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淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、细小脲原体多重荧光定量PCR检测方法的建立及临床应用
目的 建立淋病奈瑟菌(Neisseria agonorrhoeae,NG)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、细小脲原体(Ureaplasma parvum,UP)多重荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)检测方法.方法 选择NG保守基因porA、解脲支原体(Ureaplasma urealytieum,UU)保守基因ure及CT保守基因trp作为目标检测基因,设计引物及TaqMan探针,制备重组质粒标准品,绘制标准曲线,建立多重FQ-PCR检测方法,并验证其敏感性、特异性及重复性.用建立的方法对203份泌尿生殖道感染NG、CT、UP的临床样本进行同步检测,并与单重FQ-PCR法、常规PCR法及基因测序结果进行比较.结果 重组质粒标准品经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;建立的标准曲线起始DNA拷贝数与Ct值之间的线性关系良好,相关系数为0.998 ~ 1.000;该方法检测NG、CT和UP的灵敏度均可达102 copies/ml,检测范围可达109 ~ 102 copies/ml,相关系数分别为1.000、0.999和0.995;不与生殖道其他菌群如阴道霉菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌、人型支原体、单纯疱疹病毒Ⅰ型、Ⅱ型及人乳头瘤病毒(16/18型)发生交叉反应;检测的203份样本中,多重FQ-PCR检测NG、CT、UP的阳性检出率分别为34.48%、30.54%、18.71%,与单重FQ-PCR法、基因测序法比较,差异无统计学意义(P>0.05),3种方法阳性检出率均高于常规PCR法;与基因测序法相比,多重FQ-PCR法灵敏度为100%,3种病原体检测特异性均高于98.50%.结论 已成功建立NG、CT、UP多重FQ-PCR检测方法,该法检测时间短,特异性强,灵敏性高,适合于临床快速诊断.
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135株淋病奈瑟菌药物敏感性监测分析
淋病奈瑟菌(NG)是淋病的病原体,淋病是常见的性传播疾病之一,也是我国目前监测的8种主要性传播疾病中发病人数多的一种.本来采用基本的青霉素就能治愈,但目前已存在患者对多种药物的耐药,因此对NG体外药物敏感性监测,掌握其药物敏感谱变迁和发现其新的耐药菌株对淋病的防治工作十分重要.我们分析了我院近2年分离的135株NG,并对其耐药性进行了分析.
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荧光定量PCR技术检测女性淋病的临床价值
目的:探讨荧光定量PCR技术检测女性淋病的临床价值.方法:用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,检测疑似淋病女性患者泌尿生殖道标本117例,并与常规的细菌培养进行比较.结果:FQ-PCR阳性检出率为48.7%(57/117),细茵培养阳性率为36.7%(43/117).结论:凡细菌培养阳性者FQ-PCR均阳性,表明FQ-PCR操作更简便、快速,并能准确定量.对于淋病的诊断、病情的发展和愈后监测、疗效评价、指导用药均具有很高的临床实用价值.
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中草药治疗产β-内酰胺酶淋病奈瑟菌感染的疗效观察
淋病奈瑟菌是淋病的病原菌,淋病是性传播疾病中发病率高的一种,近年来随着广谱抗菌素的广泛使用,治疗不规范造成临床大量耐药菌株.所以对细菌耐药性检测(Beta-内酰胺酶),以及寻求一种切实可行的治疗方法已是刻不容缓的问题.现将本人几年来临床耐药菌株分离结果,并中草药对产Beta-内酰胺酶淋病治疗效果介绍如下.
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1例静点头孢哌酮钠后饮酒致过敏性休克
头孢哌酮为第三代头孢菌素,对大肠埃希菌、伤寒沙门菌等肠肝菌科细菌和铜绿假单细菌有良好抗菌作用.流感杆菌、淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌对本品高度敏感.对多数革兰阳性厌氧菌和某些革兰阴性厌氧菌有良好作用,主要抑制细菌细胞壁的合成,故临床上已广泛应用.我科于2000年5月份收治1例静点头孢哌酮钠后饮酒致过敏性休克患者,现报道如下.
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淋病奈瑟菌基因分型进展
淋病奈瑟菌表型分型方法的局限性限制其在该菌分型方面的应用.近年来,一系列该菌基因分型方法的建立弥补了表型分型方法的不足.各种基因分型方法,如Opa分型法、Por分型法、脉冲场凝胶电泳等有着各自不同的基因分型基础、应用范围及优缺点等.本文就近年来新发展的主要的该基因分型方法作一简要介绍.
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淋病奈瑟菌黏附机制的研究进展
淋病导致的公共卫生问题在世界范围内广泛存在.淋病奈瑟菌的唯一宿主是人类,该菌侵袭泌尿生殖道引起淋病.其感染的关键是黏附因子对黏膜细胞的黏附.淋病奈瑟菌主要黏附因子与细胞受体间的作用机制已经在细胞水平上研究得比较清楚,表达淋病奈瑟菌黏附因子受体的转基因动物可望成为淋病研究的合适动物模型,为深入研究淋病奈瑟菌的致病机制、研制淋病疫苗及新型治疗药物提供有效工具.
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沙眼衣原体抗原成分的研究进展
沙眼衣原体的感染率不断增加,其危害也越来越大。在欧、美等国和地区,由沙眼衣原体所致性传播疾病已超过淋病奈瑟菌而居首位。当前对沙眼衣原体的研究较多,本文概这了近年来对沙眼衣原体抗原成分的研究进展及其在分型、诊断、致病性、疫苗研究方面的意义。
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淋病奈瑟菌多重传递耐药主动外排系统的研究进展
淋病奈瑟菌多重传递耐药系统属于细菌的主动外排系统,与淋球菌多重耐药的发生有密切关系。本文就该系统的组成、功能、基因调控及与淋球菌多重耐药间关系等方面的研究现状作一概述,并讨论对该系统进一步研究的意义。
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淋病奈瑟菌分型的研究进展
淋病奈瑟菌(淋球菌)分型可追溯细菌的来源,了解其地域分布和流行情况,对淋病的防治具有重要意义.常用的淋球菌分型方法有:营养、血清学、营养/血清学双重、植物凝集素、基因、耐药谱和质粒分型等.本文就当前的分型概况予以介绍.
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男性尿道炎尿道多形核白细胞与沙眼衣原体和淋病奈瑟菌感染临床相关性分析
目的 本研究采用亚甲蓝(美蓝)染色检查男性尿道炎患者尿道多形核白细胞数量并进行沙眼衣原体抗原检测和淋病奈瑟菌培养,以评价非淋病奈瑟菌性尿道炎和淋病的临床意义.方法 对3000例性病患者的尿道分泌物进行亚甲蓝涂片染色镜检、衣原体抗原检测和淋病奈瑟菌染色镜检和培养.结果 3000例性病患者中,387例患者(12.9%)沙眼衣原体抗原阳性.在沙眼衣原体感染患者中,242例(62.5%)≥5个多形核白细胞,59例(15.2%)为1~4个多形核白细胞,86例(22.2%)为0个多形核白细胞;其中36例患者(9.3%)无症状,141例患者(36.4%)无体征.415例(13.8%)淋病奈瑟菌阳性,在淋病患者中,397例(95.7%)≥5个多形核白细胞,10例(2.4%)为1~4个多形核白细胞,8例(1.9%)为0个多形核白细胞;其中5例(1.2%)患者无症状,46例(11.1%)无体征.86例沙眼衣原体和淋病奈瑟菌合并感染的患者中,76例阳性患者≥5个多形核白细胞,5例阳性患者为1~4个多形核白细胞,5例阳性患者无多形核白细胞.结论 男性尿道炎尿道多形核白细胞数量在沙眼衣原体感染和淋病奈瑟菌感染中存在明显差异(P<0.001).此结果表明临床诊断与实验室检查在证实男性尿道炎中具有重要意义
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126株淋病奈瑟菌耐药性分析及其所致感染的中西医结合治疗
目的 研究近几年来淋病奈瑟菌(简称淋球菌)对抗生素的敏感性,探讨中西医结合治疗的有效性.方法 对我科从2000年1月~2007年6月收治保存的126株淋球菌分别用纸片扩散法和快速药敏测试法进行15种药物的药敏检测,并用头孢曲松合并中药治疗.结果 用快速定量药敏检测法测定的小抑菌浓度(MIC)与用K-B法基本相符.对环丙沙星的耐药率为75.40%,1.50%的菌株耐大观霉素(MIC≥64μg/ml);所有菌株均对头孢曲松敏感.中西医结合治疗所有病例均获得痊愈.结论 头孢曲松药物敏感性无明显变化,6年间未发现耐药菌株;环丙沙星耐药性显著上升.中西医结合在淋病治疗中有效可行.
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淋病奈瑟菌孔蛋白疫苗研究进展
淋病奈瑟菌孔蛋白具有较强的免疫原性和相对缓慢的抗原变异性.近年来,淋病奈瑟菌孔蛋白结构、抗原性及其影响因素等方面的研究进展推动了该菌疫苗的研究.
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荧光定量聚合酶链反应在同时检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和解脲脲原体中的应用
目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)在淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)和解脲脲原体(UU)检测中的应用价值及NG、CT、UU的感染状况.方法 采用FQ-PCR同时检测328例疑有泌尿生殖道感染患者的NG、CT和UU,并与培养法做比较.结果 FQ-PCR对NG、CT和UU的阳性检出率高于培养法.阳性标本定量均值分别为NG 1.1×108拷贝/mL、CT 1.2×107 拷贝/mL、UU 3.9×106 拷贝/mL.UU的阳性率为60.67%,CT为6.40%,NG为3.05%;CT+UU合并感染的阳性率为4.57%,NG+UU为1.83%,NG+CT为0.61%,总阳性率为70.12%(230/328).结论 FQ-PCR灵敏度高、特异性强,可对NG、CT和UU进行定量测定,对三者感染的诊断具有重要的临床意义.
关键词: 淋病奈瑟菌 沙眼衣原体 解脲脲原体 荧光定量聚合酶链反应 -
上海地区卖淫嫖娼人员性病发病状况调查与分析
目的 了解上海地区卖淫嫖娼人员性病发病状况及其特点.方法 对2005年全市部分看守所、拘留所等公安机关所关押的5 701名卖淫嫖娼人员作淋病奈瑟菌(NG)的分离培养、梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)及梅毒螺旋体抗体凝集试验(TPPA).结果 阳性检出率为:NG 7.2%,其中女性(9.3%)>男性(3.4%);梅毒螺旋体6.8%,其中女性(9.1%)>男性(2.9%).结论 上海地区卖淫嫖娼人员性病发病率较高,淋病的发病率稍高于梅毒,且淋病和梅毒的发病率卖淫女明显高于男嫖客.卖淫女和男嫖客是淋病和梅毒的主要传染源和传播者(尤其是卖淫女),社会应给予关注.
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淋病奈瑟菌的耐药性及氟喹诺酮耐药基因突变的分析
目的了解本地区淋病奈瑟菌(NG)流行株对5种抗生素的敏感性,分析NG的耐药性特点,为淋病的治疗提供实验依据.方法纸片扩散法检测108株NG对5种抗生素的敏感性,用产色头孢硝噻吩法检测β-内酰胺酶,用聚合酶链反应(PCR)扩增NG gyrA和parC基因的氟喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关序列并作测序分析.结果 108株NG中检出84株对青霉素耐药(77.8%),由质粒介导的产青霉素酶NG(PPNG)为60株(55.6%);四环素耐药率为61.1%,其中质粒介导高度耐四环素NG(TRNG)为28株,占25.9%;环丙沙星耐药率为83.3%;未发现对大观霉素和头孢曲松的耐药菌株.耐氟喹诺酮的22株NG均发生gyrA基因的91、95氨基酸位点突变,原91位氨基酸全部由丝氨酸转变为苯丙氨酸,parC基因的氨基酸突变位点分别为86、87和91.结论青霉素、四环素以及氟喹诺酮类药物已不宜作为本地区治疗淋病的常规药物;大观霉素、头孢曲松可作为治疗淋病的首选药物,基因检测分析证明了NG gyrA和parC基因突变与氟喹诺酮耐药性有关.
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2001~2003年上海地区淋病奈瑟菌对抗生素的敏感性测定及质粒分析
目的了解上海地区2001~2003年淋病奈瑟菌(NG)对抗生素的敏感性情况及变化趋势.方法采用琼脂稀释法测定青霉素、头孢曲松、大观霉素、环丙沙星、四环素对742株NG的小抑菌浓度(MIC).用纸片酸度法检测β-内酰胺酶菌株.用碱裂解方法抽提质粒.结果742株NG检出产青霉素酶菌(PPNG)342株(46.09%);质粒介导高度耐四环素(TRNG)166株(22.37%);耐环丙沙星718株(96.77%);耐大观霉素1株;未发现对头孢曲松耐药菌株;超过20%的菌株同时对青霉素、四环素和环丙沙星耐药;对35株菌株作了质粒分型,含耐药质粒检出率97%,分别带有5.4和7.4kb耐药性质粒.结论淋球菌对青霉素、四环素和环丙沙星3种药物分别有较高比例的耐药率.上海地区治疗淋病应首选大观霉素和头孢曲松.
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性病实验室常见病原体检测结果分析
目的了解梅陇地区性传播疾病(STD)感染情况.方法对1 322例患者淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(Ct)和解脲脲原体(Uu)检测结果进行分析.结果阳性检出率为:Uu(29.5%)>NG(18.7%)>Ct(9.1%),男性患者NG阳性率高,为30.9%(170/552),女性患者Uu阳性率高,为39.4%(303/770).结论男性患者NG阳性率高,应加强对性伴的检查.Ct阳性率低,可能与标本采集有关.Uu阳性,应根据患者情况,综合判断.
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不孕妇女中沙眼衣原体、解脲脲原体、淋病奈瑟菌感染的现状
目的研究淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(Uu)感染与不孕的关系.方法 CT、Uu、NG用PCR荧光定量检测法,抗精子抗体(ASAb)用ELISA法.对98例可疑性病患者,76例不孕者和88名健康体检者分别进行CT、Uu、NG、ASAb测定比较.结果不孕组CT、Uu、NG检出率与对照组比较差异均有显著性(P<0.01).不孕组血清中ASAb浓度与对照组比较差异有显著性(P<0.01).不孕组CT、Uu、NG检出率和血清中ASAb的浓度与可疑性病组比较差异无显著性.结论 CT、Uu、NG、ASAb的检测对探讨性病与不孕之间的关系有一定的价值,有必要开展对不孕患者CT、Uu、NG、ASAb的检测.
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性传播性疾病实验室检测结果分析
目的探讨上海浦东新区的性传播性疾病(STD)感染特征.方法对657例患者的淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、梅毒螺旋体抗体检测法(TPPA)检测结果进行分析.结果阳性检出率为:梅毒21.4%(141/657)>NG 15.7%(103/657)>CT 9.0%(59/657)>UU 1.8%(12/657),梅毒感染占首位,UU检出率偏低.结论浦东新区的STD感染情况符合我国沿海城市的特征,梅毒感染显著升高应引起重视.UU检出率偏低,可能与试剂质量有关,应加强试剂的质量监控.