中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人脐带间充质干细胞治疗失代偿期肝硬化的近期效果
背景:脐带间充质干细胞可分化为肝细胞样细胞.目的:观察人脐带间充质干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的近期临床效果.方法:选择肝硬化失代偿期患者30例,对照组18例给予内科常规治疗,移植组12例在内科综合治疗基础上经肝动脉移植人脐带间充质干细胞悬液治疗.结果与结论:移植后,移植组白蛋白有上升趋势,从第2周开始明显高于对照组(P < 0.05),并持续至第12周;谷丙转氨酶和凝血酶原时间有下降趋势,从第8周开始明显低于对照组(P < 0.05),并持续至第12周;总胆红素水平有下降趋势,从第4周开始明显低于对照组(P < 0.05),并持续至第12周.两组临床症状、体征改善情况差异无显著性意义(P > 0.05).说明经股动脉移植人脐带间充质干细胞是治疗失代偿期肝硬化近期有效.
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脑缺血再灌注损伤大鼠尾静脉移植脐带间充质干细胞的安全性
背景:尾静脉移植干细胞穿过血脑屏障到达宿主脑损伤区域内的具体机制尚不明确.目的:观察尾静脉移植人脐带间充质干细胞治疗脑缺血再灌注损伤大鼠的效果及安全性,并探讨其作用机制.方法:通过密度梯度离心法结合贴壁筛选法获取人脐带间充质干细胞并以BrdU标记.Sprague-Dawley大鼠以改良线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型,移植A组在造模后第7天、移植B组在造模后第14天通过尾静脉移植人脐带间充质干细胞,模型组不做处理.结果与结论:①移植后7,14,28,35,42,49,56 d,2个移植组mNSS评分低于模型组(P < 0.05).移植后7,14,28,35,42,49 d,移植A组mNSS评分低于B组(P < 0.05).模型组在造模后第35天、移植A组在第42天、移植B组在第49天时mNSS评分进入平台期.②2个移植组大鼠脑组织未见到CD11b、MPO单染阳性细胞,可见Brdu+Nestin、Brdu+MAP-2、Brdu +GFAP、Brdu+FⅧ,Brdu+VEGF双染阳性细胞.结果表明人脐带间充质干细胞经尾静脉途径移植可以在宿主脑内存活,通过生成神经元样和神经胶质样细胞、促进新生血管形成并分泌神经营养因子等因素促进大鼠神经功能恢复,且未发现明显免疫排斥反应及异常分化细胞,具有较高的安全性.
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胶原酶和胰酶对胎鼠端脑神经干细胞培养的影响
背景:神经干细胞为神经发育和神经功能重建的研究带来了广阔前景,其体外培养已成为神经科学的一个研究基础.目的:比较胶原酶和胰酶对体外培养神经干细胞的作用.方法:取孕14 d的SD大鼠,无菌条件下取胎鼠端脑,剪碎后分别用含EDTA的胰酶和Ⅰ型胶原酶消化,无血清培养基培养细胞.结果与结论:胶原酶消化得到的神经干细胞呈单层贴壁生长,而用胰酶消化得到的则形成聚集体;Nestin免疫荧光鉴定细胞为阳性;获取的神经干细胞纯度大于99%.提示用胶原酶可以简单而快速地获得原代单层化贴壁生长的神经干细胞.
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不同体外环境下舌癌干细胞标志CD44及ESA和CXCR4的表达
背景:细胞生存的微环境与蛋白的表达密切相关,在不同的环境中癌干细胞标志的表达可能存在差异.目的:探讨癌干细胞标志CD44、ESA、CXCR4的表达是否会在不同的细胞生存环境中发生改变.方法:选取舌癌TCA8113细胞系,分别建立干细胞培养基、常规标准培养基以及在标准培养基中添加阿霉素的3种体外培养微环境,采用免疫组化及流式细胞术,检测不同培养环境中3种标志在舌癌细胞中的表达.结果与结论:免疫组化法检测显示,在所有培养环境中CD44、ESA强阳性表达,CXCR4在干细胞培养基环境中弱阳性表达,其余为阳性表达;流式细胞术检测CD44与ESA在所有培养环境中均高水平表达;与常规标准培养基环境比较,在干细胞培养基的微环境中CXCR4极低水平表达,将舌癌细胞从干细胞培养基转回常规标准培养基后,CXCR4的表达回升;在阿霉素干预的培养环境中,CXCR4表达水平升高.结果表明舌癌干细胞标志在不同体外微环境下的表达存在差异,需结合体内环境与肿瘤组织的表达情况来寻找癌干细胞标志.并且不同微环境模式可能富集不同性质的癌干细胞.
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遗传霉素(G418)纯化许旺细胞过程中成纤维细胞胞浆空泡化的光镜观察
背景:以往研究应用遗传霉素(G418)联合差速贴壁及差速分离法除去成纤维细胞用于许旺细胞的纯化,对纯化过程中成纤维细胞形态变化的描述及可能其原理的推测很少.目的:利用光学显微镜采集纯化的不同时期成纤维细胞和许旺细胞形态学照片,描述成纤维细胞病理学变化.方法:利用差速贴壁、差速分离法结合遗传霉素抑制来纯化大鼠坐骨神经来源的许旺细胞.将传代培养的细胞分2组,实验组:细胞重复一次差速贴壁后转移到另一六孔培养板,每2 d更换新鲜纯化培养液,用差速分离法传代.对照组:差速分离纯化1次后转移到另一六孔培养板,每2 d更换新鲜基础培养液,用差速分离法传代.在纯化的不同时期,利用光学显微镜观察成纤维细胞病理学变化.结果与结论:在纯化的早期,光学显微镜下不能观察到成纤维细胞的病理变化,但成纤维细胞的增殖速度减慢,持续纯化经过3代(三四周)之后,光镜下可观察到逐渐加重的细胞病理变化,直至细胞空泡化.结果表明,应用遗传霉素纯化许旺细胞过程中,成纤维细胞增殖受限较早,但是胞浆的空泡化延迟至第3次传代及以后发生.
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脐血干细胞移植对帕金森病大鼠旋转行为的影响
背景:目前帕金森病的临床治疗还是以药物为主,细胞移植实验也多见于骨髓间充质干细胞,脐血来源干细胞移植能否改善帕金森病的旋转行为报道较少.目的:观察脐血间充质干细胞移植对帕金森病大鼠旋转行为的影响.方法:帕金森病模型大鼠随机分成实验组和对照组.实验组大鼠纹状体内植入用Hoechst33258标记的第4代脐血间充质干细胞,对照组注射PBS.此后每周腹腔注射阿扑吗啡以观察大鼠的旋转行为;并在移植后3,6,9周用免疫荧光双标法检测间充质干细胞的存活、迁移情况以及胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶和突触素的表达.结果与结论:移植脐血间充质干细胞后大鼠的旋转行为与对照组相比有明显改善(P < 0.05);间充质干细胞可在大鼠脑内存活,随时间延长迁移范围扩大,分布于纹状体、胼胝体和皮质;胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶都有表达,突触素无表达.结果可见移植脐血间充质干细胞后能明显改善帕金森病大鼠旋转行为,有望成为治疗帕金森病的种子细胞.
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骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠扩张型心肌病
背景:扩张型心肌病所致的心肌纤维化是心力衰竭的病理基础,目前药物治疗、介入治疗和外科手术均不能替代坏死心肌和彻底改善心脏功能.目的:观察异体骨髓间充质干细胞移植对大鼠扩张型心肌病心脏功能的作用和心肌纤维化的影响.方法:40只Wistar大鼠随机数字表法分为细胞移植组(n=15)、对照组(n=15)和空白组(n=10),前2组建立大鼠扩张型心肌病模型.造模成功4周后细胞移植组注射骨髓间充质干细胞悬液150 μL(含3×106个细胞),对照组和空白组注射等量培养液.结果与结论:与空白组相比,细胞移植组和对照组移植前左室收缩末期内径增加,射血分数和缩短分数明显下降(P < 0.01);移植后4周,细胞移植组超声心动图检查和移植前相比,左室收缩末期内径下降、射血分数和缩短分数明显升高(P < 0.01).细胞移植组心脏胶原的表达低于对照组(P < 0.05).与对照组相比,其他2组基质金属蛋白酶2及基质金属蛋白酶9表达明显下降(P < 0.05).提示骨髓间充质干细胞移植后可改善心肌纤维化及扩张型心肌病鼠的心脏功能.
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体外诱导翼状胬肉成纤维细胞向平滑肌细胞的分化
背景:作者前期研究发现翼状胬肉组织中存在平滑肌成分,但此平滑肌的来源并不清楚.目的:探讨翼状胬肉组织中平滑肌成分的起源.方法:组织块法对26例翼状胬肉进行原代细胞培养及鉴定.生长状态较好的原代细胞传代后分为诱导组和对照组,分别置于含或不含20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子的培养基中培养.倒置显微镜下对比观察两组细胞的形态学变化;共聚焦显微镜下观察免疫荧光染色波形纤维蛋白和α-平滑肌肌动蛋白在两组细胞中的表达情况.结果与结论:免疫组织化学染色显示所有细胞均表达波形纤维蛋白,鉴定为成纤维细胞.倒置显微镜下观察:对照组细胞呈长梭形,编织状排列;诱导组细胞饱满,胞体增大,呈"峰-谷样"生长.共焦显微镜观察:对照组细胞均表达波形纤维蛋白,不表达α-平滑肌肌动蛋白;诱导组细胞除表达波形纤维蛋白外,还不同程度地表达α-平滑肌肌动蛋白,胞浆内可见伸向细胞两极的肌动蛋白丝,证实为平滑肌细胞.结果表明翼状胬肉来源的成纤维细胞在体外经碱性成纤维细胞生长因子诱导可以向平滑肌细胞分化.
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红景天苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞
背景:前期实验证明红景天苷能诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞定向分化,但是具体的影响方式尚不清楚.目的:以骨髓间充质干细胞为研究对象,进一步探讨红景天苷诱导其向神经元样细胞定向分化的作用方式和分子机制.方法:选取第2代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,按照不同的诱导剂分为维甲酸诱导组、红景天苷诱导组和对照组,通过不同的时间点对细胞进行观察.结果与结论:两诱导组细胞不同时间点神经干细胞标志物巢蛋白、神经细胞分化相关的兔抗微管蛋白和神经微管相关蛋白2表达阳性率均高于对照组(P < 0.01);神经胶质纤维酸性蛋白阳性率维甲酸组显著高于红景天苷组(P < 0.01).Real Time-PCR结果显示,维甲酸和红景天苷诱导不同时间,两组细胞均有神经细胞相关基因神经元特异性烯醇化酶、神经微管相关蛋白2 mRNA表达,与诱导时间有关且不完全相同,两组间神经胶质纤维酸性蛋白mRNA的高丰度出现于诱导早期;诱导后两组神经元特异性烯醇化酶蛋白的表达随时间延长显著增加,兔抗微管蛋白表达出现于诱导早期.说明红景天苷能促进骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,其诱导效应与维甲酸相似,且向神经元样细胞定向分化方面优于维甲酸.
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绵羊羊膜上皮细胞分离培养及鉴定
背景:目前有研究发现人羊膜和大鼠羊膜分离消化培养后,可成功获得具有干细胞特性的人羊膜上皮细胞和鼠羊膜上皮细胞,在体外一些外源因子作用下具有向三胚层细胞分化的潜能.目的:获取绵羊羊膜上皮细胞,并对其干细胞特性进行鉴定.方法:采用机械方法剥离绵羊羊膜组织,运用低速旋转TrypLE(胰酶替代物)消化法对绵羊羊膜进行分离培养获得绵羊羊膜上皮细胞.结果与结论:细胞免疫荧光检测结果表明绵羊羊膜上皮细胞表达Oct-4、SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81等胚胎干细胞标记蛋白;RT-PCR技术鉴定结果显示绵羊羊膜上皮细胞的Oct-4、Sox-2、Rex-1全能性相关基因表达,而Nanog基因不表达.检测结果提示实验成功获得具有干细胞特性的绵羊羊膜上皮细胞.
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大鼠骨髓间充质干细胞的体外成骨诱导
背景:骨髓间充质干细胞作为良好的种子细胞,将其复合于生物支架治疗骨缺损取得了良好的进展,是当今研究的一大热点.目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导向成骨样细胞分化的效果.方法:采用贴壁筛选法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,取生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞,分为2组,对照组细胞仅用DMEM/F12培养基培养;实验组以含成骨诱导剂的DMEM/F12培养基培养.结果与结论:全骨髓贴壁法培养的原代骨髓间充质干细胞呈梭形或多角形贴壁生长;经成骨诱导剂诱导后骨髓间充质干细胞呈圆形或卵圆形贴壁生长,碱性磷酸酶活性明显强于对照组(P < 0.01);茜素红染色出现阳性的钙化结节;Western blotting检测Ⅰ型胶原蛋白表达较对照组有明显增加(P < 0.01);骨钙素ELISA定量分析较对照组明显升高(P < 0.01).提示全骨髓贴壁法培养骨髓间充质干细胞方法简单、实用,所培养的骨髓间充质干细胞在成骨诱导后表现了成骨细胞的形态学和生物学特性.
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携带人骨形态发生蛋白2可诱导慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞的成骨
背景:tet-on慢病毒载体除了具有传统慢病毒载体的优点外,因载入一个反向反式激活因子,可通过强力霉素或其类似物对目的基因的表达进行调控.目的:观察携带骨形态发生蛋白2的tet-on慢病毒载体对人脐带间充质干细胞转染表达及稳定转染后成骨的影响.方法:取第3代人脐带间充质干细胞分组培养:实验组稳定转染携带骨形态发生蛋白2的tet-on慢病毒载体,并加入10 mg/L强力霉素;未加强力霉素组:同实验组但不加强力霉素;空病毒组转染携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体;空白对照组未进行任何处理.结果与结论:①骨形态发生蛋白2表达:实验组、未加强力霉素组均有表达,且实验组表达量高于未加强力霉素组(P < 0.05);空病毒组、空白对照组未见表达.②碱性磷酸酶染色:实验组可见细胞胞浆中出现大量红色或红棕色颗粒,未加强力霉素组可见少量红色颗粒,实验组碱性磷酸酶活性高于未加强力霉素组(P < 0.05);空病毒组、空白对照组未见明显红色颗粒.③茜素红染色:实验组、未加强力霉素组均可见钙结节形成,实验组较未加强力霉素组矿化结节数量多,面积更大;空病毒组、空白对照组未见明显矿化结节形成.表明携带骨形态发生蛋白2的慢病毒载体可稳定转染人脐带间充质干细胞,显著增强其成骨能力.
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骨髓间充质干细胞对肝癌模型大鼠血管形成的影响
背景:骨髓间充质干细胞移植影响大鼠肝脏癌变过程中肝脏血管报道目前不多.目的:观察骨髓间充质干细胞移植对大鼠肝脏癌变过程中血管生成的影响.方法:将30只Wistar大鼠随机摸球法均分成骨髓间充质干细胞移植组、单纯造模组和空白对照组,前2组以二乙基亚硝胺为诱癌剂制备肝癌模型,空白对照组仅给予正常食水作对照.结果与结论:单纯造模组8只大鼠形成肝癌,骨髓间充质干细胞移植组9只大鼠形成肝癌,肝脏携带SrY的阳性细胞,MRI影像中可见较多占位性病变,而单纯造模组占位病变数量明显较少,两组比较差异有显著性意义(t=2.45,P =0.026);骨髓间充质干细胞移植组大鼠血管内皮细胞生长因子和微血管密度平均阳性表达率均高于单纯造模组(P < 0.05).说明在二乙基亚硝胺制备的大鼠肝癌模型中,骨髓间充质干细胞可通过促进血管的生成而促进肝癌的生长.
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联合培养体系中对骨髓间充质干细胞Bmi-1表达的影响
背景:血管内皮细胞能够促进骨髓间充质干细胞向成骨方向转变,并为干细胞的生长增殖提供营养支持.目的:观察人脐静脉血管内皮细胞在联合培养体系中对人骨髓间充质干细胞的形态、生长、细胞分化及其Bmi-1基因表达的影响.方法:在建立细胞联合培养体系基础上,设立单纯骨髓间充质干细胞培养组、骨髓间充质干细胞与脐静脉血管内皮细胞联合培养组,分别于第4,6,8,10天在相差显微镜下观察形态变化、细胞计数绘制生长曲线并采用实时荧光定量PCR检测单独培养的人骨髓间充质干细胞组及联合培养组中人骨髓间充质干细胞的Bmi-1基因表达情况.结果与结论:在各时间点与单纯骨髓间充质干细胞培养组相比较,联合培养组中干细胞的形态呈多样化,后期部分细胞之间出现了连接,成骨分化明显.联合培养组的细胞数量以及Bmi-1表达量各时间点均显著高于单纯骨髓间充质干细胞培养组.联合培养相容性良好.提示脐静脉内皮细胞对体外联合培养体系中骨髓间充质干细胞具有促进增殖的作用;能促进骨髓间充质干细胞Bmi-1基因的表达,对细胞衰老和增殖能力有显著影响.
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人骨髓间充质干细胞的体外培养、鉴定及成骨分化
背景:国内外对骨髓间充质干细胞的体外成骨诱导分化研究手段、测定指标均不够全面.目的:建立并完善一整套人骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定方法,探讨其体外成骨分化能力.方法:采用密度梯度离心法分离培养人骨髓间充质干细胞,流式细胞仪鉴定细胞表面表型.传至第3代时更换成骨诱导培养基进行成骨分化诱导.结果与结论:人骨髓间充质干细胞生长旺盛,传代后增殖旺盛,第3代骨髓间充质干细胞表面表型CD44、CD73、CD90表达阳性,CD34表达阴性.诱导后的成骨细胞碱性磷酸酶活性增加,Gomori、Von kossa、茜素红染色均阳性.RT-PCR检测诱导后细胞有Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素、骨唾液酸蛋白、骨桥蛋白及骨连接蛋白基因的表达,证明了人骨髓间充质干细胞成功向成骨方向分化.表明实验建立了一整套稳定、成熟的骨髓间充质干细胞分离、培养、扩增方案.
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血管内皮细胞生长因子165基因转染干细胞促进组织工程化脂肪的存活
背景:体外构建工程组织时常因植入区血供不良或植入物建立血管化过程延长,造成种子细胞缺乏营养,代谢紊乱,增殖、分化及分泌功能受损甚至死亡,移植物终失效.目的:观察血管内皮细胞生长因子165基因转染脂肪组织来源干细胞移植能否促进组织工程脂肪组织的血管新生.方法:利用腺病毒介导血管内皮细胞生长因子165基因体外转染人脂肪来源干细胞,然后与脂肪组织工程移植物混合移植于裸鼠背部(实验组),以移植脂肪来源干细胞+脂肪组织工程移植物(细胞组)、DMEM培养基+脂肪组织工程移植物(对照组)为对照.结果与结论:移植后3个月,实验组脂肪组织存活湿质量、脂肪组织血管密度高于细胞组与对照组(P < 0.01,P < 0.05),且细胞组均高于对照组.说明脂肪来源干细胞可促进组织工程脂肪组织的血管新生,提高存活水平,转染血管内皮细胞生长因子165基因后具有更强的促血管新生的作用.
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自体骨髓间充质干细胞和同种异体软骨细胞共培养优化软骨组织工程种子的细胞源
背景:至今尚无一种细胞能完全满足组织工程对种子细胞的要求.目的:探讨自体骨髓间充质干细胞和同种异体软骨细胞共培养的可行性.方法:酶消化分离法获得兔软骨细胞,使用密度梯度离心和贴壁筛选的方法获得骨髓间充质干细胞.取细胞浓度为3×108 L-1的第2代骨髓间充质干细胞和软骨细胞,随机分为3组,共培养组:将骨髓间充质干细胞和软骨细胞按2∶1比例混匀;实验组:取同代同浓度的软骨细胞(浓度与共培养细胞的终浓度相同);对照组:取低浓度软骨细胞1×108 L-1(与共培养组中软骨细胞终浓度相同).结果与结论:共培养组、实验组及对照组细胞平均群体倍增时间分别为3,7,8 d;共培养组共培养细胞增殖比其他2组明显增快(P < 0.05);糖胺多糖水平明显多于其他2组(P < 0.05);自体骨髓间充质干细胞与同种异体软骨细胞共培养未见明显排异反应,提示自体骨髓间充质干细胞与同种异体软骨细胞为种子细胞共培养,骨髓间充质干细胞能促进软骨细胞的增殖和细胞外基质合成,缩短软骨细胞培养时间和减少传代次数,同时软骨细胞可促进骨髓间充质干细胞向软骨细胞的定向转化,节省大量软骨细胞.
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兔下颌骨来源骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性
背景:以往研究表明骨髓间充质干细胞的获取来源主要是股骨或髂骨,但下颌骨来源骨髓间充质干细胞的研究至今少有报道.目的:观察兔下颌骨来源的骨髓间充质干细胞体外分离、培养及其生物学特性.方法:体外分离培养兔下颌骨骨髓间充质干细胞,取第2或3代检测.MTT法检测细胞增殖,克隆形成试验检测细胞的克隆形成率变化,并对其进行成骨和成脂肪诱导分化.结果与结论:MTT法检测细胞增殖,细胞生长曲线显示下颌骨骨髓间充质干细胞经历潜伏期、对数生长期和平台期.细胞克隆形成实验显示,细胞呈成纤维集落形成单位外观.茜素红、油红O染色结果显示,成骨诱导、成脂诱导后形成钙结节及脂滴.结果证实,兔下颌骨分离出的骨髓间充质干细胞有强大的自我复制及增殖能力,具有多向诱导分化的潜能.
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自体脂肪源性干细胞与成纤维细胞联合尿道周围注射治疗大鼠压力性尿失禁
背景:干细胞增殖和分化形成成纤维细胞以及适当的结缔组织,从而实现组织的再生,治疗自体盆腔器官脱垂和压力性尿失禁是目前该领域的一个研究热点.目的:观察自体脂肪源性干细胞与成纤维细胞治疗压力性尿失禁的可行性.方法:建立压力性尿失禁大鼠模型,建模后1个月行自体脂肪源干细胞与成纤维细胞尿道周围注射,细胞移植后1个月测定大鼠腹压漏尿点压力,同时近端尿道组织采用苏木精-伊红染色、弹力纤维染色观察形态学改变.结果与结论:干细胞治疗后的模型大鼠漏尿点压力升高(P < 0.01),膀胱排空正常.尿道壁肌层增厚(P < 0.01),弹力纤维、平滑肌含量增多(P < 0.01).结果证实,自体脂肪源性干细胞与成纤维细胞联合尿道周围注射能明显提高压力性尿失禁大鼠腹压漏尿点压力,增强注射点尿道肌层压力,可用于压力性尿失禁的治疗.
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不同细胞接种浓度影响人脐带间充质干细胞生长及多向分化
背景:在干细胞培养过程中寻找合理的细胞接种浓度,从而得到能稳定、高效生长的干细胞非常重要.目的:观察不同接种浓度对人脐带间充质干细胞原代培养及分化为神经元样、胰岛样、脂肪样细胞的影响.方法:分离人脐静脉内皮及内皮下层细胞,按不同接种浓度分组进行原代培养,记录原代培养时间并进行传代.取第1代人脐带间充质干细胞,体外诱导其向神经元样、胰岛样、脂肪样细胞分化.结果与结论:原代培养发现以5×105~1×106/cm2细胞浓度接种的人脐带间充质干细胞生长状态佳.经β-巯基乙醇诱导6 h,细胞即表达Nestin、神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白;经尼克酰胺,活化素A,胰高血糖素样肽1诱导21 d可见明显的胰岛样细胞团,双硫腙染色呈砖红色;经成脂诱导培养基诱导后细胞油红O染色阳性,有明显脂滴出现.可见选取合适的细胞浓度可以快速获得大量的人脐带间充质干细胞,且该细胞经体外诱导可向神经元样、胰岛样及脂肪样细胞分化.
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四种诱导剂诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化
背景:不同诱导剂诱导骨髓间充质干细胞分化形成心肌样细胞功能学方面的研究未见报道.目的:观察5-氮杂胞苷、血管紧张素Ⅱ、骨形态发生蛋白2和P53特异性抑制剂对骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响.方法:分离大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞分为5组,即正常对照组,5-氮杂胞苷组、血管紧张素Ⅱ组、骨形态发生蛋白2组和P53特异性抑制剂组.采用流式细胞仪技术鉴定骨髓间充质干细胞表面特定抗原表达情况,Western blot法检测诱导4周后Cx43、肌钙蛋白Ⅰ表达情况,fluo3/AM钙离子探针激光共聚焦检测诱导4周后钙瞬变能力.结果与结论:骨髓间充质干细胞表面抗原CD29、CD44、CD45的阳性表达率分别为89.1%,90.4%和1.9%.Western blot结果显示,各诱导组均有肌钙蛋白Ⅰ的表达,P53特异性抑制剂组较其余各组表达多(P < 0.05),骨形态发生蛋白2组较其余各组表达少(P < 0.05).Cx43蛋白在各组之间均有表达,正常对照组较各实验组明显较少(P < 0.05),P53特异性抑制剂组较其余各组表达多(P < 0.05),血管紧张素Ⅱ组较其余各组表达少(P < 0.05).钙瞬变功能测定结果显示,荧光强度血管紧张素Ⅱ>P53特异性抑制剂>5氮杂胞苷>骨形态发生蛋白2>正常对照组(P < 0.01).提示不同诱导剂诱导骨髓间充质干细胞之后,各实验组均能向心肌样细胞分化,表达心肌特异性蛋白.而不同诱导剂发挥作用的通路不同,从而对诱导骨髓间充质干细胞分化形成心肌样细胞的功能产生不同影响.
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局部注射骨髓间充质干细胞和曲安奈德治疗兔跟腱炎的效果对比
背景:应用长效糖皮质激素局部封闭治疗跟腱炎在学术界一直很有争议.目的:对跟腱炎模型兔跟腱局部分别注射兔骨髓间充质干细胞和长效糖皮质激素曲安奈德,动态观察相关指标,观察骨髓间充质干细胞和曲安奈德对跟腱炎的组织结构和力学性能的影响.方法:将60只单侧跟腱炎新西兰大白兔模型随机等分4组,取其中2组分别于患侧跟腱局部注射骨髓间充质干细胞和曲安奈德1次;剩余2组则分别注射2次,注射间隔2周.结果与结论:相比1次曲安奈德组,局部注射骨髓间充质干细胞1次和2次的跟腱炎模型兔跟腱腱束整齐、致密,断裂少,成纤维细胞增多,跟腱组织羟脯氨酸含量、跟腱大负荷拉力均增加(P < 0.05),2次注射的治疗效果更明显(P < 0.05).说明局部重复注射骨髓间充质干细胞移植治疗跟腱炎的效果优于长效糖皮质激素曲安奈德.
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骨髓间充质干细胞及细胞因子在股骨头坏死治疗中的应用与展望
背景:单纯应用骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的效果较差,若同时加入相关细胞因子可更好的发挥作用.目的:综述相关细胞因子诱导间充质干细胞在股骨头坏死治疗方面的应用.方法:由第一作者检索1989/2009 PubMed数据库及万方数据库有关治疗股骨头坏死的新进展、骨髓间充质干细胞治疗骨科相关疾病、可促进间充质干细胞向成骨细胞分化的相关细胞因子及其作用机制等文献报道.结果与结论:骨形态发生蛋白、成骨生长肽、血管内皮生长因子、软骨源性形态发生蛋白1、生长转化因子β、胰岛素样生长因子1、血小板衍生生长因子等细胞因子被证实可诱导骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞、软骨细胞,促进骨痂的愈合.因此临床中将骨髓间充质干细胞与细胞因子诱导技术相结合治疗股骨头坏死可大程度优化治疗效果.
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神经干细胞治疗小儿脑性瘫痪的研究进展
背景:神经干细胞移植给小儿脑性瘫痪的治疗带来了可能.目的:对国内外应用神经干细胞移植治疗的现状及新进展作一综述.方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1999-01/2011-04关于神经干细胞移植治疗脑瘫的文章,在标题和摘要中以"脑瘫,神经干细胞,移植"或"cerebral palsy,neural stem cell,transplantation "为检索词进行检索.选择文章内容与神经干细胞有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章.初检得到119篇文献,根据纳入标准选择关于神经干细胞移植治疗脑瘫的28篇文献进行综述.结果与结论:神经干细胞特别是神经营养素3联合神经干细胞移植对小儿脑瘫的功能康复起着促进作用,给小儿脑瘫的今后的治疗指明了方向.
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脐血间充质干细胞移植与免疫调节
背景:近年研究显示,脐血间充质干细胞的自我更新和多向分化潜能为细胞移植治疗提供了基础条件,而其免疫调节功能也极大地拓展了细胞治疗的方向和范围.目的:就近期脐血间充质干细胞的免疫调节和细胞移植研究进行回顾分析.摘要进行初筛,排除研究内容与此文无关的文献、重复性研究及Meta分析,选择近期发表或发表在权威杂志的30篇文献进行综述.关键词检索Pubmed数据库,以"脐血间充质干细胞"为关键词检索知网数据库,时间限定为2008-01/2011-06,语言种类为"English"和汉语.通过阅读标题和方法:应用计算机以"umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells"为结果与结论:脐血间充质干细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的自我更新和多向分化潜能.通过细胞移植技术,脐血间充质干细胞在糖尿病、神经退化性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病等以及神经损伤后的修复治疗方面显示出很强的潜力.同时,脐血间充质干细胞又具有免疫调节作用,其可通过下调T细胞的增殖,降低免疫反应.利用该特点,脐血间充质干细胞在一些免疫性疾病,如移植物抗宿主病和狼疮性肾炎等疾病的细胞治疗方面也取得了积极的进展.
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脑肿瘤干细胞的研究现状
背景:在脑肿瘤中存在一种具有自我更新、无限增殖与多向分化能力的细胞,即脑肿瘤干细胞.脑肿瘤干细胞被认为是脑肿瘤发生、发展、转移与复发的根源.目的:总结和探讨脑肿瘤干细胞的研究现状.方法:以"脑肿瘤、脑肿瘤干细胞"为检索词,应该计算机检索Pubmed 数据库1977-01/2011-07的相关文章,并查阅与干细胞及脑肿瘤干细胞实验有关的书籍,对资料进行初审,选取符合要求的有关文章共32 篇.结果与结论:在恶性脑肿瘤中存在脑肿瘤干细胞.脑肿瘤干细胞是恶性脑肿瘤发生、发展、转移及复发的根源,其表达特异性的CD133、Nestin蛋白和ABC转运体.目前已经获得了分离脑肿瘤干细胞的简便方法.CD133阳性的肿瘤干细胞所占的比例与脑肿瘤的恶性程度呈正相关,可作为预后诊断指标之一.
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自体骨髓干细胞移植治疗下肢缺血性疾病
背景:骨髓干细胞可通过多种机制促进缺血下肢新生血管生成,形成新的侧支,改善局部血供.目的:总结骨髓干细胞在下肢缺血性疾病中的研究进展.方法:应用计算机检索PubMed及CNKI数据库2001-12/2011-12与骨髓干细胞移植治疗下肢缺血性疾病相关的文献,检索词"bone marrow stem cells,lower extremists ischemia".结果与结论:骨髓干细胞可定向到达坏死组织参与组织再生,形成和分泌许多血管活性生长因子促进血管新生,促进细胞增殖和分化,利于组织细胞再生.关于骨髓干细胞移植治疗下肢缺血性疾病方面的研究虽已取得较大进展,但仍存在许多问题,如种子细胞的保存,细胞体外培养中分化增殖的调控机制不十分清楚,产生骨骼肌细胞的生物力学性能不太满意,修复组织内细胞分子生物学特性不明确等.
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膝关节半月板损伤与骨髓基质干细胞
背景:骨髓基质干细胞移植是解决软骨组织缺损有前景的手段之一,骨髓基质干细胞也成为软骨组织修复应用较广泛的重要种子细胞.目的:分析骨髓基质干细胞在半月板损伤和软骨损伤方面的应用情况,为膝关节半月板损伤的修复和治疗提供理论参考.方法:由第一、二作者共同检索1997/2011PubMed数据库及清华同方数据库,中文关键词为"骨髓间充质干细胞,膝关节半月板损伤",英文关键词为"bone marrow stromal cells;knee joint meniscus injury".纳入骨髓基质干细胞修复膝关节半月板损伤的相关文献26篇进行分析.结果与结论:骨髓基质干细胞在治疗和修复膝关节半月板损伤方面具有独到的优势,包括其损伤面较小,方便易行,没有后遗症,并克服了切除半月板引起的形态和生物功能的改变,避免了因异体材料移植引起的膝载荷传导紊乱和晚期骨性关节炎发病的可能,与保留半月板修复其功能的临床治疗理念较为接近,并成为当前和今后治疗与修复膝关节半月板损伤的新思路.在其修复治疗的过程中,其关键问题在于一方面如何获得大量纯化的骨髓基质干细胞并在体外定向诱导为半月板软骨表型的细胞,另一方面是诱导分化的确切机制研究.
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自体外周血干细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化患者9例:短期效果分析
背景:目前临床报道已有关于自体骨髓有核细胞、嗅细胞、脐血源干细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化的报道.目的:观察自体外周血干细胞移植治疗9例肌萎缩侧索硬化患者的临床疗效.方法:采用自身前后对照研究方法,对9例肌萎缩侧索硬化患者自体外周血干细胞移植前和移植后第1,3,6个月神经功能改变(FIM、Norris、Bathel评分)及肌电图改变进行评估.结果与结论:自体外周血干细胞移植后自我症状改善,神经功能评分显著高于移植前,短期内效果明显,肌电图呈现改善趋势.结果初步表明自体外周血干细胞移植治疗可在一定程度上改善肌萎缩侧索硬化患者神经功能障碍.
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急性淋巴细胞白血病患者外周血CD4+CD25+T调节细胞与白细胞介素2、白细胞介素10、转化生长因子β的检测
背景:目前急性淋巴细胞白血病的病因尚未完全清楚,而CD4+CD25+T调节细胞对机体的免疫反应可能起着一定的调节作用.目的:观察急性淋巴细胞白血病患者外周血CD4+CD25+T调节细胞分泌白细胞介素2、白细胞介素10及转化生长因子β的情况.方法:采用密度梯度离心法分离22例B细胞系列的急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患者、13例T细胞系列的急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者和18名正常人外周血单个核细胞.采用免疫磁珠法分离出CD4+CD25+T调节细胞进行培养,同时用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清中白细胞介素2、白细胞介素10及转化生长因子β的水平.结果与结论:B-ALL患者和T-ALL患者外周血CD4+CD25+T调节细胞培养上清中白细胞介素10和转化生长因子β水平显著高于正常人水平,而白细胞介素2水平显著低于正常人水平(P < 0.05);B-ALL和T-ALL患者的CD4+CD25+T调节细胞培养上清中3种因子表达差异无显著性意义(P > 0.05).提示CD4+CD25+T调节细胞可能通过增加分泌白细胞介素10和转化生长因子β、减少分泌白细胞介素2等干扰抗肿瘤的免疫反应.
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SCI数据库关于神经干细胞移植治疗脊髓损伤研究的10年文献分析
背景:脊髓损伤是中枢神经系统的严重创伤,是目前公认的疑难病之一.组织工程细胞移植为脊髓损伤治疗提供了新的思路,使损伤轴突修复、再生和恢复脊髓部分神经功能成为可能.目的:利用SCI数据库文献检索和深度分析功能,对神经干细胞移植治疗脊髓损伤研究的10年文献资料进行多角度的探讨分析.设计:文献计量学分析.资料提取:由第一作者以"neural stem cells (神经干细胞),spinal cord injury or spinal injury (脊髓损伤),cell transplantation (细胞移植),spinal transection (脊髓横断)"为关键词检索SCI数据库2002-01/2011-12的相关文献,并将分析结果及资料导出,以文字和图表的形式进行统计和计量分析,描述其分布特征.入选标准:纳入标准:检索神经干细胞移植治疗脊髓损伤研究相关的文献.文献类型包括研究原著、综述、会议记录及摘要、快报文章、编辑素材.排除标准:与文章目的无关的文献,大于10年较陈旧的文献,未发表的文章以及需电话追踪和手工检索逐一分析的文献.主要数据判定指标:以文献的类型、出版时间、发表文献的作者分布、学科类别、机构分布、国家地区分布、来源期刊、文献被引情况及基金资助机构进行相关分析.结果:SCI数据库2002/2011收录的文献中共检索到500篇神经干细胞移植治疗脊髓损伤研究相关的文献,研究原著以348篇位居首位,其中有15篇可以确定为经典文献.在时间分布上,文献数量2002/2011总体呈上升趋势,来源出版物呈分散情况,其中Journal of Neurotrauma<神经外伤杂志>发表文献量22篇,占全部文献的15.09%.其次为Journal of Neuroscience Research<神经科学研究杂志>21篇. <神经外伤杂志>发表文献量22篇,占全部文献的15.09%.其次为Journal of Neuroscience Research<神经科学研究杂志>21篇.结论:通过文献计量学方法对来源于SCI数据库关于神经干细胞移植治疗脊髓损伤研究的文献进行分析,可为了解该领域的概貌、现状和研究者进一步确定该领域研究的热点难点提供有价值的参考.
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神经营养因子与神经干细胞的增殖与分化:基于汤森路透Web of Science数据库文献检索
背景:神经营养因子与神经干细胞的增殖、分化密切相关,在神经干细胞的诱导分化中起重要作用.目的:通过对汤森路透Web of Science数据库收录2002/2011有关神经营养因子与神经干细胞增殖分化作用相关文献的计量学分析,得出神经营养因子与神经干细胞增殖分化影响的国际动态研究的趋势.设计:文献计量学分析.资料提取:由第一作者检索汤森路透Web of Science数据库有关神经营养因子与神经干细胞增殖分化的文献,分析其研究进展.检索文献时间范围为2002-01/2011-12.入选标准:纳入标准:经同行评议的神经营养因子与神经干细胞增殖分化研究的已发表文章,包括研究原著,综述,会议记录,会议摘要.排除标准:①需采用手工检索和电话检索方式收集的文章.②未正式出版的文章.③在收录数量之外排除勘误类文献类型.主要数据的判断指标:①文献收录总量.②文献类型.③学科类型.④国家分布.⑤发文单位.⑥来源期刊.⑦高被引文章.结果:①汤森路透Web of Science数据库过去10年共收录神经营养因子与神经干细胞增殖分化研究相关文献257篇,其中神经生长因子与神经干细胞增殖分化研究相关的文献88篇,脑源性神经营养因子与神经干细胞增殖分化研究相关文献127篇,神经营养素3与神经干细胞增殖分化研究相关文献42篇.2002年仅发表并收录神经营养因子与神经干细胞增殖分化相关研究7篇,从2007年开始文献数量成倍增长,2010年收录该领域的相关文献达到顶峰,为43篇.其中研究类文章共收录225篇,综述类文章30篇.研究文字的学科领域集中在神经科学和细胞生物学方向.②目前已发表的文献美国为主,占全球相关领域发稿量的36.12%.中国在过去10年间被收录文章总量中位居第2名,共发表60篇相关文章,占全球相关文章的23.34%.其高被引文章主要发表在Cell Transplantation<细胞移植>、Journal of Neuroscience Research<神经科学研究杂志>、Neuroscience Letters<神经科学快报>和Brain Research<脑研究>杂志.结论:文献分析显示,近几年来神经营养因子与神经干细胞增殖分化研究趋于成熟,发文量稳定并且呈逐渐上升趋势,是目前该领域研究的热点.
