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家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽促K562细胞凋亡作用及其机制研究
目的 观察家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽对K562细胞核和线粒体膜电位及K562细胞凋亡蛋白半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的影响,进而探讨家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽是否可以影响线粒体膜电位及促进K562细胞凋亡.方法 首先采用Hoechst33258荧光标记法,将家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞,用荧光显微镜检测K562细胞核荧光强度的变化；其次采用荧光探针罗丹明123标记K562细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察K562细胞中罗丹明123荧光强度,以细胞内荧光强度表示线粒体膜电位大小；后用caspase-3检测试剂盒和酶标仪测定K562细胞caspase-3的含量.结果 采用Hoechst33258荧光标记法,用荧光显微镜观察到家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用于K562细胞后部分细胞核的荧光强度增强,说明其可以引起K562细胞发生凋亡；用罗丹明123标记,激光共聚焦显微镜观察发现,家蝇3龄幼虫峰5、峰8组分作用组的K562细胞荧光强度值明显低于对照组(t1=21.30,t2=196.23,P＜0.05),说明家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽可以使K562细胞线粒体膜电位降低；峰5、峰8组分作用组caspase-3的含量明显高于对照组(t1=146.92,t2=189.56,P＜0.05),说明3龄幼虫抗肿瘤肽可以促进K562细胞发生凋亡.结论 家蝇3龄幼虫抗肿瘤肽峰5、峰8组分对K562细胞核具有损伤作用,可以引起K562细胞发生凋亡,作用机制是通过降低K562细胞线粒体膜电位,激活caspase-3,扰乱其生理功能,促使其凋亡.
关键词： 抗肿瘤肽 荧光标记法 线粒体膜电位 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 凋亡 -
细胞色素c 介导的半胱天冬氨酸蛋白酶-3活性改变与人卵巢癌顺铂耐药的关系
目的探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP、COC1/DDP中抗凋亡基因bcl-XL、细胞色素c的表达和半胱天冬氨酸蛋白酶-3 (caspase-3) 活性对人卵巢癌顺铂耐药的影响.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot 检测人卵巢癌顺铂敏感细胞株A2780、COC1和顺铂耐药株A2780/DDP、COC1/DDP中bcl-XL的表达,以及顺铂作用后细胞色素c的含量和caspase-3活性的变化,并应用流式细胞仪测定顺铂作用后A2780、COC1、A2780/DDP、COC1/DDP细胞的凋亡率.结果bcl-XL在A2780/DDP、COC1/DDP细胞中的表达明显高于A2780、COC1细胞;顺铂作用后,细胞色素c在A2780/DDP、COC1/DDP细胞中的表达明显减少,caspase-3活性和凋亡率也较A2780和COC1细胞明显降低(P<0.05).结论人卵巢癌细胞对顺铂产生耐药可能与细胞内bcl-XL过度表达、细胞色素c释放受抑制和caspase-3活性下降有关.
关键词： 卵巢肿瘤 细胞色素C 顺铂 多药耐药性 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 -
二甲双胍联合塞来昔布对胰腺癌细胞增殖及Caspase-3活性的影响
目的:探讨二甲双胍和塞来昔布单独或联合应用对胰腺癌细胞增殖和Caspase-3活性的影响.方法:体外培养人胰腺癌BxPC-3和AsPC-1细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度二甲双胍和塞来细胞对胰腺癌细胞存活率的影响.联合实验分4组:对照组、二甲双胍组(MET,15 mmol/L)、塞来昔布组(CEL,100 μmmol/L),二甲双胍和塞来昔布联合组(MET 15 mmol/L+CEL100 μmmol/L),孵育48 h,用MTT检测细胞存活率,用Caspase-3比色测定试剂盒测定Caspase-3活性.结果:二甲双胍和塞来昔布单药均可以时间和剂量依赖性方式降低胰腺癌BxpC-3和AsPC-1细胞的生存率.两种细胞系的各加药组细胞存活率与对照组比较差异均存在统计学意义(P＜0.01),联合实验组的细胞存活率明显低于单独用药组(P＜0.01).二甲双胍和塞来昔布单药处理的胰腺癌BxPC-3和AsPC-1细胞Caspase-3活性均显著高于对照组(P＜0.01),二甲双胍和塞来昔布联合实验组Caspase-3活性均明显高于单药处理组和对照组(P＜0.01),但二甲双胍组和塞来昔布组之间的Caspase-3活性比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:二甲双胍和塞来昔布联合作用可协同抑制胰腺癌细胞的增殖,并通过激活Caspase-3活性促进胰腺癌细胞的凋亡,其联合应用可能成为胰腺癌药物治疗的有效策略.
关键词： 胰腺癌 二甲双胍 塞来昔布 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 -
榄香烯对人喉鳞癌细胞生长抑制与凋亡诱导作用
目的探讨榄香烯对人喉鳞癌细胞株HEp-2细胞的生长抑制作用,以及对半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性的影响.方法采用四氮甲基唑蓝(MTT)法和流式细胞分析技术(FCM),研究榄香烯诱导人喉鳞癌细胞株HEp-2细胞凋亡的作用;用比色法观察榄香烯诱导人喉鳞癌细胞株HEp-2细胞凋亡时Caspase-3活性的变化.结果榄香烯抑制HEp-2细胞生长呈时间剂量依赖性,24 hIC50值为69.297 mg·L-14;榄香烯(60 mg·L-1)和顺铂(3 mg·L-1)联合用药可加强抑制作用;Caspase-3活性在榄香烯作用12 h达到高,并随药物作用时间的延长而下降.结论榄香烯可诱导HEp-2细胞凋亡,同时可引起Cas-pase-3活性的改变.
关键词： 榄香烯 Hep-2细胞 凋亡 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 -
可卡因-苯丙胺调节转录肽对缺血性脑损伤及其神经元半胱天冬氨酸蛋白酶活性的影响
目的 探讨可卡因-苯丙胺调节转录(CART)肽对缺血性脑损伤及其半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)活性的影响.方法 将12只小鼠随机分为CART组与对照组,CART组小鼠侧脑室注射CART多肽,对照组注射生理盐水,然后制作脑缺血模型,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测量梗死体积.体外培养小鼠皮质神经元,制作缺糖缺氧神经元模型,加入CART多肽或生理盐水,用噻唑蓝染色测细胞生存率,酶联法检测Caspase-3活性.结果 CART组脑梗死体积[(0.225±0.044)mm3]显著小于对照组[(0.389±0.055)mm3](P＜0.05);CART组神经元生存率(0.494±0.056)显著高于对照组(0.348±0.174)(P＜0.05);CART组神经元Caspase-3活性(45674±9780)显著低于对照组(51172±2776)(P＜0.01).结论 CART多肽可明显减少缺血性脑梗死体积,提高缺氧神经元的生存率,并降低缺氧神经元的Caspase-3活性.
关键词： 可卡因-苯丙胺调节转录肽 脑缺血 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 -
乌司他丁对脑出血模型兔血清基质金属蛋白酶-9、半胱天冬氨酸蛋白酶-3的影响
目的：观察乌司他丁对脑出血模型兔血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的影响，探讨乌司他丁的脑保护作用。方法将造模成功的20只新西兰兔随机分为脑出血模型组（模型组）和乌司他丁治疗组（治疗组），每组10只。分别给予生理盐水和乌司他丁注射液，静脉推注，共7天。应用ELISA法测定各组兔脑出血后第1、3、5、7天动脉血基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）含量。结果与模型组比较，治疗第1天治疗组MMP-9[（951.72±216.35）ng/L]、Caspase-3[（58.11±5.07）μmol/mL]差异无统计学意义（P>0.05）；治疗第3、5、7天，治疗组MMP-9[分别为（887.02±205.77）ng/L、（892.79±123.94）ng/L、（858.90±97.37）ng/L]及Caspase-3[分别为（58.00±4.99）μmol/mL、（49.05±9.30）μmol/mL、（48.22±10.28）μmol/mL]含量均明显下降，差异有统计学意义（P均<0.05）。结论乌司他丁可下调脑出血模型兔血清MMP-9及Caspase-3含量，对脑出血具有一定的脑保护作用。
关键词： 兔 脑出血 乌司他丁 基质金属蛋白酶-9 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 -
过氧化氢体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞Caspase-3表达及超微结构改变的影响
目的 探讨过氧化氢(H2O2)体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡、Caspase-3表达和细胞超微结构的影响.方法 RPMI1640添加谷氨酰胺组即体外培养细粒棘球蚴原头节,用5mmol/L H2O2诱导8h,使其发生细胞凋亡.用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL 法)检测原头节细胞凋亡情况,用过氧化物酶标记链霉卵白素(SP)染色半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3).在透射电镜下观察原头节细胞超微结构的变化.结果 过氧化氢诱导原头节细胞凋亡细胞增加,caspase-3表达增加,电镜观察原头节细胞异染色质增加,部分细胞染色质异常浓缩呈现凋亡细胞征象.结论 H2O2可诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡,且caspase-3参与原头节细胞的凋亡.
关键词： 细粒棘球蚴原头节 过氧化氢 细胞凋亡 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 -
z-VAD-fmk 对烫伤大鼠肾脏细胞凋亡的影响
目的：探讨广谱半胱天冬氨酸蛋白酶（Caspase）抑制剂z-VAD-fmk对烫伤大鼠肾脏细胞凋亡的影响。方法48只雄性Wistar大鼠制作严重烫伤模型并随机分为治疗组与对照组各24只。z-VAD-fmk首次剂量3mg／kg，此后每隔12 h腹腔注射1．5 mg／kg ；对照组用等剂量生理盐水干预。两组分别于造模后2、8、24、48 h各处死6只大鼠，取出肾脏。采用TUNEL法检测肾脏细胞凋亡指数（AI），免疫组化法检测B淋巴细胞瘤／白血病-2（bcl-2）和Bcl-2同源拮抗蛋白／致死蛋白（ Bax）表达，荧光比色法检测Caspase-3活性。结果与对照组比较，治疗组造模8、24、48 h AI水平降低、Bax表达水平降低、Bcl-2表达水平升高（ P均＜0．05）。两组Caspase-3活性均于伤后8 h达峰值；与对照组比较，治疗组造模2、8、24、48 h Caspase-3活性均降低（P均＜0．05）。结论 z-VAD-fmk可抑制烫伤大鼠早期肾脏细胞的凋亡，其作用机制可能为下调AI、Bcl-2表达水平、Caspase-3活性，上调Bax表达。
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皮肤血管瘤组织中survivin、Caspase-3的表达及意义
目的 探讨在皮肤血管瘤组织中凋亡相关因子生存素(survivin)、半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3的表达及意义.方法 采用免疫组化SP法检测60例皮肤血管瘤中的survivin、Caspase-3.结果 在血管瘤增生期、退化期和血管畸形中survivin的阳性表达率分别为76.9%、35.7%、25.0%,Caspase-3的阳性表达率分别为23.1%、78.6%、0,survivin与Caspase-3的表达呈负相关(r=-0.400,P＜0.05).survivin、Caspase-3在血管瘤增生期、退化期和血管畸形中的表达差异皆具有统计学意义(P＜0.05).结论 survivin与Caspase-3表达下调在皮肤血管瘤的形成中可能起协同作用.
关键词： 血管瘤 生存素 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 细胞凋亡 -
凋亡相关蛋白的表达及Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系
背景与目的:以顺铂为基础的化疗是卵巢癌治疗的重要组成部分 , 对顺铂的耐药是卵巢癌治疗失败的原因之一 . 本研究探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株中凋亡相关蛋白表达及 caspase-3活性与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系 . 方法 : 采用 Western blot法分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株 COC1和顺铂耐药株 COC1/DDP中凋亡相关蛋白 bcl-2、 bcl-xL、 bax、 bcl-xS的表达 , caspase-3活性和其底物多聚 ADP核糖聚合酶 ( PARP) 的变化 , 并应用流式细胞仪检查不同浓度顺铂作用 COC1和 COC1/DDP细胞后的细胞凋亡率 . 结果 : 在 COC1/DDP细胞中 , bcl-2和 bcl-xL的表达明显高于 COC1细胞 , bax的表达无明显改变 , bcl-xS在 COC1和 COC1/DDP细胞中均无表达 . 用顺铂处理后 , COC1/DDP细胞中 caspase-3活性、 PARP裂解片段和凋亡率较 COC1细胞均明显降低 ( P< 0 05) , 且呈浓度依赖性 . 结论 : 人卵巢癌细胞对顺铂产生耐药可能与肿瘤细胞内凋亡抑制蛋白过度表达、 caspase-3活性下降有关 , 而与凋亡诱导蛋白的表达无关 .
关键词： 卵巢癌 凋亡相关蛋白 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 耐药 顺铂 -
乳腺非特殊型浸润性癌组织中apaf-1、caspase-3及ki-67表达相关性及临床意义
目的:研究乳腺非特殊型浸润性癌组织中凋亡酶激活因子-1(apaf-1)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、细胞增殖核抗原(ki-67)表达的相关性及其临床意义.方法:采用免疫组化方法检测100例正常乳腺组织、100例乳腺非典型导管增生、100例乳腺非特殊型浸润性癌中apaf-1、caspase-3及ki-673种蛋白表达,比较3种蛋白表达的差异,并分析其相关性.结果:乳腺非特殊型浸润性癌、乳腺非典型导管增生及正常乳腺组织中,apaf-1蛋白的阳性表达率分别为38.00％、80.00％、96.00％;caspase-3蛋白的阳性表达率分别为46.00％、69.00％、90.00％,ki-67蛋白的阳性表达率分别为81.00％、57.00％、6.00％.乳腺非特殊型浸润性癌组织中apaf-1、caspase-3阳性率低于乳腺非典型导管增生及正常乳腺组织(P<0.05);乳腺非特殊型浸润性癌组织中ki-67阳性率高于乳腺非典型导管增生(P<0.05)和正常乳腺组织(P<0.01).不同乳腺非特殊型浸润性癌分期、组织学分级及肿瘤直径患者apaf-1、caspase-3及ki-67表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05).apaf-1与caspase-3表达水平呈正相关关系(r=0.352,P=0.000),与ki-67表达水平呈负相关关系(r=-0.287,P=0.000),caspase-3与ki-67表达水平呈负相关关系(P<0.05).结论:乳腺非特殊型浸润性癌apaf-1与caspase-3和ki-67表达水平有明显相关关系.
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鬼臼毒素衍生物YB-1EPN对人口腔鳞状上皮癌细胞系增殖的抑制作用研究
目的:研究鬼臼毒素衍生物YB-1EPN对人口腔鳞状上皮癌细胞系(KB)增殖的抑制作用.方法:以KB细胞为研究对象,采用MTT法检测细胞毒作用；荧光染色法观察细胞形态学变化；RT-PCR法检测半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3 mRNA的表达；激光共聚焦显微镜观察药物对细胞微管结构的影响.结果:4 μmol·L-1YB-1EPN能够直接抑制和杀伤KB细胞；荧光显微镜观察到4 μmol·L-1YB-1EPN干预24 h后KB细胞出现凋亡小体；RT-PCR法检测到在1、2、4 μmol·L-1 YB-1EPN干预下KB细胞促凋亡基因Caspase-3表达上调；激光共聚焦显微镜观察到在2、4μmol·L-1YB-1EPN干预24 h后KB细胞微管结构被破坏.结论:YB-1EPN能够直接抑制和杀伤KB细胞株,作用机制可能与促凋亡基因的表达上调和抑制微管蛋白聚合有关.
关键词： 鬼臼毒素衍生物 微管蛋白 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 增殖 抑制 -
橙皮苷对缺血再灌注损伤模型大鼠心肌组织保护作用的研究
目的:研究橙皮苷对缺血再灌注损伤模型大鼠心肌组织的保护作用.方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支复制心肌缺血再灌注损伤模型,60只Wistar大鼠均分为对照、模型和橙皮苷高、中、低剂量组.光镜下观察心肌组织病理变化,通过免疫组化法检测Fas、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况.结果:光镜下对照组心肌组织无病理损伤；模型组心肌组织呈严重炎性细胞浸润,并见多处坏死;橙皮苷高、中、低剂量组心肌细胞变性坏死程度显著减轻.与对照组比较,模型组心肌组织Fas和Caspase-3蛋白表达显著增强(P＜0.05)；与模型组比较,橙皮苷高、中、低剂量组心肌组织Fas、Caspase-3蛋白表达均显著下降(P＜0.05).结论:橙皮苷预处理对大鼠冠状动脉结扎后再灌注心肌损伤具有一定的保护作用.
关键词： 橙皮苷 缺血再灌注损伤 心肌 Fas 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 -
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对卵巢癌裸鼠移植瘤SKOV3细胞的促凋亡研究
目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白对SKOV3移植瘤细胞半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响及其与肿瘤细胞凋亡的关系.方法 建立雌性裸小鼠SKOV3移植瘤24只,随机分为4组,每组6只.TRAIL组单用重组人TRAIL蛋白(10μg/kg),顺铂(DDP)组单用DDP(3 mg/kg),TRAIL+DDP组联合使用TRAIL蛋白(10μg/kg)和DDP(3 mg/kg),空白对照组给予0.5mL生理盐水.经处理后,各组的组织切片用免疫组织化学染色检测Caspase-3的表达和末端脱氧核苷酸转移酶介导核苷酸缺口标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡指数.结果 Caspase-3的表达水平在TRAIL组(171.67±14.38)、DDP组(172.50±14.75)、联合组(230.00±40.99)中均明显高于对照组(135.83±16.25)(P＜0.05).SKOV3移植瘤细胞凋亡指数在空白对照组、TRAIL组、DDP组和联合组分别为16.67±5.43、33.17±8.42、24.33±4.59和40.50土6.16,TRWAIL组和联合组细胞凋亡指数较空白对照组和DDP组明显增高(P＜0.05).结论 TRAIL蛋白使卵巢癌移植瘤细胞的Caspase-3表达增强,TRAIL蛋白促进肿瘤细胞凋亡发生.
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子痫前期患者胎盘组织中caspase-3,8,9的表达及临床意义
目的 研究半胱天冬氨酸蛋白酶-3,8,9(caspase-3,8,9)在子痫前期患者胎盘中的表达及临床意义.方法 选择2010年8月至2011年2月在西京医院妇产科住院分娩的孕妇40例,分为子痫前期组20例、正常妊娠对照组20例,采用免疫组化法、蛋白印迹法检测子痫前期患者和正常妊娠妇女胎盘中caspase-3,8,9的表达.结果 caspase-3,8,9在子痫前期胎盘和正常妊娠胎盘中均有表达;在子痫前期患者胎盘中,caspase-3,8,9表达与正常胎盘相比显著升高(t值分别为25.09、14.65、8.10,均P<0.01).结论 子痫前期患者胎盘组织中caspase-3,8,9的异常表达与滋养细胞凋亡增加有关,可能是导致子痫前期发生发展的重要病理因素.
