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电针对脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞线粒体膜电位及凋亡的影响
目的:探讨针刺对脑缺血再灌注大鼠神经元保护作用的机制.方法:雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组(Sham)、脑缺血再灌注组(CI/R)及脑缺血再灌注+电针组(CI/R+EA),每组12只.采用改良线栓法制备局灶性脑缺血(MCAO)再灌注模型.于再灌流开始后,CI/R+EA组电针"水沟""百会"穴,电针参数:频率2～15 Hz,间断疏密波,电流强度1 mA,以局部肌肉轻微震颤为度,时间30 min.以罗丹明123和Annexin V-FITC进行荧光染色,通过流式细胞仪检测细胞内荧光强度,分析脑组织细胞线粒体膜电位及凋亡发生率的变化.结果:CI/R组大鼠大脑皮层细胞线粒体膜电位明显低于假手术组(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01);电针治疗后,线粒体膜电位升高,细胞凋亡率受到抑制,与CI/R组比较差异有显著性意义(P<0.01).结论:针刺治疗可明显减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,上调神经细胞线粒体膜电位水平可能是针刺抑制大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一.
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自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响
目的:探讨自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响.方法:以24 mg·L-1双去甲氧基姜黄素或联合5 mol·L-1自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤 (3-methyladenine, 3-MA) 对HepG2细胞作用24, 48 h, 以四甲基偶氮唑盐 (methye thiazolye telrazlium, MTT) 比色法检测细胞活力;以24 mg·L-1双去甲氧基姜黄素单用或联合3-MA对HepG2细胞作用48 h, Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡形态, 磷脂结合蛋白V/碘化丙啶 (Annxin V/propidium iodide, PI) 双染检测细胞凋亡率, 罗丹明123 (Rhodamine 123, Rh123) 染色检测线粒体膜电位, 蛋白免疫印迹法 (Western blot) 检测自噬相关蛋白Beclin-1, LC3, 半胱氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3), 活化型Caspase-3 (cleaved Caspase-3), B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2), Bcl-2相关X蛋白 (Bax) 的活性表达.结果:与空白组比较, 双去甲氧基姜黄素可抑制HepG2细胞增殖, 诱导细胞凋亡, 降低线粒体膜电位, 使pro-Caspase-3, Bcl-2, LC3-Ⅰ蛋白表达降低 (P＜0.01), 升高cleaved Caspase-3, Bax, Beclin-1, LC3-Ⅱ蛋白的表达 (P＜0.01);3-MA可增强双去甲氧基姜黄素所诱导的HepG2细胞凋亡, 提高凋亡率 (P＜0.01), 增加其降低线粒体膜电位作用 (P＜0.01), 明显下调pro-Caspase-3, Bcl-2蛋白的表达 (P＜0.01), 并上调Beclin-1, LC3, cleaved Caspase-3蛋白的表达 (P＜0.01) .结论:双去甲氧基姜黄素可经线粒体机制诱导HepG2细胞凋亡, 并诱导细胞自噬, 自噬对凋亡有抑制作用.
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益肾调肝方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠线粒体的调控作用研究
均P＜0.01);另外可以显著降低肝酶及血脂水平,减少脂肪沉积及改善肝脏病理.结论:益肾调肝方预防非酒精性脂肪性肝炎的过程中,对线粒体有明显影响,对线粒体的调控可能是益肾调肝方预防非酒精性脂肪性肝炎的作用靶点之一.
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双去甲氧基姜黄素通过降低线粒体膜电位诱导人白血病K562细胞凋亡
目的:探讨双去甲氧基姜黄素对K562细胞增殖的影响及其机制.方法:以1,10,30,50,100μmol·L-1的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用48 h或72 h后MTT法检测细胞增殖;以10,30,50 μmol·L-的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用24 h或48 h实验,另设空白组,AO/EB双染法倒置荧光显微镜观察凋亡形态,Rh123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Annxin V/PI染色流式细胞仪检测凋亡率,Westren blot方法检测Bcl-2,Bax的表达活性.结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可剂量依赖性抑制K562细胞的增殖,在30,50 μmol·L-1浓度下,双去甲氧基姜黄素可诱导细胞凋亡,下调Bcl-2/Bax,并可降低线粒体的膜电位(P＜0.01).结论:双去甲氧基姜黄素可抑制K562细胞的增殖,作用机制可能与改变线粒体膜电位诱导的细胞凋亡有关.
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姬松茸多糖对大鼠胸腺细胞凋亡和线粒体膜电位的影响
目的:观察姬松茸多糖对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱发大鼠胸腺细胞凋亡和线粒体膜电位的影响.方法:Wistar大鼠随机分为4组:正常组,模型组,姬松茸多糖低、高剂量组,每组10只.正常组和模型组灌胃(ig)生理盐水,姬 松茸多糖低、高剂量组ig姬松茸多糖溶液(60,120 mg·kg-1),1次/d,连续7d.模型组和姬松茸多糖低、高剂量于第7日腹腔注射DEX(0.02 g·kg-1).3h后处死各组动物,迅速无菌取胸腺,采用显微观察、流式细胞技术观察胸腺细胞形态学改变,胸腺细胞凋亡、脱氧核糖核酸(DNA)断裂百分率及线粒体膜电位变化,胸腺组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的变化.结果:与模型组比较,姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞线粒体嵴肿胀明显减轻；姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞凋亡率[低、高剂量(5.96±1.14)％,(5.07±1.02)％],DNA断裂率[低、高剂量(3.67±0.49)％,(3.24±0.45)％]及胸腺组织MDA含量[低、高剂量(1.87±0.25),(1.72±0.23)μg·mg-1]均明显低于模型组[(7.14±1.62)％,(4.25±0.86)％,(2.16±0.38) μg·mg-1]；姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞线粒体膜电位(荧光指数:低剂量38.57±6.29,高剂量41.36±7.18)及胸腺组织SOD活性量[低、高剂量(25.78±3.94),(27.36 ±4.21)U.mg-1]明显高于模型组(32.76 ±5.48)荧光指数,(21.45±3.52) i g· mg-1.结论:姬松茸多糖可阻断胸腺细胞DNA断裂和线粒体膜电位的下降,有效抑制DEX诱导的胸腺细胞凋亡,其作用机制与姬松茸多糖提高胸腺组织抗氧化功能有关.
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白蔹药效成分没食子酸抑制人肝癌HepG2细胞生长及作用机制研究
目的:探讨从白蔹抗肿瘤活性部位分离得到的没食子酸对人肝癌HepG2细胞生长的影响及其作用机制.方法:用不同浓度的没食子酸处理HepG2细胞,MTT法测定没食子酸对HepG2细胞生长增殖的抑制活性；采用Hochest染色、荧光显微镜、Annexin V-FITC/PI双标记法和流式细胞术观察凋亡细胞的形态结构变化以及定性、定量检测细胞凋亡；采用JC-1染色检测HepG2细胞线粒体膜电位变化情况.结果:没食子酸在12.5～200 mg·L-1对HepG2细胞生长有明显抑制作用,且呈一定的浓度依赖性；没食子酸能诱导HepG2细胞凋亡,降低细胞线粒体的膜电位.结论:没食子酸为白蔹抗肿瘤主要活性成分之一,通过降低细胞线粒体的膜电位而诱导细胞凋亡为其抗肿瘤作用机制之一.
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健脾补肾方对615小鼠前胃癌术后复发瘤细胞凋亡和线粒体膜电位的影响
目的:研究健脾补肾方对小鼠前胃癌术后复发瘤细胞凋亡和线粒体膜电位的影响.方法:以615小鼠前胃癌术后模型为对象,应用健脾补肾方,观察抑制术后复发的作用,应用流式细胞仪检测复发瘤的细胞凋亡的水平和线粒体膜电位.结果:与模型组比较,健脾补肾组复发瘤瘤重显著降低,复发瘤抑制率为71.07%;复发瘤凋亡指数显著增高:复发瘤细胞线粒体膜电位(MMP)显著降低.以上各项指标均P＜0.01.结论:健脾补肾方对术后局部肿瘤复发有明显的抑制作用,导致复发瘤细胞线粒体膜电位降低,从而诱导肿瘤细胞凋亡.
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六味地黄汤及其活性组分含药血清对原代培养海马神经元的保护作用
目的:运用血清药理学方法观察六味地黄汤(LW)及其活性组分(CA4、CA4-3)含药血清对原代培养胚胎大鼠海马神经元的保护作用.方法:首先通过MTT法观察了LW及CA4、CA4-3对海马神经元存活的影响,进而采用流式细胞术观察LW及CA4、CA4-3对海马神经元线粒体膜电位的影响.结果:LW及CA4、CA4-3含药血清均可不同程度地提高海马神经元的存活率,并且稳定线粒体膜电位与其神经保护作用具有密切关系.
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丹参素对缺氧/缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响
目的:观察丹参素对神经细胞SH-SY5Y缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位(MMP)和凋亡的影响.方法:将SH-SY5Y细胞分为5组:对照组、模型组、尼莫地平组及丹参素15、30mg/L组,给予相应处理后分别培养2、4、6、12h.四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率.结果:缺氧/缺糖损伤2b,模型组的线粒体活性和MMP水平较对照组显著降低(P＜0.01),并随缺氧/缺糖损伤时间的延长而变化越显著.而细胞凋亡和坏死的百分率均较对照组显著升高(P＜0.01),形态学观察也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多.丹参素能显著提高SH-SY5Y细胞线粒体膜电位和活性,降低细胞凋亡及坏死的百分率,其作用随剂量增加而作用增加.结论:丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生.
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知柏地黄汤对解脲脲原体感染模型大鼠精子MMP、ROS、CytC的影响
目的:研究知柏地黄汤对解脲脲原体(UU)感染模型大鼠精子线粒体膜电位(MMP)、活性氧(ROS)水平及细胞色素C(CytC)含量的影响.方法:雄性SD大鼠80只,随机分成假手术组、模型组、中药组(知柏地黄汤,2mL/d)、中西组(知柏地黄汤+强力霉素)、西药组(强力霉素,2mL/d),除假手术组外,其他组均采用经大鼠膀胱注射UU建立UU感染动物模型.连续灌胃给药21d后处死取标本检测,采用荧光流式细胞技术(JC-1染色)测定精子MMP水平(JC-1+％)及ROS水平(JC-1+％),采用ELISA法检测CytC含量.结果:模型组大鼠精子MMP(JC-1+％)、ROS水平(JC-1+％)及精子中CytC含量,与假手术组比较,差异显著(P＜0.01);各治疗组中精子MMP水平上升,ROS水平、CytC含量下降,其中,中西组与模型组比较,差异显著(P＜0.01).结论:知柏地黄汤能够提高UU感染大鼠精子MMP水平,减少精子ROS产生,减少精子凋亡,抑制CytC释放,这可能是知柏地黄汤治疗UU感染所致男性不育症的机制之一.
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片仔癀诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡与线粒体膜电位的关系
目的:探讨片仔癀诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡与线粒体跨膜电位(△ψm)的关系.方法:采用不同浓度的片仔癀(0.8、1.2、1.6mg/mL)作用U2OS细胞后,Hoechst 33258染色镜下观察、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;JC-1染色流式细胞仪检测线粒体跨膜电位;分光光度法检测Caspase-9、Caspase-3活性;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果:随剂量的增加,片仔癀可明显诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡、降低细胞线粒体膜电位,增加Caspase-9、Caspase-3活性,各干预组与阴性对照组比较均有明显差异(P＜ 0.05,P＜0.01),Western blot检测结果表明Bcl-2蛋白表达下降,而Bax蛋白表达上调.结论:片仔癀可降低细胞线粒体跨膜电位,改变线粒体通透性,促使骨肉瘤细胞凋亡.
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不同治法对脑老化小鼠神经元线粒体膜电位及神经元密度的影响
中医药缓衰增智向以补肾填精占居优势,单纯补益脾胃及在此基础上的比较研究少见.笔者通过大量临床发现,衰老早期气虚脾弱比较明显,与相关资料一致[1].研究表明,保护神经元免受损伤因素的侵害,是发挥益智作用的重要途径之一[2].本实验以补益脾胃为切入点,观察不同方药对神经元的影响.
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沙棘水提物对短波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡及线粒体膜电位的影响
目的:研究沙棘(Hippophae rhamnoides L.)水提物对短波紫外线(UVC)辐射人永生化角质形成(HaCaT)细胞增殖与凋亡、线粒体膜电位(△ψm)的影响,探讨沙棘水提物对UVC辐射HaCaT细胞是否具有防护功能及其作用机制.方法:体外培养HaCaT细胞株,设置对照组(不加药、不照射)、UVC组和药物组(UVC辐射+不同浓度的沙棘水提物),CCK-8法测定细胞增殖、Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡、JC-1检测△ψm.结果:与UVC组比较,药物组CCK-8吸光度值(OD值)明显升高(P＜0.01),且呈剂量依赖;细胞凋亡率降低,发生线粒体膜电位下降的细胞数比例(F值)下降.结论:沙棘水提物能够抑制HaCaT细胞凋亡、促进细胞增殖,其机制可能与保护线粒体功能有关.
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益气健脾、益气健脾祛痰化瘀方药对脑老化小鼠神经元保护作用的比较研究
目的:比较益气健脾、益气健脾祛痰化瘀方药对脑老化小鼠神经元保护作用.方法:采用D-半乳糖(D-galactose, D-gal)复制亚急性衰老及脑老化动物模型.以流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测大脑神经元线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)及凋亡百分率,病理图文分析系统检测大脑神经元密度.结果:益气健脾和益气健脾祛痰化瘀方药均能明显:(1)稳定MMP,益气健脾方药更具优势;(2)抑制大脑皮质神经元密度的下降(对海马神经元密度的作用不显著).益气健脾法方药还能明显降低神经元凋亡百分比(益气健脾祛痰化瘀法作用不显著).结论:益气健脾和益气健脾祛痰化瘀方药均有一定的神经元保护作用,单纯益气健脾方药作用更为显著.
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脾气虚型HIV/AIDS患者淋巴细胞线粒体功能状态在常温和热应激条件下的改变情况
研究比较脾气虚证人类获得性免疫缺陷病毒患者(HIV/AIDS患者)与健康人群淋巴细胞在37℃和40℃条件(模拟热应激)下,淋巴细胞线粒体膜电位差异,结果显示脾气虚证HIV/AIDS患者淋巴细胞线粒体膜电位明显下降,特别是在热应激条件下(40℃孵育1h),反映了其机体在发热情况下能量代谢功能的下降,另一方面揭示了HIV/AIDS患者脾气虚病机的部分细胞免疫学基础,为中医药防治HIV/AIDS提供理论支持和依据.
关键词： 人类获得性免疫缺陷病毒患者 脾气虚 淋巴细胞 线粒体膜电位 -
辣椒素对大细胞肺癌NCI-H460细胞凋亡线粒体的影响
目的 观察辣椒素对人大细胞肺癌NCI-H460细胞线粒体膜电位(Δψm)的影响,探讨其诱导NCI-H460细胞凋亡的线粒体机制.方法 体外培养NCI-H460细胞,采用不同终浓度辣椒素进行处理,以不加辣椒素为对照.MTT法检测NCI-H460细胞增殖反应,计算半数抑制率;分别采用流式细胞术AnnexinV-FITC/PI法、JC-1活细胞染色、免疫荧光和Western blot检测细胞凋亡、ψm、细胞色素C(Cyt c)的分布和线粒体内Cyt c的表达.结果 与对照组比较,辣椒素明显抑制NCI-H460细胞增殖,并诱导NCI-H460细胞凋亡(P＜ 0.05,P＜0.01);辣椒素显著降低NCI-H460细胞Δψm、促进Cyt c由线粒体释放至胞浆及降低线粒体内Cyt c的表达(P＜0.05).结论 辣椒素对肺癌NCI-H460细胞增殖具有抑制作用,诱导其凋亡,其机制可能是通过线粒体介导的细胞凋亡途径实现.
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含砷中药复方青黄散治疗骨髓增生异常综合征的克隆选择性与砷体内效应的相关性研究
目的 探讨含砷中药复方青黄散治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的克隆选择性与砷体内效应的相关性.方法 对接受口服青黄散(每日雄黄0.16 g)治疗的MDS患者40例(治疗组)进行疗效评价,分析MDS患者口服青黄散后血砷浓度和线粒体膜电位(△Ψm),并与未服用青黄散或其他砷制剂的MDS 患者(未治疗组)以及正常人(健康对照组)进行比较.结果 治疗组总有效率为75.0%(30/40).伴随正常克隆与+8 异常克隆患者的疗效明显好于其他异常克隆类型(P＜0.05).治疗组全血和血浆砷浓度均明显高于未治疗组及健康对照组(P＜0.05).治疗组有效患者的全血砷浓度明显高于治疗失败者(P＜0.05).治疗组全血砷浓度明显高于血浆砷浓度(P＜0.05).治疗组正常核型和+8 患者与其他异常克隆患者的血砷浓度差异无统计学意义(P＞0.05).治疗组线粒体△Ψm与未治疗组比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗组线粒体△Ψm与全血砷浓度没有相关性(P＞0.05).结论 口服青黄散治疗MDS,砷被人体少量吸收,并进入细胞内发挥作用.MDS患者对青黄散的治疗反应与全血砷浓度具有相关性.青黄散治疗MDS的克隆选择性与全血砷浓度以及线粒体△Ψm变化没有相关性.
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西兰花中异硫氰酸盐诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡作用及其机制的研究
目的:探讨西兰花中异硫氰酸盐(isothiocyanates,ITCS)诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡过程中的作用及其可能机制.方法:不同浓度ITcs处理人肝癌细胞HepG-2,应用MTT法检测ITCS对HepG-2细胞增殖的影响;流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(△ψm)和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况.结果:ITCS可明显抑制HepG-2细胞增殖;15,30,60,120,240μg·mL-1的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内活性氧分别为(23.1±1.8)%,(53.3±3.3)%,(57.9±2.0)%,(79.9±3.4)%,(93.4±2.6)%;△ψm分另0为(94.8±5.5)%,(91.8±5.4)%,(66.0±5.6)%,(65.5±6.6)%,(44.3±2.7)%;60,120,240μg·mL-1的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%,(21.9±4.4)%,(70.2±5.3)%.结论:ITCS能够通过刺激HepG-2细胞内活性氧的产生,损伤线粒体,使其膜电位下降,引起HepG-2细胞凋亡.
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麝香酮对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护及作用机制研究
目的:考察麝香酮对谷氨酸引起PC12细胞损伤的保护作用及作用机制.方法:将大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(pheochromocytoma,cells,PC12)分为正常组、模型组、麝香酮10.0,1.0,0.1 μmol·L~(-1)高、中、低剂量组和1μmol·L~(-1)尼莫地平组,用500μmol·L~(-1)谷氨酸造成PC12细胞损伤,采用药物预处理给药方法,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用Fura3/AM为荧光指示剂,用Vector~2 1420多标记免疫分析仪研究麝香酮对谷氨酸所致损伤PC12细胞内Ca~(2+)的作用,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位,考察不同浓度麝香酮对PC12细胞的保护作用.结果:麝香酮可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞还原能力,抑制该细胞LDH的释放,提高细胞存活率;抑制兴奋性氨基酸所引起的细胞内Ca~(2+)含量的升高;降低PC12细胞的凋亡百分率,并呈剂量相关性.结论:麝香酮可抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制可能与抑制细胞内钙超载,稳定细胞线粒体跨膜电位有关.
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β-谷甾醇诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制研究
目的:探讨β-谷甾醇诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其作用机制.方法:以MTT法检测细胞增殖活力,高内涵活细胞成像系统检测细胞周期变化、凋亡率、线粒体膜电位的变化,Western Blotting检测凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Bcl-2,Bax,tBid,cytochrome c的表达.结果:β-谷甾醇剂量依赖性地抑制肝癌细胞HepG2的生长、降低线粒体膜电位并诱导其凋亡；上调细胞Bax及tBid表达,下调细胞Bcl-2表达；诱导Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9等蛋白酶原表达逐渐降低而激活的大片段表达逐渐增加；胞浆中cytochrome c表达逐渐增加而线粒体中的cytochrome c表达逐渐减少.β-谷甾醇对正常肝细胞QSG7701的生长及凋亡相关蛋白几乎没有影响.结论:β-谷甾醇对人肝癌HepG2细胞生长具有较强的抑制作用,并通过线粒体途径及膜死亡受体途径诱导该细胞凋亡.
