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  • 耶氏肺孢子菌主要表面糖蛋白合成及人群IgG抗体调查

    作者:宋营改;乌姗娜;徐安健;靳庆娥;赵高潮;任翊

    目的 原核表达耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)主要表面糖蛋白(major surface glycoprotein,Msg)氨基端片段,获得可溶性Pj重组Msg抗原(recombinant Msg,rMsg),利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测266例成年人外周血抗Pj rMsg IgG抗体. 方法 从耶氏肺孢子菌感染者的痰液获得Pj DNA,构建表达载体pGEX-3X-Pj Msg,转化感受态大肠埃希菌DE3,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达.利用谷胱甘肽转移酶(GST)标签进行亲和纯化,对纯化Pj rMsg抗原进行鉴定并建立ELISA方法,检测266例成年人外周血抗Pj rMsg IgG抗体. 结果 成功构建了表达质粒pGEX-3X-Pj Msg,并诱导表达分子质量单位约39 ku的可溶性Pj rMsg蛋白,产量为13 mg/500ml菌液,以此为抗原,采用ELISA检测266例成年人外周血抗Pj rMsg IgG抗体,阳性率为42.5%(113/266).其中男、女性患者阳性率分别为43.3%(58/134)和41.7%(55/132),差异无统计学意义(x2=o.071,P>0.05);20~29岁、30~39岁、40~50岁组阳性率分别为31.8%(27/85)、48.3(42/87)和46.8%(44/94),差异无统计学意义(x2=5.911,P>0.05). 结论 成功表达了可溶性Pj rMsg抗原,Pj rMsg-ELISA检测结果表明北京地区成人耶氏肺孢子菌感染率较高.

  • 脑瘤手术患者咽喉部吸取液中耶氏肺孢子菌的筛查

    作者:任珊珊;宋营改;吴赵永;粟绍钢;范东瀛;王爱东;任翊

    目的 采用常规PCR、巢式PCR(Nest PCR,nPCR)和定量PCR(Quantitative PCR,qPCR)检测耶氏肺孢子菌(Pneumoc ystisjirovecii,Pj)特异性核酸片段,调查脑瘤手术患者咽喉部吸取液中的Pj. 方法 选取无肺炎脑瘤手术患者108例,留取手术咽喉部吸取液,分别以线粒体大亚基rRNA(Mitochondrial large subunit rRNA,mtLSUrRNA)为靶基因的常规PCR(Mt-PCR)和巢氏PCR(Mt-nPCR),以及主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,Msg)为靶基因的常规PCR(Msg-PCR),检查咽喉部吸取液中Pj特异性核酸片段,阳性标本进行qPCR,检测分别以mtLSUrRNA和Msg为靶基因的拷贝数. 结果 108例脑瘤手术患者咽部吸取液Mt-nPCR、Msg-PCR及MtPCR扩增阳性率率分别为41.7%(45/108)、15.7% (17/108)和4.6%(5/108),其中3种检测方法同为阳性1例(占0.9%),任意2种方法阳性11例(占10.2%),Mt-nPCR和Msg-PCR任意1种方法阳性42例(占38.9%),3种方法均阴性54例(占50.0%).54例PCR检测阳性的标本同时进行mtLSUrRNA定量PCR(Mt-qPCR)和Msg定量PCR (Msa-qPCR)检测,其中Mt-qPCR检测为100~999拷贝/μl2例(占3.7%),1 000~9 999拷贝/μl有49例(占90.7%),≥10 4拷贝/μl有3例(占5.6%);Msg-qPCR检测为1 000~9 999拷贝/μl 14例(占25.9%),10 000~99 999拷贝/μl 21例(占38.9%),100 000~999 999拷贝/μl 14例(占25.9%),≥106拷贝/μl有5例(占9.3%).54例中Msg-qPCR拷贝数>Mt-qPCR拷贝数51例(占94.4%),Msg-qPCR拷贝数<Mt-qPCR拷贝数3例(占5.6%). 结论 核酸扩增法检测脑瘤手术患者咽喉部吸取液Pj阳性率为50.0%,其中MtqPCR检测多数为103拷贝/μl,Msg qPCR检测多数为103~105拷贝/μl,解读需谨慎.

  • 中国耶氏肺孢子菌主要表面糖蛋白UCS基因分型研究

    作者:孙岚;黄敏君;郭增柱;王建成

    目的 以主要表面糖蛋白上游保守区UCS基因对中国耶氏肺孢子菌进行基因多态性分析. 方法 用巢式PCR扩增127例耶氏肺孢子菌感染患者呼吸道标本中主要表面糖蛋白上游保守区UCS基因,通过DNA直接测序获得该基因的序列,并随机选取部分标本经过克隆测序,分析其UCS串联重复区序列的特征,并分析不同患者人群中基因多态性分布. 结果 共获得97例(占76.4%)患者标本的UCS基因序列,依据串联重复单元的数目、序列不同得到2~5个重复的7种基因型,其中基因型1,2,3(占68.04%)为常见,其次为基因型1,2,3,3(占21.65%).在6组患者中,基因型1,2,3亦为常见. 结论 本研究获得了我国耶氏肺孢子菌UCS基因多态性的基础资料,为进一步分析耶氏肺孢子菌的遗传学、流行病学提供了依据.

  • 14岁以下儿童抗耶氏肺孢子菌合成抗原IgG和IgM抗体的调查

    作者:乌姗娜;郭爽;靳庆娥;田小军;李威;栗绍刚;任翊;王刚

    目的 调查北京地区14岁以下人群,抗耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)人工合成主要表面糖蛋白(Recombinant major surface glycoprotein,rMsg)IgG和IgM抗体检出率,探讨Pj在该人群中感染和流行情况.方法 利用原核表达的Pj rMsg可溶抗原,建立酶联免疫吸附试验,随机收集201例北京地区14岁以下人群血清,分析其抗Pj rMsg IgG和IgM抗体的检出情况.结果 收集病例按年龄分为3组,分别为出生日龄1 ~30 d 78例、出生1~12月龄33例、出生年龄1~14岁90例,3组人群中抗Pj rMsg IgG抗体检出率分别为10.3% (8/78),21.2% (7/33)和41.1%(37/90),组间比较x2 =21.190,P =0.000;抗Pj rMsg IgM抗体检出率分别为6.4% (5/78),39.4%(13/33)和76.7%(69/90),组间比较x2=84.260,P=0.000.人群IgG和IgM抗体总体检出率为25.9%(52/201)和43.3%(87/201)(x2=53.463,P=0.000).同一份血清中IgG阳性IgM阳性、IgG阳性IgM阴性、IgG阴性IgM阳性和IgG阴性IgM阴性的检出率分别为22.4% (45/201)、3.5%(7/201)、20.9% (42/201)和53.2%(107/201).结论 北京地区14岁以下人群抗Pj rMsg IgG或IgM抗体总体检出阳性率为46.8%,阳性率随着出生后年龄的增加而逐渐增加.

  • 非艾滋病耶氏肺孢子菌肺炎患者合并巨细胞病毒血症的危险因素分析

    作者:姜辉;张秋彬;朱华栋

    目的 探讨非艾滋病耶氏肺孢子菌肺炎(非HIV-PJP)患者合并巨细胞病毒(CMV)血症的危险因素和结局.方法 回顾性分析北京协和医院2014年收治的101例非HIV-PJP患者.CMV血症定义为血浆巨细胞病毒DNA(CMV-DNA)≥500拷贝/mL,并将患者分为CMV血症组和非CMV血症组.分析不同组别患者的人口学资料、临床特征、实验室资料、治疗转归等.使用卡方检验等进行单因素统计学分析,并应用Logistic回归分析非HIV合并CMV血症的危险因素.结果 终纳入研究的93例临床诊断为非HIV-PJP患者中,合并CMV血症者41例(44.1%).单因素分析显示PJP合并CMV血症相关危险因素分别为:女性、淋巴细胞计数、C反应蛋白(CRP)、六胺银染色阳性、耶氏肺孢子菌DNA(PJP-DNA)阳性、进行有创机械通气.多因素Logistic回归分析发现,PJP合并CMV血症的独立危险因素分别为女性(OR=4.222,95%CI:1.453~12.271,P=0.008)、合并真菌感染(OR=10.113,95%CI:1.38~74.102,P=0.023)、进行有创机械通气(OR=4.62,95%CI:1.478~14.444,P=0.008).结论 同一次住院期间,非HIV-PJP患者合并CMV血症的患病率较高,其独立危险因素分别为女性、合并真菌感染、进行有创机械通气.

  • 实时荧光PCR检测非HIV感染人群肺孢子菌核酸载量

    作者:王建成;黄敏君;安亦军;孙岚;郭增柱

    肺孢子菌肺炎是一种由耶氏肺孢子菌引起的呼吸系统机会性感染,见于免疫功能低下或缺陷者~([1-2]).近年来,接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)和肺孢子菌肺炎预防措施的HIV感染发生肺孢子菌肺炎的概率明显减少[1,3],但随着癌症患者、器官移植者、老年患者、先天性或获得性免疫缺陷及因其他疾病而接受免疫抑制剂者等其他肺孢子菌肺炎高危人群的扩大,临床肺孢子菌肺炎患者日趋增多~([4-5]).鉴于肺孢子菌肺炎患者的临床症状、体征、X线胸片及常规实验室检查均无特异性,病原体检出率较低,血清抗体检测因健康人群抗耶氏肺孢子菌抗体阳性率较高而无临床意义等,肺孢子菌肺炎的早期诊断比较困难.

  • 复方新诺明治疗肺孢子菌肺炎后血象变化一例

    作者:许珺;张峣;韩宁

    磺胺类抗菌药物的抗菌谱广且价格低廉,在临床中应用广泛.AIDS患者常见的机会性感染,即耶氏肺孢子菌肺炎(pneumocystis pneumonia,PCP),复方新诺明(TMP-SMX)是其一线治疗和预防药物[1].然而,多种相关不良反应可能影响该药临床使用,而正确认识和处理这些相关不良反应的意义不可低估.本文结合1例AIDS并发重度PCP患者,应用复方新诺明后导致血象指标(白细胞、红细胞和血小板水平)严重降低,经及时治疗后血象恢复、PCP痊愈的临床过程,现对复方新诺明相关的血液系统不良反应的诊治进行讨论.

  • HIV-1感染者抗耶氏肺孢子菌主要表面糖蛋白抗体筛查

    作者:宋营改;刘意;任珊珊;张彤;范东瀛;李威;任翊

    目的 利用原核表达的耶氏肺孢子菌(Pj)重组主要表面糖蛋白(rMsg)建立酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,调查176例艾滋病病毒(HIV-1)感染者的抗Pj rMsg IgG和IgM抗体的检出率.方法 以临床获得的Pj脱氧核糖核酸(DNA)为模板,扩增主要表面糖蛋白基因的5'端350bp片段,将聚合酶链反应(PCR)产物克隆到原核表达载体pGEX-3X中,获得可溶GST标签的rMsg,建立ELISA方法,检测北京佑安医院176例HIV-1感染者的血清标本,统计抗Pj rMsg IgG和IgM抗体的检出率.结果 176例HIV-1感染者中,抗Pj rMsg IgG和IgM抗体检出率分别为24.4%(43/176)和12.5%(22/176),其中IgG阳性IgM阳性、IgG阳性IgM阴性、IgG阴性IgM阳性和IgG阴性IgM阴性的检出率,分别为7.4%(13/176)、17.0%(30/176)、5.1%(9/176)和70.5%(124/176).抗体调查年龄分组中,(20~29)岁、(30~39)岁和40岁以上年龄组的IgG抗体阳性率分别为19.2%(10/52)、32.1%(25/78)和17.4%(8/46),组间比较差异无统计学意义(x2=4.450,P=0.108);IgM阳性率分别为11.5%(6/52)、12.8%(10/78)和13.0%(6/46),组间比较差异无统计学意义(x2=0.064,P=0.969).CD+T淋巴细胞计数分组中,≥350个/μL组和<350个/μL组的IgG抗体阳性率分别为24.4%(30/123)和24.5%(13/53),两组比较差异无统计学意义(x2 =0.000,P=0.984);IgM抗体阳性率分别为12.2%(15/123)和13.2%(7/53),两组比较差异无统计学意义(x2 =0.035,P=0.852).抗Pj rMsg IgM抗体阳性的22例HIV-1感染者,临床没有肺炎的症状与体征.结论 HIV-1感染人群中抗Pj rMsg IgG和IgM抗体检出率分别为24.4%和12.5%,该人群感染Pj的血清学证据,抗Pj rMsg IgG或IgM阳性的检出率为29.5%.抗Pj rMsg IgM抗体阳性不能作为Pj现症感染的指标.

  • 耶氏肺孢子菌基因组信息研究进展

    作者:张丽娟;郭爽;任翊

    耶氏肺孢子菌(Pj)引起的肺孢子菌肺炎是免疫缺陷患者重要的致死原因之一,基因组测序分析揭示了Pj对人宿主依赖性的新机制.研究发现,Pj十分适应生存于人类的肺部,依赖肺部环境获取气体和营养物质,具有逃避宿主先天免疫和适应性免疫的能力.Pj不使用几丁质和N-甘露聚糖,仅在包囊期合成使用β-1,3-葡聚糖.Pj有球形的包囊和滋养体两种生存形态.包囊期是肺孢子菌有性繁殖和对外传播期,机体吸入空气中的肺孢子菌包囊而感染,成熟包囊进入肺泡后破裂,囊内小体脱囊后发育为滋养体,滋养体期细胞壁薄且具有变形能力和胞吞功能,能与宿主肺泡Ⅰ型细胞吸附,增殖并导致弥漫间质性肺炎.

  • 肾移植受者肺孢子菌肺炎的临床特征研究

    作者:赵菲璠;周庆涛;梁瀛;孙永昌;沈宁;朱红;贺蓓

    目的 分析人类免疫缺陷病毒(HIV)阴性免疫受损患者肺孢子菌肺炎(PCP)的临床表现及诊治过程,探讨肾移植受者PCP的临床特征.方法 回顾性分析北京大学第三医院呼吸与危重症医学科2013年1月至2016年12月收治的42例HIV阴性免疫受损PCP患者,分为肾移植组和非肾移植组,每组各21例.收集患者临床资料,并进行比较.结果 患者年龄中位数(四分位间距)为49.0 (27.0)岁,男19例,女23例.基础病肾移植占50.0%,其次为肾脏疾病(19.0%)、结缔组织病(14.3%).97.6%的患者发病前接受糖皮质激素和/或其他免疫抑制治疗.患者均发热,其他常见症状为咳嗽(64.3%)和呼吸困难(59.5%).胸部CT主要表现为弥漫分布的磨玻璃影(83.3%)、斑片状高密度影和/或实变影(35.7%).42例PCP患者一线方案治疗后有14例因无效或不良反应无法耐受而调整为替代方案.药物方案以磺胺甲(口恶)唑/甲氧苄啶(SMZ/TMP)单用(48.2%)和含SMZ/TMP联合治疗方案(35.7%)为主,其余为卡泊芬净单用或联合克林霉素(16.1%).42例患者临床治愈39例,死亡3例.两组比较肾移植组患者以男性为主(61.9%比28.6%,P=0.030),年龄更轻[41.0(18.0)比52.0(27.0)岁,P=0.015],发热多为低热(低热患者分别占66.7%比14.3%,P=0.001),PaO2/FiO2 >300者占多数(71.4%比19.1%,P=0.003),血淋巴细胞计数显著降低[0.6(0.8)×109/L比1.0(2.1)×109/L,P=0.036],血清肌酐水平显著升高[160.0(105.5)比77.0(36.0) μmol/L,P=0.001],接受呼吸支持者显著减少(无创通气、机械通气分别为1例、0例比8例、2例,P=0.007),3例死亡患者均为非肾移植患者.结论 肾移植受者罹患PCP临床表现较轻,预后较好,淋巴细胞减少、肾功能不全者发病风险高.

  • 艾滋病合并耶氏肺孢子菌肺炎病人的护理

    作者:解莹

    目的:探讨艾滋病合并耶氏肺孢子菌肺炎的有效护理方法.方法:对我院临床诊治的37例艾滋病合并耶氏肺孢子菌感染患者采用SMECO治疗的护理,配合消毒隔离、心理护理、症状护理等措施.结果:37例中治愈25例,好转8例,住院期间死亡4例.结论:艾滋病合并耶氏肺孢子菌肺炎,使艾滋病患者生活质量降低,心理负担加重,死亡率增高.为患者提供有效的治疗和护理措施,可减轻患者身心痛苦,提高生活质量,延长患者生命.

  • 艾滋病合并耶氏肺孢子菌肺炎、气胸及水痘一例

    作者:张敏;刘志斌;陈秀敏;丁红云

    患者男,20岁,因发热伴胸闷、气喘、咳嗽、咳痰1月于2011年9月25日入院.患者3岁时有外伤手术及输血史,17岁患带状疱疹.2011年8月患者出现发热、伴胸闷气喘咳嗽咯痰,体温高39℃,先后在多家医院治疗,诊断为“间质性肺炎、心力衰竭”,治疗效果不佳,遂来我院呼吸科就诊.9月26日患者HIV筛查阳性转入.体格检查:体温37.5℃,脉搏86次/min,呼吸21次/min,血压120/80 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa).

  • 接受免疫抑制治疗患者肺孢子菌肺炎的诊治进展

    作者:孙丹

    肺孢子菌肺炎(PCP)是免疫抑制患者严重的真菌疾病之一,是人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者主要的机会性感染.随着糖皮质激素、化疗及其他免疫抑制剂应用的增多,非HIV患者PCP发病率明显增加.这些患者病情更加严重,进展更加迅速,易延误诊治.新的诊断方法出现可提高这些患者的生存率.本文就此做一综述.

  • 无创辅助通气治疗HIV并发PCP导致ARDS28例的临床分析

    作者:储美萍;黄捷辉;张艳

    卡氏肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia,PCP)是由耶氏肺孢子菌引起的一种间质性肺炎,获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immunodeficiency Syndome,AIDS)患者中大部分都会发生PCP,病死率达20%~40%,系艾滋病患者的主要死因之一.PCP临床起病隐匿,进展迅速,病情凶险,若不及时进行有效治疗,将会并发急性呼吸窘迫综合征(Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS),增加病死率.临床常见为数不少的急性呼吸窘迫综合症为首发症状的AIDS合并PCP首诊呼吸科.临床在常规应用复方磺胺甲恶唑(SMZ)和(或)卡泊芬净以及糖皮质激素等对症支持治疗的同时,我院给予无创辅助通气治疗和标准氧疗.本文回顾性分析2010.2~2012.10期间入住我院合并AIDS合并PCP并出现ARDS患者的临床资料,分析无创辅助通气改善患者预后的作用.

  • 肺孢子虫肺炎临床研究进展

    作者:王凤梅;赵爱阳;金敬顺

    肺孢子虫肺炎是由耶氏肺孢子菌( Pneumocystis jiroveci,PJ)引起的一种机会感染性真菌肺病,自1942年首次报道人体感染以来,发病率逐渐上升,主要见于获得性免疫缺陷综合征、器官移植及肿瘤放化疗患者等。随着人免疫缺陷病毒( human im-munodeficiency virus,HIV)感染患者的增多,PJ所致的卡氏肺孢子虫肺炎( Pneumocystis carinii pneumo-nia, PCP)目前已成为这类患者的首要死亡原因。临床对于PCP诊断主要依赖于HIV感染病史与临床症状,实验室及支气管镜检查,准确率仍有待提高。对PCP的治疗一般认为需要尽早尽快治疗,目前的一线药物仍是磺胺甲噁唑-甲氧苄啶复合剂(复方新诺明)( trimethoprim-sulfamethoxazole, TMP-SMX),其他药物及联合用药还需进一步验证疗效,可作为 TMP-SMX 的挽救治疗选择。因此本文对PCP相关方面的研究进行综述。

  • 肺孢子菌肺炎实验室诊断研究进展

    作者:叶宁;朱明利;李茜茜;刘寿荣

    耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,PJ)过去称卡氏肺孢子菌(Pneumocystis carinii,Pc),是一种引起呼吸系统严重肺孢子菌肺炎(pneumocystis pneumonia,PCP)的机会性致病菌.PCP主要发生于获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)、恶性肿瘤以及自身免疫病等免疫功能低下者,临床症状与体征不典型,进展迅速,病死率高,是AIDS患者首要的并发症和死因,被视为AIDS的“标志病”.PJ的培养方法虽有少量报道,但均不能获得可见菌落,一般认为不能或难于培养,因此其镜检、PCR等方法的应用就极为重要.

  • 重视免疫抑制性肺真菌病的影像诊断

    作者:施裕新;张志勇;朱莹

    1.提高免疫抑制性肺真菌病诊断意识随着AIDS的流行、癌症治疗的改进、器官移植及免疫抑制治疗的开展,免疫抑制患者明显增多,这些人群更易受到真菌等多种病原体的感染,导致相当高的发病率和病死率.了解免疫缺陷的类型和严重程度有助于预测可能引起感染的病原体.轻度免疫抑制者,如年老、嗜烟、酗酒、支气管扩张、慢性阻塞性肺病和肺结核患者,半侵袭性曲霉菌是主要的感染病原体之一[1-5].严重免疫抑制主要为造血干细胞、器官移植及AIDS患者[1-4].在造血干细胞抑制的初期(术后30天内),中性粒细胞计数<500/mm3,真菌是主要的致病菌,其中耶氏肺孢子菌、烟曲霉菌和白色念珠菌常见,新型隐球菌、毛霉菌和地方性真菌较少见.中性粒细胞持续减少两周以上,曲霉菌、念珠菌等机遇性致病菌可引发致命性感染[6-7],这一时期细菌也可是发病的致病菌.CD4<200/mm3的AIDS患者真菌感染概率明显增加,CD4细胞数越低,感染发生率越高.因此,在日常临床工作中,应强化肺真菌是免疫抑制患者常见病原体这一概念.

  • 抗耶氏肺孢子菌合成抗原IgG和IgM及IgA抗体水平调查

    作者:宋营改;任珊珊;乌姗娜;徐安健;赵高潮;任翊

    目的 利用北京地区随机人群,抗耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)人工合成主要表面糖蛋白(Recombinant major surface glycoprotein),调查抗PjrMsg、IgG、IgM和IgA抗体水平,探讨人群感染Pj情况.方法 利用原核表达的Pj rMsg可溶抗原,建立酶联免疫吸附试验,调查266例北京地区随机人群血清抗Pj rMsg IgG、IgM和IgA抗体的检出情况.结果 北京地区266例随机血清,抗Pj rMsg IgG、IgM和IgA抗体检出率分别为42.5%(113/266),41.7%(111/266)和0(0/266).其中同期IgG阳性IgM阳性、IgG阳性IgM阴性、IgG阴性IgM阳性和IgG阴性IgM阴性的检出率分别为17.3%(46/266)、25.2%(67/266)、24.4% (65/266)和33.1%(88/266).40~50岁组的抗Pj rMsg IgM抗体检出率为62.8%(59/94),分另别高于20~29岁组的32.9%(28/85)(x2=15.895,-0.000)和30~39岁组的27.6%(24/87)(x2=22.522,P=0.000).结论 北京地区成人抗Pj rMsg IgG与IgM抗体阳性率分别为42.5%和41.7%,人群感染Pj后的IgG或IgM抗体阳性率高达66.9%,IgA抗体没有检出以及IgM抗体在高年龄组中检出率高的原因需要进一步研究.

  • 非肺孢子菌肺炎患者支气管肺泡灌洗液肺孢子菌检出情况

    作者:任珊珊;田小军;齐志群;安亦军;范东瀛;王爱东;任翊

    目的 利用常规PCR、巢式PCR(Nest PCR,nPCR)和定量PCR(Quantitative PCR,qPCR)方法,调查非肺孢子菌肺炎(Non-Pneumocystis pneumonia,non-PCP)患者支气管肺泡灌洗液(Bronchial alveolar lavage fluid,BALF)中耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)的检出情况.方法 入选non-PCP患者50例留取BALF,分别以线粒体大亚基rRNA(Mi-tochondrial large subunit rRNA,mtLSUrRNA)为靶基因进行常规PCR(Mt-PCR)和巢氏PCR(Mt-nPCR),以主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,Msg)为靶基因进行常规PCR(Msg-PCR),检测Mt-PCR,Mt-nPCR和Msg-PCR三种方法的Pj特异性核酸片段检出率,并对PCR检出为阳性的样本分别用以mtLSU rRNA和Msg为靶基因的qPCR来检测相应Pj核酸片段拷贝数.结果 50例BALF中,Mt-nPCR、Mt-PCR及Msg-PCR的检出率分别为56%(28/50)、36%(18/50)和26%(13/50),其中三种检测方法同时阳性5例(10%),任意两种方法阳性13例(26%),任意一种方法阳性18例(36%),三种方法均为阴性14例(28%).36例PCR检测结果阳性的标本分别进行mtLSU rRNA定量PCR(Mt-qPCR)和Msg定量PCR(Msg-qPCR)检测,其中Mt-qPCR检测结果为:1000拷贝/μL~9 999拷贝/μL有36例(100%);Msg-qPCR检测结果为:100拷贝/μL~999拷贝/μL有3例(8.3%),1 000拷贝/μL~9 999拷贝/μL有16例(44.4%),10 000拷贝/μL~99 999拷贝/μL有9例(25%),105拷贝/μL以上8例(22.2%).36例配对检测qPCR样本中,Msg-qPCR拷贝数大于Mt-qPCR拷贝数样本28例(77.8%).结论 在non-PCP患者BALF中,Pj核酸扩增方法的检出率为72%,Mt-qPCR拷贝数主要位于103拷贝/μL数量级,Msg-qPCR拷贝数主要分布于103至105拷贝/μL.用核酸扩增方法在BALF中检测出Pj时,临床意义解读需要谨慎.

  • 耶氏肺孢子菌合成抗原在不同人群抗体筛查中的应用

    作者:宋营改;卜定方;任翊

    耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)是引起肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia,pCp)的真菌类病原体,是免疫功能缺陷者重要的条件致病菌.Pj通过主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,Msg)的抗原转换,逃避宿主免疫清除.MsgA,MsgB,MsgC1以及MsgC1的3个变种MsgC3,MsgC8和MsgC9是三组跨越Msg基因全长的原核表达重组肽段.对健康人群调查发现,84%的个体抗MsgA、MsgB或MsgC1 IgG抗体阳性.与健康对照相比,HIV感染者抗MsgC1 IgG抗体水平明显增高,而抗MsgA、MsgB IgG抗体水平没有变化.与非暴露组相比,职业暴露组医务人员的抗MsgC1 IgG抗体水平也明显增高,而抗MsgA、MsgB IgG抗体水平没有变化.因此,MsgC1抗体水平增高可以作为近期暴露过Pj的指标,对免疫缺陷者具有辅助诊断PCP的临床意义.Pj血清学研究的发展将会带来更大的PCP临床诊断和流行病学调查价值.

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