首页 > 文献资料
-
抑制NF-κB信号通路抗心脏异种移植延迟性排斥反应作用研究
目的：观察抑制NF-κB信号通路对心脏移植异种移植延迟性排斥反应（DXR）的影响，探讨在DXR过程中心肌细胞凋亡的作用机制。
方法：选取ICR小鼠为供体动物，SD大鼠为受体动物。ICR小鼠及SD大鼠随机分为三组，每组12只：对照组， siRNA阴性对照组（siRNA-NC组）及siRNA组。每组6只移植后48 h处死，做各项指标检测，剩余6只用于观察供心生存曲线。HE染色观察心肌组织病理学改变；透射电镜观察各组心肌组织的超微结构变化；TUNEL法检测心肌组织凋亡指数；特异性探针染色法检测线粒体膜电位；ELISA法检测caspase-3活性；比色法检测NO含量、iNOS活性；Western Blot检测NF-κB p65及凋亡相关蛋白Fas及Fas-L的表达。 -
一个简便的猪-猴异种心脏移植模型的建立
目的建立一个简便的研究延迟性排斥反应的猪-猴异种心脏移植模型.方法通过流式细胞仪法监测猕猴体内天然抗体水平在出生后0.5～3月龄的变化,选择新生梅山猪和2.5月龄中国猕猴分别作为供、受体,建立非协调性猪-猴异种移植模型.观察移植心存活时间,排斥后取移植心进行电镜、病理及免疫组化检查.结果 IgM类天然抗体水平出生后缓慢上升,3月龄时达到31%左右,而IgG类天然抗体水平始终处于低水平.移植心脏平均存活时间36 h,电镜、病理及免疫组化显示为延迟性排斥反应.结论选择新生梅山猪和2.5月龄中国猕猴建立非协调性猪-猴异种移植模型,可方便克服急性排斥反应,从而有助于延迟性排斥反应的研究.
-
利用siRNA抑制NF-κB p65蛋白表达对EOMA细胞中TF表达影响
目的 探讨针对小鼠EOMA细胞核因子κB(NF-κB)的小干扰RNA(siRNA)对细胞中组织因子(TF)表达的抑制作用.方法 设计并化学合成针对小鼠NF-κB p65的siRNA,按照实验分组分别转染小鼠EOMA细胞,转染24 h后,在相应细胞中加入肿瘤坏死因子α(TNF-α,终浓度为20 mg/L),于此后6 h分别提取各组细胞总蛋白及RNA,检测细胞内NF-κB p65蛋白表达和TF的mRNA水平.结果 TNF-α刺激6 h后,与空白对照组相比,阴性对照组、scramble siRNA组细胞内NF-κB p65蛋白表达和TF mRNA水平增加,而siRNA组则明显受到抑制;TNF组、TNF+scramble siRNA组细胞内NF-κB p65蛋白表达和TF mRNA水平明显增加,TNF+siRNA组细胞内NF-κB p65蛋白表达和TF mRNA水平较空白对照组有所增加,但明显低于TNF组、TNF+scramble siRNA组(P<0.01).结论 利用siRNA抑制NF-κB p65蛋白表达可以有效地抑制NF-κB下游靶基因TF的表达.
-
NF-κB p65 siRNA对延迟性排斥反应的抑制作用
目的 探讨核因子kappa B(NF-κB) p65的小干扰RNA (siRNA)对延迟性排斥反应的抑制作用.方法血管内皮细胞(EOMA)分为7组:A组(空白对照),B组(阴性对照),C组(TNF-α处理),D组(siRNA处理),E组(scramble siRNA处理),F组(TNF-α+ siRNA处理),G组(TNF-α+scramble siRNA处理).用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000作为转染试剂将化学合成的小鼠NF-κB p65 siRNA转染入相应的EOMA细胞,24 h后在C组、F组和G组中加入TNF-α(终浓度为20 ng/ml).于TNF-α加入后的6h提取各组细胞总RNA,RT-PCR法测定EOMA细胞内E选择素(E-selectin)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、白细胞介素1α(IL-1α)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)水平.结果 F组EOMA细胞内E-selectin、ICAM-1、IL-1α和VCAM-1表达明显高于A组,的明显低于C组和G组(P＜0.01).结论 特异性siRNA抑制NF-κB p65表达可以有效抑制延迟性排斥反应.
