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用PCR分析高水平耐四环素淋病奈瑟菌质粒类型
1985年美国首次分离出高水平质粒介导的耐四环素淋病奈瑟菌(hight-level plasmid mediated tetracycline-resistant N.gonorrhoea,TRNG)以来,在世界各地引起广泛流行,欧洲、非洲、亚洲、拉丁美洲等地区都有报道,有些地方TRNG在质粒介导型耐药菌株中分离率居首位.根据限制性内切酶谱将TRNG分为"荷兰型"和"美国型"两种[1],"美国型"与1600 bp的扩增产物相关,"荷兰型"与700 bp大小的扩增产物相关.1991年成都地区首次分离出TRNG[2],现已成为本地区流行的主要耐药菌株.我国过去对TRNG分型主要采用琼脂稀释法测定对四环素的小抑菌浓度或质粒抽提等方法,未对其携带的质粒类型进行基因分型.我们对1999年-2002年我所性病门诊收集的476株淋病奈瑟菌采用琼脂稀释法和聚合酶链反应对其携带的质粒类型进行检测和分析,现报告如下.
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应用碱裂解法研究淋病奈瑟菌质粒谱
淋病奈瑟菌(淋菌)的质粒谱(plasmid profiles)是淋菌分子流行病学研究和淋病监控的对象.本研究利用碱裂解法对2000年1月~2001年10月门诊分离的淋菌进行了质粒抽提及质粒谱分型研究.报告如下.
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褪黑素受体mRNA检测方法的建立
1 方法介绍1.1 组织标本制备待检新鲜组织标本立即用4%多聚甲醇DEPC液固定,梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋组织,置4℃冰箱贮存待检测.1.2 原位杂交检测方法1.2.1 载玻片的预处理载玻片盐酸浸泡24 h,流水洗净,蒸馏水洗后晾干,用95%乙醇浸泡30 min,180℃烘干过夜,室温冷却,涂切片粘合剂.1.2.2 探针制备 LB培养基各50 ml,分别加入mt1、和MT2受体探针大肠杆菌菌株甘油保存液各15 μl,37℃,200 r/min培养过夜.10 000×g离心5 min回收大肠杆菌,按照华舜公司质粒抽提纯化试剂盒说明抽提纯化质粒,将两种质粒以XhoⅠ、HindⅢ内切酶酶切消化2 h,琼脂糖凝胶电泳,回收1.1 kb左右的片段胶,地高辛标记探针(按宝灵曼公司说明书进行),并测定标记效率,探针浓度均达到80 ng/μl.