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野菊花提取物对人肝癌MHCC97H细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察中药野菊花提取物(chrysanthemum indicum extact,CIE)对人肝癌MHCC97H 细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养人肝癌MHCC97H细胞,以0.4、0.8、1.2 mg/ml的CIE(实验1、2、3组)作用于MHCC97H细胞,并设立空白对照组.分别于药物作用24、48、72 h时,应用MTT法检测细胞增殖情况.于药物作用24 h时,用AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡、Rhol23检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化;Western blot检测细胞色素C、Caspase-9、-3的蛋白表达.结果 三种浓度的CIE对MHCC97H细胞的增殖均有明显的抑制作用,且呈明显的时间和浓度依赖性.与对照组相比,各实验组MHCC97H细胞的凋亡率明显增高(P＜0.05),线粒体膜电位水平明显降低(P＜0.05),细胞色素C、Caspase-9和-3的蛋白表达显著增强(P＜0.05),以上各项均呈明显的量效关系.结论 野菊花提取物对肝癌MHCC97H的增殖具有抑制作用,这可能与药物诱导肝癌细胞凋亡有关.线粒体途径可能是CIE诱导MHCC97H细胞凋亡的主要机制之一.
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蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α表达的影响
目的 研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(snake venom cystatin,sv-cystatin)重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响.方法 采用ELISA方法检测不同浓度sv-cystatin重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α分泌的影响;实时定量PCR和Western blot法分别分析不同浓度sv-cystatin重组蛋白体外处理人肝癌MHCC97H细胞后TGF-β2、TNF-α的mRNA及蛋白表达.结果 与对照组相比,5种浓度的sv-cystatin重组蛋白对MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α的分泌具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);25、50、100、200 mg·L-1 4种浓度的重组蛋白能够抑制TGF-β2的mRNA及蛋白表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);而50、100、200 mg·L-13种浓度的重组蛋白能够抑制TNF-α的mRNA及蛋白表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 sv-cystatin重组蛋白可能通过抑制TGF-β2和TNF-α的表达来发挥多方面的抗肿瘤作用.
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卵泡抑素样蛋白5对HCCLM3细胞迁移和侵袭的影响
目的 探讨卵泡抑素样蛋白5(follistatin-like 5,FSTL5)在不同肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞株中的表达及在HCCLM3细胞迁移、侵袭中的作用.方法 取对数生长期HCC细胞(SMMC-7721、HepG2、HCCLM3、MHCC97H、PLC)和永生化正常肝上皮细胞LO2,采用实时荧光定量PCR法检测FSTL5 mRNA相对表达量.将对数生长期HCCLM3细胞随机分为转染组和对照组,转染组转染FSTL5的表达质粒,对照组转染空白质粒;转染24 h,采用实时荧光定量PCR法检测2组HCCLM3细胞FSTL5 mRNA相对表达量,划痕愈合试验检测HCCLM3细胞迁移能力,Transwell小室法检测HCCLM3细胞侵袭能力,三维培养实验检测HCCLM3细胞伪足生长情况.结果 FSTL5 mRNA相对表达量在SMMC-7721 (0.37±0.03)、HepG2 (0.43±0.03)、HCCLM3 (0.19±0.02)、MHCC97H(0.28±0.02)、PLC细胞(0.35±0.01)均低于LO2细胞(1.04±0.04)(P＜0.05),且在HCCLM3细胞表达量低(P＜0.05);转染24 h,转染组HCCLM3细胞FSTL5 mRNA相对表达量(12.04±1.42)明显高于对照组(1.00±0.25)(P＜0.05),划痕愈合率[(24.7±2.4)％]、侵袭细胞数目[(11.7±2.3)％]均明显低于对照组[(86.7±3.7)％、(34.7±5.9)％](P＜0.05);三维培养实验结果显示,转染组HCCLM3细胞克隆球未见伪足生成,对照组可见少量伪足生成且延展性较好.结论 HCC细胞(SMMC-7721、HepG2、HCCLM3、MHCC97H、PLC)中FSTL5表达明显降低,过表达FSTL5可抑制HCCLM3细胞迁移和侵袭.
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雷公藤红素对人肝癌MHCC97H细胞侵袭转移的影响及机制研究
目的:探讨雷公藤红素对人肝癌MHCC97H细胞侵袭转移的抑制作用及相关机制.方法:应用Transwell技术观察不同浓度(2.5 μmol·L-1、5.0 μmol·L-、10.0 μmol·L-1)雷公藤红素对MHCC97H细胞侵袭力和迁移力的影响.Westernblot法检测雷公藤红素处理后对C-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及NF-κB/p65核浆分布变化的影响.结果:雷公藤红素处理后24 h,迁移实验及侵袭实验结果显示,加药组透膜细胞数较对照组明显减少(P＜0.05).Westerblot结果显示磷酸化JNK表达上调,NF-κB/p65入核减少.结论:雷公藤红素体外具有抑制人肝癌细胞侵袭和转移的作用,其机制可能与活化JNK通路、抑制NF-κBp65入核有关.
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消癌平注射液对人肝癌HepG2和MHCC97H细胞侵袭和转移抑制作用及分子机制研究
目的:研究消癌平注射液(XAP)对人肝癌HepG2和MHCC97H细胞侵袭和转移抑制作用及分子机制.方法:MTT法检测XAP对人肝癌细胞株HepG2和MHCC97H的增殖抑制作用,通过划痕实验、Transwell实验检测XAP对HepG2和MHCC97H细胞迁移能力的抑制作用,采用Transwell包被基质胶实验检测XAP对HepG2和MHCC97H细胞侵袭能力的抑制作用,应用Western blotting方法检测XAP对HepG2和MHCC97H细胞MYOF、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响.结果:MTT法结果显示,当XAP浓度为80μl·ml-1作用24 h时,HepG2和MHCC97H细胞的存活率约为70％;XAP浓度为120μl·ml-1及160μl·ml-1时,对HepG2和MHCC97H细胞的增殖抑制作用逐渐增强(P<0.01).48 h时,XAP呈剂量依赖性抑制HepG2和MHCC97H细胞的增殖(P<0.05或P<0.01).划痕实验和Transwell实验结果显示XAP呈剂量依赖性地抑制佛波酯(12-O-tetradecanoylphor-bol13-acetate,TPA)诱导的HepG2和MHCC97H细胞迁移(P<0.05或P<0.01).Transwell包被基质胶实验显示XAP呈剂量依赖性地抑制TPA诱导的HepG2和MHCC97H细胞的侵袭(P<0.05或P<0.01).Western blotting结果表明XAP抑制TPA诱导的HepG2和MHCC97H细胞中MYOF、MMP-2、MMP-9蛋白表达的升高(P<0.05或P<0.01).结论:消癌平注射液能够抑制肝癌HepG2和MHCC97H细胞的侵袭和转移,其抑制作用可能与调控MYOF从而抑制基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达相关.
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TGFβRⅡ基因对肝癌细胞MHCC97H体外增殖和侵袭能力的影响
目的：研究慢病毒介导TGFβRⅡ基因对肝癌细胞MHCC97H体外增殖和侵袭能力的影响。方法：构建 TGFβRⅡ慢病毒载体 Lenti-TGFβRⅡ-puromycin-eGFP 并转染至人肝癌细胞 MHCC97H。 qPCR 和Western Blot检测TGFβRⅡ的表达。应用MTS和Transwell观察97H细胞增殖和侵袭能力的改变。结果：97H细胞成功转入 TGFβRⅡ，与对照组相比，qPCR 和 Western Blot 提示 TGFβRⅡ表达明显升高。 MTS 和Transwell实验结果显示在高表达TGFβRⅡ后其增殖和侵袭能力下降。结论：过表达TGFβRⅡ基因抑制肝癌细胞生长，提示该基因有望成为肝癌治疗的一个新方法。
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MEK1表达载体的构建及其对肝癌细胞ERK通路活性的影响
目的 构建pcDNA3.1(+)-MEK1真核表达载体,体外转染人肝癌MHCC97H细胞,观察MEK1在肝癌细胞中的表达及其对ERK通路活性的影响.方法 应用RT-PCR扩增出MEK1基因插入pcDNA3.1(+)中,形成重组载体pcDNA3.1(+)-MEK1.经测序确认后,利用LipofectamineTM 2000将重组载体转染MHCC97H肝癌细胞,使用含G418的培养基进行筛选;将肝癌细胞分为不转染组、转染空载体组和转染重组载体组,运用Western-blot方法检测MEK1、p-MEK1、ERK1/2、p-ERK1/2在各组细胞中的表达并绘制各组细胞的生长曲线对比其增殖能力.结果 重组载体pcDNA3.1(+)-MEK1酶切鉴定电泳条带大小正确,测序结果经Blast比对与人MEK1基因开放性读码框100％吻合;重组载体载体转染肝癌细胞后MEK1表达水平较不转染及转染空载体载体组细胞显著升高,且磷酸化的MEK1及ERK1/2水平也明显升高,转染重组载体载体的肝癌细胞增殖能力得到显著增强.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-MEK1,过表达MEK1蛋白可提高肝癌细胞MAPK/ERK通路活性.
