分析法测定两组细胞双链DNA断裂的修复.结果 成功建立高表达LRIG1的U251稳定细胞株,LRIG1-U251组(0.352±0.011)较N1-U251组(0.071±0.003) LRIG1基因表达明显上调(P＜0.01).LRIG1基因表达上调后U251细胞的放射敏感性增加,放射增敏比为1.448.上调LRIG1基因明显抑制了RAD51基因的表达(P＜0.01)及照射后的高表达(P＜0.01).彗星分析表明LRIG1基因的过表达将照射8h后U251细胞的Olive彗尾力矩由21.14±3.42增加至32.81±5.61 (P ＜0.05).结论 LRIG1可以增加人脑胶质瘤U251细胞的放射敏感性.机制可能是通过降低RAD51蛋白表达,进而抑制双链DNA损伤的修复.
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多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白在成年大鼠脑组织的表达及其意义
多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白( LRIGs)是一类细胞表面跨膜蛋白,包括LRIG1、LRIG2、LRIG3,其胞外段均含多亮氨酸重复区(LRR)和免疫球蛋白样区(Ig).其中LRIG1在人脑组织尤其在胶质细胞中表达较高[1].LRIG1是一种多功能的生长因子受体抑制剂[2],参与多种细胞生物过程,包括生长增殖调控和表皮干细胞分化调控,可能是一种新的人类抑癌基因[3,4].LRIG1另外2个旁系同源基因LRIG2和LRIG3的功能目前仍不明确.为了进一步了解LRIGs在神经系统中的功能和分布上的差异,我们采用原位杂交染色方法对成年大鼠脑组织中LRIG1、LRIG2、LRIG3的表达进行了定位,从组织形态学角度对其功能进行分析.
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LRIG1基因特异性RNA干扰表达载体的构建、鉴定和稳定株的筛选
目的 构建针对LRIG1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,LRIG1)基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响,为探讨LRIG1基因沉默对人脑胶质瘤细胞的生物学行为调控奠定基础.方法 根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1、LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negative shRNA.合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列.用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15的筛选浓度.将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株.Western印迹法在蛋白水平上检测LRIG1的表达.结果 重组pGenesil2-LRIG1-shRNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明序列插入正确.G418对GL15细胞的筛选浓度为600mg/L,筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil2-LRIG1-shRNA1组细胞LRIG1蛋白表达明显低于转染pGenesil2-negative shRNA组.结论 成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体(pGenesil2-LRIG1-shRNA1),转染细胞后可抑制LRIG1基因表达,为下一步研究其功能奠定基础.
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LRIG1在脑膜瘤中的表达及与其生物学行为的关系
目的 探讨一新的可能的抑癌基因--富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样多肽1(LRIG1)在脑膜瘤中的表达和其与脑膜瘤病理学分级及生物学行为的关系.方法 收集我科2005年8月～2006年8月共98例脑膜瘤病例资料及石蜡标本,行LRIG1、内皮因子受体(EGFR)和Ki67免疫组化染色,分析LRIG1、EGFR和Ki67蛋白表达与脑膜瘤病理学分级及侵袭性的关系.结果 ①LRIG1表达强度在不同级别、不同亚型、不同侵袭性表现的脑膜瘤中,无显著差异(P＞0.05).②EGFR与Ki67表达强度则随脑膜瘤级别的增高而增高(P＜0.05),而在侵袭性及非侵袭性脑膜瘤中的表达无显著差异(P＞0.05).结论 ①LRIG1可能并未参加脑膜瘤的恶性进展或在其侵袭性行为中发挥效应.②EGFR信号系统的异常可能参与了脑膜瘤的恶性发展.
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LRIG1基因在人星形细胞瘤中的表达与意义
目的探讨LRIG1在人星形细胞瘤中的表达与意义.方法设计、制作LRIG1 mRNA寡核苷酸探针,用原位杂交检测LRIG1 mRNA在16例不同级别人星形细胞瘤组织及11例原代培养的人脑星形细胞瘤细胞中的表达,同时用免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,分析肿瘤LRIG1表达和PCNA表达之间的关系.结果人星形细胞瘤组织和培养的星形细胞瘤细胞中均有一定程度的LRIG1表达,其表达的程度与PCNA表达呈显著负相关(P＜0.05).结论LRIC1蛋白具有抑制星形细胞瘤增殖的作用,可能参与了肿瘤的发生和发展过程.
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SNAI2与E-cadherin参与LRIG1对U251细胞侵袭与转移的抑制作用
目的：探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）对人脑胶质瘤U251细胞侵袭与转移及U251细胞SNAI2、E-cadherin表达的影响。方法传代培养U251细胞，随机分为空白对照组、LRIG1空载体组、LRIG1过表达组、LRIG1低表达组、LRIG1低表达阴性对照组，应用脂质体介导的基因转染技术分别转染PBS、PEGFP-N1-U251质粒、PEGFP-LRIG1-U251质粒、LRIG1-siRNA、LRIG1-NC-siRNA。应用PCR、Western blot检测细胞LRIG1、SNAI2、E-cadherin mRNA和蛋白表达水平， Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力，划痕实验检测细胞转移能力。结果LRIG1过表达组U251 SNAI2表达下调（P<0.05）， E-cadherin表达上调（P<0.05），细胞侵袭与转移能力明显下降（P<0.05）。LRIG1低表达组U251细胞SNAI2表达上调（P<0.05）， E-cadherin表达下调（P<0.05），细胞侵袭与转移能力明显提高（P<0.05）。结论上调LRIG1可抑制U251细胞侵袭与转移，而敲除LRIG1可明显促进U251细胞侵袭与转移，SNAI2及E-cadherin可能参与其调节过程。
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脑肿瘤中以EGFR为靶点治疗的进展
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)对细胞的增殖和分化起重要作用,与绝大多数脑肿瘤的发生和发展密切相关.近年来针对EGFR的靶向性治疗研究日趋多样化,显示出较好的应用前景.
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LRIG1对胶质瘤细胞中表皮生长因子受体的抑制作用及其机制
目的 验证LRIG1在胶质瘤细胞中对表皮生长因子受体(EGFR)的抑制作用,探讨其作用机制.方法 采用激光共聚焦显微镜及Western blot法检测LRIG1质粒转染前后神经胶质瘤H4细胞中EGFR和LRIG1的亚细胞定位和表达情况.结果 在H4细胞中LRIG1低表达,EGFR高表达,均主要为膜表达;转染LRIG1质粒后,LRIG1表达增强,EGFR表达下降.结论 LRIG1主要位于胶质瘤细胞膜上,对膜受体EGFR有抑制作用,参与EGFR的负反馈调节.
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LRIG1基因功能域载体的构建及亚细胞定位
目的构建含LRIG1胞外段+跨膜段(ET)及跨膜段+胞内段(TC)基因的真核表达载体, 并研究它们的亚细胞定位.方法以人LRIG1全长的质粒p3XFLAG-CMV-9-LRIG1为模板, PCR扩增出3XFLAG-LRIG1-ET和LRIG1-TC, 并将之分别亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP-N1和p3XFLAG-CMV-9中. 酶切和DNA测序鉴定, 脂质体法将构建的质粒转染U251细胞, 观察标记基因荧光蛋白EGFP的表达, 间接免疫荧光检测标记基因3XFLAG的表达. 结果构建的质粒序列正确, 转染细胞后可检测到EGFP和3XFLAG基因的表达; LRIG1-ET和LRIG1-TC均主要表达在U251的胞膜上, 少量表达在胞浆. 结论包含LRIG1亚单位ET和TC的真核表达载体均构建成功, 其表达产物均主要位于胞膜, 少量位于胞浆.
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LRIGs基因与肿瘤关系的研究进展
LRIGs是新近发现的一类基因,在哺乳动物体内广泛存在,已经发现该家族至少包括三个成员:LRIG1、LRIG2和LRIG3.这三个成员在mRNA序列及表达蛋白的结构上有很高的同源性,而且它们的染色体定位与许多恶性肿瘤的发生相关,是目前研究的热点基因家族之一.现将LRIGs基因与肿瘤之间的关系作一综述.
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LRIG1在脑胶质瘤中的研究进展
在寻找哺乳动物表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)负调控蛋白的过程中,与果蝇Kek1蛋白(EGFR负反馈因子)结构相似的多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 (leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,LRIG1)步入了研究者的视野[1].2001年,Nilsson 等[2]从人脑中成功克隆了LRIG1基因.随后的功能研究表明LRIG1可以促进EGFR泛素化并降解,从而抑制其信号转导[3-4].研究发现LRIG1在肺癌、Her2(+)乳腺癌、肾透明细胞癌、膀胱癌、结肠癌及星形细胞瘤中表达下调,因此,Hedman 等[5]提出LRIG1是一个潜在的抑癌基因.近年来发现LRIG1基因缺失的小鼠自发肠腺瘤,这为LRIG1的抑癌作用提供了基因水平的证据[6-7].EGFR信号通路的异常激活与胶质瘤的发生和发展密切相关,作为EGFR负调控蛋白的LRIG1在胶质瘤中的研究也逐年增多.本综述着重回顾近年来LRIG1在胶质瘤发生、发展、治疗及预后中的相关研究进展.
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富含亮氨酸重复序列和LRIG1在人脑星形细胞瘤中的表达及意义
目的:探讨富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样多肽1(over-expressing leucine-rich repeats and immunoglobulin bulin-like domain protein 1,LRIG1)在人脑星形细胞瘤中的表达,并研究其表达与临床病理分级的关系,分析LRIG1基因的表达与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、P27及Rad51基因表达的相关性.方法:分别采用链霉亲和素复合体(strept Avidin-Biotin Complex,SABC)免疫组化法及逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)法检测了LRIG1 mRNA和蛋白在70例具有不同临床病理分期的星形细胞瘤组织及10例正常人脑组织中的表达,并进一步分析了LRIG1与人脑星形胶质瘤临床病理学特征的关系.此外,从mRNA水平检测了EGFR、P27、Rad基因的表达情况,并采用SPSS17.0分析LRIG1基因表达与EGFR、P27及Rad51的相关性.结果:LRIG1及p27在正常脑组织中表达较高,而在脑胶质瘤中的表达水平均明显低于正常脑组织(P＜0.05),且其表达水平与脑胶质瘤病理分级呈负相关,此外LRIG1 mRNA的表达水平与p27具有显著性的正相关性；研究结果还显示EGFR及Rad51在正常脑组织中表达较低,而在脑胶质瘤中的表达显著性高于正常脑组织(P＜0.05),且其表达水平随着脑胶质瘤病理分级的增加而增高,LRIG1 mRNA的表达水平与EGFR及Rad51的表达水平分别成负相关性.结论:LRIG1可能参与了脑星形胶质细胞瘤的发生、发展及转归,LRIG1可作为判定脑星形胶质细胞瘤恶性程度及复发的参考指标.
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LRIG1诱导人胶质瘤细胞凋亡与表皮生长因子受体基因关系
目的 研究LRIG1诱导神经胶质瘤细胞的凋亡作用,探讨LRIG1对表皮生长因子受体信号转导通路抑制效应的分子机制.方法 采用Lipofectamine介导的基因转染技术,将质粒pcDNA3.1-LRIG1转染原代神经胶质瘤细胞,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测转染后胶质瘤细胞LRIG1和EGFR mRNA与蛋白水平的变化,Western blot方法检测神经胶质瘤细胞PKCα、Bax、bcl-2蛋白水平的变化.MTT法和流式细胞技术分析细胞的增殖和凋亡的变化.结果 细胞中转染pcDNA3.1-LRIG1组中以LRIG1 mRNA和蛋白质的表达水平较未处理组和转染空载体组明显升高,而EGFR mRNA和蛋白质的表达水平较对照组和转染空载体组明显降低,PKCα、Bax表达上调,bc1-2表达下降,胶质瘤细胞生长受到抑制,凋亡显著增强.结论 LRIG1可能通过参与形成EGFR的负反馈环,从多种途径抑制了肿瘤的生长.
