CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导的人近曲肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管细胞转分化的可能影响.方法:采用体外培养的人近曲肾小管上皮细胞株(HK2),分别观察CTGF反义寡核苷酸和AngⅡ干预细胞对细胞CTGF mRNA和蛋白质的表达、细胞内超微结构及细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.结果:AngⅡ干预HK2细胞48 h后,细胞CTGF mRNA和蛋白的表达显著增高(P＜0.01);AngⅡ干预96 h后,细胞超微结构显示出间质细胞样结构;这些作用都可被CTGF反义寡核苷酸显著抑制.AngⅡ可以呈时间依赖性地刺激HK2细胞表达α-SMA,这些作用可以被CTGF反义寡核苷酸显著抑制(P＜0.01).对照组错义寡核苷酸无上述作用.结论:CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导HK2细胞转分化具有显著的抑制作用,提示CTGF可能介导了AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞转分化.

RegⅣ基因在结直肠癌细胞系中的mRNA表达及pcDNA-RegⅣ的构建与转染

目的:探讨RegⅣ基因在4种结直肠癌细胞系中的表达水平,构建并转染pcDNA-RegⅣ重组质粒,为阐明RegⅣ基因在结直肠癌发生发展中的作用机制奠定基础.方法:采用RT-PCR方法检测HT-29、Caco-2、Sw480、LoVo细胞系的RegⅣ基因表达水平,将获得目的基因RegⅣ克隆于pcDNA3.1/(-)质粒上,用PCR、酶切进行鉴定后,脂质体转染至低表达甚至不表达RegⅣ的结直癌细胞系,用G418筛选后进行RT-PCR鉴定.结果:HT-29、Caco-2细胞系RegⅣ基因高表达,Sw480细胞系表达较前两者弱,LoVo细胞系RegⅣ阴性表达;构建的重组质粒中含有RegⅣ基因,经pcDNA-RegⅣ转染的LoVo细胞RegⅣ基因呈阳性表达.结论:RegⅣ基因在不同的结直肠癌细胞系中表达水平不同.成功构建和转染了pcDNA-RegⅣ,可使得RegⅣ(-)的LoVo细胞系RegⅣ基因呈阳性表达.

用原子力显微镜表征DNA纯化效果的实验研究

目的:运用原子力显微镜(AFM)表征3种DNA纯化试剂盒对DNA的纯化效果.方法:PCR扩增K562/A02细胞mdr1基因DNA,分别以3种不同的DNA纯化试剂盒对PCR产物进行纯化后,按终浓度为10 ng·μl-1固定在用1 ng·μl-1L型多聚赖氨酸预先处理过的新剥离的云母片上,用AFM获取DNA扫描图像,分析评价3种DNA试剂盒对DNA的纯化效果.结果:用AFM成功表征3种纯化试剂盒纯化后DNA片段,获得了清晰的DNA图像.对3种DNA纯化试剂盒的纯化效果作出评价,建议其中的两种DNA纯化试剂盒的DNA纯化产物可用于AFM的DNA分析.结论:用AFM表征DNA时对DNA的纯度要求较高.通过对3种DNA纯化试剂盒纯化效果的比较,为AFM观测DNA样本的纯化方法提供了较好的方案.

MDP-Cyclic与CpG-ODN 1826对小鼠膀胱瘤免疫治疗效应的初步研究

目的:研究卡介苗(BCG)有效成分MDP-Cyclic和细菌细胞核有效成分CpG-ODN 1826免疫治疗小鼠膀胱瘤效应.方法:用小鼠膀胱肿瘤细胞(BTT739)在T739小鼠皮下接种,肿瘤形成后,于瘤内多点注射MDP-Cyclic或CpG-ODN 1826共3次.ELISA检测IFN-γ和IL-4含量,3H-TdR掺入法和MTY法检测脾淋巴细胞增殖效应和对靶细胞杀伤效应.结果:(1)与生理盐水(NS)对照组相比,联合应用MDP-Cyclic和CpG-ODN 1826组小鼠肿块重量明显减轻,优于单独使用CpG-ODN 1826组;(2)联合用药能明显促进IFN-γ分泌,而对IL-4没有显著影响;(3)脾淋巴细胞对联合用药或单用MDP-Cyclic刺激均有增殖作用,与NS对照组相比差异有统计学意义;(4)脾淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤率联合用药组高于其它组.结论:联合应用免疫调节剂MDP-Cyclic和CpG-ODN 1826能抑制小鼠膀胱肿瘤生长.

MnCl2对树突状细胞调节T细胞抗肿瘤活性的实验研究

目的:探讨不同浓度MnCl2对树突状细胞(DC)调节T细胞抗肿瘤活性的影响.方法:采用析因实验设计,分析MnCl2浓度、DC细胞浓度、效靶比三因素各水平对DC调节T细胞抗人肝癌细胞株(Huh7)活性的影响;流式细胞仪检测MnCl2佳刺激组与空白组DC膜分子HLA-DR表达;体内实验分析MnCl2佳刺激组DC在SCID小鼠体内对T细胞抗Huh7活性的调节作用.结果:MnCl2浓度、DC细胞浓度、效靶比三因素各水平对T细胞杀伤活性皆产生显著效应(P＜0.01),并且3个因素中两两有协同作用(P＜0.01).佳MnCl2刺激浓度为300μmol·L-1,该浓度MnCl2能显著提高DC表面HLA-DR表达水平及阳性细胞率(P＜0.01).在SCID小鼠体内,MnCl2刺激组DC成瘤率为2/5,对照组成瘤率为5/5;MnCl2刺激组的肿瘤平均体积为0.42 cm3,对照组为2.95 cm3.刺激组的成瘤率及肿瘤平均体积皆小于对照组(P＜0.01).结论:300p,mol·L-1MnCl2能显著提高DC表面HLA-DR表达水平及阳性细胞率;MnCl2激活的DC在体外能显著增强T细胞杀伤活性并在SCID小鼠体内能显著抑制肿瘤生长.

糖基化终产物对人肾小球系膜细胞半乳糖凝集素-3基因表达的影响

目的:研究糖基化终产物(AGEs)对人肾小球系膜细胞半乳糖凝集素-3(galectin-3)表达的影响.方法:将培养的人肾小球系膜细胞(HRMC)用不同浓度(50、100、200及400mg·L-1)的AGEs干预24 h或同一浓度(200mg·L-1)的AGEs干预0、48、48及72 h,以无血清培养基(DMEM)和相应浓度的牛血清白蛋白(BSA)为对照.用RT-PCR检测细胞中半乳糖凝集素-3的mRNA水平.结果:不同浓度AGEs组HRMC的半乳糖凝集素-3 mRNA水平与对照组相比均有显著差异(P＜0.01),且随着AGEs浓度的增高,半乳糖凝集素-3 mRNA水平也逐渐增高(P＜0.05);AGEs干预HRMC 24、48、72 h,半乳糖凝集素-3mRNA水平与对照组相比有显著差异(P＜0.05),且随着干预时间的延长,半乳糖凝集素-3 mRNA水平也逐渐增高(P＜0.01).结论:AGEs以时间及剂量依赖的方式促进HRMC半乳糖凝集素-3 mRNA的表达.

颈前路多节段椎体次全切除钛笼植入重建颈椎生理弧度的实验研究

目的:研究颈椎前路多节段椎体次全切除减压后两种钛笼植入方法对颈椎生理弧度的影响.方法:选用7具成年防腐尸体颈段标本,术前作为空白对照组;C5、C6椎体次全切除后将钛笼剪成相关长度不预弯植入减压骨槽中作为非预弯组;后将不预弯钛笼取出,将预弯的钛笼植入相应标本后作为预弯组.3组均拍颈椎标准侧位X线片,测量颈椎弧度、手术节段椎间角度及手术节段椎间高度.结果:钛笼预弯组的颈椎弧度及手术节段椎间角度均较钛笼非预弯组和空白对照组有显著改善(P＜0.01);钛笼非预弯组的颈椎弧度及手术节段椎间角度与空白对照组相比无显著性差异(P＞0.05);手术节段椎间高度钛笼预弯组与钛笼非预弯组相比无显著性差异(P＞0.05),但两组与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:颈椎前路多节段椎体次全切除减压后钛笼预弯植入可以很好地恢复颈椎的生理弧度.

低频低强度超声波诱导白血病细胞株K562凋亡的研究

目的:研究低频低强度超声波诱导白血病细胞株K562凋亡的作用及其机制.方法:取对数生长期的K562细胞,分成实验组和对照组,用MTT法计算细胞存活率,流式细胞仪判断细胞凋亡,瑞氏染色和透射电镜观察细胞照射后有无出现凋亡,分光光度法检测照射前后K562细胞Caspase-3的活性改变.结果:超声照射各组间细胞存活率与对照组相比有统计学差异,但组间无差异;瑞氏染色光镜下可见0.03 W组和0.10 W组细胞出现细胞核固缩等早期凋亡的改变,0.25 W组出现凋亡小体等典型凋亡改变;流式细胞仪检测0.25 W组凋亡率为38.87%;照射前后K562细胞Caspase-3的活性无差异.结论:低频低强度超声波对白血病细胞株K562有诱导凋亡作用,与照射强度和时间无明显相关.低频低强度超声波诱导K562的凋亡可能不通过Caspase-3的途径.

结肠癌细胞上调脐静脉内皮细胞EMMPRIN的表达

目的:探讨结肠癌细胞对脐静脉内皮细胞中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)表达的影响,以及EMM-PRIN与肿瘤新生血管生成的关系.方法:建立结肠癌LoVo细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养模型,并设HUVEC单独培养对照组,培养36 h后进行形态学观察,并应用免疫细胞化学方法检测内皮细胞EMMPRIN的表达.结果:共培养组HUVEC形成大量管样结构,且EMMPRIN的表达明显强于HUVEC单独培养对照组强.结论:结肠癌细胞上调HUVEC EMMPRIN的表达,并诱导HUVEC管样结构的的形成,EMMPRIN的表达可能与肿瘤新生血管生成具有一定的相关性.

甲泼尼龙和神经节苷脂对大鼠损伤脊髓CD95表达的影响

目的:研究甲泼尼龙(MP)加神经节苷脂(GM1)对大鼠脊髓损伤(SCI)的疗效.方法:采用Allen's法制备SCI大鼠模型.将模型大鼠随机分为4组,A组为生理盐水对照组,B组为MP治疗组,C组为GM1治疗组,D组为MP加GM1联合治疗组.大鼠存活不同时间后分别行行为学观察再处死,取伤段脊髓作石蜡切片,行HE染色和CD95单克隆抗体免疫组化检测.结果:HE染色显示脊髓组织病理学改变B、C、D组明显轻于A组,而D组较B、C组轻.伤后2周行为学指标优差依次为D-C-B-A(P＜0.05).免疫组化检测表明,A组脊髓灰质CD95免疫染色阳性细胞数在8 h达到高峰,在白质中48 h时达到高峰,而D组虽有高峰,但明显少于A组(P＜0.01),D组也少于B、C组(P＜0.01).结论:MP与GM1联合应用可阻断神经细胞的凋亡,对损伤的脊髓组织有良好的保护作用并可促进神经功能的恢复.

经阴道彩色多普勒超声对药物流产后阴道出血时间延长的观察分析

目的:探讨药物流产后阴道出血时间延长者的宫腔声像图特征.方法:对药物流产后阴道出血达15 d的20例患者行经阴道彩色多普勒超声检查,并与手术、病理检查结果对比.结果:20例中3例内膜层内无明显血流信号,宫腔刮出物均为细碎组织物,其中1例病理检查提示为少量坏死蜕膜伴有少量凝血块和大量炎症细胞,2例为少量增生期内膜;17例内膜层内有明显血流信号,宫腔刮出物均有陈旧性组织物,病理检查均见到滋养细胞和螺旋动脉.结论:底蜕膜组织残留是药物流产阴道出血时间延长的主要原因.

海藻糖对液态低温保存血小板保护作用的实验研究

目的:研究海藻糖对液态低温(4℃)保存血小板的保护作用.方法:采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板(CP),在CP中加入不同浓度的海藻糖,4℃储存,用51Cr-铬酸钠进行标记后自体回输入兔体内,于回输后1、24、48、72 h抽取兔耳动脉血,测定放射性计数率,计算24、48、72 h血小板存活率,同时设常温对照组及单纯4℃储存的低温对照组进行比较.结果:加入不同浓度海藻糖各储存组的血小板寿命明显长于低温对照组,并且随着海藻糖浓度的增加而延长.结论:海藻糖可延长4℃液态保存血小板的寿命,对血小板具有保护作用.

糖尿病大鼠肾脏细胞外基质金属蛋白酶诱导因子和基质金属蛋白酶2的表达

目的:研究糖尿病大鼠肾脏组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达,探讨糖尿病肾病的发病机制.方法:将SD大鼠随机分成正常对照组(NC组)和糖尿病模型组(DM组),DM组腹腔注射链脲佐菌素(55 mg·kg-1)诱导糖尿病大鼠模型,于第4、第8周分批处死大鼠,用免疫组化检测EMMPRIN、MMP-2表达,图像分析仪分析.结果:正常大鼠EMMPRIN、MMP-2主要表达在肾小球系膜细胞、内皮细胞、足细胞、球囊壁层上皮细胞、肾小管上皮细胞,造模后4、8周时DM组大鼠EMMPRIN、MMP-2表达较正常对照组明显下降.结论:糖尿病时肾小球EMMPRIN和MMP-2表达水平的降低,可能是引起细胞外基质积聚的原因之一.

定量检测E-cadherin基因启动子区甲基化芯片的建立

目的:拟建立一种能够定量检测抑癌基因E-cadherin甲基化改变的基因芯片.方法:用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,并以此为模板进行PCR扩增.目的序列中未甲基化的CpG住点被翻转成TpG,而甲基化的CpG位点保持不变.设计5组探针构建一种检测E-cadherin基因启动子区17个CpG住点甲基化改变的芯片,每组探针包括一对非甲基化探针和甲基化探针,检测相邻的3或4个CpG位点.结果:绘制标准曲线显示,芯片上探针的可重复性和精确性很好,并定量检测了1例白血病样本的甲基化改变.结论:基因芯片能够作为一种定量检测基因多个CpG位点甲基化改变的有效工具,并用于肿瘤的研究.

米诺环素治疗脊髓损伤的研究进展

米诺环素(minocycline),化学名为二甲胺四环素,是第2代半合成四环素类药物的衍生物,具有相对分子质量小(为495 000)、亲脂性高、可通过血-脑屏障、口服易吸收的特点[1-2].其作为抗生素已成功应用于临床痤疮、泌尿系感染等的治疗.后来发现,米诺环素具有良好的抑制炎症反应作用,完全不同于其抗感染的作用机理,临床上应用于类风湿性关节炎等严重的人类炎症性疾病的治疗.临床实践证明,长期口服米诺环素无明显不良反应且安全有效.近几年,人们通过研究其对卒中、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、Huntington病、颅脑创伤和脊髓损伤(SCI)的治疗作用发现,米诺环素还是一种安全有效的神经保护剂.

BRAF基因突变与消化道肿瘤

近年来,BRAF基因在肿瘤中的作用越来越受到重视.BRAF基因编码一种丝/苏氨酸特异性激酶(a serine/theronine-specific kinases),是RAS/RAF/MEK/ERK/MAPK通路(MEK:mitogen/extracellular signalregulated kinase;ERK:extracellular signal-regulated kinase;MAPK:mitogen-activated protein kinase)重要的转导因子,参与调控细胞内多种生物学事件,如细胞生长、分化和凋亡等[1].

骨髓源性肝干细胞的发现、诱导与移植

与原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OLT)相比,肝细胞移植(hepatocyte transplantation,HCT)操作简单,费用低廉,风险小,而且来自一个肝脏的细胞可供给多个受体,大大缓解了供肝短缺的矛盾.HCT不仅可以作为原位肝移植手术前的一种过渡疗法,在逆转急性肝功能衰竭及治疗代谢缺陷性肝病等方面也显示了巨大的潜力.

分子搭桥技术研究进展

缺血性心脏病是心血管系统疾病常见的死因.治疗缺血性心脏病的关键就在于促进梗死区域血管生成,改善梗死区血供.冠状动脉旁路移植术(CABG)和经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)是目前应用于临床的治疗冠心病比较成熟的技术,但也有一定的局限性.随着对血管再生微观机制研究的进一步深入,蛋白治疗、细胞治疗和转基因治疗等多种治疗方法均被用于促进心肌血管再生和冠脉侧支循环的建立,从而为缺血心肌提供重要的血供来源.目前把这种促进缺血组织血管再生、改善血供为目的的治疗称为分子搭桥(molecular bypass).

米非司酮用于子宫肌瘤治疗的研究进展

子宫肌瘤在育龄妇女中的患病率达20%～40%,30～50岁的患者占患病总数的70%～80%,约50%的肌瘤患者有症状.目前该病的治疗仍以手术为主且逐渐向微创及保留子宫方向发展.药物治疗虽不能根治子宫肌瘤,但可以明显改善症状及缩小肌瘤.米非司酮(RU-486)是合成的类似孕激素和糖皮质激素的化合物,它有更强的与孕激素受体(PR)相结合的能力,使自然的孕激素难以与受体结合而不能发挥其生物学效应.自1982年Waiter Hermann首次将其成功用于终止早期妊娠以来,其应用指征日渐广泛,除用于终止早期妊娠以外,还可用于终止中期妊娠、晚期妊娠、过期流产与死胎,并可用于治疗异位妊娠、子宫肌瘤、子宫内膜异位症等.现就米非司酮治疗子宫肌瘤的研究进展进行综述.

《东南大学学报(医学版)》被波兰《哥白尼索引》(IC)收录