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心脏骤停大鼠自主循环恢复后心肌损伤的特点
目的 明确心脏骤停(cardiac arrest,CA)大鼠自主循环恢复(restoration of spontaneous circulation,ROSC)后心肌损伤的特点及其机制.方法?42只雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分为复苏后(post resuscitation,PR)4 h组、PR 24 h组、PR 48 h组及假手术(sham)组.经皮电刺激心外膜诱导室颤建立大鼠CA模型,CA 6 min后开始心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR).各组动物至观察时间点行超声心动图检测心功能,行正电子发射型计算机断层显像检测心肌葡萄糖代谢大标准化摄取值(maximum standardized uptake value,SUVmax),测线粒体通透转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)开放程度及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),并通过电镜观察心肌超微结构.结果?PR 4 h出现心功能不全,左室射血分数、心输出量下降(均P<0.01),舒张期左室后壁增厚(P<0.01),舒张末左室容量变小(P<0.05),PR 48 h心超参数与sham组比较差异无统计学意义(P>0.05);与sham组相比,PR 4 h组心肌SUVmax升高,线粒体吸光度下降明显,MMP降低,差异有统计学意义(均P<0.01),PR 48 h组上述参数与sham组比较差异无统计学意义(均P>0.05);PR 4 h及PR 24 h组心肌线粒体肿胀,线粒体嵴稀疏,但心肌超微结构完整.结论?CA/ROSC后发生复苏后心功能不全,但ROSC后48 h受损的心功能可完全恢复,其原因可能与心肌损伤为可逆性,线粒体功能和结构逐渐恢复有关.
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右美托咪定对化学性低氧环境下神经细胞的保护作用研究
目的：探讨右美托咪定（ Dex）在中枢神经细胞对抗化学性低氧环境损伤中的保护机制。方法建立化学性低氧环境的神经细胞模型，选取PC12细胞，采用右美托咪定及氯化钴（ CoCl2）的共同作用24 h。C组为空白对照组；Co组仅添加600μmol/L氯化钴；Dex组仅添加400μmol/L右美托咪定；CD组添加400μmol/L右美托咪定及600μmol/L氯化钴共同作用。采用Western blot法检测p38MAPK通路蛋白水平，采用MTT检测细胞存活率，采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，采用荧光光度法检测活性氧水平及线粒体膜电位水平。结果 Co组p38MAPK蛋白表达水平较C组明显上升，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。CD组蛋白表达水平较Co组明显下降，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。Dex组对蛋白表达水平无影响，与C组比较差异无显著性（ P ﹥0.05）。Co组较C组细胞存活率明显降低、凋亡率明显提高，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。CD组较Co组细胞存活率得到明显的提升、凋亡率降低，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。Dex组细胞存活率、凋亡率较C组无明显差异（ P ﹥0.05）。Co组较C组细胞活性氧水平明显提高、线粒体膜电位水平下降，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。CD组较Co组细胞活性氧水平明显降低、线粒体膜电位水平提高，差异具有统计学意义（ P ﹤0.05）。Dex组细胞活性氧水平及线粒体膜电位较C组无明显差异（ P ﹥0.05）。结论右美托咪定对化学性低氧环境引发的神经细胞损伤的保护作用确切，其保护机制可能与抑制p38MAPK通路、活性氧生成有关。
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WWOX对胰腺癌细胞活性、凋亡及ATP含量影响及机制初步研究
目的 研究含WW域的氧化还原酶(WWOX)对胰腺癌细胞增殖活性、凋亡及细胞中三磷酸腺苷(ATP)含量影响.方法 在胰腺癌SW1990细胞中转染WWOX过表达质粒,同时转染对照质粒作为阴性组,设置只加入转染试剂的细胞为对照组.荧光定量PCR和Western blot法检测各组胰腺癌细胞中WWOX的表达水平,用MTT法测定胰腺癌细胞增殖活性,用流式细胞术测定胰腺癌细胞凋亡情况,用JC-1法检测胰腺癌细胞线粒体膜电位,用荧光素酶法测定ATP含量,用Western blot法检测胰腺癌细胞线粒体和胞质中细胞色素C(Cyt C)及细胞中剪切型Caspase-9(Cleaved Caspase-9)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达.结果 WWOX过表达质粒转染后的SW1990细胞中WWOX mRNA和蛋白水平高于对照组(P＜0.05).高表达WWOX后的SW1990细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中ATP含量降低,线粒体膜电位降低,线粒体中Cyt-C蛋白水平降低,胞质中Cyt-C蛋白水平升高,细胞中Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).阴性组细胞WWOX mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率、ATP含量、线粒体膜电位、胞质和线粒体中Cyt-C蛋白水平、细胞中Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白水平与对照组相比均无显著差异(P＞0.05).结论 WWOX可以抑制胰腺癌细胞增殖活性,诱导胰腺癌细胞凋亡,减少细胞中ATP合成,这可能与减少线粒体释放Cyt-C和线粒体膜电位有关.
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超声介导靶向微泡联合紫杉醇对卵巢癌细胞线粒体膜电位的影响
目的 探讨超声介导LHRHa靶向微泡联合紫杉醇对人卵巢癌细胞株A2780/DDP线粒体膜电位的影响.方法 采用生物素-链霉亲和素法合成LHRHa靶向微泡.将对数生长期的A2780/DDP细胞随机分为对照组、紫杉醇组,紫杉醇+超声组、普通微泡+紫杉醇+超声组、LHRHa靶向微泡组和LHRHa靶向微泡+紫杉醇+超声组.采用MTT法检测细胞增殖抑制率,激光共聚焦检测细胞线粒体膜电位变化.结果 LHRHa靶向微泡+紫杉醇+超声组对细胞增殖抑制作用明显,24 h、48 h和72 h抑制率分别为(35.39±2.12)％、(66.90±2.15)％、(69.53±2.85)％,明显高于其他处理组(P均＜0.05).与对照组相比,除LHRHa靶向微泡组外,各处理组细胞线粒体膜电位均出现不同程度的降低,LHRHa靶向微泡+紫杉醇+超声组线粒体膜电位明显低于其他组(P均＜0.05).结论 超声介导LHRHa微泡联合紫杉醇能有效增加紫杉醇对人卵巢癌细胞株A2780/DDP的增殖抑制和线粒体膜电位的耗散.
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黄芩甙对肝癌细胞BEL-7402线粒体膜电位、细胞内Ca2+和Cyt C的影响
目的:探讨线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中的作用及可能的机制.方法:应用细胞培养技术培养肝癌细胞BEL-7402,透射电镜观察线粒体的变化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率及线粒体膜 电位、细胞内Ca2+的改变.荧光发光法检测细胞色素(cytochrome C,Cyt C)含量,Bcl-2蛋白表达和流式细胞仪测定caspase-3活性.结果:黄芩甙诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡呈剂量依赖关系,线粒体结构出现明显改变:肝癌细胞线粒体膜电位降低,6 h、24 h、48 h分别为85.49±2.17、82.59±2.18、28.45±2.39;细胞内ca2+和cyt C的释放增加,Bcl-2蛋白表达下降和caspase-3活性增加.在6 h、24 h、48h时细胞线粒体膜电位,细胞内Ca2+和Cyt C的释放分别为(6 h:85.49±2.17、19.56±2.09、35.36±3.21:24 h:82.59±2.18、14.76±1.03、44.57±5.56:48 h:28.45±2.39、88.79±4.32、78.63±7.651.结论:线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中起重要作用,其机制可能为抑制肝癌细胞Bcl-2蛋白表达,促进caspase-3活性增加,使细胞内Ca2+增加,激发线粒体膜通透性转运孔开放,降低线粒体跨膜电位,促进Cyt C的释放.
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土槿皮乙酸对BEL-7402细胞凋亡、线粒体膜电位及COX-2蛋白表达的影响
目的:探讨土槿皮乙酸(PAB)对人肝癌细胞株BEL-7402增殖和凋亡的影响及其影响机制.方法:体外培养肝癌BEL-7402级胞,用不同浓度PAB作用不同时间后,MTT比色法检测PAB对细胞增殖的影响;流式细胞仪分析PAB对细胞周期和凋亡的影响:吖啶橙染色荧光显微镜下观察PAB引起的肝癌细胞株BEL-7402形态学变化;JC-1检测线粒体膜电位的变化:Western blot方法检测PAB对COX-2表达的影响.结果:PAB作用细胞24,48,72h,细胞增殖受到抑制,且表现为剂量依赖性和时间依赖性;PAB使肝癌细胞细胞周期阻滞于G2/M期;与对照组相比,2.O,4.0 μmol/L PAB作用24h后,细胞凋亡率明显增加,差异显著(19.06%±3.87%,31.19%±1.46% vs 0.10%±0.08%,P<0.05);吖啶橙染色发现1.0μmol/L PAB作用24h,细胞内即有凋亡小体出现:与对照组相比,0.5μmol/L PAB作用24h即可降低BEL-7402线粒体膜电位(P<0.05);不同浓度PAB作用24h后,随PAB浓度增加COX-2蛋白表达递减.结论:PAB通过降低BEL-7402线粒体膜电位、减少COX-2的表达抑制细胞生长,诱导细胞凋亡.
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Fe-NTA诱导的氧应激通过调节Bcl-2家族蛋白及线粒体膜电位影响人肝星状细胞和肝细胞的凋亡
目的 研究Fe-NTA诱导的氧应激对人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)和人肝细胞凋亡的影响,并明确其机制与Bcl-2家族蛋白及细胞线粒体膜电位变化的关系.方法 采用人肝星状细胞株及人肝细胞株张氏肝,取不同浓度的次氮基三乙酸铁(Fe-NTA)处理产生氧应激,测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA);用AnnexinV-FITC+PI双染色法测定Fe-NTA作用后两种细胞的凋亡率;用比色法检测细胞内Caspase 3活性的改变;用阳离子荧光染料JC-1染色,检测细胞内线粒体膜电位的改变;用RT-PCR检测抗凋亡基因Bcl-2和凋亡基因Bax的mRNA表达情况;用免疫印迹技术检测Bcl-2和Bax的蛋白表达情况.结果 铁负载产生氧应激后,两种细胞中SOD水平均下降,MDA含量均升高,与对照组比较有显著差异;Fe-NTa诱导的氧应激不能使HSC发生凋亡,亦未能使HSC线粒体膜电位下降,反而使细胞内Caspase 3活性逐渐降低,抗凋亡基因Bc1-2的mRNA与蛋白表达水平升高,Bax的mRNA与蛋白表达水平降低;Fe-NTa诱导的氧应激使肝细胞发生凋亡增多,肝细胞内Caspase 3活性逐渐升高,同时线粒体膜电位下降,抗凋亡基因Bc1-2的mRNA与蛋白表达水平降低;Bax的mRNA与蛋白表达水平升高.结论 Fe-NTA诱导的氧应激通过调节Bcl-2家族蛋白及线粒体膜电位影响人肝星状细胞和肝细胞的凋亡,通过上调Bcl-2表达及下调Bax表达、维持线粒体膜电位不致崩溃、降低Caspase 3活性而抑制肝星状细胞的凋亡,而对人肝细胞起到相反的作用,诱导肝细胞凋亡.
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药理浓度抗坏血酸诱导胰腺癌PANC1细胞的死亡方式及机制研究
目的 探讨抗坏血酸(Asc)对胰腺癌PANC1细胞的生物学影响及其作用机制.方法 PANC1细胞用不同浓度(0～40 nmol/L) Asc处理24、48、72 h.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察Asc对胰腺癌PANC1细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态,应用JC-1染色流式细胞仪检测线粒体膜电位.同时,观察Asc对抗氧化剂过氧化氢酶(catalase)及红细胞(RBC)预处理的PANC1细胞形态及线粒体膜电位的影响.结果 药理浓度Asc选择性抑制PANC1细胞增殖,并呈浓度、时间依赖性.5 mmol/L Asc处理后PANC1细胞被阻滞在G2/M期[ (32.55±7.14)％ 比(22.00±1.27)％,t=5.808,P＜0.05],但凋亡率未见增加[(1.98±1.80)％比(1.09±0.16)％].≥5 mmol/L Asc诱导PANC1细胞发生胀亡性死亡,细胞线粒体膜电位呈浓度依赖性明显降低.catalase及RBC预处理能明显抑制细胞线粒体膜电位的下降,减轻细胞发生胀亡的程度.结论 Asc在体外对胰腺癌PANC1细胞有明显的增殖抑制作用.Asc诱导PANC1细胞发生胀亡性死亡,而不是凋亡,其机制可能与线粒体膜电位下降有关.
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薯蓣皂苷对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的 研究薯蓣皂苷对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用并探讨其作用机制.方法 采用体外培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,以薯蓣皂苷进行干预.心肌细胞随机分为5组:空白对照组(C组);缺氧/复氧组(A/R组);薯蓣皂苷(Dioscin)低、中、高剂量干预组(Dioscin+A/R组).分别观察各组心肌细胞搏动频率;WIT法测细胞存活率;用Rhl23荧光探针标记线粒体,检测荧光强度以反映线粒体膜电位(△Ψ m)变化;Fluo-3负载心肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子浓度变化.结果 薯蓣皂苷干预组心肌细胞搏动频率、细胞存活率、△Ψm与A/R组比较明显升高;细胞内平均钙离子荧光强度显著低于A/R组.结论从细胞水平初步证实薯蓣皂苷预处理心肌细胞对A/R损伤有一定保护作用,保护机制可能涉及对线粒体膜保护和防止细胞内钙超载等.
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胰岛素抵抗通过增强氧化应激加重PC12细胞缺氧／复氧损伤的研究
目的：探究 IR 对PC12细胞缺氧／复氧损伤的影响，及抗氧化剂 N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）对IR PC12细胞缺氧／复氧损伤的保护作用。方法采用100 nmol／L胰岛素诱导PC12细胞产生IR，Na2 S2 O4建立PC12细胞缺氧／复氧模型，CCK-8法检测细胞活力，葡萄糖氧化酶法检测培养液上清中葡萄糖含量并计算葡萄糖消耗量，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性，硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量，流式细胞术分别检测细胞凋亡和线粒体膜电位。结果高胰岛素可在不影响PC12细胞活力的情况下抑制胰岛素诱导的葡萄糖摄取（P＜0．05）；在IR PC12细胞中，SOD活性较低，MDA水平较高（P＜0．05）；IR可加重缺氧／复氧诱导的PC12细胞凋亡和线粒体膜电位去极化（P＜0．05）；NAC可抵消IR诱导的上述作用（P＜0．05）。结论 IR可通过增强氧化应激加重PC12细胞缺氧／复氧损伤，而NAC可通过抑制氧化应激和稳定线粒体膜电位，减轻IR PC12细胞缺氧／复氧损伤。
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抑制NF-κB信号通路抗心脏异种移植延迟性排斥反应作用研究
目的：观察抑制NF-κB信号通路对心脏移植异种移植延迟性排斥反应（DXR）的影响，探讨在DXR过程中心肌细胞凋亡的作用机制。
方法：选取ICR小鼠为供体动物，SD大鼠为受体动物。ICR小鼠及SD大鼠随机分为三组，每组12只：对照组， siRNA阴性对照组（siRNA-NC组）及siRNA组。每组6只移植后48 h处死，做各项指标检测，剩余6只用于观察供心生存曲线。HE染色观察心肌组织病理学改变；透射电镜观察各组心肌组织的超微结构变化；TUNEL法检测心肌组织凋亡指数；特异性探针染色法检测线粒体膜电位；ELISA法检测caspase-3活性；比色法检测NO含量、iNOS活性；Western Blot检测NF-κB p65及凋亡相关蛋白Fas及Fas-L的表达。 -
乙醛脱氢酶2调节内皮祖细胞氧化应激反应的机制
目的：：探讨乙醛脱氢酶2（ ALDH-2）在内皮祖细胞（EPCs）的氧化应激反应中的调节作用和机制。方法：培养人外周血EPCs，分别用空白对照、1μmol/L ALDH-2特异性激活剂（Alda-1）、1μmol/L叔丁基过氧化氢（tBHP）和1μmol/L Alda-1预处理+1μmol/L tBHP干预，再分别用2'，7'-Dichlorofluorescein diacetate （DCFH-DA）和5，5'，6，6'-Tetrachloro-1，1'，3，3'-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide（JC-1）染色EPCs，检测EPCs的自由氧水平和线粒体膜电位，采用Transwell小室评价EPCs的迁移能力，采用蛋白免疫印迹（Western blot）评价EPCs的p38信号通路激活情况。结果： tBHP干预和Alda-1预处理+ tBHP干预后的自由氧水平相对于空白对照分别为（441.7±24.8）%和（237.4±12.0）%，差异均有统计学意义（P<0.05）。空白对照、tBHP干预和Alda-1预处理+ tBHP干预的EPCs发生线粒体膜电位丢失的细胞比率分别为（5.7±2.1）%，（81.7±3.7）%和（37.4±3.2）%；EPCs的迁移细胞数分别为108±9/高倍视野，22±4/高倍视野和67±7/高倍视野，三者间差异均有统计学意义（P<0.05）。加入tBHP后EPCs的p38信号通路增强[信号强度为空白对照的（259.1±7.7）%]，激活ALDH-2后，tBHP引起的p38信号活动被减弱[为空白对照的（186.4±8.0）%]。结论： ALDH-2能够减少EPCs氧化应激反应，减少EPCs线粒体膜损伤，保护EPCs的迁移功能。而这可能与p38信号通路有关。
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BRD7对过氧化氢处理的心肌细胞线粒体膜电位和胞浆中Cyt C蛋白水平影响研究
目的 研究溴区包含蛋白7(BRD7)对过氧化氢处理的心肌细胞线粒体膜电位和胞浆中细胞色素C(Cyt C)蛋白表达影响.方法 以real-time PCR和Western blot方法检测过氧化氢处理后的心肌细胞中BRD7转录和表达水平.用BRD7 shRNA慢病毒和shRNA control慢病毒感染心肌细胞,以real-time PCR和Western blot方法检测过氧化氢条件下干扰效果.MTT测定细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡情况,JC-1法检测线粒体膜电位,Western blot方法检测胞浆中Cyt C蛋白水平.结果 过氧化氢处理后的心肌细胞中BRD7转录和表达水平升高.BRD7 shRNA慢病毒能够下调过氧化氢条件下心肌细胞中BRD7的表达水平.过氧化氢降低心肌细胞增殖活性,诱导心肌细胞凋亡,降低线粒体膜电位,增加胞浆中Cyt C蛋白水平.下调心肌细胞中BRD7表达可以拮抗过氧化氢对心肌细胞增殖活性、凋亡、线粒体膜电位及胞浆中Cyt C蛋白水平影响.结论 下调BRD7提高过氧化氢条件下心肌细胞线粒体膜电位,降低胞浆中Cyt C蛋白水平,抑制细胞凋亡.
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脑缺血再灌注后线粒体膜电位变化及海风藤提取物的干预作用
现代生物学技术对海风藤成分分析发现,其提取物中所含成分海风藤酮不仅具有拮抗血小板活化因子的作用,还能抑制缺血再灌注期脑组织磷脂酶A2和自由基的生成 [1].因此,我们采用大鼠局灶性缺血再灌注模型,就海风藤提取物对线粒体膜电位、超氧化物岐化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)水平的影响做进一步的研究.
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低糖诱导的HUVEC-12细胞氧化损伤与线粒体膜电位的关系
目的 探讨低浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12细胞的氧化损伤作用及其与线粒体膜电位的关系。方法 以人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12细胞为研究对象，用5.5mmol/L及低浓度葡萄糖(2.8 mmol/L或0mmol/L)培养液培养HUVEC-12细胞4h，甲基噻唑基四唑(MTT)法测定细胞活力；超氧化物阴离子荧光探针标记测定细胞活性氧(ROS)产量；罗丹明123荧光探针标记测定线粒体膜电位(MMP)水平。结果 与5.5 mmol/L葡萄糖组(正常对照组)的细胞活力(96.80±3.20)％相比，2.8 mmoL/L葡萄糖组活动度(66.40±1.60)％与0 mmol/L葡萄糖组细胞活力(58.93±1.67)％分别低约32％、40％ (P＜0.01)；5.5mmol/L葡萄糖组、2.8mmol/L葡萄糖组、0 mmol/L葡萄糖组的ROS水平分别为0.59±0.02、0.74±0.04、0.88±0.05，2.8mmoL/L葡萄糖组、0 mmoL/L葡萄糖组的ROS水平较正常对照组分别高25％和48％ (P＜0.01)；5.5 mmol/L葡萄糖组、2.8 mmol/L葡萄糖组、0 mmol/L葡萄糖组的MMP水平分别为148.83±3.51、271.07±19.54、357.74±51.32,2.8 mmol/L葡萄糖组、0mmol/L葡萄糖组的MMP水平分别是正常对照组的1.8倍和2.4倍(P＜0.01)。结论 低浓度葡萄糖可以导致HUVEC-12细胞损伤，这种损伤作用可能与线粒体膜电位升高导致的氧化应激有关。
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线粒体膜电位和细胞色素C在哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达
目的 观察线粒体膜电位和细胞色素C在哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达,探讨其在哮喘大鼠气道平滑肌细胞发病机制中的作用.方法 将SD大鼠随机分为对照组和哮喘组,以卵清白蛋白致敏和激发的方法 制备大鼠慢性哮喘模型,用组织贴壁法体外培养气道平滑肌细胞,流式细胞术测细胞线粒体膜电位,免疫蛋白印迹检测细胞色素C.结果 哮喘组线粒体膜低电压明显低于对照组(P＜0.01),高电压明显高于对照组(P＜0.01);哮喘组大鼠气道平滑肌细胞胞浆内细胞色素C的表达水平较对照组降低(P＜0.05);哮喘组线粒体细胞色素C的表达高于对照组,(P＜0.01).结论 体外培养的哮喘大鼠气道平滑肌细胞存在着凋亡不足,线粒体膜电位和细胞色素C可能参与其过程.
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激光扫描共聚焦显微术在人外周血淋巴细胞线粒体膜电位检测中的应用
目的:利用激光扫描共聚焦显微镜检测荧光探针在淋巴细胞中的不同分布形式,研究淋巴细胞在凋亡过程中细胞核形态和线粒体形态的变化.方法:用淋巴细胞分离液体外分离健康成年人外周血淋巴细胞,以5 μmol/L地塞米松分别刺激淋巴细胞4 h和24 h,并设正常对照组.JC-1染色细胞线粒体膜,Hoechst33258染色细胞核,利用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞核及线粒体膜的形态学改变.结果:正常人外周血淋巴细胞胞核完整,细胞核呈淡紫色,线粒体呈红色短棒状.地塞米松可诱导淋巴细胞发生凋亡,在凋亡早期(作用时间4 h)细胞核完整,呈淡紫色,部分线粒体崩解呈绿色弥散状.在凋亡末期(作用时间24 h)细胞核碎裂,呈亮紫色,线粒体完全溶解,呈绿色弥散状.结论:淋巴细胞在地塞米松的作用下发生凋亡,凋亡的淋巴细胞细胞核碎裂、线粒体溶解,线粒体膜电位下降.激光扫描共聚焦显微镜检测淋巴细胞凋亡,观察效果直观,方便实用.
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野菊花提取物对人肝癌MHCC97H细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察中药野菊花提取物(chrysanthemum indicum extact,CIE)对人肝癌MHCC97H 细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养人肝癌MHCC97H细胞,以0.4、0.8、1.2 mg/ml的CIE(实验1、2、3组)作用于MHCC97H细胞,并设立空白对照组.分别于药物作用24、48、72 h时,应用MTT法检测细胞增殖情况.于药物作用24 h时,用AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡、Rhol23检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化;Western blot检测细胞色素C、Caspase-9、-3的蛋白表达.结果 三种浓度的CIE对MHCC97H细胞的增殖均有明显的抑制作用,且呈明显的时间和浓度依赖性.与对照组相比,各实验组MHCC97H细胞的凋亡率明显增高(P＜0.05),线粒体膜电位水平明显降低(P＜0.05),细胞色素C、Caspase-9和-3的蛋白表达显著增强(P＜0.05),以上各项均呈明显的量效关系.结论 野菊花提取物对肝癌MHCC97H的增殖具有抑制作用,这可能与药物诱导肝癌细胞凋亡有关.线粒体途径可能是CIE诱导MHCC97H细胞凋亡的主要机制之一.
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抗坏血酸盐、过氧化氢酶改善冻融人精子质量的研究
目的 探讨抗氧化剂--抗坏血酸盐、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)对冻融人精子质量的影响.方法 30份健康可生育男性精液分别添加改良人精子冷冻保护液,依所添加的抗氧化剂及终浓度分7组:未添加者为阴性对照组,余为抗坏血酸盐300、600 μmol/L组,CAT 200、400 U/ml组,SOD 200、400 U/ml组.检测各组精液冻融前后常规参数,冻融后活性氧(reactive oxidative species,ROS)水平、线粒体膜电位(△Ψm)和早期凋亡事件(Ann+PI-%、Ann-PI-%).结果 ①冻融后各组a+b级精子均比冷冻前下降(P＜0.01),但抗坏血酸盐300 μmol/L组与2种浓度的CAT组a+b级精子(43.5±10.0)%、(43.9±8.2)%、(44.3±9.4)%下降少于对照组(38.1±7.9)%,P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01;相对应组的精子活率复苏率分别为(67.2±14.1)%、(68.4±13.8)%、(68.8±14.8)%,也高于对照组(58.8±10.1)%,P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01;而这3组ROS水平(29.6±12.8)%、(30.0±11.2)%、(31.1±11.0)%则分别低于对照组(36.7±17.0)%,P值均＜0.05.②2种浓度CAT组的△Ψm(34.6±12.9)%、(32.9±11.2)%均高于对照组(27.5±10.8)%,P＜0.01、P＜0.05;而且低浓度抗坏血酸盐组和CAT组凋亡(Ann+PI-%)的精子(15.3±3.0)%、(15.6±2.2)%,以及未出现凋亡(Ann-PI-%)的活精子(14.0±3.8)%、(13.2±2.6)%分别低于对照组(18.1±3.9)%(P值均＜0.01)和高于对照组(10.1±4.0)%(P值均＜0.01).余实验组的检测指标与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).③冻融后各实验组a+b级精子,抗坏血酸盐600 μmol/L组、2种浓度CAT组、SOD 400 U/ml组的△Ψm,以及抗坏血酸盐组、CAT 200 U/ml组、SOD 200 U/ml组的Ann-PI-%均分别与对应组的ROS水平呈负相关;而抗坏血酸盐组、CAT 200 U/ml组的Ann+PI-%则与对应组的ROS水平呈正相关,P＜0.05或P＜0.01.结论 在精液冷冻保护剂中添加一定浓度的抗坏血酸盐、CAT可改善冻融人精子质量.
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男性生殖道感染患者脂多糖对成熟精子直接损伤作用与机制研究
目的：研究男性生殖道感染患者脂多糖（L PS ）作用成熟精子后精子活力、活性氧以及凋亡指标的变化，探讨L PS对成熟精子的损伤情况，从而研究生殖道感染后影响男性生育能力的相关机制。方法通过上游法处理正常精液标本，调整浓度为5×106／m l的高活力精子重悬液，设置对照组和试验组，37℃孵育一定时间后检测精子活力、精子内活性氧、精子凋亡和线粒体膜电位等指标的变化情况。结果试验组精子内活性氧的平均荧光强度为559±42．7，线粒体膜电位的红色平均荧光强度／绿色平均荧光强度的比值为11．1±2．61，与对照组相比，精子内活性氧的升高和线粒体膜电位的降低差异均有统计学意义（P＜0．05）；但是并未增加精子的凋亡率和降低精子的活力。结论 L PS与高活力精子重悬液孵育作用于精子表面可能升高精子内活性氧，导致精子线粒体损伤，引起线粒体膜电位的降低，可能是男性生殖道感染L PS直接作用于精子参与影响男性不育的机制。
