首页 > 文献资料
-
可卡因-苯丙胺调节转录肽对缺血-再灌注模型小鼠皮质突触可塑性的影响
目的 观察可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对缺血-再灌注(I/R)小鼠皮质突触可塑性的影响.方法 选用10~12周龄的健康雄性清洁级昆明小鼠288只,按照随机数字表法完全随机分为I/R组(81只)、I/R+CART组(81只)和假手术组(63只)、假手术+CART组(63只).建立大脑中动脉阻塞(MCAO)2 h再灌注模型.I/R+CART组于再灌注前经尾静脉注射CART(0.5μg,200μl),假手术+CART组予以等剂量CART;每24小时重复给药1次.在实现再灌注后不同时间点(24 h、72 h和7 d)采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测I/R组和I/R+CART组脑梗死体积;采用透射电镜观察各组不同时间点突触超微结构变化,并对突触形态学参数进行定量分析;采用Western Blot法观察再灌注72 h皮质梗死周围区突触后致密物95(PSD-95)蛋白表达水平.结果 (1)与假手术组比较,I/R组小鼠造模后24、72 h和7 d皮质切片中突触数量明显减少[(3.37±0.38)个/μm2比(7.04±0.55)个/μm2,(2.89±0.22)个/μm2比(6.89±0.04)个/μm2,(3.25±0.18)个/μm2比(6.78±0.42)个/μm2;均P<0.05],PSD密度明显下降[(24.4±2.8)nm比(47.3±6.1)nm,(23.8±3.7)nm比(46.5±7.5)nm,(24.6±2.2)nm比(48.1±5.1)nm;均P<0.05],突触间隙宽度增大[(25.2±2.1)nm比(21.5±1.6)nm,(25.2±1.4)nm比(21.3±1.0)nm,(23.7±2.6)nm比(21.6±1.6)nm;均P<0.05];再灌注后72 h时间点PSD-95蛋白表达水平下降(P<0.05);(2)与I/R组比较,I/R+CART组小鼠I/R后24、72 h和7 d脑梗死体积缩小[分别为(29.0±1.9)%比(36.3±1.4)%,(38.1±1.4)%比(47.6±2.7)%,(36.0±2.8)%比(42.5±2.0)%;均P<0.05];再灌注后72 h时间点突触数量[(4.32±0.35)个/μm2]明显增多(P<0.05),PSD-95蛋白表达水平增加(P<0.05);再灌注后24、72 h和7 d各时间点PSD密度[分别为(33.8±3.4)、(34.2±4.6)、(38.2±4.0)nm]增厚(均P<0.05);而各时间点突触间隙宽度差异无统计学意义(均P>0.05).结论 CART可缩小I/R小鼠脑梗死体积,改善缺血损伤后小鼠脑皮质神经细胞突触可塑性.
关键词： 可卡因-苯丙胺调节转录肽 再灌注损伤 皮质 突触可塑性 -
可卡因-苯丙胺调节转录肽对脑缺血-再灌注损伤小鼠脑保护机制的研究
目的 探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对缺血-再灌注小鼠脑梗死体积、脑组织8 -羟基-2'-脱氧鸟苷(8-OHdG)及3-硝基酪氨酸(3-NT)水平的影响. 方法 选用10 ～ 12周龄的健康雄性昆明小鼠264只,随机分为缺血-再灌注组、CART组、等渗盐水组(各72只)及假手术组(48只).建立大脑中动脉闭塞(MCAO)2h,再灌注12、24、48及72 h模型(每时间点6只).CART组于再灌注前经尾静脉注射CART55-102(0.5μg/kg,浓度12nmol/L;每24h重复给药1次),等渗盐水组给予同体积等渗盐水作对照.采用酶联免疫吸附实验双抗体夹心法测定脑组织中的8-OHdG和3-NT含量. 结果 ①CART组再灌注后各时间点脑梗死体积均小于缺血-再灌注组和等渗盐水组,其中24、48和72 h差异均有统计学意义(P＜0.01).②与假手术组比较,缺血-再灌注组、CART组及等渗盐水组在再灌注后各时间点脑组织中8-OHdG和3-NT含量均升高.③与缺血-再灌注组、等渗盐水组比较,CART组再灌注后各时间点脑组织中的8-OHdG和3-NT含量均有所下调.其中8-OHdG仅在12h差异有统计学意义(P＜0.05),3-NT在24、48及72 h时间点差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 CART对小鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用可能与下调8-OHdG及3-NT水平,抑制氧化应激有关.
-
内含子序列对CART基因转录调控作用的初步研究
目的 研究内含子序列对可卡因-苯丙胺调节转录肤(cocaine-and amphetamine-regulated transcript.CART)基因转录水平的调控作用.方法 分别以HeLa细胞和人源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的基因组DNA为模板,PCR扩增CART内含子Ⅰ(Intron)、CART截短内含子Ⅰ(去除NRSE基序,NBSEnon Intron)序列,克隆入载体 pGL3-Basic-CART32,构建pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron 荧光素酶报告载体.经质粒酶切和DNA测序进行鉴定.将报告载体瞬时转染入NT2/CloneD1细胞系,进行荧光素酶活性的分析.取1×107NT2/CloneD1细胞,采用抗NRSF和抗IgG抗体进行染色质免疫共沉淀,分析NRSF与CART内含子区NRSE的体内结合情况.结果 构建的pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron报告载体经酶切和测序鉴定正确.pGL3-Basic-CART32-Intren荧光素酶活性相对pGL3-Basic-CART32下调57.9%(P<0.05),pGL3-Basic-CART32-NBSEnon Intron相对pGL3-Basic-CART32-Intron上调53.8%(P<0.05).在NT2/CloneD1细胞中,CART内含子区NRSE调控元件能与NRSF蛋白结合.结论 研究结果表明,CART内含子序列对CART基因转录发挥负调控作用,内含子中的NRSE序列参与介导了其时CART基因的转录负调控作用.
-
可卡因－苯丙胺调节转录肽与脑缺血研究进展
可卡因－苯丙胺调节转录肽（ CART）是一种内源性神经肽，参与多方面的生理功能。本文就可卡因－苯丙胺调节转录肽的功能及其与脑缺血的研究进展作一综述。
关键词： 可卡因-苯丙胺调节转录肽 脑缺血 神经保护 氧化应激 -
慢性吗啡处理加强可卡因-苯丙胺调节转录肽mRNA在大鼠下丘脑的表达
目的观察可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)mRNAs在慢性吗啡处理后大鼠的下丘脑中表达的变化.方法采用PT-PCR克隆CART基因,用原位杂交观察慢性吗啡依赖大鼠下丘脑中CART mRNAs的表达.结果在视上核(SON)和室旁核(PVN),正常组的CART mRNAs阳性细胞数分别为44.2±s 14.3和85.3±s 34.6,慢性吗啡处理组分别为63.8±s 18.2和118.5±s 55.0;纳洛酮可阻断慢性吗啡处理引起的CART mRNAs阳性细胞数的增加,与吗啡依赖组相比分别减少34.0%和58.6%.结论CART可能参与吗啡依赖的形成;由于中枢CART的增加可明显抑制动物的进食行为,降低动物的体重,因此下丘脑CART mRNA的增加可能与吗啡依赖形成过程中进食行为的减少和体重的降低有关.
关键词： 可卡因-苯丙胺调节转录肽 吗啡依赖 原位杂交 视上核 室旁核 -
可卡因-苯丙胺调节转录肽
可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine amphetamine regulatedtranscript,CART肽)是一种在体内分布广泛的神经肽类物质.它具有广泛的生理作用,在奖赏与强化、进食与肥胖、精神焦虑行为、体液平衡、免疫功能、新陈代谢、内分泌以及其他的一些生理过程中均有作用.尤其CART肽在药物依赖中的作用研究使其自1981年发现以来迅速成为神经肽方面研究热点.
关键词： 可卡因-苯丙胺调节转录肽 药物依赖 -
可卡因-苯丙胺调节转录肽对小鼠缺血/再灌注的保护作用及脑组织8-OHdG和3-NT含量变化的研究
目的 探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(Cocain and am-phetamine regulated transcript peptides,CART)对脑缺血小鼠脑组织8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHdG)和3-硝基酪氨酸(3-nitrtyrosine,3-NT)水平的影响.方法 健康雄性昆明白小鼠随机分为4组:脑缺血组(每时间点n=15),CART组(每时间点n=15),生理盐水(NS)对照组(每时间点n=15),假手术组(每时间点n=12).建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,CART组、生理盐水对照组于缺血2h即刻分别经尾静脉注射给予CART55-102(0.5μg)或同体积NS.在脑缺血不同时间点分别进行脑梗死体积和脑组织8-OHdG及3-NT水平检测.结果 脑缺血后不同时间点脑组织8-OHdG及3-NT含量均被上调,CART可下调缺血后脑内8-OHdG及3-NT水平的升高,缩小梗死体积.结论 CART能通过下调8-OHdG及3-NT水平,抑制氧化应激,有效保护小鼠缺血性脑损伤.
-
可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及其突变体的表达纯化及生物活性观察
目的:表达纯化可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及其突变体,观察其对大鼠进食行为的影响.方法:PCR扩增CART活性片段CART55-102 cDNA,构建表达CART55-102原核表达载体,并对其68位和94位半胱氨酸残基突变,构建表达CART55-102(Cys68Ser)和CART55-102(Cys94Ser)原核表达菌株,经IPTG诱导表达后,亲和层析纯化3种小肽;行为学技术检测原核表达小肽对大鼠进食行为的影响.结果:获得的重组CART55-102及其突变体的纯度在95%以上,产物得率约75%;CART55-102可显著抑制饥饿大鼠的进食行为,而68和94位突变体对饥饿大鼠的进食行为无明显影响.结论:原核表达系统可以成功制备高纯度CART活性小肽和突变体,68位和94位突变导致CART抑制进食的作用消失.
关键词： 可卡因-苯丙胺调节转录肽 突变体 基因表达 纯化 二硫键 -
可卡因-苯丙胺调节转录肽在脑缺血中的神经保护机制
可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript peptides,CART)是一种存在于人和动物的内源性神经肽,参与调节体内多种生理和病理学过程.多项研究提示,CART在中枢神经系统中广泛分布,具有一定的中枢神经保护作用.文章对CART在脑缺血中的神经保护机制进行了综述.
关键词： 可卡因-苯丙胺调节转录肽 脑缺血 神经保护药 -
可卡因-苯丙胺调节转录肽对缺血性脑损伤及其神经元半胱天冬氨酸蛋白酶活性的影响
目的 探讨可卡因-苯丙胺调节转录(CART)肽对缺血性脑损伤及其半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)活性的影响.方法 将12只小鼠随机分为CART组与对照组,CART组小鼠侧脑室注射CART多肽,对照组注射生理盐水,然后制作脑缺血模型,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测量梗死体积.体外培养小鼠皮质神经元,制作缺糖缺氧神经元模型,加入CART多肽或生理盐水,用噻唑蓝染色测细胞生存率,酶联法检测Caspase-3活性.结果 CART组脑梗死体积[(0.225±0.044)mm3]显著小于对照组[(0.389±0.055)mm3](P＜0.05);CART组神经元生存率(0.494±0.056)显著高于对照组(0.348±0.174)(P＜0.05);CART组神经元Caspase-3活性(45674±9780)显著低于对照组(51172±2776)(P＜0.01).结论 CART多肽可明显减少缺血性脑梗死体积,提高缺氧神经元的生存率,并降低缺氧神经元的Caspase-3活性.
关键词： 可卡因-苯丙胺调节转录肽 脑缺血 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 -
多巴胺调控CART对缺血性脑卒中的保护作用
目的:探索多巴胺(dopamine,DA)和可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript peptides,CART)对缺血性脑卒中的作用及调控机制.方法:利用大鼠急性缺血性脑损伤模型,通过外源性给药,测定神经功能缺损评分、脑梗死体积和炎症小体活化,阐明DA和CART在急性缺血性脑损伤中的表达和作用.结果:DA和CART均能降低急性脑缺血损伤大鼠的神经功能缺损评分和脑梗死体积,抑制炎症小体的活化,并且CART的表达受到DA的调控.结论:DA通过CART减少炎症小体活化,对缺血性脑卒中产生保护作用.
关键词： 多巴胺 可卡因-苯丙胺调节转录肽 急性缺血性脑损伤 炎症小体
