白细胞介素-10基因修饰的未成熟树突状细胞诱导自身免疫性心肌炎特异性耐受的实验研究

目的 探讨白细胞介素(IL)-10基因修饰的未成熟树突状细胞(iDC)对实验性自身免疫性心肌炎的作用.方法 从Lewis大鼠骨髓培养成熟树突状细胞(mDC)和iDC,pcDNA3-IL-10质粒转染iDC.分别将2×106mDC、iDC、pcDNA3-iDC、pcDNA3-IL-10-iDC或PBS回输5天前以猪心肌肌球蛋白免疫的实验性自身免疫性心肌炎大鼠体内.3周后观察心肌炎症、超声心动图、Th1/Th2细胞因子、主要组织相容性Ⅱ(MHC-Ⅱ)类分子及共刺激分子表达.以T细胞增殖实验及过继转移实验检测pcDNA3-IL-10-iDC诱导耐受的抗原特异性.结果 IL-10基因修饰的iDC显著抑制抗原特异性T细胞增殖,pcDNA3-IL-10-iDC治疗后实验性自身免疫性心肌炎大鼠心肌炎症显著减轻,心功能改善,MHC-Ⅱ、共刺激分子表达显著降低,脾细胞分泌细胞因子呈Th2型.结论 IL-10基因修饰的iDC可诱导实验性自身免疫性心肌炎产生抗原特异性耐受,其机制与IL-10诱导的Th1/Th2偏离及MHC-Ⅱ、共刺激分子表达下调等有关.

携带人B型利钠肽基因重组腺病毒对慢性心力衰竭大鼠心功能的影响

目的 观察外源基因人B型利钠肽对慢性心力衰竭(心衰)大鼠心功能的影响.方法 30只入选心衰大鼠,随机分为携带人B型利钠肽基因重组腺病毒组(Ad-hBNP组)、重组空白腺病毒组(Ad-Track组)、生理盐水组(NS组),另设不予任何治疗的假手术组作为对照;分别经腹腔注射予以相应治疗,每周1次,共4周.4周后实验动物行超声心动图、血流动力学检测,酶联免疫吸附试验检测血清外源基因人B型利钠肽水平,全心质量指数检测.结果 间断Ad-hBNP治疗后,Ad-hBNP组心衰大鼠室间隔厚度、左室后壁厚度、左室舒张末径、左室收缩末径[(2.34±0.29)mm、(2.28±0.18)mm、(6.50±0.42)mm、(3.54±0.59)mm]显著低于Ad-Track组[(2.71±0.35)mm、(3.02±0.85)mm、(7.71±0.83)mm、(4.72±0.80)mm,均为P＜0.05]和NS组[(2.78±0.23)mm、(2.83±0.53)mm、(7.34±0.97)mm、(4.55±0.77)mm,均为P＜0.05],而左室射血分数、左室短轴缩短率[(79.27±7.01)%、(43.38±6.73)%]显著高于Ad-Track组[(70.85±4.81)%、(35.72±3.68)%,均为P＜0.01]和NS组[(69.67±6.90)%、(34.91±5.10)%,均为P＜0.01].Ad-hBNP组与Ad-Track组和NS组比较:心率显著降低,左室收缩压显著升高[为(131.79±15.76)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)、(112.99±32.35)mm Hg、(117.13±15.26)mm Hg],左室内压大上升速率显著升高[分别为(5037.20±430.41)mm Hg/s、(4217.40±1354.15)mm Hg/s、(4310.50±1293.97)mm Hg/s;P＜0.05];左室内压大下降速率显著升高[分别为(-4382.00±1304.79)mm Hg/s、(-3725.00±791.34)mm Hg/s、(-3890.00±1043.73)mm Hg/s,均为P＜0.05];左室舒张末压降低[分别为(-4.24±4.00)mm Hg、(21.99±6.80)mm Hg、(18.00±12.25)mm Hg,均为P＜0.01];心脏质量及全心质量指数均降低.结论 间断给予Ad-hBNP能够有效地改善心衰大鼠心脏结构和功能.

RNA干扰技术及其在肝癌治疗中的应用

RNA干扰(RNAi)是指生物体内由双链RNA(dsRNA)介导同源mRNA的特异性降解,从而导致基因沉默的现象.随着研究的不断深入,RNAi在肝癌治疗中的应用也取得了积极的进展,显示着巨大的潜力,本文就此予以综述.

128 生长抑素受体基因疗法联合放射标记奥曲肽靶向疗法:肝转移的新疗法

自体骨移植修复骨缺损的研究进展

骨缺损在临床上发病率较高,其治疗仍是骨科目前较为棘手的问题.骨缺损治疗虽然可采用骨移植、组织工程技术、膜引导性组织再生技术、基因疗法等.但是,临床上仍以自体骨移植治疗骨缺损为常见.自体骨移植骨材料生物来源与宿主是一致的,所以不用考虑组织相容性和移植后的排异反应.自体骨移植骨诱导性好且无需提前取骨贮存,术中同时完成取骨、移植过程,愈合率肯定.现将自体骨移植修复骨缺损治疗的研究进展情况概述如下.

转基因逆转椎间盘退变重组腺病毒载体Ad/CMV-hTGFβ1的构建

目的构建一个高效的重组腺病毒载体Ad/CMV-hTGFβ1,用于进一步的基因转移逆转椎间盘退变的实验研究.方法应用一种新的重组腺病毒构建系统来构建腺病毒载体.首先将hTGFβ1的cD-NA亚克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV上.重组穿梭质粒pShuttle-CMV-hTGFβ经PmeI酶切线性化后,与超螺旋的病毒质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183.两种质粒在BJ5183中进行同源重组,重组病毒质粒pAd/CMV-hTGFβ1经卡那霉素平板筛选获得.经酶切分析鉴定后,重组病毒质粒用PacI酶切线化.线化的病毒质粒经脂质体转染293细胞(包装细胞系),于2周内收集重组病毒.结果重组腺病毒质粒经BamHI,PacI酶切鉴定,在0.8%的琼脂糖凝胶电泳中出现了诊断性片段;感染的293细胞出现了明显的细胞病变效应(CPE);PCR产物电泳证实了重组病毒的存在;免疫组织化学染色证实了hTGF-β1在293细胞中的表达.结论重组腺病毒载体Ad/CMV-hTGFβ1的获得以及目的基因表达的验证使下一步的逆转椎间盘退变的实验研究成为可能.

肿瘤基因治疗中腺病毒载体的转导靶向

重组DNA技术的发展使得肿瘤基因治疗的应用范围越来越广泛,已有部分代替那些传统疗法(外科手术、化疗和放疗)的趋势.但目前存在两个重要的问题需要解决:(1)现有的载体系统缺少组织特异性;(2)现行的基因疗法的基因转染的效率比较低.这在很大程度上制约了肿瘤基因治疗的应用.为了克服这两个难题,我们需要人工构建新型的,具有特异靶向及高效率转染等特性的载体系统.腺病毒作为目前基因治疗中常用的载体系统中的一员,对其的改造和修饰已引起了很多人的关注,而且也构建出了一些高效率的具有特异靶向性的腺病毒载体.在这里将详细的介绍这些新颖的腺病毒载体.

基因疗法治疗脊柱疾病——现状与展望

随着对人类基因结构及其功能研究的深入，基因疗法极可能成为21世纪临床治疗脊柱疾病的有效手段。成功地将治疗基因转入椎间盘内的靶细胞，以及在动物模型上利用基因疗法成功促进脊柱融合，标志着在这一领域的研究正取得快速进展［1］。但是在基因疗法终进入临床阶段之前，还有待进一步研究。本文在介绍基因治疗研究新发展的基础上，展望基因疗法治疗脊柱疾病尤其是椎间盘变性和脊柱融合相关疾病的前景。1　基因治疗概念的新发展　　基因治疗是将编码目的基因的核酸系列（RNA或者DNA）导入某群细胞，改变细胞的基因成分，使细胞成为特定蛋白的“生产工厂”，从而改变该细胞本身的代谢，而且还能影响邻近的未经基因改造的细胞。它不再专指通过转移功能性基因代替缺陷基因来治疗已发生的疾病，而是指通过核酸转移治疗或预防疾病。也就是说基因治疗不仅可用来治疗遗传性疾病，而且将来可治疗后天性疾病，包括肌肉骨骼的病变［2］。

EphA7基因沉默对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探讨RNA干扰抑制EphA7基因对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤生长的影响.方法 EphA7小干扰RNA (siRNA)重组质粒采用脂质体介导法转染肝癌细胞SMMC-7721,同时设空载体转染组、未转染组和对照组.对照组不注射细胞,仅注入磷酸盐缓冲液(PBS)做对照.裸鼠移植瘤模型采用左上肢皮下注射的方法建立.应用实时PCR、免疫组化和蛋白印迹方法检测移植瘤组织中EphA7基因和蛋白的表达情况,同时比较成瘤时间、肿瘤体积和重量等.结果 注射细胞后9 ～12天,除对照组外其余各组均可在注射部位发现肝癌移植瘤形成.移植瘤形成后第35天,与未转染组和空载体转染组比较,转染组移植瘤生长速率、肿瘤体积和重量均明显降低(P＜0.05).转染干扰载体pRNA-siEphA7对裸鼠肝癌移植瘤的的抑瘤率为55％.免疫组化结果显示,与未转染组和空载体转染组比较,转染组移植瘤组织中EphA7蛋白阳性染色的细胞较少,染色较浅,呈浅黄色.实时PCR和蛋白印迹结果显示,与未转染组和空载体转染组比较,转染组移植瘤组织中EphA7基因和蛋白的表达明显低于未转染组和空载体转染组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 利用siRNA抑制EphA7的表达可减缓肝癌细胞SMMC-7721在活体动物体内的生长,有望成为肝癌基因治疗的靶点.

新型增殖性腺病毒的构建及对肝癌细胞的抑制

目的 构建携带p53基因新型增殖性腺病毒CNHK600-p53,研究其对肝癌细胞株抑制效应是否优于Ad-p53.方法 PCR扩增p53基因,利用酶切连接方法 将其插入CNHK600载体,PCR鉴定.经293细胞包装成病毒,抽提病毒DNA,PCR鉴定.氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,TCID50 方法 测病毒滴度.病毒增殖实验检测病毒在不同细胞增殖能力.四甲基偶氮唑盐(methyl-thiazolyl tetrazolium assay,MTT)法观察CNHK600-p53、Ad-p53两种病毒分别对肝癌细胞株的抑制率.结果 成功构建新型增殖性腺病毒载体CNHK600-p53;293细胞包装成病毒,PCR方法 鉴定无野生型病毒存在;病毒滴度为1.99×10~（10）pfu/ml;CNHK600-p53在肝癌细胞HepG2、SMMC-7721内复制能力明显高于正常肝细胞HEL-1和L02.对6种肝癌细胞(PLC/PRF5、SMMC7721、HepaG2、BEL-7402、BEL-7404、QGY-7703)而言,随着MOI值的不断增高.其对肝癌细胞的抑制作用也不断增强;在相同MOI情况下,CNHK600-p53组较Ad-p53组的细胞抑制率高(P＜0.05).当细胞抑制率达到80%以上时.两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 利用新型增殖性腺病毒CNHK600一p53较 Ad-p53能更有效的抑制肝癌细胞,可能成为肝癌的基因治疗更有效的一种基因治疗手段.

抗表皮生长因子受体单链抗体联合放化疗治疗裸鼠移植胰腺癌的研究

目的 针对表皮生长因子受体(EGFR)的腺相关病毒(AAV)介导的靶向治疗作为一种新的治疗方式具有广阔的前景.实验通过对胰腺癌细胞株Aspc-1进行抗EGFR抗体的重组腺相关病毒(rAAV-anti EGFR)治疗及联合放疗、吉西他滨(简称化疗)等综合治疗手段,探索rAAV介导抗EGFR单链抗体对胰腺癌治疗的效果.方法 分别通过单纯化疗、单纯放疗、rAAV-anti EGFR治疗,rAAV-anti EGFR治疗联合化疗、rAAV-anti EGFR治疗联合放疗、rAAV-anti EGFR治疗联合放化疗干预胰腺癌细胞株Aspc-1及裸鼠移植瘤,检测细胞或移植瘤的凋亡率以及移植瘤生长情况.结果 体外实验提示,以上处理方式使肿瘤细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05),rAAV-anti EGFR治疗联合放化疗细胞凋亡率要高于rAAV-anti EGFR治疗、单纯放疗或单纯化疗(P＜0.05).体内实验提示,rAAV-anti EGFR治疗后,肿瘤生长明显受到抑制(P＜0.05),且与放疗和化疗均有协同作用;rAAV-anti EGFR治疗后,组织中凋亡相关Caspase-3活性蛋白表达细胞数要显著高于对照组(P＜0.05),rAAV-anti EGFR治疗联合放疗或化疗其凋亡蛋白表达细胞数要多于单纯治疗组(P＜0.05).结论 rAAV-anti EGFR治疗在体内外均有良好的抗胰腺癌效应,其联合放化疗疗效优于单纯放疗或单纯化疗,且该病毒载体与化疗及放疗具有协同作用.

2014年胆囊癌NCCN治疗指南解读与思考

胆囊癌是发病率高的胆道系统恶性肿瘤，好发于女性患者[1]。与胆管癌相比，其恶性程度较高，复发时间较早，生存时间较短，预后较差[2]。胆囊癌的治疗手段包括手术治疗、化疗、放疗、介入治疗和基因治疗等[3]，其中手术治疗是对胆囊癌有明确疗效的治疗方法，化疗、放疗及其他治疗方法的方案及疗效仍需进一步研究[4]。本文结合2014年美国国立综合癌症网络（National Comprehensive Cancer Network，NCCN）胆囊癌指南及相关文献，对胆囊癌治疗方法的选择和疗效进行讨论，以供同道参考。

Livin靶向小干扰RNA对前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响

目的 构建Livin靶向小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,观察其对前列腺癌PC3细胞凋亡和增殖等生物学特性的影响. 方法 2009年1月至2012年1月,构建针对Livin基因的siRNA真核表达载体U6/GFP/Neo-Livin并转染前列腺癌PC3细胞.实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测转染后Livin基因mRNA和蛋白的表达情况,MTT法检测对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡效应以及对细胞周期的影响,克隆形成实验观察对细胞体外克隆形成能力的改变,体内成瘤实验比较细胞在裸鼠体内成瘤性的变化. 结果 Livin靶向siRNA重组表达载体转染PC3细胞后,与对照组相比,实验组细胞内Livin mRNA和蛋白的表达水平分别下调至(31.55±3.92)％、(0.37±0.02)％(P＜0.01)；与对照组相比,PC3细胞增殖受到显著抑制(P＜0.01)；细胞凋亡率增到(26.5±3.3)％(P＜0.01)；Caspase3活性增至0.079±0.017 (P＜0.05),体外克隆形成率降至(34.8±3.5)％(P＜0.01).实验组和对照组荷瘤裸鼠的成瘤体积分别为(1.79±0.07)、(4.40±0.06) cm3(p＜0.01). 结论 靶向Livin基因的siRNA干扰了前列腺癌PC3细胞中Livin基因的表达,抑制了细胞增殖并诱导其凋亡,延缓了肿瘤细胞的生长.

重组腺病毒介导IL-12、IL-2联合基因治疗前列腺癌的实验研究

目的探讨转移性前列腺癌的治疗方法,为前列腺癌免疫基因治疗提供实验依据. 方法采用重组腺病毒介导IL-12、IL-2联合免疫基因疗法,对66只C57BL/6小鼠前列腺癌模型进行致瘤性和抑瘤性观察. 结果腺病毒AdmIL-12、AdhIL-2能有效表达目的基因.接种野生型,转AdLacZ及转AdmIL-12、AdhIL-2混合RM-1细胞的小鼠致瘤比例分别为10/10、10/10及2/10;成瘤时间分别为(12.3±1.5)d、(12.8±1.0)d、(22.5±2.1)d;接种30d后肿瘤结节直径分别为(35.0±2.0)mm、(34.0±2.6)mm、(10.5±3.5)mm.与对照组相比,转AdmIL-12、AdhIL-2基因RM-1细胞小鼠致瘤率下降,成瘤时间延迟(P<0.01)、瘤结节小(P<0.01). AdmIL-12、AdhIL-2瘤体注射还可抑制肿瘤生长(P<0.01),减少肺转移灶数目(P<0.01). 结论 IL-12、IL-2联合基因治疗可诱发前列腺癌小鼠的肿瘤特异性免疫反应.

放射线敏感性自杀基因体外杀伤肝癌细胞的实验研究

目的观察可被放射线转录激活的早期生长反应基因-1(early growth response-1,Egr-1)启动子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herps simplex virus thymidine kinase, tk)对肝癌细胞的高效杀伤作用. 方法构建以Egr-1为启动子,以tk为目的基因的重组质粒pET,经脂质体介导转染人肝癌细胞株SMMC-7721,命名为SMMC/ET细胞,经G418抗性筛选、60Co-γ射线照射后,加入前药丙氧鸟苷(ganciclovir GCV),测定其对肝癌细胞的杀伤作用. 结果与对照组肝癌细胞(0.88±0.12)相比,经γ射线照射后,前药GCV可明显提高对SMMC/ET肝癌细胞的杀伤效率(0.07±0.03)(P<0.001). 结论放射敏感性自杀基因在γ射线作用下可以显著提高对肝癌细胞的杀伤作用.

沉默XIAP基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究siRNA(small interfering RNA)对MCF-7细胞株XIAP(X-chromosome-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)基因表达的抑制作用及对癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用.方法 体外转录法合成特异性针对人XIAP基因的siRNA;荧光标记法标记XIAP siRNA;脂质体法将siRNA转入MCF-7细胞;流式细胞仪检测siRNA的转染效率;半定量RT-PCR及Western blot法检测siRNA对XIAP基因表达的抑制作用;MTT法检测siRNA对细胞生长增殖抑制作用;TUNEL法观察siRNA诱导细胞凋亡的作用.结果 siRNA的转染效率在一定剂量范围内随浓度的增加而增加,siRNA转染组XIAP mRNA表达水平可下调约77%,对照组mRNA表达水平无明显改变.细胞生长增殖抑制率在一定范围内具有剂量依赖性和时间依赖性.荧光显微镜下观察肿瘤细胞发现,siRNA50、100、200 nmol/L转染组出现典型的凋亡形态学变化.结论 体外转录合成的siRNA能特异有效下调XIAP基因的表达,瞬时转染XIAP siRNA能有效抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,低剂量XIAPsiRNA对瘤细胞显示了显著的抗增殖作用.

重组Akt腺病毒对CCl4诱导的肝硬化门静脉高压症大鼠模型的影响

目的 研究重组Akt腺病毒对CCl4诱导的大鼠肝硬化门静脉高压症的影响及其作用机制.方法 以细胞内同源重组法构建重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt;采用四氯化碳复合法制备肝硬化门静脉高压症大鼠模型.将大鼠模型分为二部分:用于组织学检测的大鼠,在制备大鼠模型的第2周和第6周自尾静脉导入Ad-myr-HA-Akt.第8周时应用Western blot法检测各组大鼠肝组织内Akt,p-Akt,Fas,DR5蛋白的表达.用于检测肝硬化门静脉高压症大鼠,在肝硬化模型的第9周自尾静脉导人生理盐水和Ad-myr-HA-Akt,3 d后测定各组的门静脉压力、平均动脉压和心率.结果 Ad-myr-HA-Akt治疗后Akt组组织学病变减轻,Fas蛋白的表达明显低于肝硬化组、生理盐水组和增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)组,血清ALT和AST及羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)均显著低于其他各组,p-Akt蛋白的表达明显高于其他各组,Fas和HSC活化的指标DR5蛋白含量降低.EGFP组在Ad-EGFP转染后,肝组织中可见大量绿色荧光,肺和肾组织中仅见少量荧光,而其他实质器官未见EGFP表达.结论 Akt重组腺病毒能够阻断大鼠肝硬化的发展,可能是防治肝硬化的一条有效途径.

AdVEGF-CDglyTK融合基因系统靶向治疗大肠癌的研究

目的 观察腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子(VEGF)启动子驱动的CDglyTK融合双自杀基因系统(以下简称为AdVEGF-CDglyTK)对大肠癌的治疗作用,并结合研究结果进行作用机制的分析.方法 采用培养细胞移植法,将人大肠癌细胞系Lovo细胞接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人大肠癌移植瘤模型.将20只裸鼠随机分为4组,每组5只.分组方法:Ⅰ组,注射重组腺病毒AdVEGF-CDglyTK与前药5氟胞嘧啶(5-FC)/丙氧鸟苷(GCV);Ⅱ组,仅注射前药5-FC/GCV;Ⅲ组:仅注射重组腺病毒AdVEGF-CDglyTK;Ⅳ组,空白对照,不施加任何处理.结果 RT-PCR结果显示:仅在Ⅰ组、Ⅲ组扩增出融合双自杀基因CDglyTK的片段.表型及各项病理指标的检测均显示第Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长较其他3组显著受到抑制,而第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组移植瘤的生长情况无明显差异;第Ⅰ组肿瘤细胞凋亡指数为38.65%±4.20%,较其他3组显著增加(F=397.530,P=0.000);第Ⅰ组肿瘤组织微血管密度计数为3.08±0.79,较其他3组显著减少(F=34.081,P=0.000).结论 AdVEGF-CDglyTK联合前药5-FC及GCV在体内可明显抑制大肠癌肿瘤的生长.其机制有二:首先该治疗系统可诱导裸鼠体内人大肠癌Lovo细胞的凋亡;其次该治疗系统在体内可明显抑制裸鼠体内大肠癌血管形成.

携带IL-24的溶瘤腺病毒对裸鼠乳腺癌移植瘤的抑制作用

目的 构建携带IL-24基因的溶瘤腺病毒CNHK600-IL24,评估该病毒在裸鼠体内对乳腺癌的抑瘤能力.方法 将IL-24基因插入腺病毒穿梭载体SG502-△CR2,与5型腺病毒骨架载体pPE3共转染至293细胞,获得溶瘤腺病毒CNHK600-IL24.建立乳腺癌原位成瘤模型、尾静脉注射及左心室注射模拟转移瘤模型,通过尾静脉注射CNHK600-IL24,应用"活体内光学成像系统"动态地观察病毒的疗效.结果 CNHK600-IL24经测序及PCR鉴定正确,滴度为1.9×1010pfu/ml.乳腺癌原位成瘤模型:对照组的光子数以及肿瘤体积均明显高于CNHK600-IL24各治疗组(P＜0.05).CNHK600-IL24治疗后肿瘤组织出现明显的坏死,肿瘤细胞发生显著的凋亡,免疫组化检测可见肿瘤细胞内Hexon和IL-24的表达.尾静脉注射模拟转移瘤模型:对照组的裸鼠大部分于38 d前死亡,而CNHK600-IL24组的生存天数明显延长(P＜0.05).左心室注射模拟转移瘤模型:活体内光学成像可见对照组与治疗组之间具有明显差别.结论 高滴度的溶瘤腺病毒CNHK600-IL24对于乳腺癌具有明显的抑瘤效果.

逆转录病毒介导单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因对胰腺癌细胞的杀伤作用

目的观察单纯疱疹病毒-胸苷激酶(HSV-tk)/丙氧鸟苷(GCV)基因治疗系统在体内外对人胰腺癌细胞的杀伤效应. 方法构建含HSV-tk基因的重组逆转录病毒载体pDOR-tk-neo,经病毒包装细胞PA317产生重组逆转录病毒,后者将HSV-tk基因转入人胰腺癌细胞系PC-2细胞内,筛选出稳定表达HSV-tk的细胞克隆PC-2/tk.测定PC-2/tk细胞在体外对GCV的敏感性及其旁观杀伤效应;PC-2/tk细胞在裸鼠皮下成瘤,观察GCV的治疗作用. 结果 GCV对PC-2/tk细胞有明显的杀伤作用,且其作用呈现剂量和时间依赖性特点以及旁观杀伤效应,对母本细胞则无明显毒性.裸鼠腹腔注射GCV后对移植瘤有明显治疗作用. 结论表达HSV-tk的人胰腺癌细胞在体内外均可被GCV有效杀伤.