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三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用
目的:观察三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用.方法:建立缺氧/缺糖再给氧模型,模拟缺血再灌注损伤.流式细胞术检测凋亡细胞百分率,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出和一氧化氮(NO)的产生量.结果:神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加LDH的漏出和NO的产生,并随再给氧时间的延长而增加.三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,减少LDH的漏出和NO的过量产生,三七总皂苷的作用随剂量增加而增加.结论:三七总皂苷具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与降低或抑制一氧化氮合酶(NOS)活性,减少NO的过量产生有关.
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丹参素对缺氧/缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响
目的:观察丹参素对神经细胞SH-SY5Y缺氧/缺糖损伤时线粒体膜电位(MMP)和凋亡的影响.方法:将SH-SY5Y细胞分为5组:对照组、模型组、尼莫地平组及丹参素15、30mg/L组,给予相应处理后分别培养2、4、6、12h.四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测线粒体活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率和线粒体膜电位,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率.结果:缺氧/缺糖损伤2b,模型组的线粒体活性和MMP水平较对照组显著降低(P＜0.01),并随缺氧/缺糖损伤时间的延长而变化越显著.而细胞凋亡和坏死的百分率均较对照组显著升高(P＜0.01),形态学观察也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,随着缺氧/缺糖时间的延长,细胞凋亡的发生也越来越多,坏死的细胞也增多.丹参素能显著提高SH-SY5Y细胞线粒体膜电位和活性,降低细胞凋亡及坏死的百分率,其作用随剂量增加而作用增加.结论:丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生.
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三七总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠海马神经细胞凋亡的研究
目的:以原代培养的大鼠海马神经细胞缺氧/缺糖再给氧为模型,观察三七总皂苷对神经细胞凋亡的抑制作用.方法:流式细胞仪检测凋亡细胞百分率,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内Ca2+浓度,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放.结果:神经细胞缺氧/缺糖5 h 后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加细胞内Ca2+浓度和LDH 的释放,并随再给氧时间的延长而增加.三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,降低细胞内Ca2+ 浓度,减少LDH的释放,三七总皂苷的作用随剂量增加而作用增强.结论:三七总皂苷对缺血再灌注损伤后海马神经元的凋亡过程具有抑制作用,这种作用可能与其能降低细胞内Ca2+ 浓度有关.
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红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用
目的:以SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤为模型,观察红景天苷对神经细胞保护的作用.方法:流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内[Ca2+]i浓度,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率,用试剂盒显色法测定LDH的含量.结果:缺氧/缺糖损伤2 h可诱导神经细胞凋亡和坏死,分别为18.59%(P<0.01)和4.94%(P<0.01).形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,并显著增加细胞内[Ca2+]i浓度和LDH的释放,分别为8.46 nmol·L-1(P<0.01)和16.59%(P<0.01),并随缺氧/缺糖损伤时间的延长而明显增高;红景天苷(1～3 μmol·L-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,降低细胞内[Ca2+]i浓度,减少LDH的释放,其作用随剂量增加而作用增强.结论:红景天苷具有抑制SH-SY5Y细胞凋亡的作用,可对神经细胞起到保护作用,这种作用可能与其降低细胞内[Ca2+]i浓度有关.
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丹参素对缺氧/缺糖损伤神经细胞线粒体的保护作用
目的观察丹参素对SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤时胞浆内[Ca2+]i、细胞凋亡率、细胞活性和线粒体膜电位的变化,探讨其对神经细胞线粒体的保护作用及其可能的机理.方法应用细胞培养、四唑盐比色实验(MTT)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内[Ca2+]i、细胞凋亡百分率和线粒体膜电位.结果 SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤2 h时,细胞内[Ca2+]i明显增加,为8.46 nmol/L(P<0.01),细胞凋亡率明显增高,为18.59% (P<0.01),细胞内[Ca2+]i的浓度4 h时达到高峰,为9.89 nmol/L(P<0.01),而后呈下降趋势,细胞凋亡率随缺氧/缺糖损伤时间的延长而明显增高12 h时达到45.91%,细胞经缺氧/缺糖处理2 h后,线粒体膜电位和细胞活性分别降低29.17%(P<0.01)、38.80%(P<0.01),随着缺氧/缺糖时间的延长线粒体膜电位和细胞活性进一步下降, 12 h时分别降低56.72%(P<0.01)、63.58%(P<0.01),丹参素能显著降低细胞内[Ca2+]i,抑制细胞凋亡的发生,提高细胞活性和线粒体膜电位,与缺氧/缺糖组相比均有显著性差异(P<0.05,P<0.01).结论丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制细胞凋亡的发生,这种作用可能与其能抑制神经细胞内钙超载有关.
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参麦注射液及人参皂苷Rb1、Rg1抗神经、血管内皮、星形胶质细胞缺氧/缺糖损伤的研究
目的研究参麦注射液及其成分人参皂苷Rb1、Rg1对神经、血管内皮、Ⅰ型星形胶质细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用,揭示参麦注射液脑保护作用的细胞机制,并初步确定其主要效应成分.方法培养神经、血管内皮、星形胶质三种细胞,含连二亚硫酸钠的无糖Earle's液模拟造成缺氧/缺糖损伤,台盼蓝染色、MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率评价药效.结果参麦注射液及其成分人参皂苷Rb1、Rg1对正常培养的三种细胞均无明显毒性损伤;与缺氧/缺糖再给氧损伤模型组比较,参麦注射液及人参皂苷Rb1、Rg1各组的LDH漏出率、细胞死亡率显著下降(P<0.001),细胞存活率显著提高(P<0.001～P<0.05).结论参麦注射液的脑保护作用机制与其对神经、血管内皮、Ⅰ型星形胶质三种细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用有关,人参皂苷Rb1、Rg1是其脑保护作用的主要效应成分;提示参麦注射液能够应用于中风病急性期的治疗.
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麝香酮对SH-SY5Y神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤的保护作用
目的:研究麝香酮对神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤的保护作用.方法:培养SH-SY5Y神经细胞.采用含连二亚硫酸钠的无糖Earle液模拟造成缺氧/缺糖和再给氧损伤;用苔盼蓝染色计数法测定细胞死亡率,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率,用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)原位双染法荧光显微镜检测细胞坏死率和细胞凋亡率,用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;并评价药效.结果:与正常对照组比较,缺氧/缺糖和再给氧损伤模型组细胞存活率显著下降[(100.0±4.4)%比(25.6±3.7)%],细胞死亡率[(5.0±2.2)%比(71.2±9.2)%]、坏死率[(2.6±1.2)%比(46.8±10.4)%]、凋亡率[(3.1±0.8)%比(16.0±4.9)%]、LDH漏出率[(20.1±5.8)%比(66.4±7.6)%]均显著升高(P均＜0.01).麝香酮各终浓度组的细胞存活率显著提高[(42.7±1.2)%～(47.8±1.7)%,P均＜0.01],细胞死亡率[(22.7±5.2)%～(36.1±5.9)%]、坏死率[(24.3±8.3)%～(28.9±8.7)%]、凋亡率[(7.8±3.1)%～(10.4±4.9)%]、LDH漏出率[(37.6±4.1)%～(40.6±2.4)%]均显著下降(P＜0.05或P＜0.01).结论:麝香酮对SH-SY5Y神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤具有显著的保护作用,提示麝香酮可能应用于中风病急性期的治疗.
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阿司匹林对缺氧/缺糖大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位的影响
目的 观察大鼠皮质神经元细胞在缺氧/缺糖(OGD)时线粒体膜电位(MMP)的变化及阿司匹林的保护作用.方法 取体外培养7 d的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为正常对照组、缺氧/缺糖模型组、缺氧/缺糖加阿司匹林组.缺氧/缺糖2 h后在常氧下继续培养24 h.流式细胞术检测不同时间段神经元细胞线粒体膜电位.结果 缺氧/缺糖损伤2 h,缺氧/缺糖组线粒体膜电位水平较正常对照组显著降低(P<0.01).缺氧/缺糖加阿司匹林组皮质神经元细胞在缺氧2 h及再复氧24 h后细胞线粒体膜电位明显高于缺氧/缺糖模型组(P<0.01).结论 阿司匹林可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生.
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复方白花前胡液对拟缺血诱导的神经细胞凋亡的影响及其机制研究
[目的]探讨复方白花前胡液对拟缺血诱导的神经细胞凋亡的影响及其作用机制.[方法]培养的细胞随机分为空白对照组、模型组、复方白花前胡液大剂量组、复方白花前胡液中剂量组,每组10孔.将培养的神经元细胞采用缺氧罐和无糖Earle's液进行缺氧/缺糖处理3 h,再复氧复糖24 h后,显微镜下观察培养的海马神经元细胞的形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并分别检测乳酸脱氢酶含量及细胞游离钙的含量.[结果] 1.复方白花前胡液中、高浓度实验组细胞凋亡率分别下降至(21.4±3.9)%、(23.6±2.8)%,与模型组相比差异有显著性意义 (P<0. 01).2.各复方白花前胡液组在不同时点LDH释放率与模型组相比降低明显,差异有显著性意义(P<0.05 ). 3.复方白花前胡液实验组与模型组比较缺氧/缺糖培养3 h,复氧复糖24 h胞内Ca2+浓度下降,差异有显著性意义(P<0.05).[结论]复方白花前胡液能使神经细胞具有抗缺氧/缺糖损伤作用.
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亚低温对缺氧缺糖星形胶质细胞活力的影响
目的 探讨亚低温对缺氧星形胶质细胞的保护作用.方法 原代培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,设亚低温组(34℃)和常温组(37℃),同时于缺氧缺糖条件下培养,在相应时间点观察细胞形态,并用台盼兰排染法检测细胞存活率,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活力.结果 亚低温组各项指标均优于常温组(P＜0.01).结论 亚低温对缺氧/缺糖星形胶质细胞具有保护作用.
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通脑灵对原代培养大鼠大脑皮层神经细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用
目的:研究缺氧/缺糖对皮层神经细胞的损伤及通脑灵颗粒剂对其保护作用.方法:取体外原代培养8d的大鼠大脑皮层神经细胞,换以低糖无血清培养基,并置于95%N2和5%CO2的缺氧罐中5 h造成神经细胞缺氧.用神经细胞存活率及神经细胞线粒体活性来评价神经细胞活力;用乳酸脱氢酶(LDH)漏出量作为评价损伤的指标.结果:原代培养皮层神经细胞缺氧5 h,再给氧24 h后,神经细胞存活率及线粒体活性明显降低,LDH释放量显著增加.通脑灵颗粒剂可显著对抗缺氧/缺糖对皮层神经细胞的损伤,剂量依赖地抑制LDH释放量的增加.结论:通脑灵颗粒剂对皮层神经细胞缺氧/缺糖损仿具有保护作用.
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下调miR-205抑制皮质神经元的缺血性损伤
目的:探讨miR-205对皮质神经元缺氧/缺糖损伤的作用与其可能的作用机制.方法:大鼠大脑皮层神经细胞的分离培养和MAP2免疫荧光鉴定皮质神经元.缺氧/缺糖处理构建皮质神经元缺血性损伤模型.实时荧光定量PCR检测miR-205表达量.利用Lipofectamine2000转染miR-205 mimics,miR-205抑制剂或LRP-1 siRNA.试剂盒检测caspase-3活性.Annexin-Ⅴ fluorescein isothiocyanate conjugate and propidium iodide(Annexin-Ⅴ FITC/PI)方法检测细胞凋亡.MTT实验检测细胞生长活力.双荧光素酶报告基因检测miR-205与LRP-1的靶向调控关系.Western Blot检测LRP-1蛋白表达量.结果:MAP2鉴定为皮质神经元.皮质神经元缺氧/缺糖损伤下调miR-205表达量.细胞转染实验中,下调miR-205显著抑制损伤模型的细胞凋亡和caspase-3活性,提高细胞生长活力;过表达miR-205则作用相反.对于miR-205的靶向基因LRP-I,过表达miR-205可显著抑制LRP-1,而抑制miR-205其作用则相反.同时抑制miR-205和LRP-1促进损伤模型的细胞凋亡和caspase-3活性,降低细胞生长活力.结论:下调miR-205可以通过调控LRP-1抑制皮质神经元的缺血性损伤,为新生儿脑卒中的预防和治疗提供一定的理论基础.
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仙人掌多糖对大鼠海马神经细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用
目的：观察仙人掌多糖对体外培养大鼠海马神经细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用。方法建立缺氧/缺糖再给氧模型，模拟缺血再灌注损伤。流式细胞术检测凋亡细胞百分率，同时测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）和细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）含量。结果海马神经细胞缺氧/缺糖5 h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死，并显著增加LDH释放，降低细胞中SOD和GSH含量；仙人掌多糖预处理后能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率，同时，减少LDH的漏出、增加细胞中SOD和GSH的含量，并具有剂量依赖效应。结论仙人掌多糖能够减轻缺氧/缺糖再给氧所致大鼠海马神经细胞的凋亡作用，其机制可能与其增强机体的抗自由基抗氧化能力有关。
