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露蜂房蛋白抑制大鼠支气管平滑肌细胞体外增殖的可能机制
目的 观察露蜂房蛋白[NVP(1)]对大鼠支气管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其可能机制.方法 用原代细胞培养、MTT法、流式细胞术和免疫印迹法检测细胞增殖.结果 6.4×10-3g/L的NVP(1)明显抑制支气管平滑肌细胞增殖,并且阻断在细胞周期的G1期(对照组G1期为64.6%,NVP(1)处理组为90.5%).NVP(1)能增强细胞周期蛋白激酶抑制剂(P21)蛋白的表达,降低细胞周期蛋白激酶(cdk2)蛋白的表达.结论 NVP(1)阻断支气管平滑肌细胞增殖于细胞周期的G1期.
关键词： 露蜂房蛋白 支气管平滑肌细胞 细胞周期蛋白激酶 细胞周期蛋白激酶抑制剂 -
哮喘豚鼠模型支气管平滑肌钙通道特性的变化
目的探讨钙离子通道变化与支气管哮喘豚鼠模型气道高反应性的关系.方法利用膜片钳技术细胞贴附式方法测定哮喘A组(4只,22个细胞)和正常对照A组(5只,25个细胞)支气管平滑肌细胞(BSMCs)电压依赖性钙离子通道动力学变化,全细胞式测定哮喘B组(5只,25个细胞)和正常对照B组(6只,24个细胞)BSMCs内向峰值钙电流.结果(1)BSMCs钙通道开放时间哮喘A组为(1.70±0.40)ms,正常对照A组为(0.70±0.10)ms,两组开放时间比较差异有显著性(P＜0.01);哮喘A组BSMCs钙通道关闭时间为(5.7±0.6)ms,正常对照A组为(7.9±0.4)ms,两组比较差异有显著性(P＜0.01);开放概率哮喘A组为(0.40±0.10)%,正常对照A组为(0.20±0.20)%,哮喘A组较正常对照A组增加了46%,两者比较差异有显著性(P＜0.01);(2)哮喘B组BSMCs平均内向峰值钙电流为(-54±23)PA(微微安培),正常对照B组为(-25±8)PA,哮喘B组较正常对照B组增加了1.17倍,两组比较差异有显著性(P＜0.01).结论哮喘豚鼠BSMCs钙离子通道活性增加,可能是气道高反应性主要原因之一.
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YKL-40调控支气管上皮分泌 IL-8对支气管平滑肌细胞增殖和迁移的影响
目的：研究YKL-40介导支气管上皮细胞的炎症反应及对支气管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。方法：体外培养支气管上皮永生细胞系（BEAS-2B）和原代人支气管上皮细胞（HBECs），用不同浓度的YKL-40刺激BEAS-2B和HBECs不同时间后，用Realtime PCR和ELISA方法检测炎症细胞因子的变化。 YKL-40刺激BEAS-2B和HBECs 6 h后，更换新鲜培养基继续培养18 h后收集细胞培养液，命名为（ YKL-40-BEAS-2B-CM、YKL-40-HBECs-CM），用于培养支气管平滑肌细胞（BSMCs）。24 h后检测BSMCs迁移能力的变化，72 h后检测BSMCs增殖能力的变化。结果：在BEAS-2B和HBECs中，YKL-40均能以浓度和时间依赖方式增强IL-8 mRNA的表达和IL-8的分泌，但对RANTES、Eotaxin，TNF-α没有影响。 YKL-40-BEAS-2B-CM和YKL-40-HBECs-CM刺激BSMCs能显著增强其增殖能力和迁移能力，但去除YKL-40-BEAS-2B-CM和YKL-40-HBECs-CM中的IL-8后，则未见其可以明显提高BSMCs的增殖和迁移能力。结论：YKL-40通过调控支气管上皮表达和分泌IL-8参与了哮喘时的气道炎症反应，进一步通过影响支气管平滑肌细胞的增殖和迁移介导哮喘时的气道重构。抑制IL-8有望成为控制YKL-40介导的哮喘炎症反应和组织重构的有效干预措施。
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细胞外信号调节激酶1/2信号通路在慢性哮喘模型大鼠支气管平滑肌细胞迁移功能变化中的调控作用
本研究旨在探讨细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)信号通路在慢性哮喘模型大鼠支气管平滑肌细胞(bronchial smooth muscle cells,BSMCs)迁移能力改变中的调控作用.应用卵清蛋白致敏和雾化方法制备大鼠慢性哮喘模型,体外培养大鼠BSMCs,采用免疫荧光细胞化学、Western blot和RT-PCR方法检测ERK1/2信号通路的表达,分别用平面迁移实验和跨膜迁移实验来评价BSMCs的活动和趋向迁移能力,并比较用和不用ERK1/2信号通路干预剂的差异.Western blot结果显示慢性哮喘模型大鼠BSMCs中总ERK1/2(9.13±0.87)较对照组(4.68±0.59)明显增加,磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)占总ERK1/2的比值(0.55±0.05)较对照组(0.48±0.04)显著提高(n=10,P＜0.01).慢性哮喘组ERK1和ERK2 mRNA的表达(1.83±0.24和1.07±0.11)较对照组(0.58±0.14和0.51±0.12)明显增高(n=10,P＜0.01).在平面迁移实验中,慢性哮喘大鼠BSMCs的迁移远距离是对照组的(2.9±0.1)倍,在ERK1/2激动剂表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)刺激下增加到(5.0±0.2)倍,而在30 μmol/L PD98059的作用后下降到(1.7±0.2)倍.正常对照大鼠BSMCs平面迁移能力对PD98059的反应较慢性哮喘组弱,仅在100 μmol/L PD98059的作用下下降到(0.8±0.1)倍.跨膜迁移实验中,慢性哮喘大鼠BSMCs的跨膜迁移细胞是对照组的(1.9±0.1)倍,在EGF刺激下增加到(3.1±0.2)倍,而在30 μmol/L PD98059作用后下降到(1.45±0.2)倍.这些结果表明慢性哮喘模型大鼠BSMCs的迁移能力明显增强,ERK1/2信号通路在该功能变化的调控中可能发挥了重要作用.
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吗啡对豚鼠支气管平滑肌Kv通道的影响
目的 探讨吗啡对豚鼠支气管平滑肌(guinen pig bronchial smooth muscle,GPBSM) Kv通道的影响.方法 用全细胞膜片钳技术研究吗啡对急性分离GPBSM Kv(电压依赖性延迟整流钾通道)活性的影响,用Western blot和RT-PCR技术,通过图像分析系统和凝胶成像系统分析吗啡对体外培养GPBSM的Kv1.5 mRNA及蛋白质表达的影响.结果 吗啡能抑制急性分离GPBSM的Kv通道电流和抑制抑制培养GPBSM Kv1.5 mRNA及蛋白质的表达,吗啡受体阻断剂盐酸纳洛酮和PKC阻断剂Ro31-8220能明显阻止这种效应.结论 吗啡收缩支气管平滑肌可能是活化支气管平滑肌细胞膜的PKC,从而抑制其cAMP介导的Kv通道电流活性,下调Kv1.5 mRNA及蛋白质表达水平完成的.
关键词： 吗啡 支气管平滑肌细胞 电压依赖性延迟整流钾通道 蛋白激酶C -
脱氢表雄甾酮对COPD大鼠支气管平滑肌细胞钙激活性钾通道的激活作用
目的:对比研究正常及慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠支气管平滑肌细胞钙激活性钾(KCa)通道的活性,观察脱氢表雄甾酮(DHEA)对COPD大鼠支气管平滑肌细胞KCa通道的作用.方法:38只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=20)和COPD组(n=18),在相对密闭舱内吸入纸烟建立COPD动物模型,采用急性酶分离法分离大鼠支气管平滑肌细胞,应用膜片钳技术,在对称性高钾溶液中,于急性分离的大鼠支气管平滑肌细胞的内面向外式膜片上,分离出KCa电流,比较COPD和对照组的活性,记录DHEA对COPD大鼠支气管平滑肌细胞膜KCa通道活性的激活作用.结果:COPD组KCa活性明显比正常组低(P<0.01),DHEA可明显激活COPD组大鼠支气管平滑肌的KCa电流(P<0.01).结论:COPD大鼠支气管平滑肌细胞KCa通道活性降低可能在COPD发病机制中起着一定作用,DHEA可以直接激活COPD大鼠支气管平滑肌KCa活性,松驰COPD大鼠支气管平滑肌.
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加减射麻止喘汤对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞生长周期的干预作用
目的 探讨加减射麻止喘汤对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞(ASMC)生长周期的干预作用.方法 以卵清蛋白(OVA)致敏并激发制造大鼠哮喘模型,提取ASMC进行细胞传代培养；高、中、低剂量的加减射麻止喘汤分别灌胃大鼠以制备含药血清,以含药血清、蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波醇-12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛渡酯(PMA),PKC抑制剂马来酰亚胺甲磺酸盐(Ro-31-8220)分别干预3～5代ASMC,空白组不予药物干预.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组ASMC增加、流式细胞术检测ASMC各周期分布.结果 与空白组、PMA组相比,加减射麻止喘汤高、中、低剂量组的D值显著降低,加减射麻止喘汤高剂量组的G1期、G2/M期细胞百分比显著升高,S期细胞百分比显著降低(P＜0.05)；与Ro-31-8220组相比,加减射麻止喘汤高低剂量组的D值显著增加,加减射麻止喘汤高剂量组的G1期细胞百分比显著降低,S期细胞百分比显著升高(P＜0.05).结论 加减射麻止喘汤可抑制哮喘大鼠ASMC的细胞增殖,从而影响气道重构.
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改变PTEN基因表达影响支气管平滑肌细胞增殖
目的:通过基因过表达和RNA干扰(RNAi)技术改变PTEN基因的表达并观察其对人支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖和相关信号通路的影响.方法:利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-GFP-PTEN)和针对PTEN基因的腺病毒短发夹状RNA(shRNA)载体(Ad-GFP-shRNA-PTEN),转染BSMC细胞,建立PTEN基因过表达细胞模型Ad-GFP-PTEN-BSMC和PTEN基因沉默细胞模型Ad-GFP-shPTEN-BSMC,并以感染Ad-GFP和空白组作为对照.通过荧光倒置显微镜检测转染效率;Western blot法检测PTEN蛋白的表达和AKT、ERK1/2通路的活化情况;MTS/PMS法检测细胞生长的变化;PI单染流式细胞术检测细胞周期的变化.结果:腺病毒介导的过表达载体和shRNA载体都能有效改变PTEN基因的表达.PTEN基因表达上调后,BSMC细胞生长受到抑制,G_0-G_1期细胞增多,S期细胞和G_2/M期细胞减少,PI3K/AKT通路受到抑制,而MAPK/ERK通路未见变化;PTEN基因表达下调后,BSMC细胞生长受到促进,S期细胞增多,G_0-G_1期细胞和G_2/M期细胞减少,PI3K/AKT通路激活,但MAPK/ERK通路却受到抑制.结论:PTEN基因可能主要通过调节PBK/AKT通路影响人支气管平滑肌细胞的生长.
