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枸杞多糖对小鼠睾丸细胞DNA损伤的保护作用
目的:研究枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H2O2)引起的睾丸细胞DNA氧化损伤的保护作用.方法:睾丸细胞先用不同浓度LBP作用1h,再加入100μmol/LH2O2共同培养25min,然后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定DNA链断裂情况,分析LBP的抗氧化损伤作用.结果:H2O2作用一定时间后,可引起DNA链断裂.50、100、200、400μg/mL的LBP预处理可使H2O2染毒细胞的拖尾百分率和尾长显著降低.结论:LBP本身没有致氧化损伤作用,它能够清除自由基,对氧化应激所致的睾丸细胞DNA损伤具有抑制作用.
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肺癌组织中的8-OH-dG及其与几种癌变相关基因的关系
为探讨8-羟基-脱氧鸟苷(8-OH-dG)与人群肺癌发生及癌变相关基因的关系,使用针对8-OH-dG加合物的鼠抗人单克隆抗体,通过免疫学方法检测150例肺癌、120例癌旁肺组织、40例肺良性病变和40例正常肺组织中氧化损伤标志物8-OH-dG的含量;同时检测相应肺组织中P53、C-MYC、K-RAS、BCL-2、hTERT等癌变相关基因的表达,分析8-OH-dG与上述癌变相关基因表达的关系.结果显示,92.7%(139/150)的肺癌组织中可检出氧化损伤标志物8-OH-dG,其阳性标志细胞的比率为(24.00±25.11)%;17.5%(21/120)的癌旁肺组织可检出8-OH-dG,阳性标志细胞的比率为(2.42±5.98)%;10.0%(4/40)的肺良性病变组织可检出8-OH-dG,阳性标志细胞的比率为(0.80±1.30)%;5.0%(2/40)的正常肺组织可检出8-OH-dG加合物, 阳性标志细胞的比率为(0.34±1.01)%,肺癌中8-OH-dG的含量高于其它肺组织(P<0.01).将肺癌病例按性别、年龄、细胞类型和吸烟史分层,它们皆与8-OH-dG无关联.分析8-OH-dG与癌变相关基因的关系,发现肺癌组织K-RAS、BCL-2基因阳性表达者8-OH-dG的含量高于上述基因阴性表达者,P值分别为0.035和0.034;而P53、C-MYC和hTERT基因表达与8-OH-dG的含量无关联.结果提示,8-OH-dG 是反映机体细胞DNA经受氧化损伤的重要标志物,其致癌作用可能与其导致K-RAS和BCL-2等基因的改变有关.
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铅染毒对大鼠下丘脑、纹状体的损伤作用
目的 探讨铅染毒对大鼠下丘脑及纹状体的损伤作用.方法 45只SPF级SD雄性健康大鼠随机分为对照组(双蒸水)、低铅组(60 mg/kg乙酸铅)、高铅组(120 mg/kg乙酸铅),每组15只.每天经口灌胃染毒,连续9周.应用旷场试验检测大鼠行为学变化,电感耦合等离子质谱仪(ICP-MS)测定大鼠下丘脑及纹状体的铅含量.应用实时荧光定量PCR方法检测大鼠下丘脑及纹状体中Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因1(OGG1)mRNA表达;采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)的方法检测下丘脑及纹状体中TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)蛋白含量.结果 染毒期间各组大鼠摄食和饮水量未见异常,体重变化未见明显差异.与对照组相比,铅染毒大鼠总运动距离、总穿格数及中央区域运动距离显著下降(P＜0.05).低、高铅染毒组大鼠下丘脑和纹状体中的铅含量分别是(60.10±6.71)、(71.20±11.24)及(44.07±9.63)、(66.67±8.78) μg/g,显著高于对照组的(33.77 ±8.19)和(25.75±6.33)μg/g,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,低铅组和高铅组大鼠下丘脑中NF-κB和OGG1的mRNA表达分别为对照组的(3.47±0.15)、(1.43±0.16)及(0.67±0.13)、(0.57±0.19)倍,而只有高铅组大鼠下丘脑中的TLR4和NF-κB mRNA表达与低铅组比较差异有统计学意义(P＜0.05).此外,低铅组大鼠下丘脑中NF-κB、TNF-α、IL-1 β蛋白水平分别为(5.85±1.10)、(56.15±6.96)和(1.18±0.20) ng/g,显著高于对照组的(3.03±0.71)、(49.25±7.21)和(0.86±0.11) ng/g.高铅组大鼠下丘脑中TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β蛋白含量分别为(0.67±0.12)、(4.74±0.68)、(69.73±9.61)和(1.43±0.29) ng/g,显著高于对照组,其中TLR4和TNF-α蛋白水平高于低铅组.高铅组大鼠纹状体中TLR4、NF-κB和IL-1β mRNA显著高于对照组(P＜0.05);同时,其TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1 β和8-OHdG蛋白分别为(0.33±0.02)、(4.66±0.51)、(82.63±7.99)、(1.92±0.35)和(1.21±0.14) ng/g,与对照组比较显著增加(P＜0.05);其中NF-κB蛋白表达显著高于低铅组(P＜0.05).结论 铅染毒可导致大鼠下丘脑和纹状体损伤,炎症损伤和DNA氧化损伤可能参与了此过程.
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慢性砷暴露人群DNA氧化损伤与血脂异常关联性的研究
目的 探讨慢性砷暴露人群DNA氧化损伤与血脂异常的关联性.方法 采用分层整群抽样方法,随机抽取某饮水型高砷暴露地区407名慢性砷暴露者作为调查对象,检测其血脂水平,并据此分为血脂正常组、HDL-C比值异常组、高TC血症组和HDL-C比值异常合并高TC血症组.采集调查对象晨尿,并使用ELISA试剂盒测定其DNA氧化损伤的关键性标志物8-羟基脱氧鸟苷/肌酐(8-OHdG/Cr)水平.采用广义线性回归模型调整相关混杂因素后,分析慢性砷暴露人群DNA氧化损伤与血脂异常的关联性.结果 4组人群8-OHdG/Cr水平M(Q1～Q3)分别为51.43(36.86～68.57)、55.73(39.90～ 79.94)、58.08(44.94～69.91)和65.28(49.29～ 92.95)ng/mg,各组间差异有统计学意义(P=0.006).广义线性回归模型进一步表明,在校正血压、文化程度、暴露年限、BMI、FPG、性别、主动吸烟、被动吸烟、吸烟指数和饮酒等潜在的混杂因素后,HDL-C比值异常合并高TC血症组8-OHdG/Cr水平与血脂水平呈现出显著正相关(P=0.018),且8-OHdG/Cr水平与其血脂异常程度间存在明显的线性趋势(P=0.016).结论 慢性砷暴露人群8-OHdG/Cr水平与其血脂状态间存在显著的关联性,血脂异常程度越严重,其DNA氧化损伤越明显.
关键词： 砷暴露 慢性 8-羟基脱氧鸟苷/肌酐 血脂异常 DNA氧化损伤 -
高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定DNA氧化损伤标志物8-羟基-2'-脱氧鸟苷
8-羟基-2'-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG)是活性氧自由基(ROS)引起DNA氧化损伤修饰产物之一.8-OHdG可被机体特异性DNA修复酶剪切清除并经肾脏随尿排泄,其含量反映机体氧化损伤程度[1-4].因此测定机体8-OHdG含量可评估体内氧化损伤和修复程度,对研究衰老机制、癌发生机制、环境毒物等均有重要的意义.
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槲皮素-7-硫酸酯钠对H2O2所致DNA氧化损伤的保护作用
目的:探讨槲皮素-7-硫酸酯钠的体外抗氧化活性及对DNA氧化损伤的保护作用.方法:通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基(·DPPH)、羟自由基(OH·)和超氧阴离子自由基(O2-·)清除实验评价槲皮素-7-硫酸酯钠的体外抗氧化活性；采用紫外扫描法、凝胶电泳技术观察槲皮素-7-硫酸酯钠对H2O2所致DNA氧化损伤的保护作用.结果:自由基清除实验结果显示,槲皮素-7-硫酸酯钠能有效清除·DPPH、·OH和O2-·自由基,其清除能力较维生素C(VC)及槲皮素都强,且呈浓度依赖性.DNA氧化损伤保护实验结果显示,H2O2可致小牛胸腺DNA出现断裂梯带和浓度下降,槲皮素-7-硫酸酯钠预处理可抑制H2O2所致的小牛胸腺DNA断裂及浓度下降,且有浓度依赖性.结论:槲皮素-7-硫酸酯钠体外有较强的抗氧化能力,并对H2O2所致的DNA氧化损伤有保护作用.
关键词： 槲皮素-7-硫酸酯钠 体外 抗氧化活性 DNA氧化损伤 -
芦荟提取物对衰老模型鼠抗自由基氧化损伤DNA作用的实验研究
目的:探讨芦荟延缓衰老的疗效及其可能机理.方法:利用小鼠吸入臭氧(O3)制造衰老模型,并在其造模过程中以不同浓度的芦荟提取液实施治疗,9周后检测小鼠全血超氧化物歧化酶(SOD)的活性,肝组织过氧化脂质代谢产物丙二醛(MDA)的含量,并用彗星实验(Comet Assay)检测肝、脾组织细胞DNA氧化损伤的程度.结果:与模型组相比,经芦荟治疗后,模型小鼠不仅全血SOD活性及肝组织MDA含量两项指标明显改善并趋向正常,而且肝、脾细胞DNA拖尾尾长减短,有效地减轻了肝、脾细胞DNA的损伤程度,作用较复方丹参片对照组全面.结论:芦荟能提高机体抗自由基氧化损伤的能力,减轻肝、脾细胞DNA损伤程度,从而达到延缓衰老的目的.
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终末期肾病中DNA氧化损伤标志物8-OHdG水平的研究
目的 通过检测终末期肾病(ESRD)患者血清中的DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量,探讨ESRD患者中DNA氧化损伤的程度及其影响因素.方法 选取年龄及性别匹配的研究对象40例,分为3组:对照组、CRF(慢性肾功能不全)组和HD(血液透析)组.采用ELISA法检测血清8-OHdG水平,改良镀铜镉颗粒还原法检测一氧化氮(NO)水平,硫代巴比妥酸产物比色法检测丙二醛(MDA)水平.结果 与对照组相比,CRF组、HD组透析前、后血清8-OHdG水平均显著增高(P＜0.01),且HD组透析后8-OHdG水平较透析前显著增高(P＜0.05).CRF组、HD组透析前和透析后NO、MDA水平较对照组明显增高(P＜0.05).血清8-OHdG和Scr、NO水平呈显著正相关(P＜0.05).结论 在ESRD患者血清中8-OHdG水平明显增高,提示DNA氧化损伤增强.8-OHdG作为一种DNA氧化损伤产物,可被认为是评价ESRD氧化损伤水平的可靠观测指标.
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8-羟基脱氧鸟苷在氧化应激与儿童相关疾病的研究
8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)是DNA氧化损伤产物之一.8-OHdG水平可反映机体氧化损伤程度,是目前国际上公认的评价DNA氧化损伤和氧化应激(OS)状态的新型指标和生物标志物.笔者拟就8-OHdG的主要检测方法及其在OS与儿童相关疾病的新研究进展进行阐述,旨在为临床对该类疾病的诊断与治疗提供参考依据.
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长波紫外线照射对培养人表皮黑素细胞与真皮成纤维细胞抗氧化活性影响
目的 对比观察了长波紫外线(UVA)照射对培养人表皮黑素细胞与真皮成纤维细胞过氧化氢酶(CAT)蛋白表达以及DNA氧化产物8-羟基-脱氧鸟苷(8-oxo-dG)生成的影响,旨在认识除生成黑素以外黑素细胞具有的抗氧化机制.方法 建立人成纤维细胞及人黑素细胞原代和传代培养.培养细胞给予不同剂量(0,3,5,25 J/cm2)UVA照射,孵育3h后,用间接免疫荧光的方法检测CAT和8-oxo-dG的水平.结果 3J/cm2 UVA照射后,成纤维细胞CAT蛋白表达与假照射组对比明显增加(P＜0.001),8-oxo-dG荧光强度差别无统计学意义(P=-0.918);黑素细胞中CAT蛋白表达与假照射组对比明显减少(P＜0.001),8-oxo-dG荧光强度显著增加(P=-0.002).结论 表皮黑素细胞对氧化应激存在固有的敏感性,且暴露UVA介导的氧化应激后黑素细胞缺乏适应性上调CAT表达,这些机制可能关系到白癜风皮损黑素细胞氧化损伤的发生.
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Pten缺失小鼠胚胎成纤维细胞中活性氧和氧化损伤水平的研究
目的:研究Pten缺失后小鼠胚胎成纤维细胞抗氧化能力、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、脂质以及DNA氧化损伤水平的变化.方法:采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力检测、ROS荧光发光分析、丙二醛(malondialdehyde,MDA)舍量检测和γ-H2AX免疫荧光染色技术.分别比较Pten+/+ MEFs与Pten-/- MEFs细胞SOD活力、ROS、MDA和γ-H2AX水平的差异.结果:Pten-/- MEFs细胞中SOD活力明显减弱,ROS、MDA和γ-H2AX水平均显著增高.结论:Pten可能通过调控细胞抗氧化能力影响ROS水平,从而拮抗脂质和DNA氧化损伤以及由此产生的染色体不稳定性.
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8-羟基脱氧鸟嘌呤作为DNA氧化损伤标志物的研究现状
8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)作为DNA氧化损伤的生物标志物,其表达水平与多种癌基因的突变密切相关,在癌症的发生、发展及预后中扮演着重要角色.8-OHdG或能成为一种对氧化性损伤疾病早期筛查、疗效监测与预后评估行之有效的生物标志物,在临床中发挥重要作用.本文通过对8-羟基脱氧鸟苷既往临床研究进行总结,旨在为其在临床上的应用提供启示.
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异丹叶大黄素的体外抗氧化作用
目的异丹叶大黄素(isorhapontigenin,ISOR)是从中药射干中提取的化学成分,是与白藜芦醇化学结构相似的芪衍生物.通过多种模型研究ISOR的体外抗氧化作用.方法采用Fe2+-半胱氨酸(Cys)、VitC-ADP-Fe2+和H2O2等自由基发生系统诱发大鼠肝微粒体、脑线粒体及突触体的氧化损伤,观察ISOR对此过程中MDA生成、GSH降低及超微弱化学发光增强的影响,并观察ISOR对用CuSO4-Phen-VitC-H2O2系统损伤DNA后8-OH-dG的特征性超微弱化学发光增强影响.结果ISOR能显著抑制Fe2+-Cys诱导的大鼠肝微粒体、脑线粒体及突触体膜氧化损伤过程中MDA的生成,并能显著抑制H2O2诱导的脑线粒体及突触体GSH的降低;显著抑制VitC-ADP-Fe2+系统引起的微粒体膜氧化损伤时超微弱化学发光增强,并能显著降低DNA受氧化损伤后微弱化学发光的强度.经典抗氧化剂VitE 10-4mol@L-1抑制MDA生成及GSH降低的作用仅相当于ISOR10-5或10-6mol@L-1的效果.结论 ISOR具有较强的抗氧化作用,且其活性明显强于经典抗氧化剂VitE.
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ID-LC-MS/MS方法对高糖血症SD大鼠肾组织DNA中8-oxo-dGsn的检测
目的 用同位素稀释高效液相-串联质谱法(Isotope-Diluted LC-MS/MS,ID-LC-MS/MS)和免疫组化法检测高糖血症SD大鼠肾组织DNA氧化产物8-羟基脱氧鸟苷(8-oxo-dGsn)的含量,评价高糖血症对大鼠肾组织DNA氧化损伤的影响.方法 健康雄性SD(Sprague-Dawley rats)大鼠28只,随机分为4组:3月糖尿病模型组(3DR组)及其对照组(3CR组),6月糖尿病模型组(6DR组)及其对照组(6CR组).糖尿病模型组接受腹腔单次链脲佐菌素(streptozotosin,STZ)每公斤70mg注射,对照组接受腹腔生理盐水注射.糖尿病模型组造模成功3个月及6个月后,分别抽提大鼠肾组织DNA,用ID-LC-MS/MS方法检测其DNA氧化产物8-oxo-dGsn的含量;用免疫组化法观察肾组织中DNA氧化损伤部位及程度.结果 糖尿病模型组造模成功3个月时肾组织DNA中8-oxo-dGsn高于对照组高,造模成功6个月时肾组织DNA中8-oxodGsn含量比正常对照组增加显著(P＜0.01);免疫组化结果显示3个月模型组DNA氧化损伤水平高于对照组,6个月时模型组DNA氧化损伤更为严重.结论 高糖血症3个月可造成大鼠肾组织DNA的氧化损伤,高糖血症6个月时大鼠肾组织中DNA氧化损伤程度呈显著增加,高糖血症是肾组织中DNA氧化损伤的重要原因.
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oh8dG 在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 研究胃癌组织及正常胃黏膜组织中8-羟-2-脱氧鸟苷(oh8 dG)表达,探讨DNA氧化损伤与胃癌发生和发展的关系.方法 以免疫组化方法检测40例胃癌组织中(胃癌组)和20例正常胃黏膜组织标本(对照组)中oh8dG的表达.结果 oh8dG在胃癌组和对照组的表达水平有显著性差异,(P＜0.05).胃癌组中oh8dG表达与癌组织浸润深度、淋巴结转移、远处器官转移、临床病理分期有显著相关.结论 oh8dG在胃癌组织中表达水平增高,提示DNA氧化损伤是胃癌发生的重要因素,oh8dG可作为判定胃癌预后的指标.
关键词： 胃癌 DNA氧化损伤 8-羟-2-脱氧鸟苷 -
8-羟基脱氧鸟苷检测方法的研究进展
活性氧基团引起的氧化损伤在许多慢性疾病中起着重要作用,8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)是DNA氧化损伤的修饰产物之一,可以通过高灵敏度、高选择性的检测手段来检测,目前已成为DNA氧化损伤中常采用的生物标志物.本文主要介绍其来源、检测方法及在医学上的应用.
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孕哺期铅暴露对小鼠脑组织8-羟基脱氧鸟苷和沉默信息调节因子1表达的影响
目的 研究孕哺期铅暴露对成年仔鼠脑组织中DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy deoxy guanosine,8-OHdG)、沉默信息调节因子1(silent information regulator1,SIRT1)表达及学习记忆能力的影响.方法 通过饮用2g/L乙酸铅水溶液建立C57BL/6小鼠孕期染铅模型,并对哺乳期母鼠持续铅暴露至子代小鼠断乳,分娩3周后将仔鼠分笼以无铅去离子水饲养至12周龄,同时设立无染铅对照组.于仔鼠12周龄时以Morris水迷宫实验检测其学习记忆能力,以免疫组化方法检测8-OHdG在两组仔鼠脑组织中的表达和分布,采用Western blot测定其脑组织中SIRT1蛋白的表达水平.结果 水迷宫实验结果显示,第3～5天铅暴露组成年仔鼠在定位航行实验中的平均逃避潜伏期长于对照组,后一天穿越平台次数及在目标象限停留时间低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).铅暴露组仔鼠海马组织CA1区8-OHdG表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),但大脑皮层8-OHdG表达水平无明显差异(P＞0.05).铅暴露仔鼠脑组织胞核内SIRT1水平低于对照组,胞浆内SIRT1水平高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 孕哺期铅暴露对成年仔鼠学习记忆能力的影响可能与脑组织(特别是海马组织)DNA氧化损伤有关;铅暴露使成年仔鼠脑组织中SIRT1发生核质转移,该现象可能与SIRT1对铅暴露小鼠的神经保护作用有关.
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太原市采暖期和非采暖期农村和城市居民尿中8-羟基脱氧鸟苷水平的比较研究
目的 比较采暖期和非采暖期农村与城市居民体内DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的水平.方法 分别于2009年10月(非采暖期)和2010年3月(采暖期),选择年龄在45 ～65周岁,在太原市居住时间≥5年的农村居民(傅山医院附近)79人和城市居民143人为研究对象,排除焦炉工等多环芳烃职业暴露者和癌症患者.采用ELISA试剂盒测定尿中8-OHdG的浓度.结果 非采暖期农村居民尿中8-OHdG的浓度高于城市居民；采暖期农村居民尿中8-OHdG的浓度与城市居民无差别；在同一人群中,采暖期尿中8-OHdG的浓度高于非采暖期.结论 太原市农村居民DNA氧化损伤水平高于城市居民,采暖期居民的DNA氧化损伤水平高于非采暖期.
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燃汽油机动车尾气致核酸分子氧化损伤效应研究
目的:通过研究燃汽油机动车尾气成分,及其对DNA分子的氧化损伤,在分子生物学水平上探讨燃汽油机动车尾气污染物的遗传毒性效应与机制.方法:以DNA加合物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)作为DNA氧化损伤的生物学标志物,用高压液相色谱-电化学检测(HPLC-EC)法对污染物染毒后的DNA中8-OHdG进行定量检测,通过气质联用法(GC-MS)进行有机成分分析和原子吸收法(AAS)对其进行无机元素分析,并从化学组成成分的角度探讨DNA氧化损伤的分子机理.结果:在燃汽油机动车尾气的颗粒物和挥发性有机物中分别检出有机污染物85种和46种,无机元素7种和5种.燃汽油机动车尾气颗粒物和挥发性有机物均可在体外直接诱导DNA氧化损伤,尾气颗粒物还可诱导大鼠肺组织DNA氧化损伤,并呈现一定的剂量—反应关系.结论:污染物直接以及间接的氧化作用,源于含有醌类、多酚等具有自氧化作用的化合物,不需要任何生物活化系统,在体外就可产生大量的活性氧自由基,并在金属离子的催化作用下进攻DNA的碱基形成8-OHdG,产生遗传毒性效应,而8-OHdG是DNA氧化损伤的较好的效应标志物.
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镁对入脐静脉内皮细胞D NA氧化损伤的影响
目的:观察Mg2+对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响.方法:取新生儿脐带内皮细胞进行细胞培养.实验分四组:1.阴性对照.2.阳性对照,培养液中加H2O2.3.补镁组,培养液中加不同浓度的MgSO4.4.补H2O2与镁组:培养液中加H2O2与镁.用单细胞凝胶电泳技术检测各组拖尾细胞率与拖尾细胞长.结果:与H2O2组相比,H2O2+Mg2+各剂量组拖尾细胞率下降、拖尾细胞尾长减小.结论:Mg2+对H2O2诱导的DNA氧化损伤有明显的拮抗作用.
