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四种抗癌药物对乳腺癌MDA-MB-435细胞的体外抗肿瘤活性
目的：评价表柔比星、紫杉醇、奥沙利铂、羟基喜树碱对乳腺癌MDA-MB-435细胞体外抗肿瘤活性。方法利用MTT比色法初步测定四种抗癌药物对MDA-MB-435细胞体外抑制活性；利用形态学观察考察四种药物对靶标细胞的形态学影响；利用甲瓒结晶生成分析四种药物对细胞的毒杀作用；利用乳酸脱氢酶活力测定评价四种药物对靶标细胞的细胞毒性。结果四种抗癌药物在1μmol/L和10μmol/L对乳腺癌MDA-MB-435细胞都显示出很好的体外抑制活性，其中表柔比星在10μmol/L或者紫杉醇、羟基喜树碱在1μmol/L和10μmol/L对乳腺癌 MDA-MB-435抑制率＞94％，表柔比星在1μmol/L或者奥沙利铂在1μmol/L和10μmol/L抑制活性相对较低；形态学观察、甲瓒结晶生成和乳酸脱氢酶活性测定表明表柔比星在1μmol/L或奥沙利铂在1μmol/L 和10μmol/L毒性较小，而表柔比星在10μmol/L或者紫杉醇、羟基喜树碱在1μmol/L 和10μmol/L都显示出明显的细胞毒作用。结论紫杉醇、羟基喜树碱或高浓度表柔比星主要通过细胞毒性发挥抗肿瘤作用；奥沙利铂或低浓度表柔比星则是通过生理途径发挥体外抗癌活性。
关键词： 表柔比星 紫杉醇 奥沙利铂 羟基喜树碱 MDA-MB-435细胞 -
维生素E琥珀酸酯诱导MDA-MB-435乳腺癌细胞的凋亡
目的:检测维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对MDA-MB-435乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用并 分析凋亡诱导分子Fas表达的变化.方法:以VES刺激人乳腺癌细胞MDA-MB-435(雌激素受体阴性)12、24和48 h,VES浓度为5、10和20μg/mL,以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数变化,Western blot法检测VES作用后Fas蛋白水平变化.结果:VES对MDA-MB-435乳腺癌细胞增殖具有显著的抑制作用并表现为时间和剂量依赖关系.流式细胞仪分析细胞凋亡,MDA-MB-435细胞的自然凋亡率为1.5%,5、10和20μg/mL VES分别作用48 h后凋亡率升高至13.1%、20.2%和46.5%.TUNEL法检测VES作用后乳腺癌细胞凋亡指数由1.1±0.4升高至10.8±1.0、30.4±2.7和51.4±4.7,细胞Fas蛋白水平分别升高1.3、1.9和4.3倍,细胞表面Fas平均荧光强度由46.29升高至59.66、84.54和103.41.结论:VES对MDA-MB-435乳腺癌细胞具有显著的增殖抑制作用,并诱导细胞的凋亡,其机制与细胞表面Fas表达上调有关.
关键词： 维生素E琥珀酸酯 乳腺肿瘤 细胞凋亡 Fas蛋白质 MDA-MB-435细胞 -
羟氯喹对人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及凋亡的影响
目的 观察羟氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)对人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用 MTT法及克隆形成抑制实验观察HCQ对人乳腺癌MDA-MB-435细胞的增殖抑制作用;采用倒置显微镜观察HCQ处理后细胞形态学变化;采用Hoechst 33258荧光染色检测HCQ对人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的作用;采用PI 单染流式细胞术检测细胞晚期凋亡水平;采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)观察HCQ处理人乳腺癌MDA-MB-435细胞后线粒体膜电位的转变.结果 不同浓度的HCQ作用于乳腺癌MDA-MB-435细胞24、48、72 h后,均能明显抑制细胞增殖;在倒置显微镜下可观察到HCQ作用于乳腺癌MDA-MB-435细胞后细胞逐渐萎缩变圆,细胞密度变小,失去正常细胞形态;HCQ能明显抑制MDA-MB-435细胞克隆形成;Hoechst 33258 荧光染色结果显示,HCQ可以诱导乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡;PI结果显示,20、40、60 μmol·L-1 HCQ处理细胞24 h后,晚期凋亡率分别为7.1%、15.9%、35.3%(P<0.05);HCQ作用于乳腺癌MDA-MB-435后JC-1从红色荧光到绿色荧光转变(P<0.05).结论 HCQ可以明显抑制人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及诱导凋亡.
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FRNK对人乳腺癌MDA-MB-435细胞迁移的抑制作用
背景与目的:粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的高表达或过度激活与肿瘤迁移密切相关.粘着斑相关非激酶(FAK related non-kinase,FRNK)是FAK内源性抑制剂,通过与FAK竞争粘着斑结合位点抑制FAK活性.本研究旨在探讨FRNK对人乳腺癌细胞MDA-MB-435迁移的抑制作用及相关机制.方法:RT-PCR法克隆目的基因FRNK,构建pcDNA3.1-FRNK重组质粒;利用脂质体转染MDA-MB-435细胞,经G418筛选抗性单细胞克隆,通过Western blot鉴定稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞并检测其与野生型MDA-MB-435细胞中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)表达水平;采用体外划痕修复实验和Boyden趋化小室比较野生型和稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞的非定向及定向迁移运动能力.结果:成功构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-FRNK,建立稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞.高表达FRNK的细胞较野生型MDA-MB-435细胞MMP-9蛋白表达降低73.1%.在划痕修复实验中,稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞移行面积与空白面积之比为0.35±0.02,与野生型MDA-MB-435细胞(0.58±0.06)相比划痕修复能力明显减弱(P＜0.05);在趋化小室实验中,高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞迁移数为65.15±8.56,仅为野生型MDA-MB-435细胞迁移数(97.86±5.44)的66.57%.结论:FRNK可抑制MDA-MB-435细胞迁移运动,该抑制作用与MDA-MB-435细胞中MMP-9表达下调有关.
