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桔梗皂苷D诱导人肺癌细胞A549的凋亡及机制
目的:研究桔梗皂苷D(platycodin,PD)抑制人肺癌A549细胞株增殖和诱导凋亡的分子机制.方法:体外培养人肺癌细胞株A549,PD作用终浓度分别为5～ 20μmol·L-1.MTF法测定PD对细胞的增殖抑制作用,显微镜观察细胞的形态学变化,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,JC-1检测线粒体膜电位的变化,Western blot方法检测PD对Caspase-3,Caspase-9,PARP的剪切片段和Bax,Bcl-2,Bak,Bcl-xl蛋白表达的影响.结果:PD抑制A549细胞的增殖,并随药物浓度的增加和作用时间的延长,作用更显著；与对照组相比,不同浓度的PD作用24 h后,细胞凋亡率增加,线粒体膜电位降低,且差异显著.蛋白电泳检测结果显示蛋白Caspase-3,Caspase-9均出现剪切片断,并随着时间的增加断裂更明显.PD处理A549细胞后,Bax和Bak蛋白表达升高,Bcl-2和Bcl-xl蛋白表达下降.结论:PD具有明显的细胞毒作用,能诱导A549细胞凋亡,通过对Bax,Bak和Bcl-2,Bcl-xl表达的调控,导致线粒体膜电位的下降,进而激活Caspase终导致肺癌细胞死亡.
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定心方对大鼠缺氧及正常心肌细胞内钙、膜电位和线粒体膜电位的影响
目的：探讨定心方(DXR)抗心律失常的分子机理。方法：采用胰蛋白酶法分离培养心肌细胞，用不同荧光染料分别标记细胞，在激光共聚焦显微镜上测定DXR血清对心肌细胞内钙〔Ca2＋〕i、膜电位(MP)和线粒体膜电位(MMP)的变化。结果：缺氧使心肌细胞〔Ca2＋〕i和MMP升高，而使MP降低，DXR血清降低了正常和缺氧心肌细胞〔Ca2＋〕i，改善了缺氧引起的MP降低，使缺氧状态下MMP保持在基线水平。结论：DXR能通过抑制缺氧引起的〔Ca2＋〕i和MMP升高，及拮抗缺氧所致的MP降低，从而发挥保护心肌细胞，防治心律失常的作用。
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脉心康胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠肝细胞内Ca2+及线粒体膜电位的影响
目的观察脉心康胶囊对载脂蛋白E基因敲除[ApoE(-/-)]小鼠肝细胞内Ca2+浓度及线粒体膜电位的影响.方法采用胶原酶消化法分离ApoE(-/-)小鼠肝细胞,体外原代培养8天后,加入10%含药大鼠血清的培养液,48 h后以Flou-3和Jc-1为探针,应用激光共聚焦显微镜测量肝细胞内Ca2+浓度和线粒体膜电位.结果脉心康可明显降低ApoE(-/-)小鼠肝细胞内Ca2+浓度,与生理盐水及洛代他汀组比较差异有显著性(P＜0.01);同时,脉心康可明显提高ApoE(-/-)小鼠肝细胞线粒体膜电位(P＜0.01),脉心康的这两种作用无明显的剂量效应关系.结论脉心康可降低ApoE(-/-)小鼠肝细胞内Ca2+浓度,提高线粒体膜电位,从而调节脂代谢、对抗高脂血症及动脉粥样硬化的发生和发展.
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荷瘤小鼠扶正抑瘤颗粒含药血清对H22细胞的凋亡、自由基含量和线粒体膜电位的影响
目的 观察荷瘤小鼠扶正抑瘤颗粒(FYG)含药血清对H22细胞的凋亡、自由基含量和线粒体膜电位的影响.方法 应用流式细胞仪检测FYG含药血清对H22细胞凋亡情况的影响;应用激光共聚焦显微镜检测H22细胞DNA RNA、自由基含量和线粒体膜电位的变化.结果 FYG含药血清可引起H22细胞的凋亡,细胞DNA RNA和线粒体膜电位降低,自由基含量升高.结论 FYK含药血清引起H22细胞的凋亡可能与其影响H22细胞自由基含量和线粒体膜电位变化有关.
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高温诱导ECV-304细胞凋亡及对其线粒体膜电位的影响
有文献报道高温诱导细胞凋亡有两个独特的模型: 慢死亡和快死亡.慢死亡是指细胞受热后,在失去再生能力之前能够维持生理活动几天.快死亡是指细胞受热后几天内发生的死亡,其特征是细胞脱离其培养表面.关于快死亡的机制可能与热诱导细胞凋亡有关[1].目前随着对凋亡机制研究的深入,已从细胞质膜转向线粒体.线粒体是促进能量转换、参与细胞凋亡的重要细胞器.由于细胞膜上各种生物泵的作用,使细胞膜内外维持着不同梯度的离子浓度,产生了线粒体膜电位.几乎所有诱导剂引起的各种类型的细胞凋亡均出现线粒体膜电位下降,提示线粒体膜电位下降为早期凋亡[2] .本文建立一种高温诱导ECV-304细胞凋亡的方法,并应用流式细胞仪采用AV-FITC/ PI 双染法和荧光探针JC-1 法,对高温诱导ECV-304细胞凋亡及对其线粒体膜电位的影响进行分析.
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选择性线粒体分裂抑制剂抑制大鼠急性脊髓损伤后的细胞凋亡
目的 检测mdivi-1预处理对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后线粒体膜电位,凋亡诱导因子(AIF)释放及细胞凋亡的影响.方法 大鼠随机分为:假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)、二甲基亚砜预处理组(DMSO组),mdivi-1预处理组(mdivi-1组).采用Allen's方法制备ASCI模型.JC-1标记法检测线粒体膜电位(MMP),Western blot方法检测线粒体及细胞核内AIF,TUNEL法检测细胞凋亡.结果 与Sham组相比,SCI组线粒体中AIF先降低后升高,低点是8h(P＜0.01),而细胞核中AIF却呈相反趋势(P＜0.01),术后8 h MMP明显降低(P＜0.01),凋亡细胞数目明显增多(P＜0.01).与SCI 8 h组相比,mdivi-1组MMP明显升高(P＜0.01),线粒体中AIF明显增多(P＜0.01),细胞核中AIF明显降低(P＜0.01),凋亡细胞数目明显减少(P＜0.01).结论 Mdivi-1具有保护大鼠ASCI后MMP,抑制线粒体中AIF的释放和细胞凋亡的作用.
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糖尿病大鼠胃平滑肌细胞凋亡与线粒体膜电位改变
目的 揭示糖尿病胃轻瘫(DGP)发病机制.方法 SD大鼠随机分为对照组和模型组,造模10周后,模型检测;流式细胞术测细胞凋亡与△ψm;免疫组化测Cyt C.结果 与对照组相比:(1)模型组造模后均出现多尿、多饮、多食症状,体重减轻;血糖浓度显著增高(P<0.01);胃内色素残留率显著降低(P<0.01).(2)模型组胃平滑肌细胞凋亡率显著增高(P<0.01),△ψm显著降低(P<0.01),胞质Cyt C显著增加.结论 线粒体介导了糖尿病大鼠胃平滑肌细胞凋亡,后者在糖尿病胃轻瘫发病机制中扮演了一定角色.
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SD118-2对人HepG2细胞凋亡影响及机制探讨
目的 观察化合物SD118-2对人HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 取对数生长期人HepG2细胞,分为对照组和给药组.给药组分别给予7 mg/L SD118-2处理12、24和48 h,对照组给予相同浓度DMSO.用MTT法检测细胞增殖率,DAPI荧光染色法观察SD118-2处理后细胞形态,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率及周期阻滞,用流式细胞仪JC-1染色法检测线粒体膜电位(△Ψm),Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、PARP和C-PARP表达.结果 SD118-2呈时间依赖性抑制人HepG2细胞生长、降低线粒体膜电位、诱导细胞凋亡、阻滞细胞G2期；抗凋亡蛋白BCL-2表达呈时间依赖性减少,促凋亡蛋白BAX、C-PARP表达呈时间依赖性增加；SD118-2对正常肝脏细胞增殖几乎无影响.结论 化合物SD118-2具有诱导人HepG2细胞凋亡的作用,并能使细胞周期进程发生变化.
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靛红衍生物IF203通过线粒体途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡
目的 探讨靛红衍生物IF203诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及线粒体凋亡途径.方法 体外培养HepG2细胞,应用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;采用酸性磷酸酶法(APA)、流式细胞术(FCM)和免疫印迹法(Western blotting),检测IF203对HepG2细胞生长、细胞凋亡率、线粒体膜电位、Caspase-9、Caspase-3、细胞色素C表达的影响.结果 不同浓度IF203作用24h和48h时可抑制HepG2细胞生长; 光镜下观察10mg/L IF203作用24h 时HepG2细胞变圆、固缩;IF203诱导HepG2细胞凋亡率增加; IF203可以引起HepG2细胞线粒体平均荧光强度显著降低;凋亡相关基因蛋白Caspase-9表达下调,Caspase-3表达下调,细胞色素C表达上调.结论 IF203抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,通过干预线粒体途径诱导HepG2细胞发生凋亡.
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穿心莲内酯对人皮肤基底细胞癌A431细胞生长、凋亡及增殖细胞核抗原蛋白表达的影响
目的 探讨穿心莲内酯(AD)对人皮肤基底细胞癌A431细胞生长、凋亡及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响.方法 应用酸性磷酸酶(APA)法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染法、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,Rh123染色FCM检测细胞线粒体膜电位,免疫细胞化学法检测细胞PCNA蛋白表达.结果 AD呈时间、剂量依赖性抑制A431细胞生长增殖；且同一时间点50mg/L、100mg/LAD组与溶媒对照组相比差异显著(P＜0.05).AD组作用A431细胞24h时,部分细胞核染色质出现典型凋亡形态学改变.不同浓度AD作用A431细胞24h,早期凋亡率、晚期凋亡及坏死率均随AD浓度升高而逐渐增加,且50mg/L、100mg/L AD组与溶媒对照组相比差异显著(P＜0.05).AD作用A431 24h细胞内PCNA蛋白随AD浓度升高表达逐渐减少.AD作用A431细胞24h后,线粒体膜电位下降明显,与溶媒对照组相比较,50mg/L、100mg/LAD组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AD可明显抑制A431细胞生长增殖,其抑制细胞增殖可能与下调PCNA蛋白表达有关.AD能诱导A431细胞凋亡,其凋亡机制可能与细胞线粒体膜电位下降有关.
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枸橼醛在急性早幼粒细胞白血病细胞系K562中的作用
目的 探讨枸橼醛(citral)在急性早幼粒细胞白血病细胞系K562中的作用.方法 Citral作用于体外培养K562细胞系,分别用Wright-Giemsa染色观察细胞凋亡形态;MTT法计算细胞增殖能力;DNA电泳分析DNA碎片;Annexin V-FITC/PI分析细胞凋亡变化;RT-PCR法检测凋亡通路蛋白Bcl、Bax的表达水平变化;流式细胞术分析线粒体膜电位、Caspase-3和核因子(NF)-KB水平变化.结果 Citral以时间和剂量依赖性方式诱导K562细胞凋亡,citral能够诱导线粒体膜电位减少.证实citral诱发细胞凋亡是依赖线粒体途径.结论 Citral对白血病有潜在的治疗效果,有一定的临床应用前景.
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线粒体与细胞凋亡
细胞凋亡过程中许多重要事件的发生都与线粒体密切相关,包括Caspases激活因子的释放,如细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)、电子传递链的改变、线粒体膜电位(ΔΨm)的丧失、细胞内氧化还原状的改变、Bcl-2家族促进和抑制凋亡蛋白的参与等.
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黄粉虫抗菌肽促K562细胞凋亡作用及其机制的研究
为观察黄粉虫抗菌肽对K562细胞线粒体膜电位及K562细胞凋亡蛋白半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的影响,进而探讨黄粉虫抗菌肽否是影响线粒体膜电位以及是否可以引起K562细胞凋亡,本文首先采用荧光探针罗丹明123 标记K562细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察K562细胞中罗丹明123荧光强度,以细胞内荧光强度表示线粒体膜电位大小;其次用caspase-3检测试剂盒和酶标仪测定K562细胞caspase 3的含量.实验结果显示,抗菌肽组的K562细胞荧光强度显著低于对照组(t=5.635,P<0.05),说明黄粉虫抗菌肽可使K562细胞线粒体膜电位降低;抗菌肽组caspase 3的含量显著高于对照组(t=43.289,P<0.05),说明黄粉虫抗菌肽可以诱导K562细胞发生凋亡.结果表明,黄粉虫抗菌肽可以诱导K562细胞发生凋亡,作用机制是通过降低K562细胞线粒体膜电位,扰乱其生理功能,促使其凋亡.
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缺氧条件下效应型记忆型CD4＋T细胞功能的免疫代谢基础
效应型记忆型 CD4＋ T 细胞（effector memory CD4＋ T cell，EMCD4＋ T cell），在含氧量正常的血液和缺氧的组织间循环，进而识别同源抗原，发挥免疫功能。然而，这些细胞的线粒体是如何在氧气含量不断变化的情况下，维持细胞生物能量稳定和抵抗细胞凋亡的呢？本文作者针对这一科学问题进行了研究，作者发现，缺氧状态下，相较于初始 T 细胞，EM CD4＋ T 细胞能够保存更多的剩余呼吸能力，这令 EMCD4＋ T 细胞获得不依赖氧气的糖酵解储能，可以在氧气含量频繁波动的情况下维持线粒体膜电位和 ROS 水平，维持了细胞的存活、迁移和功能的发挥。
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米酵菌酸抑制细胞衰老凋亡作用的研究
目的 探讨米酵菌酸抑制细胞衰老凋亡作用和可能机制. 方法 不同生理浓度米酵菌酸在体外作用于人肝癌细胞HepG2细胞株,倒置显微镜下观察细胞形态变化;通过噻唑蓝(MTT)还原反应观察细胞增殖和活性;采用罗丹明/碘化丙啶(Rh123/PI)双染法,流式细胞仪(FCM)分析线粒体膜电位与细胞存活关系;碘化丙啶测定细胞周期,FCM分析细胞生长周期的变化. 结果 0.1～27.3 μmol/L米酵菌酸作用后的HepG2细胞存活率为107.8%～130.0%,空白组为100%,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞增殖率以及Rh123+PI-、Rh123-PI+、Rh123-PI-及Rh123+PI+百分率与空白对照组比较差异也有统计学意义(P＜0.01). 结论 米酵菌酸可以抑制HepG2细胞的衰老凋亡,使S+G2/M期细胞增多.
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家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽促K562细胞凋亡作用及其机制研究
目的 观察家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽对K562细胞核和线粒体膜电位及K562细胞凋亡蛋白半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的影响,进而探讨家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽是否可以影响线粒体膜电位及促进K562细胞凋亡.方法 首先采用Hoechst33258荧光标记法,将家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞,用荧光显微镜检测K562细胞核荧光强度的变化；其次采用荧光探针罗丹明123标记K562细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察K562细胞中罗丹明123荧光强度,以细胞内荧光强度表示线粒体膜电位大小；后用caspase-3检测试剂盒和酶标仪测定K562细胞caspase-3的含量.结果 采用Hoechst33258荧光标记法,用荧光显微镜观察到家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞后部分细胞核的荧光强度增强,说明其可以引起K562细胞发生凋亡；用罗丹明123标记,激光共聚焦显微镜观察发现,家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用组的K562细胞荧光强度值明显低于对照组(t1=21.30,t2=196.23,P＜0.05),说明家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽可以使K562细胞线粒体膜电位降低；峰5、峰8组分作用组caspase-3的含量明显高于对照组(t1=146.92,t2=189.56,P＜0.05),说明3龄幼虫抗肿瘤肽可以促进K562细胞发生凋亡.结论 家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽峰5、峰8组分对K562细胞核具有损伤作用,可以引起K562细胞发生凋亡,作用机制是通过降低K562细胞线粒体膜电位,激活caspase-3,扰乱其生理功能,促使其凋亡.
关键词： 抗肿瘤肽 荧光标记法 线粒体膜电位 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 凋亡 -
西达本胺对人B淋巴瘤细胞株的作用及其机制研究
本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)西达本胺对3种B淋巴瘤细胞株Raji(Burkitt淋巴瘤)、Maver及Z-138(套细胞淋巴瘤)的抑制增殖和诱导凋亡的作用及其机制.以不同浓度的西达本胺及不同时间作用于体外培养的3种B淋巴瘤细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖；流式细胞术检测细胞的凋亡及线粒体膜电位；Western blot方法检测细胞内组蛋白H3、H4乙酰化水平及caspase-3蛋白的表达.结果表明,西达本胺可抑制这3种B淋巴瘤细胞的增殖,其抑制作用具有一定的时间和浓度依赖性,尤其能较早较快地抑制Z-138细胞的增殖；另外,西达本胺还可诱导3种B淋巴瘤细胞发生凋亡并引起细胞线粒体膜电位下降,Maver及Z-138细胞对西达本胺较Raji细胞更为敏感；西达本胺可以提高细胞内组蛋白H3、H4乙酰化水平及Maver和Z-138细胞的caspase-3活性.结论:西达本胺能够抑制B淋巴瘤细胞株的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与西达本胺上调组蛋白H3、H4乙酰化水平,触发线粒体凋亡途径及活化caspase-3有关.
关键词： 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 西达本胺 B淋巴瘤细胞株 线粒体膜电位 组蛋白乙酰化 -
薏苡仁诱导急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡及其机制
本研究探讨薏苡仁油对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖和凋亡效应及其作用机制.分别用0.4,0.8,1.6 mg/ml的薏苡仁油作用Jurkat细胞24小时,用CCK法检测细胞增殖,应用Hoechst 33258染色、P1及PI/Annexin V染色后流式细胞仪来检测细胞凋亡,然后采用JC-1染色分析线粒体膜电位.结果表明:0.8和1.6mg/ml的薏苡仁油能显著抑制Jurkat细胞增殖;随着薏苡仁油浓度的增加,凋亡细胞数目增多,线粒体膜电位降低.结论:薏苡仁油对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞有明显的抗增殖和促凋亡作用,而且此效应与线粒体膜电位降低有关,本研究结果为临床应用薏苡仁油治疗白血病提供了实验依据.
关键词： 薏苡仁油 急性T淋巴细胞白血病 Jurkat细胞 细胞凋亡 线粒体膜电位 -
硝普钠诱导K562细胞凋亡机制的研究
为了研究外源性一氧化氮供体硝普钠诱导K562细胞凋亡机制,将不同浓度的硝普钠与K562细胞在体外培养,同时设高铁氰化钾(PFC)对照组和空白对照.用Annexin-V/PI双标记、DNA片段原位末端标记法、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析等方法检测细胞凋亡;用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位(△ψm);以双氢罗丹明123(dihydrorhodamin123,DRH)和2',7':-二氯双氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)为荧光探针,测定线粒体内和细胞胞质内过氧化物;用流式细胞术测定线粒体膜蛋白和bcl-2、bax、bad、p53和Fas凋亡调控基因蛋白.结果表明:K562细胞经硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加,annexin-V/PI和DNA片段原位末端标记表达增加,这些结果均证实NO能诱导K562细胞凋亡,大部分细胞阻滞于G0/G1期.硝普钠诱导K562细胞凋亡过程中,胞质和线粒体内活性氧自由基增加,线粒体跨膜电位降低,bcl-2基因蛋白表达下调,同时bax、bad、p53、Fas和线粒体膜蛋白表达均上调.结论:NO诱导k562细胞凋亡是通过产生活性氧自由基,使p53基因表达增加,下调bcl-2基因和使bax、bad基因表达上调,线粒体膜通渗性转运孔开放,△ψm降低来实现的,此外还存在Fas系统激活途径.
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线粒体DNA在百草枯中毒机制中的作用
目的 利用体外实验研究线粒体DNA (mtDNA)在百革枯(PQ)致病机理中的作用.方法 首先用PQ处理人Ⅱ型肺泡上皮细胞(A549细胞),应用CCK-8法检测细胞生存率,然后利用绝对定量PCR的方法检测培养上清液中mtDNA的含量,以激光共聚焦成像法检测线粒体膜电位来验证PQ对线粒体的损伤作用.接着通过Transwell趋化实验检测mtDNA对入外周血单个核细胞(PBMC)及中性粒细胞(PMN)的趋化活性,并用流式细胞术确定趋化细胞的亚型.同时应用Xcelligence系统和体外血管通透性试剂盒检测了mtDNA对血管通透性的影响.后验证mtDNA在细胞增殖方面的作用.结果 PQ致A549细胞损伤的半数致死浓度为600 μmol/L,且A549细胞的生存率及对线粒体的损伤存在浓度和时间依赖关系(P＜0.05).PQ致细胞损伤释放出的mtDNA可以非特异地趋化单核细胞,但在血管通透性方面没有影响.并且mtDNA不能直接刺激人成纤维细胞的增殖,但可以引起主要的促纤维化因子TGF-β1的增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 PQ损伤细胞释放的mtDNA在PQ所致炎症及增殖反应中起着重要的作用.
