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昼夜节律对心力衰竭兔细胞电生理的影响：交感反应性研究
目的：心律昼夜节律变化是心脏交感神经和副交感神经内在平衡机制制衡的特有生物现象，终末心力衰竭阶段自主神经的失衡是导致其出现恶性心律失常的重要机制之一。但是目前昼夜节律对于心力衰竭兔心肌细胞电生理的影响还不得而知。本研究旨在通过观察不同昼夜节律下心力衰竭兔心肌细胞钙浓度、钙瞬变及L型钙通道电流特性及其对交感兴奋刺激的影响。
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利用疾病特异诱导多能干细胞进行肥厚型心肌病心脏停搏液个体化选择
目的：制作患者来源的诱导多能干细胞（hiPSC）株，构建评价不同类型心脏停搏液效果的心肌细胞模型，并对肥厚型心肌病（HCM）术中心脏停搏液的选择进行研究。
方法：收集了23例接受外科治疗的HCM患者组织样本。外显子测序发现相同的HCM突变MYH7 Arg663His突变2例，和同家系正常基因型对照2例，制作hiPSC，并向心肌细胞分化。分析hiPSC-心肌细胞的形态学和电生理特性，并在细胞缺血再灌注模型中，分析三种不同心脏停搏液对电生理活动、钙通道调控和细胞凋亡的影响。 -
心力衰竭家兔心肌细胞钙释放的异常
目的:探讨心力衰竭(心衰)家兔心肌细胞钙释放异常与收缩功能的关系.方法:22只家兔随机分为2组:假手术组(n=11)和心衰组(n=11);通过超容量负荷联合压力负荷制备家兔心衰模型,利用心脏多普勒观察手术前后家兔心功能的变化;采用常规酶解法分离心室肌细胞,经Fluo-3/AM负载后,利用激光共聚焦显微技术,观察咖啡因诱发钙瞬变过程中细胞内钙浓度的动态变化;采用Western blot法测定心肌组织L型钙通道α1亚单位(LTCCα1)、肌浆网钙释放通道(RyR2)的表达水平.结果:与假手术组相比,心衰组家兔射血分数明显降低(0.46±0.03 vs 0.73±0.05,P＜0.01);咖啡因诱发的钙瞬变幅度明显下降(16.00±3.54 FI vs 43.50±6.22 FI,P＜0.01)、峰值到达时间明显延长(129.8±l4.5 s vs 52.2±7.4 s,P＜0.01);LTCCαl(RLTCC-αl/actin:0.287±0.029 vs 0.624±0.009,P＜0.01)和RyB2表达水平明显减少(RRyR2/actin:0.106±0.001 vs.0.203±0.011,P＜0.01),均有极显著性差异.结论:LTCC α1亚单位和RyR2表达减少导致钙释放异常是心衰心肌收缩力降低的机制之一.
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卡维地洛对重症心力衰竭患者的临床疗效评价
临床研究表明,交感神经活化在心力衰竭(心衰)的病程中起重要作用.卡维地洛是一种新的非选择性第3代β受体阻滞剂,兼有选择性阻断α1受体,且具有明显的抗自由基、抗氧化损伤作用,高浓度时还能阻滞钙通道,在调节代谢紊乱、阻止平滑肌细胞增殖等方面具有其他β受体阻滞剂无法比拟的优点.本文旨在评价卡维地洛对心衰患者的临床疗效.
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心肌梗塞细胞L型钙通道、钙运作(Ca2+handling)及钠/钙交换功能研究
目的:研究心肌梗塞细胞钙通道、钙运作及钠/钙交换功能变化.方法:运用膜片钳全细胞记录法测细胞膜钙电流,荧光技术测细胞内钙浓度.结果:心肌梗塞细胞钙离子密度明显下降(正常细胞:9.8±1.4 pA/pF,心肌梗塞细胞:3.7±0.6 pA/pF,P<0.01),肌浆网钙诱发钙释放功能下降,钙回落缓慢而钠/钙交换功能无变化.结论:钙通道及钙运作功能异常可能与心肌梗塞后心力衰竭、心律失常的发生有关.
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酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响及机制研究
目的：探讨酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响及可能机制。方法体外分离培养大鼠 VSMCs,采用免疫细胞化学方法鉴定。将 VSMCs 按随机数字表法分为正常对照组、高磷+ pH7.4、高磷+ pH7.1和高磷+ pH6.8(在高磷培养基的基础上调整 pH 值为6.8、7.1和7.4三个亚组)。刺激4 d 后,采用 RT-PCR 检测 L 型钙通道(LTCC)α1C、β2和β3亚基, Runt 相关转录因子2(Runx2)及 Smad1基因的表达；应用钙离子探针 Fluo-3/ AM 检测 VSMCs 胞外钙离子内流的效应变化。刺激14 d 后,对各组细胞进行钙化染色、钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性测定。结果与正常对照组比较,高磷+ pH7.4组钙含量、ALP 活性、Runx2和 Smad1mRNA 的表达明显增高(88.26±6.43比22.39±3.19、94.33±3.08比20.39±1.18、0.37±0.02比0.01±0.00、0.65±0.05比0.07±0.01,均为 P ﹤0.05)；与高磷+ pH7.4组比较,高磷+ pH7.1组和高磷+ pH6.8组的钙含量、ALP 活性、Runx2和 Smad1mRNA 的表达均降低(69.95±1.72和50.74±3.29、51.11±2.05和34.62±1.13、0.25±0.02和0.09±0.01、0.44±0.04和0.23±0.01,均为 P ﹤0.05)。与正常对照组比较,高磷+ pH7.4组的 LTCCβ3亚基 mRNA 表达水平增加(0.80±0.01比0.34±0.13, P ﹤0.01),高磷+ pH7.1组和高磷+ pH6.8组的 LTCCβ3亚基 mRNA 表达水平均下降(0.64±0.11和0.43±0.01,均为 P ﹤0.01)。各组之间 LTCCα1C 和β2亚基 mRNA 的表达差异无统计学意义(P =0.08和0.74)。与正常对照组比较,高磷+ pH7.4组的 VSMCs 胞内钙离子浓度增加(438.33±7.50比149.54±20.89,P ﹤0.05)；高磷+ pH7.1组和高磷+ pH6.8组的 VSMCs 胞内钙离子浓度均降低(329.66±16.64和234.00±17.43,均为 P ﹤0.01)。结论酸性环境可以抑制高磷诱导的大鼠VSMCs 钙化,其可能是通过抑制 LTCC β3亚基表达,降低 VSMCs 钙离子内流,阻滞 VSMCs 发生表型转化来实现的。
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氯维地平--急性心衰伴高血压治疗新希望
一项小型研究显示钙通道5阻滞剂氯维地平（clevidipine）治疗急诊室的心力衰竭合并高血压患者较标准的静脉用药更加安全有效，可迅速降低血压、改善呼吸困难。该研究名为急性心力衰竭的血压控制研究-初步研究（PRONTO），于2014年1月15日发表于《American Heart Journal》。
PRONTO研究显示，静脉注射clevidipine治疗的患者呼吸困难在3个小时内完全消失，而采用标准治疗（静脉注射硝酸甘油或尼卡地平）的患者呼吸困难在12个小时内完全消失。 -
心力衰竭与心肌细胞钾离子通道(下)
2 钙通道的改变钙通道介导的内向电流是构成平台期的重要成分,它和复极钾电流相互拮抗,共同决定APD的时间;同时还是心肌细胞钙的运转的启动装置.心肌细胞内的各种钙转运蛋白相互关联,维系着兴奋收缩偶联效应.
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哮喘豚鼠模型支气管平滑肌钙通道特性的变化
目的探讨钙离子通道变化与支气管哮喘豚鼠模型气道高反应性的关系.方法利用膜片钳技术细胞贴附式方法测定哮喘A组(4只,22个细胞)和正常对照A组(5只,25个细胞)支气管平滑肌细胞(BSMCs)电压依赖性钙离子通道动力学变化,全细胞式测定哮喘B组(5只,25个细胞)和正常对照B组(6只,24个细胞)BSMCs内向峰值钙电流.结果(1)BSMCs钙通道开放时间哮喘A组为(1.70±0.40)ms,正常对照A组为(0.70±0.10)ms,两组开放时间比较差异有显著性(P＜0.01);哮喘A组BSMCs钙通道关闭时间为(5.7±0.6)ms,正常对照A组为(7.9±0.4)ms,两组比较差异有显著性(P＜0.01);开放概率哮喘A组为(0.40±0.10)%,正常对照A组为(0.20±0.20)%,哮喘A组较正常对照A组增加了46%,两者比较差异有显著性(P＜0.01);(2)哮喘B组BSMCs平均内向峰值钙电流为(-54±23)PA(微微安培),正常对照B组为(-25±8)PA,哮喘B组较正常对照B组增加了1.17倍,两组比较差异有显著性(P＜0.01).结论哮喘豚鼠BSMCs钙离子通道活性增加,可能是气道高反应性主要原因之一.
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抗组胺药物的抗炎特性
组胺通过与组胺受体结合发挥其生物学效应,其中H1受体在介导过敏性炎症的发生中起着重要作用,它在有无介质存在条件下均可触发下游级联反应.H1抗组胺药物是H1受体的反向激动剂,除具有拮抗组胺作用外,还有抗炎效应,在过敏性炎症性疾病治疗中有重要意义.H1抗组胺药物可以从抑制钙离子通道或下调核因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB)的表达等方面发挥其抗炎作用,本文主要从其干扰免疫级联反应的不同环节角度出发综述H1抗组胺药的抗炎效应机制.
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从国际高血压指南看钙离子拮抗剂在高血压治疗中的作用
1钙拮抗剂的发展[1]钙拮抗剂(calcium antagonist)是选择性地阻滞钙离子经钙通道进入细胞内,从而使细胞内钙离子浓度降低的一类药物.
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射频消融术改变心房颤动患者外周血微小RNA表达谱
目的 探讨心房颤动(房颤)射频消融术是否通过对调控离子通道蛋白的微小RNA(microRNA,miRNA)的影响,实现心房离子流再平衡和逆重构,并试图发现有价值的调控miRNA.方法 选择行房颤射频消融术患者(阵发性、持续性和永久性房颤各10例)30例作为房颤组,健康体检者10例作为正常对照组.正常对照组体检时,房颤组射频消融术前和术后3个月分别取外周血,使用miRNA芯片(miRNA v18.0)进行全基因组miRNA表达谱微阵列分析,2组miRNA表达比值≥1.5倍为显著上调,实时定量PCR验证miRNA表达差异结果,并通过mirbase、miranda、targetscan数据库进行靶基因分析.结果 与正常对照组比较,房颤组射频消融术前主要参与离子通道蛋白调控的21个miRNA差异表达均有显著意义(P＜0.01);房颤组术后3个月与自身术前比较,上述21个miRNA表达亦有明显差异(P＜0.01).其中miR-1266等5个miRNA术前表达上调≥1.5倍,术后明显下调≥10倍;仅miR-3664-5p术前下调8.88倍,术后进一步下降46.06倍;其余15个miRNA均术前表达下调,术后显著上调.结论 房颤射频消融术通过影响调控离子通道蛋白的主要miRNA,实现了心房离子流逆重构.调控多个离子流的miR-1266,miR-377-5p,miR-101-5p和miR-151-3p有望成为房颤治疗新靶点.
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咪达普利对舒张性心力衰竭大鼠心房肌细胞L型钙通道电流及相关基因蛋白表达的影响
目的 探讨咪达普利对舒张性心力衰竭(DHF)大鼠心房肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)和ICa-L相关基因Cav1.2蛋白表达的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为对照组、DHF组、低、中、高剂量组,每组6只.后4组采用腹主动脉缩窄建立DHF模型,对照组和DHF组予等量生理盐水,低、中、高剂量组依次给予咪达普利1.5、3和6 mg/(kg·d)干预.各组干预4周后,采用心脏超声检测心功能,急性酶解法获得单个大鼠心房肌细胞和标准全细胞膜片钳技术记录通道电流,凝胶电泳法记录心房肌细胞ICa-L相关基因Cav1.2的蛋白表达.结果 与对照组比较,DHF组大鼠心房肌细胞ICa-L电流密度峰值和Cav1.2蛋白表达明显减少;与DHF组比较,低、中、高剂量组大鼠心房肌细胞ICa-L峰值电流密度和Cav1.2蛋白表达明显增加,该作用随着咪达普利剂量增加而增加.结论 咪达普利明显抑制DHF大鼠心房肌ICa-L下调,此作用与增加心房肌Cav1.2蛋白表达水平有关.
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基质交感分子1在载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块形成中的作用
目的 观察基质交感分子1 (STIM1)在动脉粥样硬化斑块形成过程中的改变并探讨其相关性.方法 选取7～8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除(apoE)小鼠45只为模型组及野生型C57BL/6J小鼠45只为对照组,高脂饲喂至20、27和33周后,取主动脉进行HE和Masson染色,计算斑块面积占管腔面积百分比和胶原成分占斑块面积百分比;油红O染色分析斑块脂质含量;免疫组织化学染色测定平滑肌细胞阳性表达STIM1百分比,Western blot定量分析STIM1在易损斑块形成过程中的表达.结果 与对照组20、27和33周龄小鼠比较,模型组STIM1相对表达量(0.2352±0.0165) vs (0.1435±0.0262)、(0.2985±0.0241) vs (0.1 226±0.0270)和(0.3552±0.0340) vs (0.1385±0.0156)明显升高(P＜0.01);且随着其周龄增加,STIM1表达明显升高;STIM1阳性表达面积百分比与校正斑块面积呈正相关(r=0.754,P＜0.01),与校正胶原面积呈负相关(r=0.783,P＜0.01).结论 STIM1参与动脉粥样硬化斑块形成的病理过程,且与动脉粥样硬化斑块的发生、发展密切相关.
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依那普利和厄贝沙坦及血管紧张素(1-7)对快速心房起搏犬心房肌钠通道基因表达的影响
目的 观察依那普利、厄贝沙坦和血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对快速心房起搏犬心房肌细胞钠通道(Nav1.5)基因表达的干预作用.方法 普通杂种犬30只,随机分为5组,每组6只.心房起搏组、依那普利组、厄贝沙坦组和Ang-(1-7)组犬行快速心房起搏(500/min)2周;假手术组犬不行起搏刺激,普通饲养2周.应用RT-PCR检测各干预因素对Nav1.5α亚单位基因表达的影响.结果 与假手术组比较,心房起搏组犬Nav1.5α亚单位mRNA表达明显降低(P＜0.05);依那普利组、厄贝沙坦组犬可逆转快速心房起搏所致的Nav1.5α亚单位mRNA表达水平的降低(P＜0.05);Ang-(1-7)组犬Nav1.5α亚单位mRNA表达水平无明显改变(P＞0.05).结论 快速心房起搏可降低犬心房肌Nav1.5α亚单位mRNA表达,依那普利、厄贝沙坦可逆转快速起搏所致的Nav1.5α亚单位mRNA表达的降低,Ang-(1-7)则无明显影响.
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牛磺酸对尾加压素Ⅱ抑制L-型钙电流的影响
目的观察牛磺酸对尾加压素Ⅱ(Urotensin Ⅱ,UⅡ)抑制L-型钙电流的调节作用,并分析其作用机制及病理生理意义.方法采用膜片钳全细胞记录方法,分别测定牛磺酸、UⅡ、牛磺酸+UⅡ对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流的影响.结果在正常细胞外钙浓度时,(1)牛磺酸5 mmol/L、10 mmol/L使L-型钙电流峰值分别下降45.1%、35.4%;(2)UⅡ10-9 mol/L使L-型钙电流峰值下降69.4%(P＜0.05);但先给予牛磺酸5 mmol/L、10 mmol/L后,再加入UⅡ10-9 mol/L,L-型钙通道电流峰值分别下降53.4%、37.9%(P＞0.05).结论牛磺酸可使UⅡ对L-型钙电流的抑制作用减弱,具有较强的钙调节作用及心肌保护作用.
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β3肾上腺素能受体通过微小RNA对慢性心力衰竭大鼠左心房肌L型钙离子通道的调控
目的 探讨β3肾上腺素能受体(β3-AR)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠左心房肌L型Ca2+通道亚单位α2δ-2编码基因CACNA2D2的调控是否与微小RNA(miRNA)-1及miRNA-328存在关联.方法 22只雄性Wistar大鼠随机选6只为正常对照组(NC组),另16只采用皮下注射异丙肾上腺素建立CHF动物模型,将存活的12只大鼠再随机分为CHF组6只和BRL组(在大鼠尾静脉注射β3-AR特异性激动剂BRL-37344)6只.采用超声心动图检测大鼠左心房内径(LAD)、左心房射血分数(LAEF)及LVEF.采用苏木精-伊红染色检测大鼠左心房肌病理学变化.采用实时荧光定量PCR检测大鼠左心房肌β3-AR、CACNA2D2以及miRNA-1、miRNA-328表达水平.结果 BRL组大鼠LAD显著大于NC组和CHF组[(4.42±0.15)mm vs (3.50±0.21)mm和(4.09±0.17)mm,P＜0.01];BRL组LAEF显著低于NC组和CHF组[(34.91±1.51)％ vs (59.89±3.17)％和(40.09±0.95)％,P＜0.01].与CHF组比较,BRL组大鼠左心房肌细胞水肿进一步加重,可见明显肥大细胞等病理学改变更显著.与NC组比较,CHF组大鼠左心房肌ββ3-AR、CACNA2D2、miRNA-1及miRNA-328表达上调(P＜0.01);与CHF组比较,BRL组大鼠左心房肌β3-AR、CACNA2D2、miRNA-1及miRNA-328表达进一步上调(P＜0.01).miRNA-1、miRNA-328、CACNA2D2与β3-AR表达呈正相关(r=0.870、0.904、0.911,P＜0.01);CACNA2D2与miRNA-1、miRNA-328表达呈正相关(r =0.880、0.954,P＜0.01).结论 β3-AR对左心房CACNA2D2的正性调控可能与miRNA-1、miRNA-328存在关联.
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L型钙离子通道蛋白α1 D亚基与老年性耳聋关系的研究
目的 研究L型钙离子通道蛋白α1D亚基(Cav1.3)在老年性耳聋小鼠耳蜗组织中的表达和意义. 方法 应用听性脑干反应(ABR)分别检测4、14、24、48周龄的C57BL/6小鼠的听力,苏木素-伊红(HE)染色观察内耳形态的变化.免疫荧光方法观察Cav1.3在内耳组织中的分布,同时采用反转录聚合酶链反应(RT PCR)检测其基因CACNA1D在内耳组织的mRNA表达. 结果 Cav1.3主要分布在小鼠耳蜗内外毛细胞、螺旋神经节、螺旋韧带、血管纹、螺旋(板)缘细胞.与4周龄小鼠比较,[短声(27.08±9.19)dB SPL、4 KHz(23.79±13.31)dB SPL、8 KHz(18.83±12.18)dB SPL],14、24、48周龄ABR反应阈值提高(F=95.86,P＜0.05);48周龄小鼠ABR反应阈值[短声(87.81±8.36)dB SPL、4 KHz(85.63±9.88)dB SPL、8 KHz(79.50±9.83) dB SPL],较4、14、24周龄大鼠均提高(F=115.97,P＜0.01).随着鼠龄的增长,内耳毛细胞和螺旋神经节细胞逐渐出现缺失;血管纹和螺旋韧带也呈现萎缩;Cav1.3表达含量逐渐减少,4周218.94±11.29,14周184.67±11.92,24周148.18±8.35与48周98.04±4.52比较,差异有统计学意义(F=119.17,P＜0.01).结论 老年性耳聋小鼠Cav1.3钙离子通道蛋白表达含量随年龄增长而减少,其功能的异常和缺失可能在老年性耳聋的发病中起一定作用.
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通透Ca2+酸敏感离子通道1a的激活在糖尿病鼠局灶脑缺血损伤中的作用
目的 探讨酸敏感离子通道la(ASICla)的表达及细胞内Ca2+浓度的变化在糖尿病鼠局灶脑缺血损伤中的作用. 方法 取清洁级雄性Wistar大鼠108只,分为单纯脑缺血(MCAO)组、糖尿病脑缺血(DM+ MCAO)组和糖尿病脑缺血+法舒地尔干预(DM+ MCAO+ Fasudil)组,每组36只；各组分别在缺血1、3、6、24 h4个时间点留取标本,每个时间点9只.制备MCAO及DM+MCAO模型,DM+MCAO+Fasudil组在糖尿病造模成功后0.5h内尾静脉缓慢注射Fasudil 1 mg/Kg,分别检测三组不同缺血时间ASICla表达,同时检测DM+ MCAO组、DM+ MCAO+ Fasudil组两组不同缺血时间缺血周围皮层细胞内Ca2+浓度的变化. 结果 在1、3、6和24 h不同时间点对应的灰度值,MCAO组分别为0.71±0.10,0.80±0.11,0.86±0.08,0.93±0.09;DM+MCAO组分别为0.86±0.11,1.048±0.51,2.42±0.08,2.78±0.04;各时间点比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05),DM+MCAO组高于MCAO组(t=4.673,P＜0.01)；DM+ MCAO细胞内钙离子浓度逐渐增加(106.32±18.63,137.84±14.32,151.94±18.38,183.61±7.96,P＜0.05),DM+MCAO+ Fasudil组ASICla与钙电流表达均降低. 结论 ASICla的激活所导致钙离子内流增加,细胞内钙超载可能是糖尿病局灶脑缺血损伤加重的原因之一.
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黑皮质素-1对背根神经节神经元T-型钙通道电流的影响及机制研究
目的 研究黑皮质素-1(NSF-1)对成年小鼠背根神经节(DRG)神经元T-型钙通道电流的作用及信号转导机制. 方法 应用蛋白电泳方法研究NSF-1受体(黑色素皮质素4受体,MC4-R)在小鼠DRG中的表达;应用全细胞膜片钳技术研究NSF-1对小鼠小直径DRG神经元T-型钙电流的作用,并研究其信号转导通路. 结果 本实验研究结果表明,MC4-R在DRG中显著表达;NSF-1对小鼠DRG中小直径的神经元T-型钙通道电流具有量效依赖性的增强作用;MC4-R阻断剂HS024、蛋白激酶C(PKC)的阻断剂双吲哚马来酰亚胺(GF109203X)及白屈菜赤碱氯化物(chelerythrine chloride)能够抑制NSF-1对该T-型钙通道电流的增强作用,而蛋白激酶A(PKA)阻断剂PKI 6-22无此效应. 结论 NSF-1对小鼠小直径的背根神经节神经元T-型钙电流具有剂量依赖性的增加作用,该作用是通过MC4-R受体及下游PKC激酶磷酸化作用而起效.
