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碲化镉量子点对血管平滑肌细胞的损伤作用
目的 观察碲化镉量子点(CdTe QD)在体外对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)的损伤作用.方法CdTe QD(0.01~100 mg·L-1)与原代培养的大鼠胸/腹主动脉平滑肌细胞共孵育24 h,MTT法检测CdTe QD对细胞存活的抑制;钙黄绿素乙酰甲酯(calcein-AM)荧光染色观察CdTe QD对VSMC细胞活性的影响;DCFH-DA和JC-1染色、流式细胞术检测CdTe QD作用后细胞内活性氧(ROS)含量和线粒体膜电位的变化;流式细胞术检测细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测BCL-2和BAX蛋白表达变化.结果 MTT结果显示,CdTe QD 0.01~100 mg·L-1作用VSMC细胞24 h,细胞存活率降低(P<0.01),24 h IC50值为25.60 mg·L-1.Calcein-AM荧光检测发现,CdTe QD 0.1~25 mg·L-1作用后,VSMC细胞活性下降.DCFH-DA染色结果显示,CdTe QD 0.1~25 mg·L-1使细胞内ROS逐渐增加(P<0.05,P<0.01);JC-1染色结果表明,VSMC线粒体膜电位呈浓度依赖性降低(r=0.903,P<0.01).Western蛋白印迹结果表明,CdTe QD诱导抗凋亡蛋白BCL-2表达显著降低(P<0.01),促凋亡蛋白BAX表达显著上升(P<0.01);流式细胞术FITC-AnnexinⅤ染色结果显示,CdTe QD 0.1~25 mg·L-1作用24 h能显著促进VSMC细胞凋亡(P<0.05,P<0.01).结论 CdTe QD可诱导VSMC细胞凋亡,其机制可能与胞内ROS含量上升和线粒体介导的凋亡通路激活相关.
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灵芝多糖肽对自由基所致的腹腔巨噬细胞早期损伤的影响
目的以膜电位方法进一步研究灵芝多糖肽(GLPP)对自由基损伤的巨噬细胞线粒体的影响.方法以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂,建立小鼠巨噬细胞体外氧化损伤模型,以罗丹明123(Rh123)为荧光染色剂,以激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位改变.结果 tBOOH氧化剂可损伤线粒体膜,使线粒体膜电位降低,GLPP体内(100 mg·kg-1 ig 5 d)及体外给药(GLPP 10 mg·L-1)均可对抗tBOOH自由基损伤,可使因自由基损伤而降低的巨噬细胞线粒体膜电位恢复.结论 GLPP体内体外给药可减轻自由基损伤,使损伤的线粒体膜电位恢复.
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黄芪多糖对腹主动脉缩窄致大鼠心肌肥厚能量代谢紊乱的抑制作用
目的 探讨黄芪多糖(APS)对腹主动脉缩窄(AAC)致大鼠心肌肥厚的抑制作用及其机制.方法 大鼠采用结扎腹主动脉的方法制备AAC模型,1周后ig给予大鼠APS 200,400和800 mg· kg-1,每天1次,共11周.计算心脏质量指数(HMI)和左心室质量指数(LVMI)；测定左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室内压大升降速率(±dp/ dtmax),HE染色观察大鼠左室心肌形态学改变；测定左心室乳酸(LAC)、游离脂肪酸(FFA)含量；采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定心肌心钠素mRNA(ANPmRNA)表达；测定心肌细胞线粒体膜电位(MMP).结果 与假手术组相比,AAC模型组的大鼠,MMP明显降低,其他指标均显著增高.与模型组相比,APS 800 mg·kg-1组HMI,LVMI,LVSP,LVEDP和±dp/dtmax均显著降低(P＜0.05)；APS 400和800 mg·kg-1组ANP mRNA表达明显下降,MMP明显升高(P＜0.05)；APS 200,400和800 mg·kg-1组LAG水平明显降低(＜0.05).结论 APS能够有效抑制AAC大鼠心肌肥厚并改善其能量代谢紊乱,提高线粒体的活力.
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细胞内钙稳态失调在腺苷致肝癌HepG2细胞凋亡的作用
目的 探讨腺苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其与Ca2相关的机制.方法 CCK8法测定腺苷1.0,2.0,4.0和6.0 mmol·L-1分别作用24,36和48 h后对HepG2细胞存活的抑制率.腺苷1.0,2.0和4.0 mmol· L-1作用24 h后,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,双波长荧光分光光度法和激光共聚焦检测细胞内游离Ca2+浓度,流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位,实时荧光定量PCR及Western蛋白质印迹法分别检测m-钙蛋白酶、胱天蛋白酶4、Bax、Bak、胱天蛋白酶3基因和蛋白的表达.结果 腺苷可显著抑制HepG2细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性;随腺苷浓度由1.0,2.0增加到4.0 mmol·L-1,细胞凋亡率分别由(20.30±1.23)％和(28.50±2.32)％增至(38.10±4.09)％,并伴有细胞内游离Ca2+浓度增加1.17±0.02,1.28±0.03和(1.49±0.04)倍,以及线粒体膜电位下降,由703±53分别降至504 ±34,315 ±27和124±10(P＜0.01),同时m-钙蛋白酶、胱天蛋白酶4、Bax、Bak、胱天蛋白酶3 mRNA及蛋白表达水平明显增高(P＜0.05).结论 腺苷可通过提高细胞游离Ca2+水平,激活钙依赖蛋白,并激活内源性内质网应激胱天蛋白酶4信号转导途径而诱导HepG2细胞凋亡.
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一种新型二氢吡喃并[2,3-c]吡唑类衍生物的体外抑瘤作用及机制
目的 研究一种新型二氢吡喃并[2,3-c]吡唑类衍生物(36号化合物)的体外抑瘤作用及可能的分子机制.方法 MTT比色法检测36号化合物对人乳腺癌细胞Bcap-37,MCF-7和人肺癌细胞A549体外存活的影响,反转录荧光定量PCR法检测Bcap-37细胞凋亡相关基因p53,p21,Bax和NF-κB mRNA水平,流式细胞术检测Bcap-37细胞周期和细胞凋亡,JC-1荧光探针法测定Bcap-37细胞线粒体膜电位(MMP).结果 36号化合物对Bcap-37,MCF-7和A549细胞存活均表现出浓度依赖性抑制作用,其中对人乳腺癌细胞Bcap-37的半数抑制浓度(IC50)低,为(22.4±0.8)mg·L-1.与正常对照组相比,36号化合物在25 mg·L-1浓度下使Bcap-37细胞周期阻滞于G1期(P<0.01),早期凋亡细胞显著增加(P<0.01);在50 mg·L-1浓度下,使Bcap-37细胞凋亡相关基因p53,p21,Bax和NF-κB mRNA水平均显著升高(P<0.05,P<0.01);在10,25和75 mg·L-1浓度下,使Bcap-37细胞MMP明显降低(P<0.05,P<0.01).结论 36号化合物具有良好的体外抑瘤作用,可抑制Bcap-37细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制与细胞内线粒体通路和细胞外凋亡信号通路的激活相关.
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呋喃二烯对人胃腺癌MGC-803细胞凋亡的诱导作用
目的：研究呋喃二烯（FDE）在体外对人胃腺癌MGC-803细胞凋亡的诱导作用。方法 FDE 46.29~740.74μmol·L-1与MGC-803细胞孵育48 h，MTT法测定FDE对细胞存活的抑制率；FDE 92.58~370.32μmol·L-1与MGC-803细胞作用24 h，光镜下及Hoechst 33342荧光染色分别观察细胞形态和细胞凋亡，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期，罗丹明123染色和DCFH-DA荧光探针分别检测细胞线粒体膜电位的改变和活性氧的产生。结果 MTT结果表明，FDE 46.29~740.74μmol·L-1对MGC-803存活具有明显抑制作用，作用24，48和72 h时IC50分别为347.91，257.41和101.01μmol·L-1。流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双染结果显示，FDE在92.58~370.32μmol · L-1作用24 h，能显著促进MGC-803细胞凋亡（P<0.05）。细胞周期检测结果表明，FDE可使MGC-803细胞周期阻滞于S期。罗丹明123和DCFH-DA染色结果显示，当药物浓度为370.37μmol·L-1时，FDE使细胞内线粒体膜电位降低（P<0.05），对应荧光强度的细胞比例与对照组的比值为0.85∶1，使细胞内活性氧水平增加，活性氧水平为对照组的1.30倍（P<0.05）。结论 FDE可抑制人胃腺癌MGC-803细胞存活，并诱导其凋亡，其诱导凋亡的作用机制可能与激活线粒体凋亡通路、影响细胞周期和抑制DNA的生物合成相关。
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安宫牛黄丸通过诱导细胞凋亡和降低线粒体膜电位抑制肿瘤细胞增殖
目的 观察安宫牛黄丸的抗肿瘤作用,并探索其可能的作用机制.方法 安宫牛黄丸9,30,90,300和900 mg·L-1分别与人胃癌MGC-803和人肝癌BEL-7402细胞孵育24,48和72 h.采用噻唑蓝[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5(3-羧基甲基苯基)-2-(4-磺酸苯基)-2H-四氮唑)细胞毒实验MTS法和克隆实验观察安宫牛黄丸对MGC-803和BEL-7400细胞增殖的影响；应用Hoechst 33258/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡；荧光分光光度计检测线粒体膜电位.结果 安宫牛黄丸具有浓度依赖性地抑制肿瘤细胞增殖的作用.MTS法测定结果表明,安宫牛黄丸作用48和72 h对MGC-803细胞增殖具有抑制作用,浓度-效应相关系数分别为0.996(P =0.000)和0.756(P =0.004)；与BEL-7402细胞作用48和72 h的浓度-效应相关系数分别为0.732(P =0.030)和0.700(P =0.037).细胞克隆实验结果表明,安宫牛黄丸作用24h可浓度依赖性地抑制MGC-803细胞(r=0.914,P=0.011)和BEL-7402细胞(r=0.871,P=0.024)克隆形成.Hoechst 33258/PI染色和流式细胞仪检测结果表明,安宫牛黄丸900 mg·L-1作用24h可诱导MGC-803和BEL-7402细胞凋亡,细胞凋亡百分率分别达27.2％和19.7％.安宫牛黄丸900 mg· L-1作用后连续检测3 min,MGC-803和BEL-7402细胞的线粒体膜电位比对照组分别下降15.9％和15.0％.结论 安宫牛黄丸具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制与诱导细胞凋亡和降低肿瘤细胞线粒体膜电位有关.
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线粒体通透性转换在丁烯酸内酯细胞毒性中的作用
目的 研究线粒体通透性转换在丁烯酸内酯(BUT)细胞毒性中的作用.方法 HepG2细胞染毒BUT后,采用若丹明123荧光法测定线粒体膜电位(ΔΨm)的变化;线粒体膜通透性转换孔(MPTP)抑制剂环孢素A (CsA)预处理细胞后,采用MTT法测定线粒体膜通透性转换在BUT细胞毒性中的作用.结果 BUT能够浓度依赖性地降低ΔΨm,而巯基化合物谷胱甘肽、N-乙酰半胱氨酸和二硫苏糖醇则能明显抑制该效应.CsA预处理能够明显减轻BUT的细胞毒性.结论 BUT通过诱导HepG2细胞内氧化应激,导致MPTP的开放而终引起细胞死亡.
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亚硫酸氢钠穿心莲内酯对人肾小管上皮HK-2细胞的毒性作用
目的 探讨亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)对人肾小管上皮细胞HK-2的细胞毒性作用.方法 HK-2细胞在DMEM/F12培养液培养24 h后,在经ASB作用2h前,分别加入N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)10 mmol· L-1、2-氨基-4(丁基磺酸亚氨)-丁酸(BSO)2 mmol· L-1及30 min前分别加入过氧化氢酶(CAT)1000 U· L-1、环孢素A (CsA)50 μmol·L-1,再经ASB作用24 h,MTT法检测细胞存活率;用酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、总ATP酶(T-ATP)活性;流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS);Western蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶酶原3、Bcl-2、Bax和细胞色素c(Cyt c)蛋白的表达.结果 ASB呈浓度依赖性地抑制HK-2细胞增殖,作用24和48 h后IC5o值分别为19.1±3.6和(11.6±3.9)g·L-1.ASB 20 9·L-1处理HK-2细胞24 h后,G2/M期细胞由对照组的(23.3±1.0)％增至(37.0±0.8)％(P＜0.01).与正常对照组相比,ASB组LDH漏出率和ROS水平明显增加,MMP呈下降趋势;与ASB 20 9·L-1组相比,加入还原剂NAC后,细胞存活率和MMP水平明显增加(P＜0.05),LDH和ROS水平明显降低(P＜0.05);加入CsA后,细胞存活率显著降低(P＜0.01),LDH和细胞内ROS水平明显增加(P＜0.05).随着ASB浓度增加,HK-2细胞上清液中的MDA水平明显增加,GSH,SOD和T-ATP酶活性逐渐减弱;同时细胞内胱天蛋白酶原3、Bax和Cyt c蛋白表达升高.结论 ASB对HK-2细胞的毒性作用可能是通过干扰HK-2细胞线粒体能量代谢,改变细胞内氧化还原状态,耗竭细胞内GSH和SOD,导致细胞内ROS大量堆积,引发脂质过氧化作用,破坏细胞膜的通透性,导致Cyt c等凋亡因子从线粒体释放,进而引发细胞凋亡或坏死.
关键词： 亚硫酸氢钠穿心莲内酯 HK-2细胞 细胞凋亡 线粒体膜电位 活性氧 -
细胞凋亡的检测技术与方法
细胞凋亡在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键的角色.根据死亡细胞的形态学、生物化学和分子生物学特征,可以将凋亡细胞与坏死细胞区别开来.本文综述了常用的细胞凋亡检测技术与方法的基本原理,如形态学观察、荧光素染色、DNA阶梯、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活性的检测等,并对各种方法的优点及局限性做一简要比较.用透射电镜进行超微结构观察仍是鉴定细胞凋亡的金标准.在选择细胞凋亡检测方法时,要充分了解各种方法的原理和应用范围,进行综合考虑.多种检测方法的联合应用常可获得准确的结果.
关键词： 细胞凋亡 线粒体膜电位 荧光染料 流式细胞术 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
火木层孔菌桑黄对MPP+诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响
目的 评价火木层孔菌桑黄的水提物对MPP诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响.方法 采用PI染色分析细胞凋亡率,DAPI染色观察细胞核的形态变化,JC-l染色检测线粒体膜电位的变化,C-DCDHF-DA染色观察ROS生成的变化.结果 MPP+诱导后SH-SY5Y细胞凋亡率明显升高,线粒体膜电位明显下降,ROS生成明显升高;火木层孔菌桑黄作用后能明显降低细胞凋亡率,其中20、10μg·mL-1剂量组与MPP+组比较具有显著性差异;其对细胞凋亡后细胞核的形态变化具有一定的改善作用;其可以提升线粒体膜电位,其中20、10、5、2.5μg·mL-1剂量组与MPP+组比较具有显著性差异;其对ROS生成具有明显的抑制作用,其中20、10、5 μg·mL-1剂量组与MPP+组比较具有显著性差异.结论 火木层孔菌桑黄水提物对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有明显的抑制作用.
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异丹叶大黄素在体外对Cu2+介导的人低密度脂蛋白过氧化的抑制作用
目的研究异丹叶大黄素(Iso)对Cu2+介导的人低密度脂蛋白(LDL)过氧化及氧化LDL(ox-LDL)对小鼠巨噬细胞毒性的抑制作用.方法用序贯超离心法分离血脂正常的供血者血清LDL,分离的LDL 1 mg·mL-1 磷酸缓冲液(pH 7.4), 与10 μmol·L-1 CuSO4于37℃水浴温育10 h 以引起LDL过氧化,给药组预先加入不同浓度Iso,对照组加等量生理盐水,测定丙二醛(MDA)的生成量、维生素E的耗竭以及LDL电泳迁移率.另外测定用ox-LDL处理小鼠腹腔巨噬细胞线粒体的膜电位、吞噬刚果红及释放NO的量.结果 1-100 μmol·L-1 Iso 剂量依赖性地抑制Cu2+引起的人LDL氧化时MDA的生成量、维生素E的耗竭及电泳迁移率的升高.10 μmol·L-1 Iso能防止0.1 mg·mL-1 ox-LDL与小鼠腹腔巨噬细胞温育4 h 后线粒体膜电位的损伤、吞噬刚果红功能以及NO释放量的降低.结论 Iso在体外对Cu2+介导的LDL过氧化以及ox-LDL对小鼠巨噬细胞的毒性有保护作用.
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二氯醋酸钠激活C6细胞线粒体代谢途径的体外作用
肿瘤细胞线粒体代谢途径已成为抗肿瘤的关注点.二氯醋酸钠(DCA)是作用于线粒体的小分子物质,显示出一定的抗肿瘤作用.因此,本文考察DCA对C6脑胶质瘤细胞线粒体代谢途径的影响.实验结果显示,DCA可显著增加C6细胞丙酮酸脱氢酶(PDH)的活性、诱导C6细胞氧活性物质(ROS)的生成,显著降低C6细胞线粒体膜电位(MMP).上述结果表明,DCA可通过激活C6细胞线粒体代谢途径产生抗肿瘤作用.线粒体代谢途径将成为抗肿瘤治疗的新靶点.
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Liriodendrin对多巴胺所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用
目的 用多巴胺诱导的SH-SY5Y细胞凋亡模型,研究从小蜡树皮提取的单体化合物liriodendrin的神经保护作用.方法 应用MTT法检测liriodendrin对细胞存活率的影响.应用Annexin V-FITC与PI双染流式法检测liriodendrin对多巴胺诱导的细胞凋亡的影响.应用荧光染料DCFH-DA及Rhodamine 123对细胞内活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位(⊿ψm)进行了检测.此外,应用RT-PCR方法,对细胞内P53基因的转录水平进行了检测.结果 在经过10-8,10-7,10-6,10-5及10-4 mol·L-1 浓度liriodendrin处理后,细胞存活率与多巴胺处理组相比有显著性提高.流式细胞术结果显示liriodendrin具有显著的抗细胞凋亡作用.同时liriodendrin可明显改善多巴胺引起的⊿ψm下降,并可以逆转多巴胺诱导的ROS水平升高.此外,liriodendrin还可以降低多巴胺引起的P53基因转录水平的升高.结论 Liriodendrin对多巴胺诱导的细胞损伤有明显保护作用.推测主要机制可能与其调节细胞氧化应激反应及细胞凋亡的信号转导通路有关,提示该化合物可以作为治疗退行性神经疾病如帕金森氏病等的候选化合物.
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呫吨酮并吡啶衍生物XP-16抗人胃癌MGC-803细胞作用
目的 探讨呫吨酮并吡啶衍生物5,9-二(2-吡咯烷基乙酰氨基)-7H-吡啶并[4,3-c]咕吨-7-酮(XP-16)抗人胃癌MGC-803细胞作用及其可能作用机制.方法 通过MTT法、细胞形态学和克隆实验观察XP-16对MGC-803细胞增殖;应用Hoe-chest33258和PI双染法观察细胞凋亡;采用荧光分光光度计检测细胞内钙([Ca+]i)及线粒体膜电位;RT-PCR检测Bad和金属硫蛋白1A(MT-1A)mRNA的表达.结果 XP-16能抑制MGC-803细胞增殖,呈浓度(r=0.88,P＜0.01)和时间(r=0.93,P＜0.05)依赖性.XP-16作用MGC-803细胞24 h后,MGC-803细胞出现染色质聚集、核碎裂等典型的凋亡形态学改变,且随XP-16浓度的增加,MGC-803细胞凋亡百分率逐渐增大.XP-16作用后,MGC-803细胞的[Ca2+]i和线粒体膜电位降低、Bad和MT-1A mRNA表达增加.结论 XP-16可通过诱导细胞凋亡抑制MGC-803细胞增殖,其机制可能与其降低[Ca2+]i和线粒体膜电位有关,而细胞内MT-1A表达的上调可能是[Ca2+]i下降的结果.
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双氢青蒿素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其分子机制研究
目的 探讨双氢青蒿素在体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用,并初步研究其可能分子机制.方法 25,50,100,200和400μmol·L-1双氢青蒿素作用SMMC-7721细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测双氢青蒿素对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,激光共聚焦显微镜检测凋亡形态的变化,Rho123染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blot法检测细胞内Bel-2,Bax,Cleaved Caspase-3,Cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达变化.结果 MTT实验结果表明,25 ～400 μmol·L-1双氢青蒿素对SMMC-7721细胞增殖具有明显的抑制作用.流式细胞仪检测周期结果显示,双氢青蒿素可以使SMMC-7721细胞周期阻滞于G2/M期.Hochest 333258染色结果显示,给药组细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂的凋亡形态.流式细胞仪检测凋亡结果显示,双氢青蒿素给药组细胞凋亡随药物浓度呈现升高趋势(P＜0.01).Rho 123染色结果显示,双氢青蒿素给药组细胞线粒体膜电位呈现明显的下降趋势(P＜0.01).Western blot结果显示,双氢青蒿素给药组细胞内Bel-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,Cleaved Caspase-3,Cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高.结论 双氢青蒿素能诱导SMMC-7721细胞凋亡,其凋亡机制可能与线粒体途径相关.
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1,6-二磷酸果糖镁盐对大鼠实验性心肌线粒体损伤的治疗作用
目的观察1,6-二磷酸果糖镁盐(FDP-Mg)对由异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌线粒体缺血性损伤的治疗作用.方法采用皮下多点注射Iso致大鼠心肌缺血损伤模型,静脉分别予FDP-Mg 100mg·kg-1及FDP-Na 120mg·kg-1和MgSO430 mg·kg-1进行治疗,观察心肌细胞及线粒体超微结构的变化,测定药物对缺血损伤的心肌细胞内的线粒体膜电位的影响及对线粒体肿胀的抑制率.同时利用黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶氧自由基发生系统和CuSO4/细胞色素C羟自由基发生系统分别检测药物对超氧阴离子(O2-)和羟自由基(·OH)的清除率.结果FDP-Mg可以显著改善由Iso所诱导的线粒体膜电位异常改变,抑制线粒体肿胀.且对·OH和O2-有较高的清除率,与对照组相比有显著差异.电镜显示FDP-Mg对维持线粒体的正常形态有明显作用.结论FDP-Mg可有效保护由Iso所致的心肌细胞的线粒体实验性缺血损伤.
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芍药苷对谷氨酸引起的PC12细胞损伤的保护作用
目的 探讨芍药苷对谷氨酸引起PC12细胞损伤的保护作用.方法 MTT和测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用Fura3/AM为荧光指示剂,用1420 Vector2 多标记免疫分析仪研究芍药苷对谷氨酸所致损伤PC12细胞内Ca2+的作用,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位.结果 芍药苷可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞还原MTT的能力,抑制该细胞LDH的释放;芍药苷还可抑制兴奋性氨基酸所引起的细胞内Ca2+含量的升高;剂量相关性地降低PC12细胞的凋亡百分率.结论 芍药苷可抑制谷氨酸诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制细胞内钙超载,稳定细胞线粒体跨膜电位有关.
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三甲氧基苯甲醛环丙沙星席夫碱诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用
目的 探讨氟喹诺酮类化合物三甲氧基苯甲醛环丙沙星席夫碱诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用.方法 用不同浓度的1-环丙基-6-氟-7-(哌嗪-1-基)-3-[5-苄硫基4-(3,4,5-三甲氧苯甲叉基氨基)-1,2,4-三唑-3-基]-喹啉(1-H)-4-酮(M27)与人肝癌SMMC-7721细胞、结肠癌HCT-116细胞株、白血病JURKET细胞株体外培养.MTT法检测M27及其前体化合物环丙沙星盐酸盐对肿瘤细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33258荧光染色法、TUNEL法检测细胞凋亡变化;以pBR322 DNA为底物,琼脂糖电泳法检测M27对拓扑异构酶Ⅱ的活性的影响;高内涵活细胞成像系统测定线粒体跨膜电位(△ψm)变化;Western blotting法检测p53、Caspase-9、Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白的表达以及细胞色素C在线粒体内外分布的变化.结果 M27在10～60 μmol·L-1内抑制肿瘤细胞增殖,呈浓度、时间依赖性.作用于SMMC-7721细胞、HCT-116细胞、JURKET细胞24 h IC50值分别为37.97、46.07、44.33 μmol·L-1,而环丙沙星盐酸盐对SMMC-7721细胞增殖抑制作用不显著.各组M27作用于SMMC-7721细胞24 h,细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05),并伴有细胞线粒体膜电位(△Ψm)降低.与对照组比较,M27能够抑制DNA拓扑异构酶Ⅱ的活性,使细胞p53、Bax、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达及活性片段增加,Bcl-2的表达量降低;线粒体细胞色素C减少,胞浆细胞色素C增多.结论 三甲氧基苯甲醛环丙沙星席夫碱能够抑制拓扑异构酶Ⅱ的活性,造成DNA损伤,诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡.
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二苯乙烯苷对多柔比星致心肌细胞凋亡的保护作用
目的：研究中药何首乌主要有效成分二苯乙烯苷(THSG)对多柔比星(DOX)致心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法分离培养乳鼠心肌细胞，观察 DOX 单独及与 THSG 联合处理对心肌细胞的凋亡、线粒体膜电位及凋亡相关蛋白表达的影响。结果 THSG能够剂量依赖性地减少DOX诱导的心肌细胞凋亡、线粒体膜电位下降、抑制caspase-3激活、增加Bcl-2及减少Bax的蛋白表达。结论 THSG对DOX诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用，且作用与其能够减少线粒体膜电位下降、抑制 caspase-3激活，增加Bcl-2及减少Bax的蛋白表达有关。
