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异丹叶大黄素在Caco-2细胞模型上转运机制的研究
异丹叶大黄素具有抗炎、抗氧化、抗癌等药理活性.该文研究了异丹叶大黄素在Caco-2细胞模型上的吸收转运机制.采用UPLC法,应用PDA检测器在310 nm处对异丹叶大黄素进行含量测定并计算表观渗透系数Papp.考察不同浓度异丹叶大黄素在Caco-2细胞上的毒性以确定转运实验的给药浓度.探讨了时间、浓度、温度、转运体抑制剂对异丹叶大黄素在体外细胞模型上跨膜转运的影响.实验结果表明,异丹叶大黄素在10~60μmol·L-1,孵育14 h内,对Caco-2细胞没有明显毒性.异丹叶大黄素在Caco-2细胞模型上的转运具有一定的浓度依赖性,其表观渗透系数Papp大于10×10-6 cm·s-1,易被Caco-2细胞吸收.BL侧的转运量在3 h达到大值,6 h有所下降.4℃条件下,Papp(AP-BL)与Papp(BL-AP)均比37℃条件显著减小.加入P-gp转运体抑制剂维拉帕米后Papp(AP-BL)明显增大;加入MRP转运体抑制剂丙磺舒和MK-571后,Papp(BL-AP)明显减小.研究结果提示,异丹叶大黄素在Caco-2细胞模型上的转运方式主要是被动扩散,P-gp及MRP可能参与了异丹叶大黄素的外排转运.
关键词： Caco-2细胞单层膜模型 异丹叶大黄素 转运机制 -
异丹叶大黄素对人滑膜细胞白细胞介素-8生成及mRNA表达的影响
目的研究异丹叶大黄素(isorhapotigenin,Iso)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人滑膜细胞(human synovial cell, HSC)白细胞介素-8(IL-8)生成和mRNA表达的影响.方法用RIA方法测定IL-8的含量,以RT-PCR法测IL-8 mRNA.结果 Iso在1×10-6-1×10-5 mol*L-1浓度范围内对TNF-α诱导的人滑膜细胞IL-8生成有抑制作用,并抑制TNF-α诱导的HSC IL-8 mRNA表达.结论 Iso抑制TNF-α诱导的HSC IL-8生成,可能与影响IL-8 mRNA表达有关.
关键词： 异丹叶大黄素 白细胞介素-8 放免测定法 反转录聚合酶链式反应 -
应用氧化偶联反应制备二苯乙烯类低聚化合物
目的以异丹叶大黄素(isorhapontigenin)为反应物、FeCl3为氧化剂进行氧化偶联反应,以期获得多种偶合产物,供观察其类似物的活性.方法以FeCl3为氧化剂进行反应,用硅胶低压正相柱色谱、反相色谱以及半制备高压液相色谱等手段对反应物进行分离,经IR,UV,EI-MS,FAB-MS,1HNMR,13CNMR及13C-1H COSY,HMBC等光谱方法鉴定化合物的结构.结果获得10种异丹叶大黄素聚合物,其中以射干素B(4), 双异丹叶大黄素A(2)和B(3)为反应主产物,它们得率分别是9.57%,28.15%和6.31%.结论双异丹叶大黄素A(2)和B(3)为新化合物,初步药理筛选结果表明,双异丹叶大黄素A和B, 射干素B具有白三烯生成抑制及受体拮抗作用.
关键词： 二苯乙烯低聚体 异丹叶大黄素 氧化偶联反应 三氯化铁 双异丹叶大黄素A和B -
异丹叶大黄素在体外对Cu2+介导的人低密度脂蛋白过氧化的抑制作用
目的研究异丹叶大黄素(Iso)对Cu2+介导的人低密度脂蛋白(LDL)过氧化及氧化LDL(ox-LDL)对小鼠巨噬细胞毒性的抑制作用.方法用序贯超离心法分离血脂正常的供血者血清LDL,分离的LDL 1 mg·mL-1 磷酸缓冲液(pH 7.4), 与10 μmol·L-1 CuSO4于37℃水浴温育10 h 以引起LDL过氧化,给药组预先加入不同浓度Iso,对照组加等量生理盐水,测定丙二醛(MDA)的生成量、维生素E的耗竭以及LDL电泳迁移率.另外测定用ox-LDL处理小鼠腹腔巨噬细胞线粒体的膜电位、吞噬刚果红及释放NO的量.结果 1-100 μmol·L-1 Iso 剂量依赖性地抑制Cu2+引起的人LDL氧化时MDA的生成量、维生素E的耗竭及电泳迁移率的升高.10 μmol·L-1 Iso能防止0.1 mg·mL-1 ox-LDL与小鼠腹腔巨噬细胞温育4 h 后线粒体膜电位的损伤、吞噬刚果红功能以及NO释放量的降低.结论 Iso在体外对Cu2+介导的LDL过氧化以及ox-LDL对小鼠巨噬细胞的毒性有保护作用.
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异丹叶大黄素下调XIAP基因的化疗增敏作用研究
目的 观察异丹叶大黄素(ISO)对膀胱癌细胞增殖及X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的影响,并观察异丹叶大黄素对化疗药物多西他赛诱导膀胱癌细胞凋亡及其细胞毒性的增敏作用.方法 以异丹叶大黄素作用于人源性膀胱癌T24T细胞,以ATPase法检测异丹叶大黄素对膀胱癌细胞的细胞毒性,并以软琼脂集落形成实验,检测异丹叶大黄素对T24T增殖能力的影响.以逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测异丹叶大黄素对膀胱癌细胞X染色体连锁凋亡抑制蛋白基因表达的影响.以AT-Pase法、倒置显微镜下以及流式细胞仪分别观察检测异丹叶大黄素对多西他赛诱导的膀胱癌细胞凋亡和细胞毒性的影响.结果 异丹叶大黄素可显著抑制膀胱癌细胞的增殖和集落形成,其IC50约为(54.5±3.6)μmol·L-1.经蛋白印迹法和逆转录-聚合酶链反应法证实,异丹叶大黄素在作用于人源性膀胱癌T24T细胞后,其X染色体连锁凋亡抑制蛋白基因在蛋白和mRNA水平均显著性降低.经多西他赛处理T24T细胞后,IC50为(8.78±1.32)nmol·L-1;而联用异丹叶大黄素后,IC50仅为(1.02 ±0.38)nmol·L-1,两者之间有显著性差异(P＜0.01).经流式细胞仪检测,T24T细胞接受2.5 nmol·L 1多西他赛组凋亡率(21.07±2.79)％显著低于联用异丹叶大黄素治疗组的凋亡率(49.59±5.67)％ (P ＜0.01).结论 异丹叶大黄素可抑制膀胱癌细胞增殖,并可通过下调X染色体连锁凋亡抑制蛋白基因表达,显著增强多西他赛诱导的膀胱癌细胞凋亡,并增强细胞毒性.
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异丹叶大黄素的体外抗氧化作用
目的异丹叶大黄素(isorhapontigenin,ISOR)是从中药射干中提取的化学成分,是与白藜芦醇化学结构相似的芪衍生物.通过多种模型研究ISOR的体外抗氧化作用.方法采用Fe2+-半胱氨酸(Cys)、VitC-ADP-Fe2+和H2O2等自由基发生系统诱发大鼠肝微粒体、脑线粒体及突触体的氧化损伤,观察ISOR对此过程中MDA生成、GSH降低及超微弱化学发光增强的影响,并观察ISOR对用CuSO4-Phen-VitC-H2O2系统损伤DNA后8-OH-dG的特征性超微弱化学发光增强影响.结果ISOR能显著抑制Fe2+-Cys诱导的大鼠肝微粒体、脑线粒体及突触体膜氧化损伤过程中MDA的生成,并能显著抑制H2O2诱导的脑线粒体及突触体GSH的降低;显著抑制VitC-ADP-Fe2+系统引起的微粒体膜氧化损伤时超微弱化学发光增强,并能显著降低DNA受氧化损伤后微弱化学发光的强度.经典抗氧化剂VitE 10-4mol@L-1抑制MDA生成及GSH降低的作用仅相当于ISOR10-5或10-6mol@L-1的效果.结论 ISOR具有较强的抗氧化作用,且其活性明显强于经典抗氧化剂VitE.
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异丹叶大黄素抑制HepG2细胞生长及诱导其凋亡的实验研究
目的通过异丹叶大黄素抑制HepG2细胞的生长及诱导其凋亡,探讨异丹叶大黄素抗肿瘤作用的分子机制.方法我们采用FACS、Hochest33258、MTT等方法来检测HepG2细胞生长及凋亡的情况.结果异丹叶大黄素药物组的细胞凋亡明显大于对照组,药物组的细胞生长情况明显受到抑制,P＜0.05,且还呈浓度依赖和时间依赖性.结论异丹叶大黄素药物可抑制Hep62细胞的增殖及诱导的HepG2细胞凋亡,表明异丹叶大黄素药物具有抗肿瘤的药理作用.
