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自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响
目的:探讨自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响.方法:以24 mg·L-1双去甲氧基姜黄素或联合5 mol·L-1自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤 (3-methyladenine, 3-MA) 对HepG2细胞作用24, 48 h, 以四甲基偶氮唑盐 (methye thiazolye telrazlium, MTT) 比色法检测细胞活力;以24 mg·L-1双去甲氧基姜黄素单用或联合3-MA对HepG2细胞作用48 h, Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡形态, 磷脂结合蛋白V/碘化丙啶 (Annxin V/propidium iodide, PI) 双染检测细胞凋亡率, 罗丹明123 (Rhodamine 123, Rh123) 染色检测线粒体膜电位, 蛋白免疫印迹法 (Western blot) 检测自噬相关蛋白Beclin-1, LC3, 半胱氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3), 活化型Caspase-3 (cleaved Caspase-3), B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2), Bcl-2相关X蛋白 (Bax) 的活性表达.结果:与空白组比较, 双去甲氧基姜黄素可抑制HepG2细胞增殖, 诱导细胞凋亡, 降低线粒体膜电位, 使pro-Caspase-3, Bcl-2, LC3-Ⅰ蛋白表达降低 (P＜0.01), 升高cleaved Caspase-3, Bax, Beclin-1, LC3-Ⅱ蛋白的表达 (P＜0.01);3-MA可增强双去甲氧基姜黄素所诱导的HepG2细胞凋亡, 提高凋亡率 (P＜0.01), 增加其降低线粒体膜电位作用 (P＜0.01), 明显下调pro-Caspase-3, Bcl-2蛋白的表达 (P＜0.01), 并上调Beclin-1, LC3, cleaved Caspase-3蛋白的表达 (P＜0.01) .结论:双去甲氧基姜黄素可经线粒体机制诱导HepG2细胞凋亡, 并诱导细胞自噬, 自噬对凋亡有抑制作用.
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双去甲氧基姜黄素通过降低线粒体膜电位诱导人白血病K562细胞凋亡
目的:探讨双去甲氧基姜黄素对K562细胞增殖的影响及其机制.方法:以1,10,30,50,100μmol·L-1的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用48 h或72 h后MTT法检测细胞增殖;以10,30,50 μmol·L-的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用24 h或48 h实验,另设空白组,AO/EB双染法倒置荧光显微镜观察凋亡形态,Rh123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Annxin V/PI染色流式细胞仪检测凋亡率,Westren blot方法检测Bcl-2,Bax的表达活性.结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可剂量依赖性抑制K562细胞的增殖,在30,50 μmol·L-1浓度下,双去甲氧基姜黄素可诱导细胞凋亡,下调Bcl-2/Bax,并可降低线粒体的膜电位(P＜0.01).结论:双去甲氧基姜黄素可抑制K562细胞的增殖,作用机制可能与改变线粒体膜电位诱导的细胞凋亡有关.
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不同产地姜黄中挥发油及姜黄色素的含量分析
目的:明确姜黄有效成分在不同地区的含量差异,考察姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素与挥发油之间含量的相关关系.方法:采集不同产地姜黄样品,结合HPLC-UV及2010年版《中国药典》中挥发油测定法分别分析姜黄中姜黄色素和挥发油的含量,采用SPSS 20.0软件的聚类分析及相关分析功能对测定的含量进行分析.结果:不同产地姜黄有效成分含量差异明显,姜黄色素质量分数大值约4.9％,小值仅约0.2％,相差约24.5倍;姜黄挥发油大值与小值之间差距达4.2倍.姜黄的传统道地产区含量优势明显,不同姜黄色素与挥发油之间均呈现极显著正相关关系.结论:海拔差异对姜黄中有效成分的含量变化有一定影响,姜黄的产区需要进行合理的规划以提高其品质并推进其产业的可持续发展.
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姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素稳定性研究
目的:研究姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素在不同pH缓冲溶液中的稳定性.方法:以一定pH的缓冲溶液为反应介质,将姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素定量加入到反应介质中,高效液相色谱法测定姜黄素类化合物浓度的变化,采用动力学方法建立姜黄素类化合物降解速率方程.结果:在相同的条件下姜黄素类化合物的稳定性依次为:双去甲氧基姜黄素≥去甲氧基姜黄素≥姜黄素.结论:去甲氧基姜黄素对姜黄素产生稳定作用强,为姜黄素的天然稳定剂.
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姜黄素类化合物在不同品系姜黄根茎内积累规律研究
研究姜黄素(Cur)、去甲氧基姜黄素(DMC)、双去甲氧基姜黄素(BDMC)3种主要姜黄素类成分在不同姜黄品系根茎内的动态积累规律,为姜黄规范化生产、适时采收和优质品种选育提供依据.不同姜黄品系姜黄素类化合物在姜黄根茎内的积累规律基本一致,相对含量随生育进程而降低,积累量随生育进程而增加,可将总姜黄素积累量作为姜黄适宜采收期的评价指标;缅甸姜黄素和双去甲氧基姜黄素含量均较高,可作为高姜黄素含量和高双去甲氧基姜黄素含量的优良育种材料.
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双去甲氧基姜黄素对星型孢菌素诱导心肌细胞凋亡的影响
目的：探讨双去甲氧基姜黄素（BDMC）对星型孢菌素（STS）诱导的原代心肌细胞凋亡的影响。方法常规培养C57BL／6J小鼠原代心肌细胞，分为4组：对照组、STS组、BDMC预处理＋STS组、BDMC组。 CCK-8法检测心肌细胞生存率， Tunel检测心肌细胞凋亡情况，Caspase-3酶活性试剂盒检测caspase-3活性，活性氧检测试剂盒检测心肌细胞内活性氧（ ROS）水平。结果终浓度为100μmol／L的BDMC预处理能显著提高心肌细胞生存率降低caspase-3酶活性，降低心肌细胞凋亡率和细胞内ROS水平（P＜0．05）。结论 BDMC可通过降低STS处理后的心肌细胞内ROS水平，抑制心肌细胞凋亡，达到保护损伤心肌细胞的作用。
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HPLC波长切换联合梯度洗脱法同时测定康力欣胶囊中9种主要成分的含量
目的 建立一种适用于同时测定康力欣胶囊中9种主要成分含量的HPLC波长切换联合梯度洗脱法.方法 Kro?masil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-甲醇(1:2,V/V)(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱;流速0.9 ml/min;柱温30℃;检测波长分别为225 nm(木香烃内酯、去氢木香内酯)、254 nm(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚)和425 nm(双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素).结果 这9种主要成分质量浓度依次分别在6.610~132.2(r=0.9999)、7.890~157.8(r=0.9996)、14.07~281.4(r=0.9992)、3.450~69.00(r=0.9997)、2.670~53.40(r=0.9998)、3.760~75.20(r=0.9999)、5.880~117.6(r=0.9996)、8.490~169.8(r=0.9993)和13.91~278.2μg/ml(r=0.9991)范围内线性关系良好,平均加样回收率依次分别为98.28%、97.76%、99.08%、97.19%、98.45%、96.96%、98.51%、97.52%和100.04%,RSD依次分别为1.09%、0.80%、1.72%、1.00%、1.24%、1.21%、1.55%、0.83%和0.93%.结论 所建立的方法准确、快速,可用于康力欣胶囊的质量控制.
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黄丝郁金和绿丝郁金中姜黄素类成分的测定结果比较
目的：采用高效液相色谱法检测黄丝郁金和绿丝郁金中姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的含量。方法在色谱柱为LichrosPherODSCl8柱（4.6x150mm，5um）、流动相为乙腈-5％冰醋酸）（45：55）、流速1.0mL／min、检测波长为420mm的条件下对12个批次的药材进行检测。结果姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的线性关系均良好，回收率分别为99.21%、102.01%、101.32%；RSD为2.52%、2.64%、2.39%。结论黄丝郁金中含有姜黄素类成分较多，而绿丝郁金中含有姜黄素类成分较少。
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姜黄素类化合物体外抗凝血与抗血栓作用研究
目的 研究姜黄素类化合物体外抗凝血与抗血栓活性,为探寻姜黄活血化瘀药效物质提供参考.方法 采用家兔血浆复钙时间法、凝血酶时间法及体外血栓法、全血血块法,分别对3个天然姜黄素类化合物姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的体外抗凝血与抗血栓活性进行测定.结果 姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素均能延长家兔血浆复钙时间(P＜0.01)及凝血酶时间(P＜0.01),且均能加快体外血栓(P＜0.01)及全血凝块的溶解(P＜0.01),其中去甲氧基姜黄素的作用强.结论 姜黄素类化合物具有较好的体外抗凝血与抗血栓作用,空间不对称结构能加强姜黄素类化合物结构母核的抗凝活性.
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姜黄中姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的光稳定性分析
目的 研究姜黄中姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的光稳定性,并对双去甲氧基姜黄素光化学反应产物进行考察.方法 姜黄的甲醇提取液于棕色量瓶储存,在自然光/避光条件下放置0、1、2、4、6、8h后,HPLC法测定其指标成分姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素量的变化；LC-MS法分析双去甲氧基姜黄素光化学反应产物.结果 姜黄素、去甲氧基姜黄素在自然光/避光条件下均有良好的稳定性；双去甲氧基姜黄素在避光条件下稳定,见光条件下发生光化学反应.结论 姜黄素和去甲氧基姜黄素具有良好稳定性,双去甲氧基姜黄素在自然光照射下不稳定,因此,姜黄药材分析供试液应于棕色量瓶中避光保存.
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一测多评法测定姜黄中姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素
目的 建立姜黄一测多评测定方法,同时测定其中3种姜黄素类成分量,并进行方法学考察.方法 采用高效液相色谱法,ChromstarTM C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-4％冰醋酸溶液(48∶52),检测波长为422nm,体积流量为1.0 mL/min,柱温为30℃;以姜黄素为参照物,建立其与去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素相对校正因子,分别以外标法和一测多评法计算3种姜黄素类成分质量分数.结果 该方法可同时测定姜黄中3种姜黄素类成分量,且测定结果与外标法相比无显著性差异(RSD＜2.0％).结论 本法简便、可行、重复性好,可为进一步完善姜黄的质量标准提供参考.
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自乳化释药系统(SEDDS)对姜黄素类组分增溶作用的研究
目的 探讨自乳化释药系统(SEDDS)对多组分同时增溶的可行性.方法 以姜黄素类组分为模型药物,采用D-优混料设计优化SEDDS处方,以对双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的载药量、SEDDS的粒径和乳化时间为指标对SEDDS进行优化并对其进行综合评价,探讨SEDDS对多成分同时增溶的可行性.结果 优化得SEDDS佳处方为Obleique CC497-聚山梨酯20-Transcutol P(0.21∶0.50∶0.29),SEDDS粒径为(248.8±3.4) nm,乳化时间为(70±1)s.37℃时,SEDDS对双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的大载药量分别为2.298、12.220、52.561 mg/g,在水中的溶解度分别为0.107、0.661、1.648 mg/mL.结论 SEDDS能实现对多组分的同时增溶.
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基于信息熵赋值法的正交联用Box-Behnken设计-响应面法优化黄丝郁金醋炙工艺研究
目的 基于信息熵赋权法的正交联用Box-Behnken设计-响应面法(BBD-RSM)优化黄丝郁金醋炙工艺,优化其醋制炮制工艺.方法 以HPLC法测定醋郁金中姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的量,作为评价指标,采用正交试验考察米醋用量、闷润时间、炒制温度、炒制时间对黄丝郁金醋炙工艺的影响;在正交试验的基础上,进一步采用BBD-RSM考察闷润时间、炒制温度和炒制时间对该炮制工艺的影响.结果 正交试验确定的黄丝郁金佳醋炙工艺为加入10％米醋,拌匀闷润10 min,炒制温度130℃,炒制10 min;BBD-RSM确定佳炮制工艺为闷润时间12 min,炒制温度150℃,炒制时间8 min.验证实验结果表明该工艺条件重复性良好,具有合理性和可行性.结论 此实验方法可行,模型、数据可靠,优化了黄丝郁金醋炙工艺.
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复方柔肝中姜黄素类成分大鼠药代动力学特征
目的 研究复方柔肝(黄芪、姜黄、丹参和熊胆粉)中姜黄素和双去甲氧基姜黄素在大鼠体内药代动力学特征.方法 将SD大鼠随机分为3组,分别灌胃姜黄素和双去甲氧基姜黄素混合物、姜黄提取物、复方柔肝提取物,并采集血浆样本.利用UPLC-TQ/MS测定大鼠血浆中姜黄素和双去甲氧基姜黄素,以多反应监测方式进行正离子检测,应用DAS 3.2计算并比较各组药动学参数.结果 姜黄素在姜黄素和双去甲氧基姜黄素混合物、姜黄提取物和复方柔肝提取物中T1/2、Tmax并无显著性差异,而复方柔肝提取物中Cmax、AUC0～T明显高于姜黄提取物、姜黄素和双去甲氧基姜黄素混合物,姜黄素在姜黄提取物和复方柔肝提取物中MRT0～T略小于姜黄素和双去甲氧基姜黄素混合物,双去甲氧基姜黄素Lmax其他药动学参数均无显著性差异.结论 复方柔肝配伍显著提高姜黄素Cmax,增加了其生物利用度,并加快双去甲氧基姜黄素体内吸收速度,但对其生物利用度影响不大.
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双去甲氧基姜黄素抑制肝癌细胞增殖并诱导凋亡的机制
目的 探讨双去甲氧基姜黄素(BDMC)对肝癌细胞的作用及其机制.方法 不同BDMC(0、20、40、80μmol/L)干预肝癌细胞株HEPG2 72 h,MTT评价细胞增殖,Tunel分析细胞凋亡,ELISA检测活性氧(ROS)水平和p-STAT3水平,Western blot检测AMPK.采用ROS抑制剂N-乙酰-L半胱氨酸(NAC 2.5 mmol/L)处理30 min后BDMC再干预24 h,评价细胞凋亡能力.结果 BDMC可诱导肝癌细胞凋亡,增加ROS生成和AMPK磷酸化水平,抑制p-STAT3表达.抑制ROS生成可抑制BD-MC诱导HEPG2凋亡的能力.结论 BDMC通过ROS/AMPK/STAT3信号通路诱导肝癌细胞凋亡.
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不同来源莪术中姜黄素类成分的含量差异研究
目的：用高效液相色谱法测定不同来源的莪术中3种姜黄素成分，比较姜黄素（cur_cumin，Ⅰ）、去甲氧基姜黄素（demethoxycurcumin，Ⅱ）和双去甲氧基姜黄素（bisdemethoxycurcum_in，Ⅲ）的含量差异。方法：采用Kromasil色谱柱,流动相为乙腈-水（0.5%冰乙酸）,流速为1 mL· min-1，检测波长为425 nm。结果：姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的线性范围分别为0.04~0.16μg （r=0.9991）、0.037~0.150μg （r=0.9990）、0.00015~0.00062μg （r=0.9996）；平均回收率（n=9）分别为103.32%、100.32%、100.06%。结论：不同来源的莪术中姜黄素类成分的含量存在着明显的差异。
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姜黄提取物中姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的含量测定
目的:建立同时测定姜黄提取物中姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素含量的高效液相色谱法.方法:采用Ve-nusil XBP C18(L)柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm);流动相:乙腈-0.5％冰醋酸(45∶55);柱温:25℃;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:425 nm.结果:姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的线性范围分别为0.208 ～ 4.08 μg(r=0.999 7)、0.06～1.23μg(r =0.999 9)、0.06 ～ 1.30 μg(r =0.999 7);平均加样回收率(n=9)分别为100.7％、100.1％、100.6％,RSD分别为2.29％、2.26％、2.49％.结论:所建立的方法准确、快速,可用于姜黄的质量控制.
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中药莪术中姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的含量测定
目的:建立测定中药莪术中3种姜黄素即姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素含量的方法.方法:采用Kromasil C18柱;流动相为乙腈-4%冰醋酸(40:60);检测波长418 nm,对10种产地或商品地莪术药材进行了测定.结果:姜黄素在2.220～44.40 ng范围内线性关系良好;去甲氧基姜黄素在0.01066～0.2132 μg范围内线性关系良好;双去甲氧基姜黄素在1.154～23.08 ng范围内线性关系良好;10种产地或商品地莪术药材中,姜黄素含量为未检出～45.83 μg·g-1;去甲氧基姜黄素含量为未检出～144.2 mg·g-1;双去甲氧基姜黄素含量为未检出～3.148 μg·g-1.结论:不同产地或商品地莪术药材存在差异;本方法准确、快速、重现性好,为研究中药莪术质量提供依据.
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不同溶剂对姜黄中姜黄素类化合物提取率的比较
目的 分别比较姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素在9种常用提取溶剂中的提取率,为3种姜黄素提取的适宜溶剂提供参考.方法 通过改变提取溶剂种类,对等量的各份姜黄进行提取,提取液定容处理后,高效液相色谱法检测,计算提取率,比较3种姜黄素各自在不同溶剂中的提取率,分析得到3者适宜的提取溶剂.结果 姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素均在甲醇中的提取率高.结论 3者在各自溶剂中的提取率高低不呈现完全正相关.
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降脂通络软胶囊人血浆药物浓度的测定
目的:建立高效液相色谱-串联质谱法对降脂通络软胶囊人血浆药物浓度进行测定.方法:采用C18色谱柱(3.5μm,50mm×2mm),以乙腈0.1％甲酸进行梯度洗脱,流速:1.0mL·min-1.结果:人血浆内源性杂质对样品测定无干扰,姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素在100～10 000ng·mL-1范围内线性关系良好,低检测限和低定量限分别为10ng· mL-1和30ng ·mL-1,低中高3种浓度的平均回收率均大于80％,日内精密度RSD均小于3％,日间精密度RSD均小于15％.结论:该方法快速、灵敏、准确,可用于降脂通络软胶囊人血浆药物浓度的测定.
