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非核苷类逆转录酶抑制剂在抗HIV-1中的作用
目的阐述非核苷类逆转录酶(RT)抑制剂的性质、特点和在治疗HIV-1感染中的作用.方法参阅相关文献对其进行综述.结果与结论非核苷类RT抑制剂是一大类化学结构各异的化合物,它们结合于RT上一个非底物结合的变构部位,使RT失去活性.从天然化合物中寻找新的非核苷类RT抑制剂是一条治疗HIV-1感染的极有希望的途径.
关键词: 非核苷类逆转录酶抑制剂 HIV-1 逆转录酶 天然化合物 -
HIV-1逆转录酶的二聚化及其抑制剂的研究进展
目的 综述HIV-1逆转录酶的二聚化及其抑制剂的研究进展.方法 查阅近年相关文献,进行分析评述.结果 与结论酶的二聚化是逆转录酶发挥功能所必需的,抑制逆转录酶二聚化成为近年来研究抗HIV药物的一个新的靶点,现已发现的两类二聚化抑制剂为研究新的抗HIV药物提供了基础.
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氟尿嘧啶体外抗艾滋病毒作用
从分子生物学角度看,在肿瘤和获得性免疫缺陷综合征(艾滋病)的发生中,RNA逆转录病毒扮演了十分重要的角色.艾滋病毒HIV-1,HIV-2和人类T细胞白血病病毒HTLV-Ⅰ,HTLV-Ⅱ在病毒传播途径,T细胞嗜性,合胞体形成,依赖Mg2+的逆转录酶,P24核心蛋白质作用于转录或转录后的病毒编码蛋白等方面有很多相似处.所以,作用于肿瘤的有效药物,如作用机制属于上述的任一环节,则同样也能作用于艾滋病,且有效.笔者在进行一种配合物体外抗艾滋病毒研究中,发现氟尿嘧啶具有较强的体外抗艾滋病毒活性.
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首批逆转录酶活性测定国家标准品的研制
目的 研制首批逆转录酶活性测定国家标准品.方法 按《中国药典》2015年版三部相关要求,进行逆转录酶活性测定标准品的制备、检验,并使用热加速试验进行稳定性考察,以SYBR Green Ⅰ实时定量聚合酶链式反应法分别在4个实验室进行协作标定.结果 制备的逆转录酶活性测定标准品外观、无菌检查合格,水分含量为1.3%,分装精度为0.75%.在-20、4、25和37℃放置3个月和6个月的标准品与-70℃保存的标准品相比酶活性均没有下降.经4个实验室协作标定共22次,标准品酶活性的几何平均值为每支26 U,95%置信区间为每支22.95 ~30.45 U.结论 该批逆转录酶活性测定标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品使用,酶活性定为每支26 U.
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拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的耐药性研究
拉米夫定(Lamivudine,简称3TC)是具有强大抑制病毒作用的新一代核苷类药物.我国药品监督管理局及美国FDA在1998年底批准该药用于治疗慢性乙型肝炎(CHB).经国内外5年多临床研究,治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染者5000多例,发表论文近200篇,结果证明:拉米夫定在细胞内磷酸化为三磷酸拉米夫定后发挥其抑制逆转录酶,阻断病毒DNA合成与复制作用.临床治疗CHB患者,可降低体内HBV病毒水平,降低ALT水平和胆红素水平,恢复肝功能;亦可明显改善肝组织学,包括已形成的肝纤维化、肝硬化;延缓肝纤维化与肝硬化的进程[1].但引起人们关注的是拉米夫定治疗9~10个月后,开始出现对拉米夫定耐药的HBV株,这些HBV株的聚合酶基因发生变异,多为YMDD株,导致疗效下降,不少人据此对拉米夫定的效果产生疑问.因此,对拉米夫定耐药现象及耐药机制的研究又成为另一热点.本文就研究的现状进行综述.
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免疫受损宿主社区获得性肺炎的诊断和治疗
免疫受损宿主(immunocompromised host,ICH)好发各类感染,肺部感染尤其常见.过去由于引发免疫损害的各种基础疾病治疗困难,患者大多长期住院,往往因为严重感染不治而终,凡是ICH并发感染总是讨论医院感染为主.但近年来HIV/AIDS高活性抗逆转录酶治疗(HARRT)的发展使患者CD4+较快恢复,而器官移植和肿瘤治疗的长足进步,患者回归社会的机会增加,甚至恢复工作.但感染仍是ICH常见和影响预后的重要并发症.所以ICH的社区感染同医院感染一样引起临床关注.
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乙型肝炎病毒血清标志物的临床应用
1 乙型肝炎表面抗原(HBsAg)为HBV外衣壳S蛋白,在无病毒复制的情况下S基因可通过mRNA逆转录酶复制生成,故不反映病毒增殖,是HBV感染和携带的标志,用于肝炎鉴别诊断,流行病学研究和输血安全保证.急性肝炎可在转氨酶升高前或症状出现前1~7周测出,发病3周约半数阳性,高峰在感染后2~3月,多数病人半年后清除,然后表面抗体升高.HBsAg阳性持续半年或一年以上为HBV慢性携带者,母婴传播可携带数十年,此期虽无明显症状但可有肝细胞损害,与免疫功能紊乱或合并HCV或HDV感染有关.其中部分病人将发展为慢性肝炎、肝坏死、肝硬化,少数患者发生肝细胞癌.
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hTERT启动子调控下HSV-tk/GCV系统对人卵巢癌细胞系Skov3的杀伤作用
目的探讨hTERT启动子驱动下的HSV-tk/GCV系统对人卵巢癌细胞系Skov3的体外杀伤作用.方法应用分子生物学方法构建hTERT启动子调控下的tk基因真核表达载体pBTdel-279-tk,并应用脂质体转染法将之转入Skov3、正常人卵巢上皮细胞(NOEC)和人胚肺成纤维细胞中,加入GCV,用MTT法和流式细胞术检测pBTdel-279-tk/GCV系统对各种细胞的杀伤作用;应用RT-PCR法检测pcDNA3-tk和pBTdel-279-tk转染前后卵巢癌细胞和正常细胞中tk基因的表达情况.结果pBTdel-279-tk/GCV对端粒酶阳性的卵巢癌细胞有明显的杀伤作用,而对端粒酶阴性的正常细胞则无;hTERT启动子系统诱导卵巢癌细胞凋亡的效能与CMV启动子近似,两者差别无显著性意义.pcDNA3-tk转染后,在Skov3细胞和NOEC中均可探测到tk基因;而pBTdel-279-tk转染后只有Skov3可探测到tk基因,NOEC中则无.结论hTERT启动子调控下的tk基因治疗是一种新的卵巢癌靶向治疗方法,具有更高的特异性和高效性.
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肺癌端粒酶测定及其活性的研究
端粒是真核细胞染色体末端的串链重复DNA序列,其长度与细胞寿命的调控密切相关[1].端粒酶是具有逆转录酶功能的核糖核蛋白酶,能以自身的RNA为模板合成端粒DNA,以补偿细胞分裂时端粒的缩短[2].
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转导人端粒酶逆转录酶基因致人成骨细胞永生化的研究
目的建立永生化的人成骨细胞系供骨科临床和基础研究使用.方法将人骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞,以逆转录病毒为载体,导入人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)全长cDNA,经筛选得到阳性克隆,体外连续传代,检测hTERT基因的整合情况及其表达,并对不同代次细胞的成骨特性进行了检测.结果成功地将hTERT基因转入人成骨细胞,得到的转化细胞端粒酶表达阳性,增殖旺盛,至今已传至62代,对第25、第55代转化细胞分别进行碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨桥素的检测,证明此永生化细胞保持了良好的成骨特性.结论转导外源性的hTERT基因可以导致人成骨细胞永生化且可保持其正常的成骨特性.
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中药化学数据库中HIV RT(NNRTI)/IN双靶点抑制剂的虚拟筛选
[目的]从天然产物中筛选人类免疫缺陷病毒(HIV)非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)和整合酶链转移抑制剂(INSTI)作用位点的双靶点抑制剂[RT(NNRTI)/IN].[方法]运用分子模拟技术和计算机辅助药物设计(CADD)方法,构建HIV RT(NNRTI)/IN双靶点抑制剂分子相似性搜索模型、NNRTI和RT以及INSTI和IN对接模型,采用两种策略对中药化学数据库(TCMD)进行筛选.[结果]共命中与RT和IN对接得分均大于6的化合物35个,包括黄酮类、生物碱类、苷类、多酚类等,黄酮类化合物(15个)占到了42.86%.[结论]黄酮类化合物是开发潜在HIV RT (NNRTI)/IN双靶点抑制剂的主要来源,上述研究为天然产物来源的HIV双靶点药物发现提供了新线索.
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天然产物中的HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂
综述了天然产物中对HIV-1逆转录酶具有抑制活性的化合物的来源和分类.重点介绍了几种HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)的性质、特点、抗HIV-1活性及其构效关系.从天然资源和传统中草药发现具有新结构、新作用机制的天然NNRTIs是开发研制抗HIV-1药物的一条极有希望的途径.
关键词: HIV-1 逆转录酶 非核苷类逆转录酶抑制剂 -
白血病患者nm23-H1 mRNA表达及其临床意义
nm23基因在人类肿瘤发生、发展中的作用日益受到重视,其在某些肿瘤中表达与高转移潜力有关已有较多报道,近年来发现在白血病中它与细胞的分化与增殖有关,参与白血病的发生、发展过程。我们用RT-PCR技术,检测白血病患者骨髓细胞nm23-H1基因表达,并探讨其与临床的关系。对象和方法1 研究对象急性白血病(AL)患者47例,其中急性髓系白血病(AML)36例(M2 10例, M 3 9例,M4 9例,M5 8例),急性淋巴细胞白血病(ALL)11例;男26例,女21例;年龄 14~71岁,平均31岁;初治42例,复发5例。慢性髓细胞白血病(CML)16例,其中急变期6 例,慢性期10例;男6例,女10例;年龄19~66岁,平均49岁。所有患者经临床及实验室检查确诊,符合FAB诊断标准。10例非血液病患者的骨髓标本作为对照。白血病患者及对照组标本均检测了nm23-H1基因表达,以GAPDH作为内对照。2 单个核细胞(MNC)的分离及总RNA提取取骨髓1~2?ml,肝素抗凝,以Hanks液稀释3~4 倍,用淋巴细胞分离液(Ficoll,相对密度1.077)分离MNC,采用 Trizol试剂一步法提取细胞总RNA,用紫外分光光度计测定RNA的量,A260/A280鉴定RNA纯度,-70?℃保存。3 cDNA合成及PCR扩增逆转录反应体系20 μl,含总RNA 1 μg,4×dNTP(10 mmol/L) 2 μl,Oligo(dT)15 500 ng,AMV逆转录酶12 U,RNA酶抑制剂20 U,10×逆转录缓冲液2 μl。42 ℃孵育1 h,99 ℃ 5 min灭活逆转录酶,双蒸水稀释2倍,-70 ℃冻存备用。PCR引物由上海生物工程公司合成。nm23-H1上游引物为5′-ATGGCCAACTGTGAGCGTACC -3′,下游引物为5′-CATGTATTTCACCAGGCCGGC-3′,扩增产物长度为204?bp[1]。GAPDH上游引物为5′-ACATCGCTCAGACACCA-TGG3′,下游引物为5′-GTAGTTGAGGTCAA TGAAGGG-3′,扩增产物长度为150?bp[1]。PCR反应体系25?μl,内含10×扩增缓冲液2.5?μl,dNTP 0.2?μmol/L,两引物各0.3?μmol/L,Taq?DNA聚合酶1?U,cDN A 4?μl,MgCl2 1.5?mmol/L。扩增条件:95?℃变性15?s,57?℃退火30?s,72? ℃延伸30?s,共35个循环。所用试剂为Promega公司生产。4 PCR产物分析取10?μl扩增产物,用15?g/L琼脂糖凝胶(含0.5?μg/ml溴化乙锭)电泳,80?V,1?h。紫外投射仪下观察结果并照相。用nm23-H1与GAPDH吸光度积分比值反映 nm23-H1 转录本的含量。5 临床治疗方案 ALL患者采用VCDP(长春新碱、环磷酰胺、柔红霉素、泼尼松)或VDLP(L为左旋门冬酰胺酶)方案诱导缓解,复发者加用足叶乙甙(Vp16)或用AVM(阿糖胞苷、鬼臼噻吩甙、米托蒽醌)方案。M3患者用全反式维甲酸(ATRA)诱导或联合DA(柔红霉素、阿糖胞苷)、HA(高三尖杉酯碱、阿糖胞苷)方案;其他 AML亚型用DA、HA方案诱导缓解,复发者加用Vp16、鬼臼噻吩甙或米托蒽醌。CML慢性期患者用羟基脲或加用干扰素,急变后按急性白血病方案治疗。6 疗效标准按文献[2]标准。7 统计学处理采用t检验、μ检验。
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红厚壳属植物中的香豆紊类和咕吨酮类化合物对HIV-1逆转录酶和HIV-1复制的抑制
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083穴状昆布中的phlorotannins对HIV-1逆转录酶和蛋白酶的抑制作用
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黄花夹竹桃叶中的黄烷酮和黄酮醇苷及其抑制HIV-1逆转录酶和整合酶活性
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膦甲酸钠的研究现状及临床应用
膦甲酸钠(Trisodium phosphonoformate,PFA) ,商品名:可耐.为一种焦磷酸盐类物质,能抑制病毒的RNA和DNA 聚合酶,亦能抑制人免疫缺陷病毒(HIV)逆转录酶.对巨细胞病毒,疱疹病毒等病毒有较好的疗效,是一种高效低毒的广谱抗病毒新药.本文仅将膦甲酸钠的研究及临床应用作一综述.
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化学合成的HIV-1逆转录酶和整合酶双靶点抑制剂研究进展
近年来,单组分多靶点抗I型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)药物的研发成为热点,已发现的多靶点抑制剂以针对HIV-1逆转录酶(reverse transcriptase,RT)和整合酶(integrase,IN)的双靶点抑制剂居多,特别是作用于非核苷类逆转录酶抑制剂(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor,NNRTI)作用位点和IN活性位点的双靶点抑制剂[简写为:RT(NNRTI)/IN]种类繁多,现将对其中化学合成的HIV-1 RT(NNRTI)/IN双靶点抑制剂研究进展进行综述.
关键词: Ⅰ型人类免疫缺陷病毒 逆转录酶 整合酶 双靶点抑制剂 -
乙型肝炎病毒耐药变异对血清病毒DNA水平的影响
目的 了解HBV逆转录酶区A181T突变对人体血清HBV-DNA水平的影响.方法 对2007年7月-2011年12月住院的慢性乙型肝炎患者进行HBV逆转录酶区序列测定,选取181T单独突变患者43例,未检测出已知突变患者117例,另选前一次检测为阴性而后一次检测为阳性的患者7例,对其突变前后HBV-DNA水平进行检测比较.结果 病毒逆转录酶区存在A181T单独突变的患者,其血清HBV-DNA水平与逆转录酶区未检测出已知耐药突变者血清HBV-DNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);同一患者突变前后的血清HBV-DNA水平比较,差异也无统计学意义(P﹥0.05).结论 HBV逆转录酶区A181T突变对人体血清HBV-DNA的水平没有显著影响,不会影响临床以血清HBV-DNA水平的变化判断抗病毒治疗效果的准确性.
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端粒酶在肿瘤疾病中的表达及研究进展
端粒酶是近年来发现的与肿瘤发生发展密切相关的一种逆转录酶,已成为肿瘤研究的热点.目前的研究表明[1],已知85%的人肿瘤组织发现了端粒酶活性的表达,而与肿瘤相邻的正常组织或良性病变仅为4%左右,这种显著的相关性提示端粒酶在肿瘤细胞恶性状态的形成和发展中起着关键作用.