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运动与自噬的关系进展研究
近年来,一种新的细胞死亡方式-自噬(autophagy)引起科学家们广泛的注意,相对于之前发现的程序性死亡形式-凋亡,人们将自噬命名为Ⅱ型程序性细胞死亡.自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象,细胞通过单层或双层膜包裹自身受损的细胞和大分子物质形成自噬体,然后运送到溶酶体形成自噬溶酶体经过多种酶的消化和降解,以实现细胞本身的代谢和某些细胞器的更新[1].这是细胞的一种自我调节,它对于细胞自身内环境的稳定和维持细胞存活、更新、物质再利用中起着重要作用.目前,我们已经知道的细胞自噬方式主要有三种:1)大自噬,是自噬形式中普遍,它是由内质网来源的单层膜凹陷形成杯状双层膜样的分隔膜,进而完全包绕待降解物形成自噬体,接着与溶酶体融合,自噬体内细胞物质如细胞器被溶酶体酶溶解[2];2)小自噬,主要是溶酶体的膜直接包裹如长寿命蛋白并在溶酶体内降解;3)分子伴侣介导的自噬(CMA),与前面两种自噬方式不同,它主要是胞浆内蛋白结合到分子伴侣后被转运到溶酶体腔中被溶酶体酶消化,整个过程不需要囊泡的参与[3].
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黄芪甲苷对成年大鼠视神经切断后视网膜节细胞存活的影响
目的:探讨黄芪甲苷(AST)在成年大鼠视神经切断后对视网膜节细胞(RGCs)存活的影响.方法:动物分为正常组、单纯切断视神经组、AST处理组和生理盐水对照组.用荧光金(FG)逆行示踪标记法及定量解剖学技术观察正常和经AST处理的SD大鼠于视神经切断后5、7、14d的RGCs的密度.结果:正常组RGCs平均密度为(2 230±156)/mm2.单纯视神经切断组RGCs平均密度与生理盐水对照组相比较,无显著性差异;AST处理组与单纯切断视神经组和生理盐水对照组相比较,在各个时间点上均存在显著性差异.结论:黄芪甲苷可提高成年大鼠视神经切断后视网膜节细胞短期存活.
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视网膜祖细胞干细胞特性及移植入视网膜后的研究
目的:研究视网膜祖细胞的干细胞特性及移植入视网膜后的存活和迁移.方法:体外培养胎龄18 d大鼠的视网膜细胞,用RT-PCR、细胞免疫荧光方法鉴定其增殖分化;成年SD大鼠腹腔注射N-甲基-N-亚硝基脲形成视网膜感光细胞退化的动物模型,培养的视网膜祖细胞用CM-DiI标记后,移植入模型鼠的玻璃体腔.结果:视网膜祖细胞体外表达中间神经丝蛋白nestin;表达Flk-1、Pax6及Notch1的mRNA;能掺入BrdU;分化后表达视网膜各类细胞特异性蛋白;移植后在实验组大鼠视网膜能存活及迁移,而在对照组中仅聚集在玻璃体腔.结论:视网膜祖细胞具有干细胞特性,移植入受损伤视网膜后,能存活、整合及迁移.
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整合素与肝癌转移的相关研究进展
整合素家族是一类由一个α亚单位和一个β亚单位通过非共价键连接而成的异二聚体跨膜糖蛋白,目前已确认有18种α亚单位和8种β亚单位组成至少24种整合素.二种亚基都包括一个大的结合基质配体的胞外域,一个单次跨膜域和一个短的无催化作用的胞质域[1].每种整合素都有自己相对特异的配体,整合素通过识别细胞外基质(ECM)成分蛋白及细胞间黏附分子(ICAM),细胞膜免疫球蛋白超家族黏附分子来介导细胞-基质及细胞-细胞间的黏附反应,并接受,传导级联信号以调节细胞存活、凋亡、运动等,在肿瘤的侵袭转移中起重要作用.
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肝硬化患者腹水激活素A测定及其临床意义
激活素(ACT)是转化生长因子(TGF)β超家族成员之一,是早在性腺细胞中发现的二聚体糖蛋白激素,由2个亚基借二硫键连接而成.组成ACT的亚基有5种,分别是βA、βB、βC、βD和βE.根据其结合方式不同,ACT分为三种:ACTA(βAβA)、ACTB(βBβB)、ACTAB(βAβB).ACT具有多种生物学功能,能正、负反馈调节垂体卵泡刺激素分泌,诱导胚胎中胚层发育,促进红细胞系分化及维持神经细胞存活[1].
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γ射线照射对椎间盘生物学活性的影响
目的 探讨γ射线照射处理异体椎间盘的可行性,同时进一步评估去细胞化椎间盘作为自然支架辅助生物学治疗椎间盘退变的性能.方法 手术获取6例成熟比格犬的椎间盘,逐级冷冻保存,随机分为对照组及18 kGy、25 kGy、50 kGy γ射线照射组(n=8),处理各组椎间盘后进行细胞活性及生物力学检测并进行对比分析.结果 椎间盘细胞活性与照射剂量成负相关,对照组纤维环及髓核细胞活性分别为92.6%、90.7%,18 kGy照射组为76.5%、70.6%,25 kGy照射组为52.7%、46.9%,50 kGy照射组为18.3%、10.1%,各组间差异有统计学意义(P＜0.01).不同组间椎间盘生物力学性能差异均无统计学意义(P＞0.05),其中压缩、拉伸轴向力及左/右旋转扭力矩均维持在正常水平.结论 优化γ射线照射可以作为异体椎间盘消毒灭菌的手段,但其确切效果有待体内实验进一步验证.去细胞化椎间盘具有较为理想的生物学及机械性能,有望作为自然支架用于椎间盘疾病的相关研究.
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精液培养24h后存活率对体外受精胚胎移植临床结局的影响
目的 探讨体外受精、胚胎移植(IVF-ET)后过夜培养精子存活率对临床结局的影响.方法 回顾性分析我中心850例常规IVF周期受精后精子过夜培养后的存活率,并分为3组:过夜精子存活率≤20％为A组,存活率大于20％且小于或等于58％为B组,存活率＞58％为C组；再依据正常形态精子百分率将上述三组患者每组再进一步分为3组:1组为正常精子形态≤4％,2组为正常精子形态大于4％且小于或等于15％,3组为正常精子形态＞15％.比较各组间的受精率、优质胚胎率及妊娠率.结果 (1)A组的受精率明显低于B、C两组,差异均有统计学意义(P＜0.05)；而且受精率随着存活率的升高而升高；A组的优质胚胎率低于B、C两组,差异有统计学意义(P＜0.05),而B、C两组间差异不具统计学意义.(2) A1组的存活率、受精率、优质胚胎率均低于A2及A3组,差异有统计学意义(P＜0.05)；B1组的存活率、受精率、优质胚胎率均低于B3组,差异有统计学意义(P＜0.05); C1的存活率、受精率、优质胚胎率均低于C2及C3组,差异有统计学意义(P＜0.05)；同时,可以观察到随正常精子形态百分率及隔夜培养存活率升高,受精率、优质胚胎率均随之升高；而A、B、C三组间的妊娠率无统计学差异.结论 精液培养24h后检测精子存活率可以作为一种新的检测指标预测IVF-ET的受精率及优质胚胎率的结局,对临床选择受精方式有一定的参考价值.
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实验性不同类型大鼠臂丛根性损伤后脊髓运动神经元存活情况观察
目的研究臂丛神经根性切断伤与根性撕脱伤后脊髓前角运动神经元的存活情况。方法对76只健康成年SD大鼠,按手术先后顺序分成臂丛神经根性切断伤组和根性撕脱伤组,两组按术后9个不同的时间组取材,每组4只大鼠,共72只大鼠。另外4只为正常对照组。取出脊髓标本后,观察颈髓前角运动神经元数目的变化。结果臂丛神经根性切断伤后,各时间组的脊髓前角运动神经元数目和术前无明显变化;而根性撕脱伤组于术后1周其神经元数目开始减少,术后2周时神经元数目比正常对照组减少30 %,术后6周时减少70 %。撕脱伤组与切断伤组相比,损伤1周后,各时间组的差异均有显著性意义(χ2 = 3.922 ～ 17.21, P < 0.01)。结论臂丛神经根性切断伤其脊髓运动神经元和术前比无明显变化,而臂丛神经根性撕脱伤后其脊髓运动神经元有死亡,死亡速度快,死亡程度高。
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同种异体肌腱移植后的细胞转归
目的研究同种异体肌腱移植后异体细胞在关节外环境中随时间推移的动态转归情况.方法取供体大鼠跟腱移植桥接于36只受体大鼠跟腱缺损处,于术后1、4、8周取移植肌腱提取细胞DNA(每次12只动物),以DNA微卫星重复位点为分子标记, 采用聚合酶链反应扩增移植物细胞DNA的微卫星重复序列.通过变性高效液相色谱(DHPLC)技术分析移植物DNA的基因型.结果术后1周,供体DNA含量显著减少(P<0.01),4只动物体内可测到供体DNA.术后4周,2只动物体内可测到供体DNA.术后8周,12只动物体内移植物中均不能检测到供体DNA.结论深低温冻存的同种异体肌腱移植后异体细胞在关节外环境存活不超过8周.
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Twist-1通过MPL促进髓系白血病细胞增殖和耐药
目的:检测Twist-1与骨髓增生性白血病病毒癌基因(myeloproliferative leukemia virus oncogene,MPL)在髓系白血病患者和髓系造血系统恶性肿瘤细胞系中表达的相关性,并探讨Twist-1是否通过MPL对髓系白血病细胞增殖、耐药发挥促进作用.方法:选取中国医学科学院血液病医院2005年1月至2008年12月初次诊断为急性髓系白血病(acute myeloid leu-kemia,AML)、慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者的骨髓标本41例(其中AML 23例、CML 18例),用Re-al-time PCR检测AML、CML患者以及髓系造血系统恶性肿瘤细胞系中Twist-1和MPL mRNA的表达情况,并分析其相关性.构建MPL过表达载体,制备慢病毒并感染髓系白血病细胞系K562、U937,通过细胞计数实验、集落形成实验以及药物敏感实验评价其对白血病细胞增殖、集落形成能力以及耐药的影响,并进一步确定Twist-1是否通过MPL发挥白血病促进作用.结果:在U937和K562细胞中过表达Twist-1明显增加MPL蛋白水平(P＜0.05),敲降Twist-1后MPL mRNA的表达水平明显下降(P＜0.01);AML、CML患者骨髓单核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMCs)中Twist-1 mRNA表达与MPL mRNA表达水平呈显著正相关(P＜0.05).过表达MPL使K562和U937细胞对化疗药物柔红霉素及伊马替尼的敏感性显著降低(P＜0.01),且提高K562-MPL、U937-MPL的细胞增殖、集落形成数目(均P＜0.01);干扰Twist-1并过表达MPL显著降低髓系白血病细胞增殖和集落形成(均P＜0.01).结论:Twist-1通过MPL促进AML、CML白血病细胞的增殖、存活和耐药.
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b-arrestin 1对CD4+ T细胞存活和自身免疫的调控
在获得性免疫中,CD4+ T细胞发挥着重要作用,其调控的失常会导致自身免疫性疾病的发生.机体对外周活化的CD4+ T细胞的调控是十分严格的,其产生和消亡间保持着微妙的平衡.
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二氢卟吩e6声动力对乳腺癌细胞生长的作用
目的:应用二氢卟吩e6作为声敏剂,通过超声波激活,研究其对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的作用. 方法:超声与二氢卟吩e6单独及联合处理MDA-MB-231细胞和正常人外周血单核细胞(peripheral mononuclear cell,PMNC)45 min后,采用MTT比色法检测细胞生长,荧光倒置显微镜下观察细胞形态. 结果:频率1.0 MHz、超声强度1.0～2.0 W/cm~2作用60 s呈强度依赖性抑制PMNC和MDA-MB-231细胞的生长,其抑制50%PMNC和MDA-MB-231细胞生长的超声强度分别为1.23 W/cm~2和1.25 W/cm~2,差异无统计学意义(P>0.05);0.10～1.60 mg/mL二氢卟吩e6呈浓度依赖性地抑制PMNC和MDA-MB-231细胞生长,其抑制PMNC和MDA-MB-231细胞生长的IC_(50)值分别为0.77 mg/mL和0.38 mg/mL, 差异有统计学意义(P<0.05).频率1.0 MHz和超声强度0.5 W/cm~2作用60 s以及0.05～0.20 mg/mL二氢卟吩e6作用两者联合未明显抑制PMNC细胞的生长(P>0.05),但明显抑制MDA-MB-231细胞的生长(P<0.05).细胞形态学观察结果显示,与单纯超声(1.0 MHz频率、0.5 W/cm~2声强作用60 s)及单纯二氢卟吩e6 (0.20 mg/mL) 作用相比,超声联合二氢卟吩e6组的MDA-MB-231细胞死亡率显著增加(P<0.05).结论:超声联合二氢卟吩e6声动力能够特异性抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,二氢卟吩e6有望成为一种新型声敏剂应用于乳腺癌的声动力治疗.
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辐照剂量率对细胞存活的影响
目的探讨单次辐照情况下剂量率是否影响细胞的存活. 方法以中国仓鼠卵巢CHO-K细胞为材料,利用德国GSI生物物理组的X光机产生不同剂量率的X射线,采用克隆形成法研究辐照剂量率与细胞存活曲线之间的关系. 结果低剂量率辐照所致的细胞存活分数比高剂量率辐照所致的细胞存活分数高. 结论辐照治癌中的治疗计划应适当考虑剂量率对细胞存活的影响.
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第三讲 神经营养因子的神经修复作用及其机制
神经营养因子是指机体产生的能够促进神经细胞存活、生长、分化的一类蛋白质因子.过去一直认为神经生长因子主要在发育过程中调节神经元存活,而对成年神经元不产生作用.近十五年来,这种传统观念才得以彻底改变,神经营养因子不仅在成年神经系统存在,而且能够阻止成年神经元损伤后神经元的死亡以及调节包括突触可塑性和神经递质传递等许多神经系统功能.这些发现,拓展了对神经修复策略的理解,使人们认识到,神经营养因子不仅可以减少神经变性阻止疾病进程,而且还具有刺激轴突生长、促进再生的功能.研究表明,对于阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩性侧索硬化症、卒中、脊髓损伤和外周神经病变等,神经营养因子表现出能促进神经元的修复、轴突生长和功能性恢复的作用.神经营养因子极有可能成为将来治疗神经损伤和神经系统疾病的重要手段.
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感音神经性听力损失诊断和治疗要点(续)
关于神经营养因子(neurotropin factors,NTF)神经营养因子(NTF)是机体产生的调控神经细胞存活、分化和生长的一类可溶性蛋白质,对神经系统的发育和修复损伤有重要作用.
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老年抑郁症会加速其大脑痴呆
近，美国匹兹堡大学医学院的研究表明，65岁后罹患抑郁症和轻度认知损伤的人大脑更易老化。该研究结发表在《分子精神病学》（Molecular Psychiatry）杂志上。已知严重抑郁症的老年罹患痴呆的概率是对照的2倍，但是没有明确的解释为何能治疗的情感障碍如抑郁症会增加痴呆的风险。该研究团队收集了80例严重抑郁症老年患者治疗后的血样，其中36例罹患轻度认知障碍，44例认知功能正常。实验测试了血样中242种蛋白，包括肿瘤、心血管疾病和代谢相关的生物信号通路，如精神和神经退行性疾病。研究人员也对受试者的大脑进行 PET 扫描和核磁共振扫描，寻找脑血管疾病如脑萎缩的指示剂，以及阿尔茨海默病大脑斑块β-淀粉样蛋白。结果显示，轻度认知障碍受试者小组内24种蛋白的生物活性有差异，涉及免疫调节和炎症通路、细胞外信号通路，细胞存活和蛋白脂质平衡。大脑扫描轻度认知障碍小组更容易罹患脑血管疾病，例如中风，但是β-淀粉样蛋白沉积量没有差异。综合看，抑郁和认知损伤的人们更容易受到大脑老化的攻击，加速了痴呆。该研究为晚期轻度认知损伤相关的疾病提供了较完整的神经生物学功能变化的观点。
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鸟苷酸交换因子C3G对心肌细胞生存力的影响及其可能机制
目的 探讨过表达鸟苷酸交换因子C3G(Crk SH3-domain-binding guanine-nucleotide-releasing factor)对心肌细胞生存力的影响及其机制.方法 分别用pCXN2-Flag、pCXN2-Flag-hC3G(过表达人C3G mRNA)质粒瞬时转染H9C2心肌细胞,并进行缺氧/复氧(H/R)于预.实验分为空白组、空质粒组、C3G过表达组、空白+H/R组、空质粒+H/R组,C3G过表达+H/R组.用RT-PCR法检测心肌细胞C3G mRNA的表达,蛋白质印迹分析法检测心肌细胞C3G、p-ERK1/2蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞的凋亡率.结果 C3G过表达组较空白组和空质粒组,C3G过表达+H/R组较空白+H/R组和空质粒+H/R组人C3G mRNA、C3G蛋白、p-ERK1蛋白、细胞增殖率均增加(P均＜0.01),凋亡率均降低(P＜0.05,P＜0.01)；C3G过表达+H/R组较空白+H/R组、空质粒+H/R组p-ERK2蛋白增加(P＜0.01).结论 过表达C3G能促进心肌细胞的生存力,该过程可能是由p-ERK1/2蛋白表达增加和心肌细胞凋亡降低介导的.
关键词： 鸟嘌呤核苷酸交换因子类 C3G 心脏肌细胞 细胞存活 -
沉默CrkL对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和生存力的影响及其机制
目的 探讨沉默CrkL对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和生存力的影响及其机制.方法 分别用空白试剂、阴性慢病毒和CrkL RNAi慢病毒(沉默CrkL mRNA)感染H9C2心肌细胞,并进行缺氧/复氧(H/R)干预.实验分为空白组、阴性病毒组、CrkL沉默组、空白+H/R组、阴性病毒+H/R组、CrkL沉默+H/R组.用RT-PCR法检测心肌细胞CrkL mR-NA的表达,蛋白印迹分析法检测心肌细胞CrkL蛋白、p-ERK1/2蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞的凋亡率.结果 CrkL沉默组较空白组和阴性病毒组,CrkL沉默+H/R组较空白+H/R组和阴性病毒+H/R组CrkLmRNA、CrkL蛋白、p-ERK1/2蛋白、细胞增殖率均降低(P＜0.05或P＜0.01),细胞凋亡率均增加(P＜0.01).结论 沉默CrkL能加重缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和生存力降低.该过程可能是由p-ERK1/2蛋白表达降低介导的.
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抑制miR-21表达对乳腺癌细胞株MDA-MB-231生存和凋亡的影响
microRNA(miRNA)是一种广泛存在的非编码小分子RNA,在重要生命过程如细胞生长、发育、代谢中等扮演着重要角色,其表达异常与肿瘤的发生发展关系密切,可能发挥促进或抑制癌细胞生长的重要作用.miR-21是一种较早在人体中发现、并且存在相对广泛的miRNA,在多种肿瘤细胞及组织中都具有较高水平的表达[1-3].研究发现乳腺癌患者血清中miR-21水平较健康对照组明显增高,且miR-21水平升高与癌细胞在内脏中的转移显著相关[1],提示miR-21可能作为一种致癌miRNA在乳腺癌的发展过程中发挥重要作用.本研究以反义寡核苷酸技术(ASODN)抑制miR-21在乳腺癌中的表达,观察了miR-21下调后乳腺癌细胞的存活和凋亡情况以及肿瘤抑制相关蛋白TIMP-1、Caspase 3和肿瘤增殖相关蛋白Bcl-2的表达变化,为探寻乳腺癌的基因治疗靶点提供依据.
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电穿孔法转染人原代成纤维细胞条件的优化
目的 通过优化电穿孔转染条件,探讨影响人原代成纤维细胞电转染效率和转染后细胞存活率的因素,筛选出人原代成纤维细胞的佳电转染条件.方法 通过改变脉冲电压、脉冲次数和质粒浓度等条件,将含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的质粒pEGFP-N1电穿孔转染入人原代成纤维细胞.利用锥虫蓝染色检测细胞存活情况,采用流式细胞术检测转染24 h后的转染效率.结果 在低电压模式下,脉冲电压320 V、质粒浓度为20 μg/mL、脉冲1次时,人原代成纤维细胞的电转染效果理想,转染效率达到(42.53±0.63)％,细胞存活率为(74.30±3.01)％.结论 优化了人原代成纤维细胞的电转染条件,在保证细胞较高存活率的前提下提高了人原代成纤维细胞的电转染效率,为后续基因功能的研究打下基础.
