造血干/祖细胞遗传学修饰对4-氢过氧化环磷酰胺、长春新碱和柔红霉素的联合抗性

目的：探讨经醛脱氢酶基因(ALDH-3)和多药耐药基因(MDRl)遗传学修饰的人外周血造血干/祖细胞能否同时增强活性环磷酰胺(4-HC)和MDRl基因靶药的抗性.方法：构建同时含ALDH-3和MDRl双耐药基因的逆转录病毒表达质粒G1Na-ALDH3-IRES-MDRl，经电穿孔导入PA317包装细胞，将免疫磁珠分离系统(MACS)分离纯化后的人外周血CD34+细胞用含有ALDH-3和MDRl双耐药基因重组病毒的上清感染，用PCR、RT-PCR、Southem blot、Northem blot、ACS和MTT等方法检测外源ALDH-3与MDRl基因在CD34+细胞中的转移和表达.结果：用PCR与酶切分析法鉴定了双顺反子逆转录病毒载体构建的正确性，双耐药基因已整合入转染靶细胞中基因组，并获得有效表达，应用集落计数测定基因转导效率为18％.巢式PCR及补救分析均未检测到辅助病毒存在.经双耐药基因修饰的CD34+造血干/祖细胞对4-HC的IC50较对照组提高4.5倍，对多药耐药基因靶药(长春新碱和柔红霉素)的IC50较未转染细胞分别高6.6和7.8倍.结论：逆转录病毒载体介导双耐药基因转导外周血造血干/祖细胞高效共表达可降低联合化疗骨髓毒性.

诺氏梭菌作为基因载体的靶向性与安全性

目的 探讨诺氏梭菌在小鼠乳癌模型体内应用的靶向性和安全性.方法 制备小鼠乳癌模型.将减毒诺氏梭菌经尾静脉注射人模型小鼠体内,在注射后的第1、2、4、7天分别处死小鼠,取其肿瘤组织及肝、肾、肺匀浆做厌氧培养,观察减毒诺氏梭菌在小鼠肿瘤组织和各器官中的分布.取注射后第2天瘤体及上述器官制作组织切片,分别用苏木精-伊红及革兰染色,观察瘤体中央坏死区大小及细菌的分布.将减毒诺氏梭菌经尾静脉注射人正常小鼠体内,观察小鼠一般情况及处死后细菌在肝、肾、肺中的分布,评价其在小鼠体内应用的安全性.结果 荷瘤小鼠经尾静脉注射减毒诺氏梭菌后,细菌在瘤体中持续大量繁殖；各器官中有少数细菌分布,随时间的延长逐渐减少甚至被全部清除.组织学观察显示实验组小鼠肿瘤中央坏死区大于对照组.正常小鼠注射细菌后一般情况未见异常,7d后各器官培养未见细菌.结论 减毒诺氏梭菌对小鼠乳癌具有良好的靶向性,并具有一定的溶瘤作用；其在实验小鼠体内应用有较高的安全性.

基因疗法治疗乳腺癌研究近况

肿瘤是一种多基因参与的分子疾病,基因治疗逐渐成为肿瘤生物学治疗中的重要组成部分.基因治疗乳腺癌取得一定效果,且日渐成为一项有前景的治疗选择.现综述如下.1 化学基因治疗多药耐药基因治疗.

重组腺病毒介导血小板衍生生长因子感染人类脐带间质干细胞的实验研究

目的 检测重组腺病毒方法介导血小板衍生生长因子(PDGF)对人类脐带间质干细胞(MSC)的感染能力,为将其用于基因治疗奠定基础.方法 反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增人类PDGF的cDNA序列,构建重组病毒载体AdPDGF.分离培养人类脐带MSC.体外以不同感染复数感染MSC后,流式细胞术检测感染效率,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)表达.锥虫蓝染色及四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测感染后细胞生存活力及增殖能力.酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中PDGF分泌水平.结果 成功构建病毒载体AdPDGF.其对MSC的感染效率随感染复数增加而增高,当感染复数为50时,达到高,为87.36%.未感染的MSC、感染AdPDGF和对照病毒的MSC活力分别为(97.8 ±2.3)%、(91.9 ±4.0)%和(92.8 ±4.0)%.增殖能力分别为(100 ±16.8)%,(95.9±12.0)%和(87.5±9.7)%,感染AdPDGF的MSC与两个对照比较差异均无统计学意义(P>0.05).感染48 h后MSC能有效分泌PDGF,感染复数为10、30、50时,PDGF分泌水平分别为(1.53±0.37)、(3.03 ±0.68)和(5.25±0.92)ng/ml,MSC-GFP及MSC组未检测到有PDGF分泌.结论 成功构建AdPDGF重组腺病毒并高效感染人类脐带MSC.

CD、TK双自杀基因对消化道肿瘤细胞的体外抑制作用

目的用粘粒法构建含有胞嘧啶脱氨酶(CD)、单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)双自杀基因的腺病毒载体,检测双自杀基因对不同消化道恶性肿瘤细胞的体外抑制作用.方法利用重组腺病毒载体介导的CD、HSV-tk融合基因感染人结肠腺癌细胞系LoVo、胃癌细胞系SGC-7901、肝癌细胞系BEL-7402,通过MTT法测定细胞存活率,通过细胞集落形成实验分析GCV(丙氧鸟苷)、5-FC(5-氟胞嘧啶)双前药(double prodrugs)对肿瘤细胞的杀伤作用和旁观者效应的大小.结果 Western Blot检测分析融合基因的表达,显示重组腺病毒介导的双自杀基因可以在3种肿瘤细胞中高效表达.使用前药GCV和5-FC后,各组肿瘤细胞的集落形成和细胞存活率显著低于对照组.感染细胞在混合细胞中比例较低时,就能获得明显的旁观者效应.联合两种前药能获得大的细胞抑制作用,并且CD/5-FC系统对于消化道肿瘤细胞的杀伤作用强于HSV-tk/GCV系统.结论 CD、TK融合基因联合双前药治疗对消化道肿瘤有显著的体外抑制作用.

新基因疗法可增强机体免疫功能

基因疗法前景看好

2000年6月26日,美、英、法、德、日、中等国科学家共同宣布,人类基因组工作草图已经绘出,人体全部基因的初步测序研究工作已经完成,科学家们将深入研究与各种疾病有关的基因、疾病基因与其它基因及环境的相互作用等.预计到2010年或2020年,基因疗法将成为一种普通的治疗方法.

基因疗法向癌魔敲响丧钟

癌症是威胁人们生命健康的第一或第二位疾病,它的主要特征是肿瘤细胞肆无忌惮地进行增殖,极具破坏力,置人于死地.为攻克这一难题,医学家们一直在孜孜不倦地研究,基因疗法的研究成果已向癌魔敲响了丧钟.

基因疗法帮助患有癌症的狗恢复健康

美国的科学家发明了一种新的基因疗法,可以延长患有癌症的狗的生命,意味着有更好的方法帮助癌症患者存活时间更长,提高生活质量.这种基因疗法在55只患有癌症和贫血症的狗身上进行了成功地实施,而且只治疗了一次.它提高了病狗的肌肉力量,抵消了常见的癌症并发症,如虚弱、体重下降和贫血.研究者是德克萨斯州VGX医药有限公司的阿卡利博士.研究成果在旧金山召开的美国内分泌协会年会上进行了宣读.