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丙型肝炎病毒E2蛋白HVR1在体液免疫应答中的作用
丙型肝炎病毒(HCV)感染是肝硬化、肝癌的高危险因素,目前尚无HCV疫苗上市.HCV包膜E2蛋白能诱导机体产生中和抗体,是重要的候选疫苗成分.E2蛋白氨基末端由27个氨基酸残基组成的高变区1(hypervariable region 1,HVR1)含有多个线性中和抗体表位,变异频率极高[1],增加了HCV疫苗研制的难度.近年发现,除了HVR1含有中和抗体表位外,E2蛋白还存在其他的保守空间构象和线性中和抗体表位[2].
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腺病毒六邻体蛋白部分基因的构建表达及表达产物抗原性研究
腺病毒是人类呼吸道、胃肠道、眼部等部位许多疾患的重要病原之一[1],引起人的急性呼吸系统疾病、流行性角膜结合膜炎、咽结合膜热等.在儿童急性感染疾病中,2%~7%是由腺病毒引起的,有时可造成一定范围的流行.由于腺病毒型别较多,给实验室诊断带来一定困难.
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CVB3 VP1和hIL-15基因真核双表达质粒的构建及免疫效果观察
IL-15做为佐剂,可增强抗原的提呈和刺激免疫细胞的分化,CVB3的VP1蛋白可以刺激机体产生具有保护性的中和抗体.我们通过构建pcDNA3-VP1/IL-15真核双表达重组质粒并观察其免疫效果而探讨预防病毒性心肌炎的可能性.
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甲型H1N1流感病毒HA63-286蛋白的原核表达及免疫原性初步研究
近年来,随着甲型H1N1流感的不断暴发,对新型流感疫苗的开发和安全应用越来越得到重视.对甲型H1N1的血凝素(HA)第63~ 286氨基酸区进行基因克隆,并将其插入到大肠杆菌表达载体pTXB1中进行表达,对其免疫原性进行了初步的研究,为开展基因工程疫苗和核酸疫苗研究提供了资料.
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SARS冠状病毒S1基因片段真核表达载体的构建及其活性测定
严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)病原体是SARS冠状病毒(SARSCoV),研究开发安全有效的SARS-CoV疫苗以控制SARS成为热点.经过对12株SARS冠状病毒基因序列比较,发现S蛋白的氨基酸突变率仅为0.23%,其较高的保守性为疫苗研究奠定了良好的基础,由此,S蛋白成为候选疫苗的重要靶位[1].pcDNA3.1(+)是一种高效率的质粒型真核表达载体.本研究将SARS-CoV的S1基因片段连至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组pcDNA3.1(+)/S1并初步研究其免疫效果.
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NODs蛋白及其与TLRs相互调控在机体抗病原真菌感染中的作用
宿主的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)主要包括Toll样受体(TLRs)和核苷酸结合寡聚化结构域( NODs)两大类受体[1],其中TLRs是胞膜模式识别受体,NODs是近年来新发现的胞质模式识别受体.目前,已有大量关于TLRs与NODs在细菌感染免疫应答中作用的研究,但NODs蛋白在真菌感染中作用的研究报道屈指可数,且NODs与TLRs在抗病原真菌感染中相互调控关系的机制尚不明确.本文主要对NODs蛋白信号通路,NODs与TLRs相互调控关系,NODs蛋白在抗病原真菌感染免疫应答中的作用进行综述.
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系统性红斑狼疮患者中TNF的检测
本研究检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血TNF-α、β,sTNFR水平以及淋巴细胞TNF-α、β基因的转录变化,从多层面分析SLE患者中TNF系统的变化.TNF-α、TNF-β(也称淋巴毒素α,LTα)的编码基因位于与免疫调节密切相关的MHCⅢ类区.近在该区发现了与TNF基因结构相同的新基因,编码的蛋白(称淋巴毒素β,LTβ)与TNF高度同源,可能在免疫调节中起重要作用[1].我们初步观察了SLE患者中TNF-α、sTNFR 以及LTβ可能的转录变化.
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抗核糖体P蛋白抗体的检测及其与系统性红斑狼疮的相关性研究
系统性红斑狼疮(SLE)是一种常见的系统性自身免疫病.以往研究提示血清中抗核糖体P蛋白抗体(anti-P)与SLE密切相关,且可能与狼疮中枢神经系统病变(CNS-SLE),尤其是狼疮精神症状有关[1].本研究将同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫双扩散法(ID)和免疫印迹法(IBT)对血清中anti-P进行检测,比较其敏感性和特异性,并评价其在SLE及CNS-SLE诊断中的价值.
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双功能螯合剂与鼠IgG1 Fab′片段的点特异性交联方法改进
同完整IgG分子相比,单价抗体片段在免疫组织化学及核医学免疫显像中有明显优点.由胃蛋白酶消化制备的F(ab′)2抗体片段经温和还原可生成单价含活性基团-SH的Fab′片段.此片段的优点之一是可利用其铰链区的-SH基团与其它分子行点特异性交联.
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可溶性TNF受体在大肠杆菌中表达
TNF受体(TNFR)通过介导TNF的信息而在炎症、肿瘤坏死、细胞增殖、分化及凋亡中发挥着重要作用.TNFR信号传导机理及其在诱导细胞凋亡和激活核因子 NF-KappaB之间的平衡是目前研究的热点.为了探索TNFR在炎症及肿瘤细胞中的作用,我们克隆并表达了TNFR膜外区蛋白(sTNFR).
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活化caspase-1在哮喘气道炎症中的表达
Caspase-1被认为是一种与多种炎症性疾病相关的蛋白,其活化可促进IL-1β和IL-33的生成。本实验就caspase-1在哮喘动物肺组织中表达做了初步的研究。
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地方株HPV16L1基因免疫小鼠诱发的抗体反应
为了检测pcDNA-L1的表达,评价地方株HPV16L1基因诱导的体液免疫反应.我们采用PCR技术从宫颈癌组织中获得HPV16L1基因,以pGEM-Teasy为克隆载体构建重组质粒pGEM-T-L1,进行限制性核酸内切酶及核苷酸序列分析,再将L1基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建重组pcDNA-L1,转染Cos-7细胞,通过IFA试验验证L1蛋白的表达.
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新生隐球菌毒力差异基因型菌株间部分毒力相关基因分析
目的:了解新生隐球菌格鲁比变种( Cryptococcus neoformans var. grubii)两组毒力差异明显的多位点微卫星型( multilocus microsatellite typing , MLMT )菌株间的差异基因,探讨导致新生隐球菌格鲁比变种间毒力差异的相关基因及这些基因的功能。方法根据已有基因组数据,针对可能为新生隐球菌毒力相关的基因设计特异性引物,扩增并测序,通过序列对比分析每个基因在两组微卫星基因型菌株间存在的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms ,SNPs)位点,并对引起差异的蛋白质进行分析和预测。结果在成功测序的11个基因中,除2个基因序列完全相同外,其余9个基因在两组毒力差异明显的基因型菌株间分别存在1~4个规律性SNPs,其中,有2个基因中存在非同义SNPs( non-synonymous SNPs ,nsSNPs ),这2个基因的编码产物分别为沉默信息调节因子2家族成员HST302和UV切除修复蛋白RAD23。另外,在对RAD23蛋白的系统发育分析发现,与真菌界的其他门类相比,在担子菌纲的多数RAD23蛋白与人类的同源基因亲缘关系更近。结论本研究发现了新生隐球菌两种毒力差异明显的微卫星基因型菌株间具有重要功能的两个差异基因( Rad23和Hst302),且经预测nsSNPs对蛋白结构和功能均有一定影响,而蛋白的具体功能有待通过各项试验进一步深入研究。
关键词: 新生隐球菌格鲁比变种 微卫星基因分型 毒力 蛋白 -
肾综合征出血热患者特异性抗体及免疫复合物测定
为进一步了解HFRS患者发病过程中特异性抗体及其抗原特异性CIC的形成和意义,平行测定了IgA,IgE,IgG,IgM抗体及上述4类抗原在血清中的水平(抗体几何平均滴度, GMT),并从临床分型(病情严重程度)等角度作了对比分析.同时应用抗NP、抗G2蛋白McAb进行了阻断特异性CIC的试验以比较病程早、后期血清间的差异性;还比较了不同病毒血清型[汉滩(HTHV);汉城(SEOV)]之间的差异.
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肝细胞生长因子的表达、纯化和基本活性研究
目的 通过构建肝细胞生长因子(HGF)基因的重组原核表达载体,转化大肠杆菌,制备HGF重组蛋白并初步证实其活性.方法 克隆HGF基因插入载体pET-26b(+),构建重组原核表达载体pET-26b(+)-HGF,转化E.coli Rosseta(DE3).IPTG诱导转化菌表达重组蛋白,采用Ni-NTA树脂亲和层析法进行纯化,复性后冷冻干燥.结果 HGF基因重组原核表达载体pET-26b(+)-HGF构建成功.转化pET-26b(+)-HGF的E.coli Rosseta(DE3)以包涵体形式大量表达目的蛋白,占菌体总蛋白的38%,并经Western blot证实.经Ni-NTA树脂亲和层析法纯化后HGF蛋白纯度约为95%,作用于人非小细胞肺癌细胞系A549细胞发现可促进其增殖、迁徙并抑制凋亡.结论 成功构建了HGF基因重组原核表达载体pET-26b(+)-HGF,转化E.coli Rosseta(DE3)后成功表达,纯化复性回复重组HGF蛋白结构,经体外实验证实具有生物学活性.
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幽门螺杆菌感染与危重症患者急性胃粘膜病变的关系
急诊胃镜检查已经证明,多数急性危重患者在入院后24h内可发生应激性急性胃粘膜病变而出现上消化道出血.通常认为胃酸和胃蛋白酶分泌增多、胃粘膜缺血和通透性增加以及氧自由基的毒性作用是导致急性胃粘膜病变的潜在病因[1,2],但尚无确切的临床证据支持上述理论.
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血管紧张素转换酶2的研究进展
血管紧张素转换酶相关羧肽酶(angiotensin-converting enzyme related caeboxyy peptidase),又称血管紧张素转换酶2(ACE2),为肾素-血管紧张素系统(RAS)的新成员,在RAS中有拮抗ACE并减少血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)形成的作用,因此在高血压、心力衰竭、心肌梗死、肾病的发生发展中有着重要的病理生理意义.同时ACE2为SARS-CoV S蛋白的功能性受体,对其的深入研究对重症急性呼吸综合征(severe acute respiratoty syndrome SARS)的防治也有重要价值.
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生物标记在急性肾衰竭早期诊断中的研究现状
急性肾衰竭(acute renal failure,ARF)是临床常见的危重症,在综合性医院住院患者中占5%,在重症监护室则高达25%.过去50年间,虽然支持疗法不断进步,但是需要透析的重症ARF患者的病死率没有明显下降[1],诊断不够及时从而延误治疗可能是其中一个重要的原因.如何早期诊断ARF成为亟需解决的问题,近年来在动物模型和人体研究中发现了许多蛋白生物标记,其升高早于血肌酐,部分还有助于鉴别ARF的病因.
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前列腺素E1对大鼠肢体缺血再灌流损伤Bcl-2和Bax表达的影响
前列腺素E1(PGE1)是花生四烯酸的代谢产物之一,对细胞膜及细胞器质膜具有稳定的作用[1,2].而线粒体膜的不稳定性和渗透性转化是细胞凋亡的机制之一[3].PGE对细胞凋亡有无影响?国内尚未见报道,我们采用 PGE1静脉注射后,测定SD大鼠后肢腓肠肌组织的Bcl-2,Bax基因蛋白及TUNEL标记指数,结果表明 PGE1对Bcl-2、Bax蛋白具有下调作用,现报道如下.
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HPV16E6和hTERT在宫颈癌致癌机制中的作用研究
目的:观察和分析人乳头瘤病毒16(HPV16)E6蛋白和人端粒酶逆转录酶(hTERT)在宫颈癌致癌机制中的作用。方法选取220例宫颈病变标本,根据病理诊断将其分为宫颈炎症(38例)、宫颈上皮内瘤变(CIN,118例),宫颈鳞癌(SCC,36例)和宫颈腺癌(ADC,28例)。对标本中的各HPV亚型感染情况、HPV16E6蛋白和hTERT蛋白表达情况进行检测和比较。结果在本组宫颈病变组织标本中,共有146例检出感染HPV,感染率为66.4℅,其中,HPV16的感染率高,占31.8℅,占全部感染标本的47.9℅;宫颈炎与CIN标本中的HPV16E6蛋白表达阳性率均显著低于SCC标本或ADC标本(χ2=30.950、28.663、65.265、59.598,P﹤0.05),宫颈炎标本中的hTERT蛋白表达阳性率显著低于其它病变类型(χ2=6.553、62.870、62.011,P﹤0.05),CIN标本中的hTERT蛋白表达阳性率显著低于SCC标本或ADC标本(χ2=72.715、69.935,P﹤0.05);HPV16E6蛋白表达评分与SCC标本的分化程度(rs=-0.635)、ADC标本的分化程度(rs=-0.577)呈负相关关系(P﹤0.05),hTERT蛋白表达评分与CIN标本的分期(rs=0.628)呈正相关关系而与SCC标本的分化程度(rs=-0.758)、ADC标本的分化程度(rs=-0.845)呈负相关关系(P﹤0.05)。结论HPV感染与各类宫颈病变的发生具有相关性,HPV16E6蛋白和hTERT蛋白的高表达可能在宫颈癌前病变和宫颈癌的发生、进展过程中发挥着重要的作用。