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高效液相色谱-二极管阵列检测器测定食品中米酵菌酸残留
本实验利用高效液相色谱-二极管阵列检测器测定食品中米酵菌酸残留,比较了不同提取剂和萃取剂的提取效率.结果表明:在乙腈、水的比例为20:80的乙腈水中提取效率高;在不同萃取剂中,正己烷的提取效率佳,固态样品的回收率达到90.2%,而液态样品的回收率达到96.7%.
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米酵菌酸的生物合成及其机制研究进展
米酵菌酸(BA)是一种可引起致死性食物中毒的脂类毒素,由于其高致死性而备受关注.过去大量研究集中于米酵菌酸的毒理作用、检测方法以及产毒菌株产生米酵菌酸的条件等,而其生物合成过程及其机制仍不明确,有待深入研究.从20世纪70年代开始特别是近年来,米酵菌酸又被用作线粒体通透性转换孔的抑制物而广泛应用于细胞凋亡、损伤方面的研究.
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唐菖蒲伯克霍尔德菌椰毒致病型菌株Co14毒力相关基因解析
目的 了解1株引起致死性食物中毒事件的唐菖蒲伯克霍尔德菌椰毒致病型菌株Co14的全基因组序列特征,对其基因组中米酵菌酸(BA)和毒黄素(TF)的生物合成相关基因进行了预测和分析.方法 通过第三代高通量测序技术(PacBio)对Co14进行全基因组测序,使用BLAST软件预测BA和TF的生物合成相关基因.结果 Co14基因组中含有2个闭合的环状染色体,大小分别为4.1和4.0 Mb,鸟嘌呤和胞嘧啶所占比例(GC含量)分别为67.82％和68.32％.Co14基因组中还携带有一个146 kb的闭合环状质粒,GC含量为63.25％,编码149个基因.通过同源序列比对,在Co14染色体1上发现了BA和TF的生物合成相关基因簇bonR1 R2LJKFGABDEHIM和toxRABCDE.结论 Co14全基因组数据为研究唐菖蒲伯克霍尔德菌食物中毒菌株的致病性和毒力因子产生机制奠定了遗传学基础.
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云南省文山州广南县吊浆粑食物中毒事件的病原学分析
目的 分析云南省文山州广南县一起吊浆粑食物中毒事件,鉴定引起中毒的致病因素.方法 在流行病学调查的基础上,对采集的4份食物样品参照GB/T 4789.29-2003进行微生物常规培养,对其中分离的疑似目标菌株进行VITEK 2 COMPACT生化鉴定和16S rRNA序列比对,并时样品进行动物中毒试验,采用液相色谱-质谱联用方法对样品中的米酵菌酸进行定量分析.结果 分离的3株食源性致病菌的16S rRNA序列比对和VITEK 2COMPACT生化鉴定结果均为唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli),均可产毒使小鼠死亡,且样品中米酵菌酸含量超标,产毒量高达9.67 mg/kg.结论 该食物中毒事件是由唐菖蒲伯克霍尔德菌污染吊浆粑,产生大量米酵菌酸所致.从试验过程和结果分析,该菌株应为我国命名的椰毒假单胞菌酵米面亚种(Pseudomonas cocovenenans subsp.farinofermentans).
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椰毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒的病原分离鉴定
目的 通过对食物中毒病原菌的分离鉴定,为查明中毒原因提供科学依据.方法 分离鉴定和毒性试验按照国家标准方法WS/T 12-1996《椰毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒诊断标准及处理原则》和GB/T 4789.29-2003《食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》进行.米酵菌酸检测按照GB/T 11675-2003《银耳卫生标准》执行,采用液相色谱-质谱联用法对样品开展检测.结果 经VITEK 2 COMPACT全自动微生物生化鉴定仪和基因指纹鉴定仪进行鉴定,4份样品中3份鉴定结果为唐菖蒲伯克霍尔德菌,小鼠毒性试验阳性.4份样品均检测出米酵菌酸.结论 本次食物中毒源于食源性椰毒假单胞菌酵米面亚种污染.
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米酵菌酸抑制细胞衰老凋亡作用的研究
目的 探讨米酵菌酸抑制细胞衰老凋亡作用和可能机制. 方法 不同生理浓度米酵菌酸在体外作用于人肝癌细胞HepG2细胞株,倒置显微镜下观察细胞形态变化;通过噻唑蓝(MTT)还原反应观察细胞增殖和活性;采用罗丹明/碘化丙啶(Rh123/PI)双染法,流式细胞仪(FCM)分析线粒体膜电位与细胞存活关系;碘化丙啶测定细胞周期,FCM分析细胞生长周期的变化. 结果 0.1～27.3 μmol/L米酵菌酸作用后的HepG2细胞存活率为107.8%～130.0%,空白组为100%,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞增殖率以及Rh123+PI-、Rh123-PI+、Rh123-PI-及Rh123+PI+百分率与空白对照组比较差异也有统计学意义(P＜0.01). 结论 米酵菌酸可以抑制HepG2细胞的衰老凋亡,使S+G2/M期细胞增多.
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椰酵伯菌毒黄素的研究进展
椰毒伯克霍尔德菌是引起酵米面和银耳食物中毒的病原菌,毒黄素是此菌产堡的一种毒素,近年来对毒黄素的分离提取进行了相关报道,其中毒机制从对呼吸链电子传递体的旁路作用、抑制乳酸脱氢酶同工酶活力、对动脉平滑肌张力的影响以及微核技术测其诱变买验的研究等不同角度进行了研究,另有研究发现用电子自旋共振技术观察毒黄素能够损伤小鼠组织和人血细胞自由基,本文就毒黄素的化学提取分离、中毒机制以及生理生化活性的研究进展进行综述.
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米酵菌酸中毒小鼠顶叶皮质超微结构观察
目的观察米酵菌酸对小鼠顶叶皮质毒性作用的超微结构改变,探讨米酵菌酸的中毒作用机理.方法小鼠腹腔注射米酵菌酸,2 h后取其大脑皮质,常规透射电镜样品制备,电镜观察其组织的超微结构.结果米酵菌酸主要损伤皮质神经元、胶质细胞和毛细血管内皮细胞的线粒体、粗面内质网及突触等结构.可见线粒体肿胀,嵴断裂或消失,部分线粒体髓样变和空泡变性;粗面内质网数量减少;核周间隙局部增宽;血脑屏障毛细血管周间隙扩张,呈空亮的囊泡样结构,内皮细胞微绒毛减少;突触小泡减少.结论米酵菌酸可造成脑组织亚细胞结构的损伤,为米酵菌酸中毒引起的神经中毒机理提供形态学依据.
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固相萃取-高效液相色谱法测定食品中米酵菌酸含量
目的 建立固相萃取-高效液相色谱方法测定食品中米酵菌酸含量.方法 样品经氨水-甲醇超声提取,上清液经固相萃取柱净化后,进高效液相色谱仪采用C18色谱柱分离,检测波长267 nm,外标法定量.结果 米酵菌酸在0.3～40.0 μg/ml质量浓度范围内线性关系良好,为0.999 4,加标回收率在94.6％ ～ 104.4％之间,相对标准偏差均＜3.0％,检出限为0.005 mg/kg.结论 该方法具有灵敏度高、准确度高、样品前处理简单等优点,可满足食品中米酵菌酸含量的检测要求.
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米酵菌酸对培养人膀胱癌细胞超微结构的影响
目的:探讨米酵菌酸对人膀胱癌细胞毒性、杀伤作用及其超微结构的影响.方法:将不同浓度的米酵菌酸加入培养的人膀胱癌细胞,24 h后,用光镜、透射电子显微镜分析其形态学改变.结果:光镜下可见米酵菌酸低浓度组细胞体积变小,核浆比增大,培养液中死亡细胞增多;高浓度组细胞体积进一步变小,核浆比进一步增大,细胞生长受到显著抑制.电镜下多数线粒体嵴断裂、空泡样变和髓样变;核染色质边集,核周隙增宽;粗面内质网脱颗粒.结论:米酵菌酸对人膀胱癌细胞形态及超微结构有显著影响.
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米酵菌酸中毒小鼠肝细胞的形态学改变
目的观察米酵菌酸对小鼠肝细胞毒性作用的形态学改变并探讨其中毒机制.方法小鼠腹腔注射不同剂量的米酵菌酸,2h后取其肝组织,通过光镜和电镜观察其细胞结构的改变.结果光镜下见米酵菌酸致小鼠肝细胞空泡样变性.电镜下可见肝细胞的线粒体肿胀,内嵴断裂、模糊或消失,基质局部或全部空亮,呈囊泡样变,偶见其中含髓样小体,且线粒体内嵴和膜结构的病变随米酵菌酸剂量的增加而加重.结论米酵菌酸对小鼠肝细胞的毒性作用以线粒体的损伤较为突出,线粒体内膜的破坏是小鼠中毒死亡的重要原因之一.
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米酵菌酸的研究进展
米酵菌酸(Bongkrekic acid,BA)是椰毒假单胞菌产生的一种毒素,食入该毒素污染的食物可引起人或动物中毒,重者可致死亡.
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一起椰毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒分离鉴定方法的改进
目的 为椰毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒的实验室分离鉴定寻找更快速、准确的方法.方法 采用增菌和不增菌2种方法,比较菌落生长情况;PDA平板添加或不添加抗生素,比较平板分离效果.结果 不论增菌还是不增菌,PDA平板目标菌的数量无差异,经过增菌的平板杂菌比不增菌的数量多;添加与不添加抗生素的平板目标菌生长速度无差异,添加抗生素的平板菌落比不添加的略大,椰酵假单胞菌生长更纯.结论 在椰毒假单胞菌酵米面亚种的鉴定过程中,同时开展增菌和不增菌培养,既可节约时间、成本,又避免漏检,提高了检出率;PDA平板添加2种抗生素,使培养基选择性更强,菌落特征显著.
