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耶氏肺孢子菌主要表面糖蛋白合成及人群IgG抗体调查
目的 原核表达耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)主要表面糖蛋白(major surface glycoprotein,Msg)氨基端片段,获得可溶性Pj重组Msg抗原(recombinant Msg,rMsg),利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测266例成年人外周血抗Pj rMsg IgG抗体. 方法 从耶氏肺孢子菌感染者的痰液获得Pj DNA,构建表达载体pGEX-3X-Pj Msg,转化感受态大肠埃希菌DE3,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达.利用谷胱甘肽转移酶(GST)标签进行亲和纯化,对纯化Pj rMsg抗原进行鉴定并建立ELISA方法,检测266例成年人外周血抗Pj rMsg IgG抗体. 结果 成功构建了表达质粒pGEX-3X-Pj Msg,并诱导表达分子质量单位约39 ku的可溶性Pj rMsg蛋白,产量为13 mg/500ml菌液,以此为抗原,采用ELISA检测266例成年人外周血抗Pj rMsg IgG抗体,阳性率为42.5％(113/266).其中男、女性患者阳性率分别为43.3％(58/134)和41.7％(55/132),差异无统计学意义(x2=o.071,P＞0.05);20～29岁、30～39岁、40～50岁组阳性率分别为31.8％(27/85)、48.3(42/87)和46.8％(44/94),差异无统计学意义(x2=5.911,P＞0.05). 结论 成功表达了可溶性Pj rMsg抗原,Pj rMsg-ELISA检测结果表明北京地区成人耶氏肺孢子菌感染率较高.
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中国耶氏肺孢子菌主要表面糖蛋白UCS基因分型研究
目的 以主要表面糖蛋白上游保守区UCS基因对中国耶氏肺孢子菌进行基因多态性分析. 方法 用巢式PCR扩增127例耶氏肺孢子菌感染患者呼吸道标本中主要表面糖蛋白上游保守区UCS基因,通过DNA直接测序获得该基因的序列,并随机选取部分标本经过克隆测序,分析其UCS串联重复区序列的特征,并分析不同患者人群中基因多态性分布. 结果 共获得97例(占76.4％)患者标本的UCS基因序列,依据串联重复单元的数目、序列不同得到2～5个重复的7种基因型,其中基因型1,2,3(占68.04％)为常见,其次为基因型1,2,3,3(占21.65％).在6组患者中,基因型1,2,3亦为常见. 结论 本研究获得了我国耶氏肺孢子菌UCS基因多态性的基础资料,为进一步分析耶氏肺孢子菌的遗传学、流行病学提供了依据.
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HIV-1感染者抗耶氏肺孢子菌主要表面糖蛋白抗体筛查
目的 利用原核表达的耶氏肺孢子菌(Pj)重组主要表面糖蛋白(rMsg)建立酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,调查176例艾滋病病毒(HIV-1)感染者的抗Pj rMsg IgG和IgM抗体的检出率.方法 以临床获得的Pj脱氧核糖核酸(DNA)为模板,扩增主要表面糖蛋白基因的5'端350bp片段,将聚合酶链反应(PCR)产物克隆到原核表达载体pGEX-3X中,获得可溶GST标签的rMsg,建立ELISA方法,检测北京佑安医院176例HIV-1感染者的血清标本,统计抗Pj rMsg IgG和IgM抗体的检出率.结果 176例HIV-1感染者中,抗Pj rMsg IgG和IgM抗体检出率分别为24.4％(43/176)和12.5％(22/176),其中IgG阳性IgM阳性、IgG阳性IgM阴性、IgG阴性IgM阳性和IgG阴性IgM阴性的检出率,分别为7.4％(13/176)、17.0％(30/176)、5.1％(9/176)和70.5％(124/176).抗体调查年龄分组中,(20～29)岁、(30～39)岁和40岁以上年龄组的IgG抗体阳性率分别为19.2％(10/52)、32.1％(25/78)和17.4％(8/46),组间比较差异无统计学意义(x2=4.450,P=0.108);IgM阳性率分别为11.5％(6/52)、12.8％(10/78)和13.0％(6/46),组间比较差异无统计学意义(x2=0.064,P=0.969).CD+T淋巴细胞计数分组中,≥350个/μL组和＜350个/μL组的IgG抗体阳性率分别为24.4％(30/123)和24.5％(13/53),两组比较差异无统计学意义(x2 =0.000,P=0.984);IgM抗体阳性率分别为12.2％(15/123)和13.2％(7/53),两组比较差异无统计学意义(x2 =0.035,P=0.852).抗Pj rMsg IgM抗体阳性的22例HIV-1感染者,临床没有肺炎的症状与体征.结论 HIV-1感染人群中抗Pj rMsg IgG和IgM抗体检出率分别为24.4％和12.5％,该人群感染Pj的血清学证据,抗Pj rMsg IgG或IgM阳性的检出率为29.5％.抗Pj rMsg IgM抗体阳性不能作为Pj现症感染的指标.
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抗耶氏肺孢子菌合成抗原IgG和IgM及IgA抗体水平调查
目的 利用北京地区随机人群,抗耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)人工合成主要表面糖蛋白(Recombinant major surface glycoprotein),调查抗PjrMsg、IgG、IgM和IgA抗体水平,探讨人群感染Pj情况.方法 利用原核表达的Pj rMsg可溶抗原,建立酶联免疫吸附试验,调查266例北京地区随机人群血清抗Pj rMsg IgG、IgM和IgA抗体的检出情况.结果 北京地区266例随机血清,抗Pj rMsg IgG、IgM和IgA抗体检出率分别为42.5％(113/266),41.7％(111/266)和0(0/266).其中同期IgG阳性IgM阳性、IgG阳性IgM阴性、IgG阴性IgM阳性和IgG阴性IgM阴性的检出率分别为17.3％(46/266)、25.2％(67/266)、24.4％ (65/266)和33.1％(88/266).40～50岁组的抗Pj rMsg IgM抗体检出率为62.8％(59/94),分另别高于20～29岁组的32.9％(28/85)(x2=15.895,-0.000)和30～39岁组的27.6％(24/87)(x2=22.522,P=0.000).结论 北京地区成人抗Pj rMsg IgG与IgM抗体阳性率分别为42.5％和41.7％,人群感染Pj后的IgG或IgM抗体阳性率高达66.9％,IgA抗体没有检出以及IgM抗体在高年龄组中检出率高的原因需要进一步研究.
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耶氏肺孢子菌合成抗原在不同人群抗体筛查中的应用
耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)是引起肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia,pCp)的真菌类病原体,是免疫功能缺陷者重要的条件致病菌.Pj通过主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,Msg)的抗原转换,逃避宿主免疫清除.MsgA,MsgB,MsgC1以及MsgC1的3个变种MsgC3,MsgC8和MsgC9是三组跨越Msg基因全长的原核表达重组肽段.对健康人群调查发现,84％的个体抗MsgA、MsgB或MsgC1 IgG抗体阳性.与健康对照相比,HIV感染者抗MsgC1 IgG抗体水平明显增高,而抗MsgA、MsgB IgG抗体水平没有变化.与非暴露组相比,职业暴露组医务人员的抗MsgC1 IgG抗体水平也明显增高,而抗MsgA、MsgB IgG抗体水平没有变化.因此,MsgC1抗体水平增高可以作为近期暴露过Pj的指标,对免疫缺陷者具有辅助诊断PCP的临床意义.Pj血清学研究的发展将会带来更大的PCP临床诊断和流行病学调查价值.
