首页 > 文献资料
-
清癌汤体外抗肿瘤作用及其机制研究
目的:探讨清癌汤体外对肿瘤细胞的增殖、凋亡及p53表达的影响.方法:倒置显微镜下观察加药后细胞形态的变化,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,JC-1检测细胞膜电位变化情况,免疫荧光法检测细胞内p53蛋白表达情况.结果:清癌汤在高浓度作用下,肿瘤细胞形态发生了明显变化,对人乳腺癌细胞(MCF-7)、人肝癌细胞(HepG2)、人胃癌细胞(MGC-803)具有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性,而对大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)无明显抑制作用.清癌汤可诱导MGC-803发生凋亡并呈明显的浓度依赖性,降低线粒体膜电位,从而引起细胞凋亡,并能升高p53蛋白的表达量.结论:清癌汤具有良好的体外抗肿瘤作用,且无明显神经毒性,该作用与其诱导细胞凋亡包括降低线粒体膜电位和上调p53蛋白表达有关.
-
激光扫描共聚焦显微术在人外周血淋巴细胞线粒体膜电位检测中的应用
目的:利用激光扫描共聚焦显微镜检测荧光探针在淋巴细胞中的不同分布形式,研究淋巴细胞在凋亡过程中细胞核形态和线粒体形态的变化.方法:用淋巴细胞分离液体外分离健康成年人外周血淋巴细胞,以5 μmol/L地塞米松分别刺激淋巴细胞4 h和24 h,并设正常对照组.JC-1染色细胞线粒体膜,Hoechst33258染色细胞核,利用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞核及线粒体膜的形态学改变.结果:正常人外周血淋巴细胞胞核完整,细胞核呈淡紫色,线粒体呈红色短棒状.地塞米松可诱导淋巴细胞发生凋亡,在凋亡早期(作用时间4 h)细胞核完整,呈淡紫色,部分线粒体崩解呈绿色弥散状.在凋亡末期(作用时间24 h)细胞核碎裂,呈亮紫色,线粒体完全溶解,呈绿色弥散状.结论:淋巴细胞在地塞米松的作用下发生凋亡,凋亡的淋巴细胞细胞核碎裂、线粒体溶解,线粒体膜电位下降.激光扫描共聚焦显微镜检测淋巴细胞凋亡,观察效果直观,方便实用.
-
基于P-gp功能的多药耐药逆转剂高内涵筛选方法的建立与应用
目的:建立灵敏、快速、稳定的检测P-糖蛋白(P-gP)功能的高内涵筛选模型,寻找高效、低毒的肿瘤多药耐药逆转剂.方法:以荧光探针JC-1在耐药细胞内蓄积实验为基础,建立基于细胞的高内涵筛选模型.结果:JC-1的佳使用浓度为0.5 μmol·L-1,为RHO123浓度的1/10;同时,JC-1染色稳定性好、所建模型Z因子达0.8,明显优于RHO123组.利用该模型筛选获得了多个能抑制P-gp功能的化合物.结论:所建立的P-gP蛋白功能抑制剂高内涵筛选模型具有灵敏、简便与稳定等特点,可用于药物筛选.
-
磷酸肌酸保护心肌细胞线粒体功能机制初探
目的:探讨磷酸肌酸(phosphocreatine,CP)保护心肌细胞线粒体功能的机制.方法:采用胶原酶分离成年大鼠心肌细胞,0.2 mmol/L过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)刺激细胞,于刺激前 10 min 加入 1 mmol/L、10 mmol/L CP,利用荧光探针JC-1结合流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化;Annexin-V/ PI及TUNEL染色法鉴定心肌细胞的凋亡.使用 10 μmol/L 鱼藤酮及 2 μmol/L 碘乙酰胺分别抑制呼吸链及磷酸肌酸激酶(CK),观察其对 CP 保护作用的影响.结果:H2O2导致线粒体膜电位下降,细胞凋亡增加.磷酸肌酸有效地抑制了线粒体膜电位的下降,减少了细胞凋亡.鱼藤酮及碘乙酰胺可使其保护作用消失.结论:CP能够抗心肌细胞氧化损伤,其机制可能依赖于减低线粒体膜电位的下降,保护线粒体正常功能 .
-
菝葜皂苷元对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响
目的 探讨菝葜皂苷元对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响.方法 采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测LoVo细胞的凋亡率；采用流式细胞仪检测细胞周期进程；采用流式细胞仪JC-1染色法检测线粒体膜电位(△ψm)水平.结果 菝葜皂苷元作用细胞48 h后可以诱导细胞凋亡,菝葜皂苷元可阻滞细胞于G2/M期,菝葜皂苷元诱导细胞凋亡时伴随着线粒体膜电位的降低.结论 菝葜皂苷元能诱导细胞凋亡,其诱导凋亡的途径可能与线粒体通路有关.
-
羟氯喹对人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及凋亡的影响
目的 观察羟氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)对人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用 MTT法及克隆形成抑制实验观察HCQ对人乳腺癌MDA-MB-435细胞的增殖抑制作用;采用倒置显微镜观察HCQ处理后细胞形态学变化;采用Hoechst 33258荧光染色检测HCQ对人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的作用;采用PI 单染流式细胞术检测细胞晚期凋亡水平;采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)观察HCQ处理人乳腺癌MDA-MB-435细胞后线粒体膜电位的转变.结果 不同浓度的HCQ作用于乳腺癌MDA-MB-435细胞24、48、72 h后,均能明显抑制细胞增殖;在倒置显微镜下可观察到HCQ作用于乳腺癌MDA-MB-435细胞后细胞逐渐萎缩变圆,细胞密度变小,失去正常细胞形态;HCQ能明显抑制MDA-MB-435细胞克隆形成;Hoechst 33258 荧光染色结果显示,HCQ可以诱导乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡;PI结果显示,20、40、60 μmol·L-1 HCQ处理细胞24 h后,晚期凋亡率分别为7.1%、15.9%、35.3%(P<0.05);HCQ作用于乳腺癌MDA-MB-435后JC-1从红色荧光到绿色荧光转变(P<0.05).结论 HCQ可以明显抑制人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及诱导凋亡.
-
白藜芦醇对人黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测不同浓度(10、20、40、80、160 μmol·L-1) Res对人黑色素瘤细胞株Mel-RM和MM200增殖的抑制作用,溴化丙啶(propidium iodide,PI)单染进行流式细胞仪分析,检测Res对黑色素瘤细胞凋亡的影响.通过JC-1染色法检测Mel-RM和MM200细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,△Ψm).试剂盒检测Caspase-3的活性变化.结果 随着Res的浓度的增加,对人黑色素瘤细胞株的增殖产生明显的抑制作用,80、160 μmol·L-1的Res可诱导Mel-RM和MM200细胞出现明显的凋亡,JC-1染色结果显示,Res处理后Mel-RM和MM200线粒体膜电位分别降低51.0%和68.8%.Caspase-3活性检测结果显示Res对Caspase-3 具有激活作用.结论 Res具有抑制黑色素瘤细胞增殖诱导其凋亡的作用,其机制可能与降低细胞线粒体膜电位及激活Caspase-3有关.
-
松油烯-4-醇对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨松油烯-4-醇(T4O)对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制.方法 不同浓度(5～80 μmol/L)T4O体外作用于U266细胞.CCK-8法检测增殖抑制率;AO/EB染色,倒置显微镜观察细胞凋亡形态;比色法检测Caspase-3酶活性;流式细胞术检测细胞凋亡及周期;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位.结果 T4O对U266细胞有增殖抑制作用,呈时间-剂量依赖性(P＜0.05).T4O诱导U266细胞凋亡,呈剂量依赖性(P＜0.05),随药物浓度增加,Caspase-3酶活性逐渐增强(P＜0.05),线粒体膜电位逐渐降低(P＜0.05),细胞周期被阻滞在G2期.结论 T4O对U266细胞有抑制增殖及促凋亡作用,其机制是激活细胞凋亡途径关键酶Caspase-3,使细胞线粒体膜电位降低,并且使细胞周期阻滞在G2期,进而抑制肿瘤细胞分化与增殖.
-
流式细胞仪检测血小板线粒体膜电位的方法
目的 运用流式细胞仪对血小板线粒体膜电位进行检测,为衰老相关性疾病和药物对线粒体机能作用的研究提供新的研究方法.方法 利用抗凝血分离纯化得到的血小板,用荧光探针JC-1对血小板线粒体进行标记,在流式细胞仪上检测血小板线粒体内JC-1荧光强度的变化.结果 正常的血小板线粒体保持着较高的膜电位,JC-1在线粒体内形成聚合物,以红色荧光为主.膜电位去极化的异常血小板线粒体内,JC-1分解成单体,以发绿色荧光为主.结论 运用流式细胞仪对JC-1标记的血小板线粒体膜电位进行检测是一种简便可行的检测线粒体机能的有效方法.
-
星形孢菌素诱导TR3由细胞核向线粒体转运
背景和目的:星形孢菌素 (staurosporine,STS)是一种非特异性蛋白激酶抑制剂,能够诱导多种类型细胞凋亡.孤生受体 (orphan receptor)TR3是一种立早基因 (immediate-early gene)产物 ,属于类固醇 /甲状腺激素受体超家族成员.当细胞受到凋亡因子刺激时 ,TR3表达并从细胞核转运至线粒体 ,从而诱导细胞凋亡.本研究旨在探讨 STS诱导人胃癌细胞 BGC-823凋亡及其与 TR3转运的相关性.方法:荧光显微术观察经 STS处理 3 h和 24 h后 BGC-823细胞凋亡的形态变化并测定细胞凋亡率;激光共聚焦显微术和 Western blot对 STS处理后 BGC-823细胞中 TR3蛋白和细胞色素 c蛋白进行定位;流式细胞术和激光共聚焦显微术检测细胞线粒体的膜电位.结果: STS处理 BGC-823细胞 3 h和 24 h后,细胞凋亡率分别从对照组的 4.0%和 4.7%提高到 15.7%和 39.4%; STS处理 24 h后,细胞出现核膜消失、染色体聚集成发亮的小体等典型的细胞凋亡形态变化. BGC-823细胞中 TR3蛋白定位于细胞核, STS处理 3 h后 TR3蛋白由细胞核转运至线粒体上,导致线粒体膜电位下降,并伴随着细胞色素 c释放至胞浆.结论:孤生受体 TR3参与 STS诱导的细胞凋亡事件.在 STS诱导下, TR3从细胞核移位至线粒体膜 ,引起线粒体膜电位下降,细胞色素 c的释放,进而诱导细胞凋亡.
-
共固定化肿瘤坏死因子和干扰素诱导的HeLa细胞凋亡的线粒体膜电位研究
本研究以光化学固定的方法,将TNF-α/IFN-γ共同偶联到24孔聚苯乙烯基板上,利用JC-1为荧光探针,采用流式细胞术在细胞水平检测共固定化及游离细胞因子诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中线粒体膜电位(△Ψm)变化,进一步探讨共固定化细胞因子与游离细胞因子诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用机制.实验结果显示,共固定化细胞因子诱导HeLa细胞凋亡不存在剂量效应关系,低剂量(20 ng/ml)光固定化细胞因子在6 d内能使HeLa细胞线粒体膜电位持续下降,具有长效活性,并表明该凋亡过程与线粒体途径密切相关.
-
超抗原SEA对Molt-4细胞线粒体膜电位的影响
目的:超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)诱导Molt-4细胞活化与线粒体膜电位变化的关系.方法:应用CCK-8法体外检测不同浓度和时间SEA刺激传代T细胞株Molt-4细胞增殖活性,应用JC-1标记细胞线粒体,利用流式细胞术测定比较不同时间点SEA刺激对Molt-4细胞线粒体膜电位的影响.结果:经CCK-8检测,SEA的浓度在1 mg/L时Molt-4细胞的增殖显著,以该浓度的SEA作用于Molt-4细胞180、60、30、10 min,10 min时间点膜电位升高明显高于其他时间点.SEA刺激10、30 min后线粒体膜电位升高低于有丝分裂原PHA刺激的结果.结论:SEA可诱导Molt-4细胞线粒体膜电位升高,且升高作用主要发生在细胞增殖的早期阶段.其升高作用略低于有丝分裂原PHA.
-
精子线粒体膜电位与男性精液参数和体质量指数的相关性研究
目的 探讨精子线粒体膜电位(MMP)与精子常规参数及体质量指数(BMI)的相关性.方法 在本院辅助生殖科行精液分析的男性患者,禁欲3～7 d后,以手淫方式获取精液样本.通过计算机辅助精液分析仪检测精液常规,改良巴氏染色检查精子形态,JC-1染色后经流式细胞仪评估MMP.结果 与对照组(56.68％±11.13％)相比,弱精子组MMP(41.24％±9.71％)显著降低.MMP与BMI呈显著负相关(r=-0.25,P＜0.01),与精子总活力(r=0.63,P＜0.01)、前向运动力(r=0.64,P＜0.01)及正常精子形态率(r=0.37,P＜0.01)呈显著正相关,而与年龄、精液量、精子浓度和精子数量其余参数的相关性均无统计学意义.结论 精液中精子MMP是评估精子功能的重要指标,对临床综合分析男性不育症因素具有一定的参考意义.
关键词： 线粒体膜电位(MMP) 精液常规 JC-1 体质量指数(BMI)
