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清开灵注射液对神经细胞凋亡和线粒体膜电位的影响
目的以缺氧、缺糖再给氧为模型,观察清开灵注射液对大鼠海马神经细胞凋亡和线粒体膜电位的影响.方法四唑盐比色实验(MTT)检测细胞线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率.结果缺氧、缺糖5 h再给氧3、12、24h时,细胞凋亡率明显增高,形态学观察也发现大量神经细胞的染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体产生;细胞线粒体膜电位和活性均显著降低,随再给氧时间的延长而进一步下降,清开灵注射液能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,提高线粒体膜电位和活性,与缺氧、缺糖再给氧组相比均有显著性差异(P＜0.05～0.01).结论清开灵注射液可抑制缺氧、缺糖再给氧损伤所致的线粒体膜电位降低,从而稳定线粒体膜电位、抑制细胞凋亡的发生,而对海马神经细胞起到保护作用.
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丹酚酸B对大鼠皮层神经元缺糖缺氧损伤的影响
目的 探讨丹酚酸B(SalB)对原代培养大鼠皮层神经元缺糖缺氧损伤的影响.方法 采用原代培养的大鼠皮层神经元,随机分为正常组、模型组和丹酚酸B组,复制缺糖缺氧4 h的细胞模型,MTT法观察神经元的活性和存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP)、细胞内游离Ca2+和细胞凋亡率.结果 丹酚酸B组神经元的活性(0.450±0.105)、存活率(58.20±13.56)%以及MMP荧光值(126.24±12.09)高于模型组神经元的活性(0.336±0.037)、存活率(43.40±4.73)%以及MMP荧光值(109.75±10.15),两者比较有明显差异(P<0.05);而丹酚酸B组LDH漏出率(15.84±1.47)%、细胞内Ca2+荧光强度(66.75±5.93)及凋亡率(4.82±2.48)%则低于模型组的LDH漏出率(27.39±3.75)%、细胞内Ca2+荧光强度(101.09±16.08)及凋亡率(10.83±2.13)%,两者相比亦有显著性差异(P<0.01).结论 丹酚酸B通过维持细胞内Ca2+稳态,稳定线粒体膜电位及降低细胞凋亡率,对缺糖缺氧损伤的大鼠皮层神经元起到保护作用.
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丹参素对缺氧/缺糖损伤神经细胞线粒体的保护作用
目的观察丹参素对SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤时胞浆内[Ca2+]i、细胞凋亡率、细胞活性和线粒体膜电位的变化,探讨其对神经细胞线粒体的保护作用及其可能的机理.方法应用细胞培养、四唑盐比色实验(MTT)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内[Ca2+]i、细胞凋亡百分率和线粒体膜电位.结果 SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤2 h时,细胞内[Ca2+]i明显增加,为8.46 nmol/L(P<0.01),细胞凋亡率明显增高,为18.59% (P<0.01),细胞内[Ca2+]i的浓度4 h时达到高峰,为9.89 nmol/L(P<0.01),而后呈下降趋势,细胞凋亡率随缺氧/缺糖损伤时间的延长而明显增高12 h时达到45.91%,细胞经缺氧/缺糖处理2 h后,线粒体膜电位和细胞活性分别降低29.17%(P<0.01)、38.80%(P<0.01),随着缺氧/缺糖时间的延长线粒体膜电位和细胞活性进一步下降, 12 h时分别降低56.72%(P<0.01)、63.58%(P<0.01),丹参素能显著降低细胞内[Ca2+]i,抑制细胞凋亡的发生,提高细胞活性和线粒体膜电位,与缺氧/缺糖组相比均有显著性差异(P<0.05,P<0.01).结论丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制细胞凋亡的发生,这种作用可能与其能抑制神经细胞内钙超载有关.
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补肾益精法对雷公藤多苷诱发大鼠精子线粒体超微结构与膜电位损伤的影响
目的 观察雷公藤多苷制备的少弱精症模型大鼠精子线粒体超微结构与膜电位水平的变化,探讨补肾益精法治疗少弱精症的干预机制.方法 取体重为200～ 220 g雄性大鼠,随机分成正常组、模型组、黄精赞育胶囊组(3.24g/kg)、补肾益精方小、中、大剂量组(分别为0.68、1.35、2.70 g/kg),除正常组外,其他各组动物连续每天灌服雷公藤多苷8周(30 mg/kg),制备少弱精症模型.造模结束后,各组动物按剂量灌胃给药,连续30 d,正常组、模型组给予等容量蒸馏水.末次给药后30 min,处理动物,采用JC-1荧光染色流式细胞技术测定各组动物线粒体膜电位正常精子百分率(JC-1+％),并通过透射电子显微镜观察精子线粒体超微结构的改变.结果 雷公藤造模8周后,模型动物JC-1+％显著下降,橙红色荧光强度明显降低；精子尾部出现水肿、呈现空腔,线粒体肿胀、大小不一,轴丝出现断裂.模型大鼠连续30 d给予补肾益精方后,大鼠JC-1+％明显增加；精子外膜较完整、线粒体肿胀减轻、轴丝轻度变性.结论 保护精子线粒体结构可能为拮抗雷公藤多苷生殖毒性的有效途径.补肾益精方可通过抑制精子线粒体膜电位下降和保护线粒体结构完整性达到治疗少弱精症的目的.
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黄芪皂苷和黄芪多糖对乳鼠肥大心肌细胞线粒体膜电位的影响
目的 观察黄芪皂苷和黄芪多糖对心肌细胞线粒体膜电位(mitochondrial lnemhmlle potential,MMP)的干预作用,初步探讨黄芪防治心衰的机理.方法 将体外培养乳鼠心肌细胞分为对照组、模型组、黄芪皂苷组、黄芪多糖组、黄芪皂苷+多糖组.除对照组外各组加血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)造成肥大细胞模型,给药组予黄芪皂苷、黄芪多糖干预,分别测定各组24 h、48 h时心肌细胞MMP.结果 24 h时MMP比较:模型组较对照组下降,有显著性差异(P<0.01);3个给药组较模型组升高,有显著性差异(P<0.01);黄芪皂苷组较对照组升高,有显著差异(P<0.01).48 h时MMP比较:模型组较对照组下降明显(P<0.01);3个给药组较模型组升高,以黄芪皂苷组、黄芪皂苷+多糖组明显,与模型组比较有显著性差异(P<0.01).结论 AngⅡ使心肌细胞MMP下降,黄芪皂苷和黄芪多糖使MMP趋于正常,黄芪皂苷和黄芪多糖可拮抗AngⅡ减低心肌细胞MMP的作用,这可能是黄芪防治心衰的机理之一.
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线粒体功能在卵母细胞成熟中的作用综述
线粒体为真核细胞的重要细胞器之一,作为细胞的“能量工厂”合成三磷酸腺苷,参与细胞生长、分化、增殖、凋亡、信号传导等细胞活动.在人体中,卵母细胞中线粒体数量多,为卵母细胞成熟、受精及早期胚胎正常发育提供所需的能量.线粒体功能受损会导致卵母细胞老化、妊娠失败或人类辅助生殖成功率下降.本文将线粒体分布、线粒体膜电位、线粒体DNA拷贝或突变对卵母细胞成熟的影响进行综述.
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急性脊髓损伤后线粒体形态结构与线粒体膜电位的变化
目的 探讨大鼠急性脊髓损伤后线粒体形态结构和线粒体膜电位的变化.方法 SD大鼠36只,随机分为对照组(假手术组)和脊髓损伤组(SCI组),每组又分为处理后4h、8h、16h组(各6只).SCI组采用Allen's打击法,制作大鼠脊髓损伤模型,对照组只暴露脊髓,不打击.透射电镜观察线粒体形态结构的改变;在各时相提取伤段脊髓组织线粒体,JC-1法测定线粒体膜电位的变化.结果 SCI组脊髓组织伤后4h线粒体体积略增大,嵴排列稍紊乱;8h线粒体体积增大,嵴稍肿胀;16h线粒体结构不清,嵴断裂、排列紊乱,部分线粒体膜破裂,有空泡化.脊髓损伤后4h,线粒体膜电位开始明显下降(P＜0.01),随着时间的延长,线粒体膜电位处于下降趋势.结论 大鼠急性脊髓损伤后线粒体的形态结构发生明显改变,伤段脊髓线粒体膜电位明显下降,出现功能障碍.
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衰老小鼠脑片神经元内钙平衡与线粒体状态研究
细胞内钙稳态的变化被认为是年龄依赖性神经元损伤的重要机制之一,不太清楚的是在神经元内钙平衡当中,哪些与年龄相关联的变化是基本的,这些内钙平衡的改变在衰老神经元的生理过程中是初发生的还是继发于其他变化的结果?用接近生理状态的体外样本,由不同年龄组动物(11月龄至23月龄)获得的小鼠小脑矢状切片,对细胞内游离钙和线粒体膜电位同时进行了实时测定.以作用时间为15 s的短暂谷氨酸、KA或NMDA刺激来激发细胞内钙信号.对于衰老神经元而言,其静息态细胞内钙水平没有变化,而神经元线粒体膜电位明显降低.实验发现大部分内钙平衡的改变发生在衰老神经元接受到较高水平的外来刺激的条件下,而其中明显的变化是内钙恢复速度降低,与此同时有神经元线粒体膜电位复极时间的延长.在神经元线粒体功能状态与内钙水平之间存在的明显相关性表明:神经元内钙平衡的变化继发于线粒体功能的降低.
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APP17肽对糖尿病大鼠海马线粒体膜电位的影响
应用流式细胞仪分别观察糖尿病模型组、糖尿病APP17肽治疗组和正常对照组大鼠海马线粒体膜电位和凋亡率.结果:糖尿病组大鼠海马线粒体膜电位明显下降(P＜0.01),凋亡发生率增加(P＜0.01);APP17肽治疗组与糖尿病组相比海马线粒体膜电位增高(P＜0.05),凋亡发生率降低(P＜0.05),与正常对照组比较无显著性差异.结果提示:海马线粒体膜电位下降和细胞的凋亡可能参与糖尿病脑病的发生和发展;APP17肽具有改善这一病理过程的作用.
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2-BFI对星形胶质细胞糖氧剥夺损伤的保护及抗线粒体凋亡的研究
目的 探讨2-BFI对星形胶质细胞糖氧剥夺损伤(oxygen-glucose deprivation,OGD)的保护作用,并从抗线粒体凋亡途径探讨2-BFI抗糖氧剥夺损伤的机制.方法 原代培养星形胶质细胞,制成糖氧剥夺损伤模型,分为对照组、OGD组、OGD+ 2-BFI组,药物组分为0.75、1.5、3.0、6.0、12.0(μg/ml)五个浓度,2-BFI干预后测定细胞活力,选出佳的药物浓度,以该浓度进一步在细胞水平上研究2-BFI对线粒体膜电位、caspase-3活性、细胞凋亡率的影响.组间比较采用SPSS 17.0进行单因素方差分析.结果 各个浓度的2-BFI均能提高糖氧剥夺损伤后的星形胶质细胞存活率,其中以1.5μg/ml的效果佳;给予浓度为1.5 μg/ml 2-BFI干预OGD组能显著提高线粒体膜电位(13.50±5.88,8.48 ±4.79,P＜0.05),抑制caspase-3活性(4.56 ±0.10,4.85±0.10,P＜0.05)、降低细胞凋亡率[(24.6±1.60)％,(46.5±1.10)％,P ＜0.05].结论 星形胶质细胞糖氧剥夺损伤后,2-BFI具有提高细胞存活率,稳定线粒体膜电位、抑制caspase-3活性,进而降低细胞凋亡率的作用.
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褪黑素干预大鼠胰腺炎线粒体膜电位及caspase3的变化研究
目的 观察大鼠急性重症胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)胰腺组织损伤时腺泡细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,△Ψm)及caspase3表达的变化,探讨褪黑素(melatonin,MT)对大鼠急性重症胰腺炎胰腺损伤的保护作用.方法 取雄性SD大鼠48只,采用随机区组设计,随机分为假手术组(SO)、急性重症胰腺炎组(SAP)、褪黑素干预组(MT),采取经胰管注射4%牛黄胆酸钠法制造大鼠重症胰腺炎模型,造模成功后4h、10h处死大鼠,各组各时点8只.检测血清淀粉酶,苏木精-伊红染色观察胰腺病理变化,流式细胞术检测不同时间段腺泡细胞线粒体膜电位,Realtime-PCR检测caspase3的表达.结果 与假手术组对照,急性重症胰腺炎诱导后4h、10h线粒体膜电位明显降低(1.579±0.103 vs 8.037±1.001,0.059±0.021 vs 8.508±0.494,P<0.01),caspase3相对表达量增多(1.470±0.173,1.700±0.180,P<0.01);与急性重症胰腺炎组相比,褪黑素治疗组4h、10h线粒体膜电位明显降低(0.580±0.107 vs 1.579±0.103,0.019±0.010 vs 0.059±0.021,P<0.01),caspase3相对表达量增多(2.069±0.282,2.520±0.296,P<0.01).结论 褪黑素可促进急性重症胰腺炎线粒体膜电位的降低及caspase3的表达增多,诱导细胞凋亡,对急性重症胰腺炎有保护作用.
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莱菔硫烷诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡与胞内活性氧的关系
目的 研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)在体外对人胃癌SGC7901细胞增生及凋亡的影响,探讨其作用机制.方法 MTT比色法检测SFN对SGC7901细胞增生的影响,透射电镜观察SGC7901细胞形态学变化,流式细胞术检测早期凋亡率、细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)以及胞内活性氧(ROS)水平.结果 SFN呈剂量时间依赖地抑制SGC7901细胞增生,透射电镜观察到SFN作用后SGC7901细胞典型的早期凋亡改变.SFN由0～50μmol/L作用24h,早期凋亡率明显升高(P<0.01);△Ψm明显降低(P<0.01);ROS有不同程度的升高.结论 SFN对SGC7901细胞有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,SFN可能通过诱发细胞内活性氧水平增高,引发经线粒体途径的内源性凋亡.
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线粒体跨膜电位和细胞凋亡相关性的研究
线粒体跨膜电位的降低是细胞凋亡早期的不可逆事件.线粒体膜内外的电势差降低,可引起线粒体膜内外一系列的生化改变,如诱导细胞色素C释放,活化caspase蛋白酶家族,呼吸链与氧化磷酸化失耦联,三磷酸腺苷合成停止;线粒体膜通透性改变;凋亡诱导因子(AIF)的释放等,引起细胞凋亡的级联反应,终导致细胞凋亡.本文就线粒体跨膜电位的形成,其在细胞凋亡时的变化及其机制进行综述.
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白藜芦醇对冻融后小鼠成熟卵母细胞氧化应激水平和线粒体功能的影响
目的 探讨白藜芦醇(Res)对冻融后小鼠成熟卵母细胞活性氧(ROS)水平和线粒体功能的影响.方法 根据是否在冷冻复苏培养液中添加Res,将解冻后存活的卵母细胞分为两组:Res组和对照组.二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测ROS水平,JC-1荧光染色检测线粒体膜电位(△Ψm).结果 卵母细胞玻璃化冷冻解冻的存活率为89.0％(267/300),其中125、142枚分别进行ROS和△Ψm检测.Res组的ROS水平(0.64±0.17)较对照组(1.00±0.26)明显降低(P＜0.01),Res组的△Ψm(1.16±0.40)较对照组(0.87±0.28)明显增加(P＜0.01).结论 Res能降低小鼠冻融卵母细胞的氧化应激水平并增加其线粒体功能,可能有助于卵母细胞的损伤修复.
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顺铂诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡作用及其对线粒体膜电位变化的研究
目的 研究线粒体膜电位在顺铂诱导胃癌细胞凋亡中的作用机制.方法 采用MTT比色法测定顺铂对胃癌SGC7901细胞的生长抑制曲线;将胃癌SGC7901细胞分成对照组及10 μg/ml顺铂组处理,用流式细胞仪(FCS)分别检测线粒体膜电位(Δψm)和分析细胞周期变化情况.结果 顺铂可明显抑制胃癌细胞增殖.在24 h后可见细胞大部分受阻于G1期,且出现了典型的凋亡峰;在10 h后线粒体膜电位明显降低.结论 顺铂诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的途径可能是通过使线粒体膜通透性的改变,膜电位的下降来而实现的.
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依达拉奉对海马神经元缺血缺氧损伤后线粒体膜电位的影响
目的 探讨缺血缺氧损伤后依达拉奉对海马神经元线粒体膜电位的影响.方法 原代培养海马神经元细胞,建立缺血缺氧损伤模型,分为正常细胞组、缺血缺氧组、依达拉奉干预组(分别给予1、10、100、300 μmol/L依达拉奉干预)和阳性参照药维生素C干预组,将各组海马神经元细胞用线粒体膜电位敏感性染料Rhodamine-123 进行染色后,激光共聚焦显微镜分别检测线粒体膜电位.结果 与缺血缺氧损伤组比,加入100 μmol/L和300 μmol/L依达拉奉可以显著提高损伤海马神经元的线粒体膜电位,达到正常神经元线粒体膜电位的82%和87%.100 μmol/L和300 μmol/L依达拉奉组之间对线粒体膜电位的的稳定作用没有统计学差异(P>0.05).结论 缺血缺氧损伤后海马神经元线粒体膜电位下降,依达拉奉能够促进线粒体膜电位的恢复,起到神经保护作用.
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探索运用流式细胞仪来检测细胞凋零的方法
目的：探讨运用流式细胞仪来检测细胞凋零的方法。方法以流式细胞仪检测细胞的DNA含量、磷酯酰丝氨酸、线粒体膜电位、钙离子浓度，对凋零细胞的特点进行分析。结果 DNA含量检测敏感度、特异性欠佳；磷酯酰丝氨酸测定对细胞凋零的早期、晚期情况可做出良好反应；线粒体膜电位、钙离子浓度可反应出细胞凋零时的生理指标。结论每种检测方法均存在一定的优缺点，在使用流式细胞仪检测细胞凋零时，应具有针对性的检测方法进行选择，提高检测效率。
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慢性高原病患者骨髓CD71+有核红细胞凋亡和细胞色素C及线粒体膜电位的变化
目的 探讨慢性高原病(CMS)患者骨髓CD71+有核红细胞凋亡和细胞色素C(Cyt-C)及线粒体膜电位(MMP)的变化情况.方法 以14例CMS患者及15例单纯陈旧性骨折患者分别为CMS组和对照组,提取骨髓单个核细胞(BMMNC),CD71单克隆抗体标记、Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞术检测CD71+有核红细胞的凋亡指数,磁珠分选法分选CD71+有核红细胞并以RT-qPCR检测Cyt-C mRNA的表达水平;JC-1染色流式细胞术检测CD71+有核红细胞MMP.结果 CMS组骨髓CD71+有核红细胞凋亡指数为(1.9±1.4)％明显低于对照组(3.2±1.5)％,差异有统计学意义(P＜0.05).CMS组Cyt-C mRNA表达水平(0.72±0.14)明显低于对照组(1.00±0.15),差异有统计学意义(P＜0.01).CMS组MMP(5.0 ±2.2)明显高于对照组(3.3 ±0.9),差异有统计学意义(P＜0.05).CMS患者骨髓CD71+有核红细胞凋亡指数与血红蛋白水平呈负相关(r=-0.569,P=0.034),凋亡指数、MMP及Cyt-C mRNA间未发现明显相关性.结论 CMS患者骨髓CD71+有核红细胞凋亡指数下降,且与血红蛋白水平呈负相关,说明有核红细胞凋亡下调可能与CMS红细胞积累有关;CD71+有核红细胞MMP增高,Cyt-C mRNA相对表达水平明显降低,提示线粒体通路变化参与CMS患者骨髓CD71+有核红细胞凋亡下降机制,而CD71+有核红细胞凋亡指数、MMP、Cyt-C mRNA水平之间没有发现明显的相关性,提示CMS造血细胞凋亡机制的复杂性.
关键词： 慢性高原病 CD71+有核红细胞 细胞凋亡 细胞色素C 线粒体膜电位 -
外源性一氧化碳对体外培养的SH-SY5Y细胞的影响
目的 研究不同浓度的外源性一氧化碳(CO)对体外培养的神经细胞SH-SY5Y的影响,进一步探讨CO中毒脑损伤的机制.方法 SH-SY5Y细胞在含有不同浓度CO的装置中培养12 h,然后用MTT法检测细胞存活率,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,用荧光酶标仪测定caspase-3的活性,并用Western印迹的方法 检测Bax蛋白的表达水平.结果 1000、10000 ppm CO处理SH-SY5Y细胞12 h后显著降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率分别达29.03%和41.67%;激光共聚焦显微镜结果 细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高;线粒体膜电位明显降低,红/绿荧光强度的比值由正常的5.97分别降低为1.56±0.07和0.34±0.02;而且细胞中Bax蛋白表达水平显著升高.而100 ppm CO对体外培养的SH-SY5Y细胞的存活率、caspase-3的活性、活性氧水平、线粒体膜电位以及Bax蛋白的表达无明显影响.结论 高浓度的外源性CO(1000、10 000ppm)对体外培养的SH-SY5Y细胞造成损伤,具有明显的细胞毒性;而低浓度的CO(100 ppm)对SH-SY5Y细胞没有明显的损伤作用.
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缺氧条件下血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞线粒体膜电位的影响及金钠多的保护作用研究
目的:观察缺氧及血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)对人大动脉血管内皮细胞(VEC)的线粒体膜电位(MMP)的影响及金钠多的保护作用.方法:建立VEC缺氧损伤模型;实验分为空白对照组、单纯缺氧组、缺氧加金钠多保护组、单纯Ang-Ⅱ作用组、Ang-Ⅱ加金钠多保护组、缺氧加Ang-Ⅱ作用组、缺氧加Ang-Ⅱ加金钠多保护组共7个组.各组细胞经过Rhodamine 123的负载后.用激光共聚焦显微镜测定VEC内Rhodamine 123的荧光强度代表MMP.结果:VEC分别经过缺氧及Ang-Ⅱ作用后,MMP显著降低(p<0.01);缺氧条件下Ang-Ⅱ引起VEC的MMP变化较单纯缺氧或单纯Ang-Ⅱ作用进一步降低(p<0.01);金钠多可抑制MMP降低,但各金钠多保护组的MMP仍显著低于空白对照组(P<0.01).结论:缺氧及Ang-Ⅱ均可引起VEC的MMP降低,金钠多明显减轻上述影响因素的损伤、提高MMP,从而发挥对VEC的保护作用.
