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艰难梭菌临床分离株的毒素检测和MLST分型
目的 初步研究中日友好医院艰难梭菌临床分离株的毒素特征、核糖体分型和多位点序列分型情况,为进一步监测医院内艰难梭菌暴发流行奠定基础.方法 收集2012年至2013年本院疑似艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)的321例腹泻患者的标本,采用表型培养法进行菌株分离和鉴定,并对分离菌株进行毒素B的细胞毒试验,分析菌株的毒素基因(tcdA、tcdB、cdtA、cdtB),采用核糖体分型(ribotyping, RT)和多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)分析菌株间的同源性;收集患者临床信息,分析不同患者人群的CDI发生率.结果 共从46名腹泻患者中分离到48株艰难梭菌菌株,其中3株菌株分离自同一患者;CDI发生率为14.3%(46/321),其中门诊患者为12.8%(5/39)、住院患者为14.5%(41/282);所有菌株的毒素B细胞毒试验均为阳性,其中ST1型较其他ST型菌株毒素作用更强;毒素基因tcdA(-)/tcdB(+)型为20.8%(10/48),主要是ST37和ST81;所有菌株的RT和MLST结果一致,均为相同的9个型别,其中以ST1/RT027为主,占27.1%(13/48),这些ST1/RT027菌株毒素基因检测均为tcdA(+)/tcdB(+)、二元毒素基因检测均为cdtA(+)/cdtB(+),其中中医呼吸病区占84.6%(11/13),提示该病区存在ST1/RT027型菌株的小范围暴发流行的可能.结论 CDI在我院主要以医院感染为主,分离株主要为毒素基因tcdA(+)/tcdB(+)的菌株,监测ST1/RT027高产毒性流行株引发的暴发流行尤为重要.
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免疫缺陷小鼠肿瘤模型的建立及其肿瘤相关免疫机制的探讨
目的:观察不同免疫缺陷小鼠中的人肝癌细胞生长情况以及T,B淋巴细胞的免疫作用,探讨免疫缺陷小鼠肿瘤模型制作的意义.方法:将体外培养的人肝癌细胞接种到四种免疫缺陷小鼠,分别为:B细胞缺陷的CBA/N,T细胞缺陷的Balb/c-nu,T,B细胞缺陷的SCID及免疫重建的SCID小鼠,观察其生长特点;作鼠脾细胞毒试验,测定外周血CD4+,CD8+数分数和荷瘤鼠血清Ig含量的变化;作肝癌细胞凝集试验.结果:CBA/N和用BALB/c鼠外周血淋巴细胞重建的SCID(B-PBL-SCID)鼠不成瘤,nude、SCID和用CBA/N鼠外周血淋巴细重建的SCID-(C-PBL-SCID)小鼠全部成瘤;SCID鼠的瘤体比裸鼠瘤体长的更快,肝内接种转移率更高、转移范围更大.接种瘤细胞的BALB/c和CBA/N鼠脾细胞对癌细胞杀伤力较强,免疫重建的SCID鼠脾细胞毒杀伤较小.接种瘤细胞的鼠CD4+数分数都下降,CD8+变化不大,CD4+/CD8+比值下降.具有B细胞的实验鼠均测得Ig在mg@L1水平,并能使癌细胞产生凝集反应.结论:SCID鼠是建立肿瘤模型和免疫重建研究的理想小鼠;小鼠成瘤率与T细胞相关,T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用;B淋巴细胞及其产生的抗体在抗肿瘤中起着不可忽视的作用.
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心脏移植的体外循环(附1例报告)
1 资料与方法 受者,女,43岁,身高153cm,体重45kg,诊断为扩张型心肌病(终末期)。供者男,24岁,为外伤后脑死亡者,体重55kg,身高163cm。供、受者淋巴细胞毒试验(PRA)<1%,HLA基因配型有6个位点相合(半相合)。供心切取后经主动脉根部灌注4℃Stanford大学晶体心脏保存液,灌注压低于110mmHg,灌注量1800ml,放于含冰屑的保存液中,修整。于2000年4月5日在体外循环下行同种异体原位心脏移植术(标准法)[1]。使用Stockert Ⅲ型人工心肺机和大号Medtronic膜式氧合器,乳酸林格氏液1500ml预充。采用中度低温(鼻咽温降至25.7℃),稀释冷血心脏停搏液顺行灌注。升主动脉开放前予甲基强的松龙500mg加入机器。心脏恢复供血后出现室颤,20W/s电击2次后复跳。循环血压稳定,生化检查正常后,平稳脱离体外循环。
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鼠源性H-Y抗血清制备及特异性分析
目的 利用C57BL/6小鼠制备H-Y抗血清并分析.方法 以纯系C57BL/6雄鼠脾细胞做为抗原,通过腹腔注射免疫雌鼠的方法制备H-Y抗血清.利用经典精子细胞毒实验和ELISA检测方法分别对两组抗血清检测.结果 H-Y抗血清对鼠精子的平均工作效价为1/20~1/160,而ELISA检测抗血清的高效价为1/640,比精子细胞毒实验的检测结果高.结论 对两种检测方法的结果进行分析,认为ELISA能准确判断出H-Y抗血清的特异性和效价,尤其在选择免疫效果较好的雌鼠方面有较高的参考价值.
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再生障碍性贫血患者骨髓CFU-GM及血清细胞毒试验18例临床分析
目的:探讨再生障碍性贫血(简称再障)的体液免疫抑制发病机理.方法:对18例再障患者(急性再障6例、慢性再障12例)进行骨髓CFU-GM培养及血清细胞毒试验.结果:16例骨髓CFU-GM培养集落数明显低于正常对照组(P<0.01),15例存在有造血干细胞缺陷、细胞和体液免疫异常及微环境异常,病人血清经56℃30min水浴灭活前后对正常骨髓CFU-GM的刺激作用明显不一,而且在同属于造血干细胞缺陷的病例中急性再障与慢性再障比较也有显著性差异.结论:骨髓CFU-GM及血清细胞毒试验在对再障体液免疫抑制发病机理研究中起有协同作用.
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MTS法在测定镓合金的细胞毒性中的应用
传统汞合金在临床使用已有一百五十余年的历史,传统的汞合金对操作者及患者均有一定程度的危害,以适当的口腔修复材料来取代银汞合金已显其必要性.镓合金是一种不含汞的牙体材料,是有望替代现有传统汞合金的材料之一,其生物学性能明显优于银汞合金[1].本研采用MTS法对新研制的镓合金的细胞毒性评价,为其在临床应用提供保证,以满足人们对健康和环境保护的需求.同时为细胞毒试验提供一种新方法.
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无症状HBsAg携带者免疫功能探讨
自1978~1980年对1543名商业工作者进行了HBsAg及肝功能等连续三年的动态检测,共检出I-IBsAg携带者136例(均为无肝炎发病史,肝功能检测三次上正常的"健康者".对检出的HBsAg携带者中部分作了抗-HBs、抗-HBc、循环免疫复合物(CIC)、抗-LSP、白细胞粘附抑制试验(LAI)及抗体依赖细胞毒试验(ADCC)等检测.并以同一方法对正常人,慢性迁延性肝炎(CPH)及慢性活动性肝炎(CAH)进行了对照.还用免疫调整药物对他们进行了HBsAg阴转治疗的动态观察.
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微量板比色试验的应用评价
红细胞同种抗体在体内是否引起红细胞的破坏,用常规的血清学方法不能完全检测出来.致敏RBC在网状内皮组织系统内主要是被单核吞噬细胞破坏,在这些细胞上有可结合IgG1、IgG2、IgG3和补体C3或C4成分的特殊受体.单核细胞结合了致敏RBC后,通过吞噬作用或依赖抗体细胞介导的细胞毒试验(ADCC)可破坏RBC.由于这类试验较常规血清学试验更接近人类自然免疫过程,因而在预测结果方面就更具有准确性和灵敏性.
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肾移植术后肾功能延迟恢复1例
患者,女,38岁。血型为B型,供肾为同型左肾。淋巴细胞毒试验6%,HLA配型为两同两容两无关。热缺血时间为12 min,冷缺血时间为13 h。供肾动静脉分别与受者右侧髂外动静脉行端侧吻合。术中开放血流,移植肾颜色、张力正常,约30 s分泌尿液。术后第1天尿量约6 000 ml,查肌酐、尿素氮明显下降。给予环孢素A(CsA)5 mg/kg·d、硫唑嘌呤(Aza)75 mg和泼尼松(Pred)30 mg三联抗排斥反应。第3天开始出现尿量减少,至第5天约300 ml(自体肾分泌尿液约200 ml)。患者无发热和移植肾区不适等现象,同时查肌酐、尿素氮呈进行性升高,考虑为急性排斥反应。给予甲基泼尼松龙0.5 g加0.9%生理盐水100 ml静脉滴注,每天1次,尿量仍无增加。B超显示移植肾大小正常,髓质与皮质分界尚清,髓质光点增强,集合系统无分离,血流正常,血流阻力指数小于0.8。测CsA浓度为350μg/L,考虑为急性肾小管坏死(ATN),停用甲基泼尼松龙冲击治疗,给予维持性血液透析治疗,每周3次,用三联药物抗排斥反应并作彩色B超定期观察。术后第15天开始静脉滴注立其丁10 mg加速尿100 mg加多巴胺20 mg,每天1次,并用肌苷、丹参护肾。术后第55天,尿量增多,至第60天达3 000 ml,肌酐、尿素氮下降至正常,肾功能恢复正常,痊愈出院。随访至今(术后9个月)无排斥反应现象,复查肌酐、尿素氮、小便常规等均正常,尿量每天约2 000 ml。
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重视对炎症性肠病的研究
炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)在西方国家常见,对其病因与发病机制的研究活跃,专科医师对IBD熟悉程度并不逊于消化性溃疡。我国既往认为IBD少见,近20年来,医院有关资料表明发病呈上升趋势,但对其研究尚处于初始阶段,高起点、深层次的研究文章太少,与国际接轨还有很大的提速空间。 国内北京、成都、上海等地专家所做的研究开创、前瞻,引人注目。武汉大学中南医院(原湖北医科大学附属第二医院)近10年来对IBD病因与发病机制从实验到临床进行了系列研究,并取得了成果:成功制作了乙酸、二硝基氯苯(DNCB)和胎鼠移植3种动物模型,从不同角度对IBD病因、发病机制、病理改变、病理生理变化等进行研究;通过上述动物模型复制和淋巴细胞毒试验,证实细胞免疫反应在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)发病中起重要作用;提出国人UC存在细胞因子产量改变和免疫反应紊乱;阐明表皮生长因子和谷氨酰胺联合应用,对结肠粘膜具有保护作用;通过对医院IBD资料分析,认为甚有必要在国内开展该病流行病学调查,这些研究成果受到了国内外同行专家的肯定和重视,尚待把研究引向深入。
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半微量法淋巴细胞毒试验淋巴细胞提取方法的改进
半微量法淋巴细胞毒试验主要用于器官同种移植前判断受者对供者有无预存抗体,能否发生超急排斥反应,而在临床广泛应用.但老的试验方法,采用淋巴细胞分层液直接提取淋巴细胞、由于分离不纯,常混有单核细胞、少量粒细胞、红细胞及血小板,可导致假阴性结果,造成读数误差.如何提高淋巴细胞分离纯度,成为此试验关键.现将新的淋巴细胞提取方法介绍如下.