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常见苛养菌培养的研究进展
链球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌是常见苛养菌,该菌培养条件苛刻,临床分离率低.本文就近几年来,苛养菌培养基成分的改良、生长结果的评价以及今后研究的方向等进行了综述.
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淋病奈瑟菌基因工程疫苗研究概况
淋病奈瑟菌是性传播疾病淋病的致病菌,为预防和控制淋病奈瑟菌的感染,淋病奈瑟菌的疫苗已经进行了深入的研究.其中淋病奈瑟菌基因工程疫苗越来越受到关注,其能诱导机体产生特异性细胞和体液免疫应答,且是安全性高的疫苗.本文概述了淋病奈瑟菌PorA、PorB、NspA和Tbp基因相关的基因工程疫苗的研究进展.
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细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌cppB基因稳定性的影响
细胞壁缺陷变异是细菌变异的一种特殊类型,细胞壁缺陷不但导致细菌的形态发生改变,也常常导致细菌代谢活性、致病性、遗传等多种特性发生改变.研究证实细胞壁缺陷可导致细菌丧失其R因子等质粒甚至造成细菌染色体基因碱基序列或活性发生改变,但关于细胞壁缺陷导致细菌隐蔽性质粒丢失或其碱基序列改变尚未见报道.为探讨细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌隐蔽性质粒的影响,本文对青霉素诱导形成的淋病奈瑟菌细胞壁缺陷型的cppB基因进行了检测与分析.
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淋病奈瑟菌NspA原核表达及其抗原性研究
目的 研究淋病奈瑟菌表面蛋白A(NspA)的抗原性及其在淋病快速诊断技术中的应用价值.方法 用PCR技术克隆淋病奈瑟菌NspA基因,构建其原核表达载体,在大肠杆菌中表达重组NspA,表达产物复性后免疫小鼠,Western blot、ELISA分别检测免疫血清与淋病奈瑟菌细胞裂解液中NspA及与淋病奈瑟菌全细胞的结合能力.结果 NspA基因可在大肠杆菌中表达,纯化并复性的重组NspA(rrNspA)可在小鼠体内刺激产生高效价特异性抗体,抗rrNspA抗体可与淋病奈瑟菌完整细胞及细胞裂解液中NspA特异性结合.结论 获得的rrNspA及抗rrNspA抗体在建立淋病奈瑟菌抗体或抗原快速检测方法中具有潜在的应用价值.
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某三级医院四环素耐药淋病奈瑟菌临床分离株的耐药机制及分子特征
目的 对中国东部温州地区淋病奈瑟菌流行菌株进行分型,并对四环素耐药的相关机制进行研究.方法 从淋病患者中分离出77株淋病奈瑟菌,采用E-test法进行青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、头孢曲松和阿奇霉素的小抑菌浓度(MIC)测定.PCR和DNA测序用于检测四环素抗性相关基因,包括Tet-M基因、mtrR启动子区和mtrR编码区.多抗原序列分型(NG-MAST)和多位点序列分型(MLST)分别用于确定所有临床分离株和四环素耐药分离株的分子特征.结果 在77株淋病奈瑟菌中,74株(96.10%)、27株(35.06%)、70株(90.91%)和15株(19.48%)分别对青霉素、四环素、环丙沙星和阿奇霉素耐药.所有测试的分离株对大观霉素和头孢曲松敏感.19株耐四环素菌株均存在Tet-M基因,其中17株mtrR启动区域发生1个碱基A的缺失突变,3株mtrR编码区域发生G45D突变.19株四环素耐药淋病奈瑟菌共测得11个不同的NG-MAST基因型,其中ST14781、ST1766和ST1866各占15.79%(均为3株),2个ST型(10.52%,2/19)未在NG-MAST数据库中报道过.19株四环素耐药淋病奈瑟菌共测序得到12个不同的MLST基因型别,其中ST10899占26.32%(5株),ST1600占15.79%(3株).结论 淋病奈瑟菌对四环素的耐药可能与mtrR启动区域和Tet-M基因的突变相关.NG-MAST基因分型结果显示温州地区淋球菌临床分离物表现出分子分型多样化.应采取措施监测温州地区具有高抗药性的NG-MAST ST1766和MLST ST1600淋病菌克隆.
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人癌胚抗原相关细胞黏附分子1介导的小鼠淋病奈瑟菌易感性
目的 研究制备淋病奈瑟菌感染人癌胚抗原相关细胞黏附分子1(hCEACAM1)转基因小鼠模型的可行性.方法 用hCEACAM1真核表达载体pCDPGICEA1,通过显微注射法制备转基因小鼠,PCR及序列分析法检测目的基因在小鼠基因组中的整合,Western blot及FACS技术检测目的基因的表达,镜检及培养法检查淋病奈瑟菌对转基因小鼠的感染.结果 产生的22只F0代小鼠中4只为转基因整合阳性,其中1只可表达hCEACAM1蛋白,且目的蛋白表达在细胞膜上.淋病奈瑟菌可在转基因小鼠中形成感染.结论 hCEACAM1转基因小鼠可作为淋病奈瑟菌感染研究的转基因动物模型.
关键词: hCEACAM1:转基因小鼠 淋病奈瑟菌 易感性 -
淋病奈瑟菌临床菌株PⅠ基因型及PⅠB基因点突变分析
目的 分析浙江地区淋病奈瑟菌株外膜孔蛋白PⅠ基因序列及其点突变与耐药性关系,了解本地区淋病奈瑟菌株PⅠA与PⅠB基因分布及其优势基因型.方法 采用高保真PCR扩增34株淋病奈瑟菌全长PⅠ基因序列,T-A克隆后测序.根据测序结果,建立多重PCR同时检测113株淋病奈瑟菌PⅠA和PⅠB基因.分析测序菌株PⅠB基因中与耐药性密切相关的G120和A121变异情况,采用二倍琼脂稀释法确定PⅠB菌株的耐药性.结果 11株PⅠA+淋病奈瑟菌均为ⅠA6血清型.23株PⅠB+淋病奈瑟菌中,6株(26.1%)为ⅠB3血清型、5株(21.7%)为ⅠB3/6血清型、2株(8.7%)为ⅠB4血清型、9株(39.1%)为ⅠB3/6-ⅠB2嵌合血清型、1株(4.3%)为ⅠB2-ⅠB4嵌合血清型.所建立的多重PCR可特异和准确地对PⅠA和PⅠB基因分型,检测灵敏度为10ngDNA模板.113株淋病奈瑟菌中,26株(23.0%)和87株(77.0%)分别携带PⅠA和PⅠB基因.经测序的23株PⅠB+淋病奈瑟菌中,1株(4.3%)G120和A121均未突变,3株(13.0%)G120或A121突变,2株8.7%)G120突变但A121缺失,17株(73.9%)双位点突变.22株G120和/或A121突变的PⅠB+菌株均对青霉素和四环素耐药.结论 所建立的多重PCR可用于淋病奈瑟菌PⅠA和PⅠB基因的分型检测.本地区流行的淋病奈瑟菌主要携带PⅠB基因.ⅠA6为PⅠA菌株优势血清型.PⅠB菌株以ⅠB3/6-ⅠB2嵌合、ⅠB3和ⅠB3/6血清型常见,但主要为耐药性G120和/或A121突变株.
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hCEACAM1介导淋病奈瑟菌对COS-1细胞的黏附
目的 研究人癌胚抗原相关细胞黏附因子1(hCEACAM1)在淋病奈瑟菌黏附宿主细胞过程中的作用.方法 将hCEACAM1 cDNA置于hCD46启动子和兔β-球蛋白第2内含子之后,构建重组真核表达载体pCDPGICEA1.转染COS-1细胞,G418筛选和流式细胞术分选稳定表达hCEACAM1的基因转染细胞.细菌黏附实验检测淋病奈瑟菌对基因转染COS-1细胞的黏附.结果 在hCD46启动子和兔β-球蛋白第2内含子的作用下,hCEACAM1 cDNA在COS-1细胞获得高效表达,淋病奈瑟菌可以黏附表达hCEACAM1的COS-1细胞.结论 hCEACAM1可以介导淋病奈瑟菌对动物细胞的黏附,可能是淋病奈瑟菌特异性感染人体的一种重要受体,可用来制备淋病奈瑟菌感染的相应转基因动物模型.
关键词: 淋病奈瑟菌 人癌胚抗原相关细胞黏附因子1 基因转染 COS-1细胞 黏附 -
广西南宁地区淋病奈瑟菌耐药监测及基因分型研究
淋病是性传播疾病的主要病种之一,积极有效地开展淋病的分子流行病学监测已成为控制淋病的重要措施之一.淋病奈瑟菌分型在淋病的治疗和淋病疫苗的研究中有着重要的意义.淋病奈瑟菌传统分型方法存在复杂、费时费力、有限的分型能力等诸多不足,限制了该方法的广泛应用[1],而基因分型方法的建立和发展,弥补了这些不足.
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淋病奈瑟菌NspA基因疫苗诱导小鼠特异性体液免疫应答
1999年Martin等首先克隆了淋病奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface protein A,NspA)基因,发现其在细胞表面持续表达,菌株之间NspA氨基酸序列的同源性高达98%,提示NspA可能是研制淋病疫苗的理想抗原.我室已成功构建NspA真核表达载体pcNspA,本文研究了pcNspA基因免疫在小鼠体内诱生特异性抗体的作用.
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用PCR分析高水平耐四环素淋病奈瑟菌质粒类型
1985年美国首次分离出高水平质粒介导的耐四环素淋病奈瑟菌(hight-level plasmid mediated tetracycline-resistant N.gonorrhoea,TRNG)以来,在世界各地引起广泛流行,欧洲、非洲、亚洲、拉丁美洲等地区都有报道,有些地方TRNG在质粒介导型耐药菌株中分离率居首位.根据限制性内切酶谱将TRNG分为"荷兰型"和"美国型"两种[1],"美国型"与1600 bp的扩增产物相关,"荷兰型"与700 bp大小的扩增产物相关.1991年成都地区首次分离出TRNG[2],现已成为本地区流行的主要耐药菌株.我国过去对TRNG分型主要采用琼脂稀释法测定对四环素的小抑菌浓度或质粒抽提等方法,未对其携带的质粒类型进行基因分型.我们对1999年-2002年我所性病门诊收集的476株淋病奈瑟菌采用琼脂稀释法和聚合酶链反应对其携带的质粒类型进行检测和分析,现报告如下.
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淋病奈瑟菌TetM耐药基因的检测及质粒介导耐药性的分析
目的建立淋病奈瑟菌TRNG株的PCR检测方法并对淋病奈瑟菌质粒介导的耐药性进行调查与分析。方法通过特异的引物设计,行PCR扩增、电泳,可以检测出淋病奈瑟菌的TRNG株。同时通过琼脂稀释法检测153株淋病奈瑟菌对青霉素及四环素的MIC值。结果 153株淋病奈瑟菌中,通过小抑菌浓度测定为TRNG株的83株菌,其PCR法结果均为阳性,其余为阴性。用质粒总量或菌悬液作为检测模板,其低检出率分别为0.1pg和100个菌细胞。淋病奈瑟菌质粒介导的耐药性调查显示:质粒介导的耐药率为87%,其中PPNG 71%,TRNG 54%,PPNG/TRNG 39%。PPNG/TRNG株已成为成都地区主要流行菌株。结论 TRNG株PCR检测方法具有很高的特异性和灵敏度。与传统方法相比,其简便、快速、准确,可以在一般实验室运用。成都地区质粒介导的耐药性保持高水平并呈上升趋势,应该引起有关部门的高度重视。
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膜芯片技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和3种支原体的方法学研究
目的 建立和评价一个新的多重PCR-反向线点杂交技术(RLB)快速同时检测泌尿生殖道沙眼衣原体(Ct)、淋病奈瑟菌(Ng)和3种支原体感染的方法.方法 分别选择Ct隐蔽质粒和Ng 16S rRNA基因设计两对特异性引物,以支原体内转录间隔序列(ITS)设计一对支原体属通用引物,生物素标记下游引物.构建三重PCR同时扩增Ct、Ng、解脲脲原体(Uu)、微小脲原体(Up)、人型支原体(Mh)等菌DNA,然后与固定在尼龙膜上的各特异性寡核苷酸探针杂交.并对142份经荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Ct和Ng的性病高危人群标本,以及45份经支原体液体培养法鉴定的标本进行检测.结果 多重PCR可同时扩增Ct、Ng、Uu、Up和Mh标准菌株DNA,其PCR产物的片段长度为208~408 bp.97份FQ-PCR Ct阳性标本中有93份经多重PCR-RLB检测为Ct阳性,45份FQ-PCR Ct阴性标本中35份多重PCR-RLB阴性.41份FQ-PCR Ng阳性标本中34份多重PCR-RLB Ng阳性,101份FQ-PCR Ng阴性标本中98份多重PCR-RLB阴性.其中36份经多重PCR-RLB检测为混合感染.32份支原体液体培养阳性标本中28份多重PCR-RLB阳性,13份支原体培养阴性标本经多重PCR-RLB检测均为阴性.结论 多重PCR-RLB可快速同时检测Ct、Ng、Uu、Up和Mh,为性传播疾病的临床诊断提供了一种可靠的方法.
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荧光定量聚合酶链反应检测女性生殖道分泌物沙眼衣原体等病原体
测女性生殖道分泌物中淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)的数量,以了解本地区上述3种病原体感染现状.方法:用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测了121份标本的NG-DNA和149份标本的CT-DNA与UU-DNA.结果:NG阳性率为49.6%(60/121),其阳性标本的平均拷贝数为3.61×105拷贝/ml;CT阳性率为23.5%(35/149),其阳性标本的平均拷贝数为9.59×104拷贝/ml;UU阳性率为34.3%(51/149),其阳性标本的平均拷贝数为4.11×105拷贝/ml.结论:FQ-PCR具有简便、快速、准确的优点,是目前快速诊断淋菌、非淋菌性阴道炎可靠准确的方法.
关键词: 淋病奈瑟菌 沙眼衣原体 解脲脲原体 荧光定量聚合酶链反应 -
聚合酶链反应-单链构象多态性检测淋病奈瑟菌gyrA基因突变的研究
国外研究表明,DNA旋转酶是淋病奈瑟菌(淋菌)中氟喹诺酮类药物的首要作用靶位,淋菌对氟喹诺酮类药物耐药主要与编码该酶的gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变有关[1].为建立一种简便、快速、可靠的淋菌gyrA基因突变的检测方法,并进一步探讨该突变与我国临床分离淋菌对氟喹诺酮类药物耐药的关系,本课题以浓度梯度(Etest)法检测了42株临床分离淋菌对环丙沙星敏感性,采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)结合DNA测序技术,对淋菌gyrA基因QRDR突变进行了研究,报告如下.
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应用单克隆抗体技术研究淋病奈瑟菌外膜蛋白
淋病奈瑟菌细胞的外膜蛋白I(outer membrane protein I,PI)是淋病奈瑟菌抗原的重要组成部分,也是其血清学分类的重要物质基础,PI可分为低分子量的PI-A和较高分子量的PI-B两类. 本研究应用单克隆抗体分型技术对2000年1月-2001 年10月门诊分离的淋病奈瑟菌进行了外膜蛋白抗原性测定.
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应用碱裂解法研究淋病奈瑟菌质粒谱
淋病奈瑟菌(淋菌)的质粒谱(plasmid profiles)是淋菌分子流行病学研究和淋病监控的对象.本研究利用碱裂解法对2000年1月~2001年10月门诊分离的淋菌进行了质粒抽提及质粒谱分型研究.报告如下.
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基因芯片检测泌尿生殖道三种病原体的初步应用
目前在临床性病检验中,对常见的3种病原体淋病奈瑟菌(淋菌)、沙眼衣原体和解脲脲原体的检验效率较低,一次只能检测一种病原体,花费时间轼长,急需研制一种快速、简便、准确的检测方法.
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问题解答
问:超高倍镜下形态学检查可确定淋病奈瑟菌吗? 答:不能。确定淋病奈瑟菌的“金标准”是细菌培养。取材合格的尿(阴)道分泌物的直接涂片革兰染色,在油镜下如见到多量脓细胞,其胞浆内有多量革兰阴性肾性双球菌,也只能报告“查到细胞内革兰阴性肾形双球菌”而不能报告淋病奈瑟菌,虽然直接涂片革兰染色对男性急性淋病的诊断可靠性达80%,但对女性的可靠性不足60%,由于阴道中细菌种类繁多,已有许多文献报道单由形态学检查导致的误诊。不染色下的超高倍显微镜,只能放大物象,无助于细菌的鉴别与鉴定。 (王金良)(收稿日期:2000-12-12) 问:什么是“细胞凋亡”? 答:所谓细胞凋亡是区别于细胞坏死的一种细胞死亡形式,它是在一定的生理和病理条件下,一种并不引起机体炎症反应的细胞程序性死亡(Programmed Cell Death, PCD)的过程。细胞凋亡是细胞生命的基本特征之一,在机体生理状态下参与调节体内正常细胞的更新和异常细胞的清除,而在病理状态下异常的凋亡又与肿瘤等多系统疾病的发生发展密切相关。(秦雪)
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连接酶链反应检测泌尿生殖道淋病奈瑟菌感染
在性传播疾病(STD)中,淋病奈瑟菌(NG)的感染较常见.文献报道连接酶链反应(LCR)对NG的诊断有高度的敏感性和特异性.我们通过对STD门诊尿道炎/宫颈炎患者276份拭子标本进行LCR检测和细菌培养,评价LCR诊断男性尿道、女性宫颈NG感染的意义.一、材料与方法1.标本来源:STD门诊尿道/宫颈炎患者276例,有轻重不等的尿道炎/宫颈炎症状和体征,就诊前两周内未使用任何抗生素.拭子插入尿道或宫颈内捻转并停留10 s,取出后立即接种T-M培养基,然后将拭子置入LCx STD拭子标本收集及运送试管内(美国Abbott公司产品).2.细菌培养: 拭子接种后,置5% CO2温箱,37℃培养48~72