首页 > 文献资料
-
姜黄挥发油对皮肤鳞癌A431细胞增殖及凋亡的影响
为研究姜黄挥发油(turmeric volatile oil,TVO)对皮肤鳞癌(CSCC) A431(以下简称A431)细胞增殖及凋亡的影响并探讨其机制,该实验采用不同质量浓度(5 ～80 mg·L-1)TVO体外作用于A431细胞,利用细胞增殖/毒性检测试剂盒(celcounting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖活性;倒置显微镜观察细胞形态变化;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染色荧光显微镜观察A431细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)表达量.结果显示,随TVO质量浓度的增加对A431细胞生长具有显著的抑制增殖作用,呈剂量依赖关系,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,不同质量浓度TVO组均出现细胞皱缩及细胞破碎现象,细胞凋亡率增加,并呈剂量依赖性,caspase-3,caspase-9的相对表达量上调,各组间差异有统计学意义(P＜0.05),提示了TVO能抑制皮肤鳞癌A431细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与上调caspase-3,caspase-9的表达有关.
关键词： 姜黄挥发油 A431细胞 细胞凋亡 线粒体途径 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 -
穿心莲内酯对人皮肤基底细胞癌A431细胞生长、凋亡及增殖细胞核抗原蛋白表达的影响
目的 探讨穿心莲内酯(AD)对人皮肤基底细胞癌A431细胞生长、凋亡及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响.方法 应用酸性磷酸酶(APA)法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染法、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,Rh123染色FCM检测细胞线粒体膜电位,免疫细胞化学法检测细胞PCNA蛋白表达.结果 AD呈时间、剂量依赖性抑制A431细胞生长增殖；且同一时间点50mg/L、100mg/LAD组与溶媒对照组相比差异显著(P＜0.05).AD组作用A431细胞24h时,部分细胞核染色质出现典型凋亡形态学改变.不同浓度AD作用A431细胞24h,早期凋亡率、晚期凋亡及坏死率均随AD浓度升高而逐渐增加,且50mg/L、100mg/L AD组与溶媒对照组相比差异显著(P＜0.05).AD作用A431 24h细胞内PCNA蛋白随AD浓度升高表达逐渐减少.AD作用A431细胞24h后,线粒体膜电位下降明显,与溶媒对照组相比较,50mg/L、100mg/LAD组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AD可明显抑制A431细胞生长增殖,其抑制细胞增殖可能与下调PCNA蛋白表达有关.AD能诱导A431细胞凋亡,其凋亡机制可能与细胞线粒体膜电位下降有关.
-
白黎芦醇对人表皮样癌细胞端粒酶活性及其增殖、凋亡的影响
目的观察白藜芦醇诱导人表皮样癌A431细胞的凋亡情况,并探讨其对端粒酶活性和hTERT基因蛋白表达的影响.方法以不同浓度的白藜芦醇处理A431细胞,显微镜观察细胞的形态学改变；MTT法检测细胞增殖情况；采用TRAP-PCR-ELISA法测定A431细胞的端粒酶活性；蛋白质印迹法检测A431细胞hTERT蛋白水平.结果在白藜芦醇诱导A431细胞凋亡的过程中对端粒酶活性有显著抑制作用,且随着其浓度增加而抑制作用越强；白藜芦醇能降低A431细胞hTERT蛋白的表达,且呈浓度依赖性.结论白藜芦醇能下调hTERT蛋白表达,抑制A431细胞端粒酶活性,这可能是白藜芦醇抑制A431细胞增殖的重要机制之一.
-
砷化合物致人表皮癌A431细胞的毒性及氧化应激和砷代谢研究
目的 探讨不同砷化合物致人表皮癌细胞(A431)的细胞毒性及氧化应激和砷代谢的情况.方法 培养的A431细胞分别暴露于0.05～50.0 μmol/L一甲基亚胂酸(MMAⅢ),0.05～200.0 μmol/L三氧化二砷(As2O3,As3+),0.5～500.0μmol/L砷酸氢二纳(As5+)和二甲基胂酸钠(DMAV)24 h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞生存率;检测砷化物对丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响;以流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS);以原子荧光分析方法检测细胞内外不同形态砷含量.结果 在一定剂量范围的MMAⅢ(≥5.0 μmol/L)、As2O3(≥200.0 μmol/L)、砷酸氢二钠(0.5,≥200.0 μmol/L)和二甲基胂酸钠(500.0μmol/L)能够显著降低A431的细胞生存率(P＜0.05,P＜0.01),而在低剂量时,四种砷化物能显著促进A431细胞增殖(P＜0.05,P＜0.01).与对照组相比,50.0μmol/L MMAⅢ组,50.0、250.0 μmol/LAs2O3组,0.5 μmol/L砷酸氢二钠组MDA含量均显著升高(P＜0.05,P＜0.01),而250.0 μmol/L砷酸氢二钠和5.0～250.0μmollL二甲基胂酸钠组MDA含量均显著降低(P＜0.05,P＜0.01).与对照组相比,0.5、50.0 μmol/L MMAⅢ组,5.0～250.0μmol/L砷酸氢二钠组和0.5～500.0 μmol/L二甲基胂酸钠组的SOD活力显著升高(P＜0.05,P＜0.01).细胞内活性氧含量依次为0.5 μmol/L MMAⅢ＞50.0 μmol/L As2O3＞100.0 μmol/L砷酸氢二钠＞100.0 μmol/L二甲基胂酸钠.低剂量As2O3、砷酸氢二钠组细胞内砷甲基化率高于高剂量组,且As2O3组甲基化率高于砷酸氢二钠.结论 在本实验条件下,不同砷化物在低剂量促进A431细胞增殖,高剂量抑制增殖,可能与A431细胞的氧化应激和砷代谢有关.
-
EGF对A431细胞中MMP-12表达的调节
基质金属蛋白酶(MMPs)和表皮生长因子(EGF)与肿瘤的发生和转移有密切关系,为了研究EGF对MMP-12的调节机制,我们用不同浓度的EGF处理人表皮癌细胞(A431细胞)后,观察MMP-12的表达变化.结果显示使用不同浓度EGF处理A431细胞后,MMP-12的mRNA和蛋白水平均有所升高.因此,在A431细胞中,EGF通过上调MMP-12的表达可能会促进肿瘤的侵袭和转移.
-
姜黄挥发油联合顺铂对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响及机制
目的 探讨姜黄挥发油(TVO)联合顺铂对人皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)A431细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法 取对数生长期A431细胞,用5、10、20、40、80 mg/L TVO处理,对照组用含有1％二甲基亚砜(DMSO)的DMEM高糖培养基处理,24 h后,CCK8法检测细胞增殖情况.另取部分A431细胞,分为4组,分别用含1％ DMSO的DMEM高糖培养基(对照组)、40 mg/L TVO(TVO组)、10 mg/L顺铂(顺铂组)、40 mg/L TVO和10 mg/L顺铂(TVO+顺铂组)处理24 h后,利用CCK8法检测细胞增殖活性;倒置显微镜观察细胞形态变化;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染色荧光显微镜观察细胞凋亡情况;比色法检测Caspase-3、Caspase-9酶活性;Western印迹检测Caspase-3、P糖蛋白表达.结果 5、10、20、40、80 mg/L TVO作用A431细胞24 h,对细胞增殖抑制率分别是(12.83±6.4)％、(16.27±11.4)％、(21.61±9.1)％、(33.11±2.0)％和(46.00±3.3)％,与对照组(4.03±1.4)％比较差异均有统计学意义(P＜ 0.05);24 h时抑制50％细胞增殖的TVO浓度为(61.66±1.03) mg/L;TVO组、顺铂组及TVO+顺铂组细胞增殖抑制率显著上升,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),联合用药有协同作用,联合指数(CI)为1.366(P＜ 0.05).TVO组、顺铂组细胞均不同程度变圆并出现凋亡,TVO+顺铂组细胞明显减少,出现大量细胞碎片.TVO组、顺铂组及TVO+顺铂组细胞Caspase-3酶活性分别是1.117±0.095、1.381±0.089、1.520±0.115,Caspase-9酶活性分别是1.259±0.059、1.829±0.171、2.760±0.297,Caspase-3蛋白表达量分别是1.156±0.006、1.296±0.021、1.482±0.016,P糖蛋白表达量分别是1.311±0.011、1.169±0.012、0.528±0.014,其中TVO+顺铂组细胞Caspase-3、Caspase-9酶活性及Caspase-3蛋白表达量显著高于TVO组和顺铂组,P糖蛋白表达量显著低于TVO组和顺铂组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 姜黄挥发油与顺铂联用可协同抑制人皮肤鳞癌A431细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与活化Caspase系统并降低P糖蛋白表达相关.
-
氨基酮戊酸光动力疗法对鳞状细胞癌细胞株A431蛋白激酶D1及其磷酸化位点的影响
目的 研究氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对皮肤鳞状细胞癌A431细胞蛋白激酶D1(PKD1)的影响,探讨ALA-PDT诱导A431细胞凋亡的机制.方法 体外培养A431细胞,用CCK-8法检测筛选出抑制作用强的ALA浓度和光动力照射(PDT)剂量组合.将对数期生长A431细胞随机分为不予任何干预的对照组、ALA组、PDT组及ALA-PDT组,观察4组细胞接受相应干预12、24、36、48 h后细胞增殖抑制率和增殖抑制作用强时间点的凋亡率.反转录PCR检测ALA-PDT作用A431细胞不同时间点后各组PKD1基因mRNA的表达.Western印迹法检测各组A431细胞中PKD1及其磷酸化位点Tyr463蛋白(pTyr463)、Ser916蛋白(pSer916)表达.结果 ALA浓度1.5 mmol/L、光照剂量2 J/cm2为佳剂量组合.4组细胞干预12、24、36、48 h的增殖抑制率差异有统计学意义(F=39.56,P＜0.05).孵育24 h时:ALA-PDT组细胞增殖抑制率(46.26％±1.25％)高于ALA组(14.65％±0.33％)、PDT组(14.96％±0.68％)和对照组(11.98％±0.32％),差异有统计学意义(均P＜0.05);ALA-PDT组细胞增殖抑制率高于12 h(P＜ 0.05);4组细胞凋亡率差异有统计学意义(F=16.32,P＜0.05),ALA-PDT组(41.92％±3.23％)高于对照组(4.67％±0.88％)、ALA组(7.02％±1.52％)和PDT组(8.37％±0.59％),均P＜ 0.05.ALA-PDT作用于A431细胞后0、6、12、24、36、48 h,细胞PKD1基因mRNA的相对表达量差异有统计学意义(F=22.24,P＜0.05),孵育24 h mRNA相对表达量低于0、6、12h(均P＜0.05),与36、48 h差异无统计学意义(均P＞0.05).4组A431细胞中pSer916表达量差异无统计学意义(F=1.53,P＞0.05),PKD1和pTyr463表达量差异有统计学意义(F值为10.04、8.27,均P＜ 0.05),ALA-PDT组PKD1、pTyr463的表达低于对照组、ALA组、PDT组(均P＜0.05).结论 PKD1可能参与ALA-PDT疗法诱导A431细胞凋亡的光化学反应进程,且可能是通过Tyr463位点活化促进癌变的发展.
-
西罗莫司和饥饿处理对人A431细胞自噬水平的影响
目的：探讨经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿处理对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431自噬水平的影响。方法分别将A431细胞和人宫颈癌细胞系HeLa分为对照组（单纯DMEM培养基处理）、二甲基亚砜（DMSO）组、20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、平衡盐溶液（EBSS）组。作用4 h后，Western印迹检测A431细胞和HeLa细胞自噬微管相关蛋白轻链3A/3B（LC3A/B）、重组人γ?氨基丁酸受体相关蛋白（GABARAP）的表达水平。吖啶橙染色分析细胞自噬体表达水平。结果 Western印迹检测显示，对照组与DMSO组A431细胞中LC3A/B?Ⅱ与LC3 A/B?Ⅰ比值差异无统计学意义（P>0.05）；20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、EBSS组LC3 A/B?Ⅱ与LC3 A/B?Ⅰ比值较对照组均明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。HeLa细胞Western印迹检测结果与A431细胞类似。双变量相关性分析显示，HeLa细胞中LC3A/B?Ⅰ与GABARAP表达呈正相关（r=0.869，95%CI：0.807~0.999，P=0.051），LC3A/B?Ⅱ与GABARAP表达呈负相关（r=-0.742，95%CI：-0.982~0.406，P=0.042）；A431细胞中LC3A/B?Ⅰ与GABARAP表达亦呈正相关（r=0.837，95%CI：-0.173~0.989，P=0.037），LC3A/B?Ⅱ与GABARAP表达呈负相关（r=-0.684，95%CI：-0.977~0.500，P=0.047）。吖啶橙染色显示，A431细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组（23.750%±0.260%）与EBSS组（32.450%±0.488%）同样高于对照组（15.987%±0.242%，均P <0.05）；HeLa细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组（33.307%±0.715%）和EBSS组（66.097%±1.141%）高于对照组（14.117%±0.295%，均P<0.05）。结论经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿能够上调A431细胞的自噬水平，GABARAP蛋白可能与LC3A/B高度相关。
-
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的表达抑制对A431细胞增殖和细胞周期的影响
目的研究葡萄糖?6?磷酸脱氢酶（G6PD）表达下调对皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）细胞增殖和细胞周期的影响。方法正常培养人永生化上皮细胞HaCaT、皮肤鳞癌SCL?1和A431细胞，采用Western印迹法检测细胞中G6PD蛋白的表达。当A431细胞生长至85%~90%融合时，将siRNA对照（siRNA对照组）和G6PD siRNA（G6PD siRNA组）分别转染A431细胞，未转染的A431细胞则为未转染组。Western印迹法检测3组不同处理的A431细胞中G6PD蛋白及细胞周期蛋白D1、CDK4的表达，CCK?8法检测3组A431细胞的增殖情况，流式细胞仪分析3组A431细胞周期的变化。结果正常培养的2株皮肤鳞癌SCL?1和A431细胞中G6PD蛋白的表达水平（分别为0.308±0.023和0.643±0.046）均显著高于HaCaT细胞（0.100±0.019），且A431细胞显著高于SCL?1细胞（均P<0.05）。A431细胞G6PD siRNA组G6PD、细胞周期蛋白D1和CDK4蛋白的表达（0.134±0.027、0.154±0.017、0.166±0.017）显著低于未转染组（0.425±0.029、0.344±0.024、0.330±0.020）和siRNA对照组（0.444±0.033、0.350±0.027、0.348±0.018），差异均有统计学意义（P<0.05）。G6PD siRNA组在24~96 h各时间点的细胞增殖活性均明显低于siRNA对照组和未转染组（P<0.001），而siRNA对照组与未转染组间细胞增殖差异无统计学意义（均P>0.05）。G6PD siRNA组G0/G1期A431细胞比例显著高于siRNA对照组及未转染组（P<0.001），而G6PD siRNA组S期A431细胞比例又显著低于siRNA对照组及未转染组（P<0.001）。结论G6PD可能在调控皮肤鳞癌细胞增殖和细胞周期中发挥重要作用。
-
小檗碱对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨小檗碱对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖及凋亡相关信号通路中Bax与Bcl-2表达的影响.方法 体外培养A431细胞,分别用含12.5、25、50、100 mg/L小檗碱的培养液(实验组)、含250 mg/L顺铂的培养液(阳性对照组)、正常培养液(空白对照组)作用于A431细胞12、24、48、72 h后,用噻唑蓝(MTT)法测定小檗碱对A431细胞生长的抑制作用;倒置显微镜观察小檗碱作用后细胞形态学改变;实时定量RT-PCR法检测小檗碱对A431细胞Bax和Bcl-2基因表达的影响;免疫荧光法分析Bax和Bcl-2的表达情况.采用SPSS 13.0软件进行多因素方差分析.结果 MTT结果显示,小檗碱对A431细胞的生长抑制作用随作用时间的延长而增强(F=510.927,P<0.001),随浓度的增加而增强(F=1118.312,P＜ 0.001),小檗碱浓度与作用时间的交互作用有统计学意义(F=70.239,P＜ 0.001),表明不同浓度小檗碱组各时间点的变化趋势不完全一致.倒置显微镜下可见,随着药物浓度增加,A431细胞密度减少,由多角形变为圆顿皱缩.实时定量RT-PCR结果表明,小檗碱作用后,随着时间或浓度的增加,Bax/Bcl-2 mRNA相对表达量增加,同一浓度小檗碱(25、50、100 mg/L)作用4、8、12h组间比较,差异均有统计学意义(F=226.231、1 300.636、4 325.139,P＜ 0.001).免疫荧光染色显示,小檗碱作用后A431细胞内Bax荧光增强,而Bcl-2减弱.结论 小檗碱对A431细胞的生长抑制作用呈时间和浓度依赖性,Bax和Bcl-2的表达改变可能是小檗碱诱导A431细胞凋亡的途径之一.
关键词： 小檗碱 癌 鳞状细胞 原癌基因蛋白质c-bcl-2 bcl-2相关X蛋白质 细胞凋亡 细胞增殖 A431细胞 -
ABCG2在人皮肤鳞状细胞癌组织及A431侧群细胞中的表达及意义
目的 探讨干细胞相关因子三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette transporter 2,ABCG2)在人皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)组织及A431侧群细胞中的表达.方法 培养人A431细胞,流式细胞仪分选侧群细胞,噻唑蓝(MTT)实验比较侧群、非侧群细胞生长的增殖能力,逆转录PCR检测ABCG2在两者中的表达.免疫组化MaxVision法检测人鳞癌组织中ABCG2表达情况.结果 A431细胞系中存在侧群细胞,约占总细胞数的1.1％.侧群细胞具有较强的生长能力以及克隆形成能力,侧群组和非侧群组24孔板内每孔克隆形成数分别为114.8±4.95和44.5±3.67(t=27.92,P＜0.01),且侧群细胞ABCG2 mRNA表达量明显高于非侧群细胞(t=5.22,P＜ 0.01).在人鳞癌组织中存在少量ABCG2阳性细胞,ABCG2蛋白主要表达在细胞胞质和胞膜上.结论 人鳞癌细胞A431中存在具有干细胞特性的侧群细胞,高表达ABCG2.ABCG2可作为鳞癌干细胞的表面标志物之一.
-
羟基磷灰石纳米粒子抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的机制
随着纳米技术的发展,纳米技术在临床诊治中的应用成为研究的热点.羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)纳米粒子在肿瘤治疗方面的研究日益深入,我们实验初步证实HAP纳米粒子对皮肤鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞株(A431)增殖具有一定的抑制作用,且抑制作用存在时间一浓度依赖关系,400 mg/L的HAP纳米溶胶对A431增殖的抑制作用强.在此基础上,探讨HAP纳米粒子抑制A431细胞增殖的可能机制,为HAP纳米粒子在皮肤鳞癌治疗中的应用提供实验依据.
-
羟基磷灰石纳米粒子对A431细胞增殖抑制作用的研究
目前对皮肤鳞状细胞癌的治疗一般首选外科手术切除,但对一些不适宜皮肤外科治疗的癌前病变以及某些特殊部位如口腔内、阴茎等处皮损面积较大的病变,现有的治疗手段疗效均不理想.已有学者研究发现,羟基磷灰石(hydroxya-patite,HAP)纳米粒子具有抗癌活性[1-2].本课题研究HAP纳米溶胶对皮肤鳞癌细胞株(A431)细胞增殖的影响,为应用HAP纳米粒子治疗皮肤鳞状细胞癌提供实验依据.
-
生存素小分子干扰RNA对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及生物学功能的影响
目的 探讨生存素小分子干扰RNA(siRNA)对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响.方法 培养的A431细胞分为3组:生存素siRNA组、阴性对照组和空白对照组,分别用50.0 nmol/L脂质体包裹的生存素基因序列特异性siRNA、无关序列siRNA阴性脂质体及预制囊泡转染.实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法分别检测A431细胞生存素mRNA及蛋白的表达.采用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪膜联蛋白V/碘化丙锭双染法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭力,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 转染后48 h,生存素siRNA组、阴性对照组、空白对照组A431细胞中生存素mRNA水平分别为0.56±0.15、0.88±0.37、0.90±0.43,蛋白表达水平分别为0.59±0.04、0.86±0.05、0.91±0.07,差异均有统计学意义(F=276.67、243.61,均P＜ 0.001),且生存素siRNA组生存素mRNA和蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05),而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义(均P＞ 0.05).重复测量方差分析显示,转染生存素siRNA能抑制A431细胞增殖(F=13.19,P=0.004),且生存素siRNA组A431细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组(均P＜ 0.05),而阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).转染后24 h,3组间A431细胞凋亡率差异有统计学意义(F=83.97,P=0.002),且生存素siRNA组A431细胞凋亡率显著高于阴性对照组(P＜0.05)和空白对照组(P＜ 0.05),而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).转染后48 h,生存素siRNA组G2/M期细胞比例显著高于阴性对照组(P＜0.05)和空白对照组(P＜0.05),而生存素siRNA组A431细胞迁移数及侵袭数均显著低于空白对照组(均P＜ 0.05)和阴性对照组(均P＜0.05).结论 生存素序列特异性siRNA能抑制A431细胞生存素基因表达和细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,提示生存素可成为皮肤鳞状细胞癌基因治疗的靶点.
-
依曲替酸诱导上皮鳞癌细胞凋亡及相关信号途径的改变
目的:研究依曲替酸诱导上皮鳞癌细胞凋亡及其分子机制.方法:用MTT法观察依曲替酸对A431细胞的生长影响,电镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰的出现,Annexin-V染色证实凋亡的发生.同时用逆转录PCR法观察,经依曲替酸作用不同的时间后,A431细胞中信号传导和转录激活因子3(STAT3)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p42/44丝裂原激活的蛋白激酶(p42/44MAPK)mRNA表达的改变;用蛋白印迹术,研究经依曲替酸作用不同的时间对A431细胞中磷酸化STAT3(p-STAT3)、CyclinD1蛋白表达的影响.结果:①随着依曲替酸作用时间的延长及剂量的增加,对A431细胞增殖的抑制作用增加.流式细胞仪检测显示,亚G1期凋亡峰明显增加,电镜观察和Annexin-V染色证实了凋亡的存在.②依曲替酸能明显抑制A431细胞中STAT3、CyclinD1 mRNA表达的改变,随着作用时间的延长,抑制作用增强,P＜0.05;并下调p-STAT3、CyclinD1蛋白的表达;下调p42/44MAPK mRNA的表达.③经依曲替酸作用后,A431细胞中CyclinD1 mRNA表达的下降与STAT3 mRNA表达的下降呈正相关,P＜0.05;p-STAT3、CyclinD1蛋白也同步下调,P＜0.05;而CyclinD1 mRNA表达的下降与p42/44MAPK mRNA的下调无相关性.结论:①依曲替酸具有抗上皮鳞癌细胞生长及诱导上皮鳞癌细胞凋亡作用.②依曲替酸抗上皮鳞癌细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡的机制,可能主要是通过调节JAK/STAT3信号途径而实现的.
-
颗粒蛋白前体在皮肤鳞癌A431细胞中的表达及其作用研究
目的 探讨颗粒蛋白前体(PGRN)在皮肤鳞癌A431细胞中的表达及其对生长转移的调控作用.方法 构建PGRN干扰细胞株,通过增殖(CCK-8)实验和侵袭(Trans-well)实验分别研究PGRN在皮肤鳞癌A431细胞的增殖和侵袭中的作用,探讨PGRN在皮肤鳞癌生长及转移中的意义.结果 成功构建了PGRN-shRNA-A431细胞株,并通过CCK-8实验和Trans-well实验验证了干扰PGRN后对皮肤鳞癌A431细胞的生长及侵袭具有抑制作用.结论 PGRN在皮肤鳞癌A431细胞中表达,并与皮肤鳞癌的发生、发展密切相关.
-
Caspase-3／Caspase-9活化与皮鳞癌1号方抑制A431细胞生长的关系研究
目的：研究 Caspase-3和 Caspase-9活化与皮鳞癌1号方抑制 A431细胞生长的关系。方法培养 A431细胞，用不同浓度的皮鳞癌1号方分别作用于 A431细胞；Hochest 染色检测细胞凋亡形态；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞色素 C 含量；比色法测定 Caspase-3和 Caspase-9活性。结果Hochest33258染色可见皮鳞癌1号方组 A431细胞发生核固缩、凋亡小体等典型的凋亡形态学特征；与对照组比较，Cytc 、Caspase-3、Caspase-9表达增加。结论Caspase-3和 Caspase-9的活化与皮鳞癌1号方可诱导 A431发生凋亡有关。
-
色素上皮衍生因子在A431细胞的表达及对其增殖的影响
目的：明确色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor, PEDF)在A431细胞的表达情况以及对其增殖影响。方法采用RT-PCR和Western-blot分别检测A431细胞PEDF mRNA和蛋白的表达；MTT方法检测PEDF对A431细胞增殖的影响。结果 A431细胞在mRNA和蛋白水平均可检测到PEDF的表达。此外，100ng/ml的PEDF可以抑制A431细胞的增殖。结论 PEDF抑制A431细胞增殖，有望用于皮肤鳞癌的治疗。
-
不同剂量ALA-PDT对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖的抑制作用
目的:确定5-氨基酮戊酸-光动力疗法对皮肤鳞状细胞癌A431细胞抑制的佳剂量.方法:体外培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株,应用MTT法检测不同ALA浓度(0.5、1、2 mmol/L)、不同PDT光照剂量(5、10、20、40 J/cm2)下A431细胞的增殖水平.结果:当ALA浓度为0.5 mmol/L时,光照剂量为5、10、20、40 J/cm2对A431细胞的抑制率分别为6%、10%、15%、18%;当ALA浓度为1 mmol/L时,光照剂量为5、10、20、40 J/cm2对A431细胞的抑制率分别为30%、52%、80%、82%;当ALA浓度为2 mmol/L时,光照剂量为5、10、20、40 J/cm2对A431细胞的抑制率分别为31%、54%、81%、82%.结论:ALA在浓度为1 mmol/L,光照剂量为20 J/cm2时,ALA-PDT对A431细胞增殖抑制效果达到佳.
-
Id-1 mRNA在人皮肤鳞状细胞癌A431细胞中的表达
目的:检测Id-1 mRNA在体外培养的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞中的表达.方法:采用RT-PCR法检测Id-1 mRNA在人皮肤鳞状细胞癌A431细胞和角质形成细胞中的表达.结果:Id-1 mRNA在A431细胞中高表达,而在人角质形成细胞中低表达或不表达.结论:Id-1 mRNA的高表达可能与皮肤鳞状细胞癌的发生有关.
