中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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姜黄素逆转SP600125诱导Dami细胞多倍体化模型的建立
背景:细胞的多倍性是重要的生物学现象,不仅影响组织器官和造血系统的正常生理功能,而且是某些应激条件下代偿性的表现,和发生某些病理过程的基础,尤其与恶性肿瘤的发生有着密切的关系.目的:优化SP600125诱导Dami细胞多倍体化模型,探讨姜黄素对此多倍体化逆转作用的机制.方法:将不同浓度SP600125(15,30,60 mmol/L)分别加入细胞悬液中,诱导Dami细胞多倍体化,确定佳诱导时间和浓度;将5,10,20 mmol/L姜黄素分别加入含有SP600125的细胞悬液中,培养72 h收集细胞.Annexin V-PI染色法的流式细胞术检测细胞倍性的变化、Western blot法检测细胞周期相关蛋白的变化.结果与结论:30 mmol/L SP600125作用Dami细胞72 h,诱导的多倍体化细胞数量多,并且cyclin D3表达高;姜黄素明显逆转Dami细胞多倍体化,cyclin D3表达逐渐降低,存在明显的剂量依赖关系.结果显示,实验成功建立了Dami细胞的多倍体化模型,并确立了诱导多倍体化Dami细胞的SP600125佳诱导时间和浓度72 h,30 mmol/L.姜黄素可能通过抑制cyclin D3的表达,逆转SP600125诱导Dami细胞多倍体化.
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姜黄素调控大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化
背景:姜黄素能明显降低破骨细胞的骨重吸收,诱导破骨细胞凋亡,抑制破骨细胞形成.目的:观察不同浓度姜黄素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.方法:采用贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代后采用成骨培养基进行成骨诱导,在诱导前3 d于诱导培养基中分别加入0(对照),10,15 μmol/L姜黄素.结果与结论:接种培养7 d,倒置显微镜下可见分散的骨髓间充质干细胞小集落,集落细胞呈放射状生长.随培养时间延长,细胞集落增大,细胞形态为长梭形.加入成骨培养基7 d后细胞形态逐渐由长梭形变为多角形,随成骨诱导时间延长形态变化更加明显.加入不同浓度姜黄素后骨髓间充质干细胞增殖无变化.姜黄素呈剂量依赖性促进骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性及Runx-2、血红素单加氧酶1的表达.提示姜黄素能有效促进大鼠骨髓间充质干细胞早期成骨分化,其机制可能与提高干细胞血红素单加氧酶1的表达有关.
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利用自体血清培养人外周血内皮祖细胞
背景:传统方法培养人外周血来源内皮祖细胞操作复杂,费用大,细胞获得率较低.目的:利用自体血清培养人外周血来源内皮祖细胞,并鉴定其功能.方法:采用密度梯度离心法从人外周血分离得到单个核细胞,体外培养分化为内皮祖细胞.按培养基条件不同分为EGM-2MV组、添加自体血清组(M199+体积分数10%自体血清+胰岛素样生长因子)、添加胎牛血清组(M199+体积分数10%胎牛血清+血管内皮细胞生长因子+碱性成纤维细胞生长因子+胰岛素样生长因子+表皮生长因子).观察内皮祖细胞增殖、迁移能力;采用细胞形态观察、双荧光染色法及流式细胞仪等技术对培养的内皮祖细胞进行鉴定.结果与结论:培养第7天,EBM-2MV组和添加自体血清组细胞增殖能力和迁移率都优于添加胎牛血清组(P < 0.05).每组细胞经结合Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素双色荧光染色鉴定后双阳性率> 80%,免疫细胞化学检测显示每组细胞CD133,CD34和KDR的表达均为阳性.证实在M199培养液中添加自体血清是一种简单、高效的培养内皮祖细胞方法.
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慢性粒细胞白血病患者骨髓来源Flk1+CD31-CD34-间充质干细胞中BCR/ABL融合基因的检测
背景:免疫表型为Flk1+CD31-CD34-的间充质干细胞体内外实验研究均证实在单细胞水平可以向造血及内皮细胞分化.目的:观察慢性粒细胞白血病患者骨髓BCR/ABL融合基因的表达情况.方法:体外培养扩增慢性粒细胞白血病患者骨髓来源原始间充质干细胞,测定其生长曲线,分析其细胞周期及免疫表型,使用RT-PCR和FISH的方法检测其BCR/ABL融合基因的表达情况.结果与结论:慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的原始间充质干细胞呈成纤维样生长,大部分细胞处于G0/G1期,并且高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,用RT-PCR和FISH的方法能够检测出BCR/ABL融合基因的表达.提出慢性粒细胞白血病的白血病基因转化可能发生在比造血干细胞更高的血液血管干细胞水平上.
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骨髓间充质干细胞分泌细胞因子与腹腔肥大细胞膜的稳定性
背景:研究表明骨髓间充质干细胞分泌的细胞因子对特异性和非特异性免疫细胞具有免疫调节作用,所以有必要深入研究其对肥大细胞的作用.目的:探讨骨髓间充质干细胞分泌因子对特异性和非特异性诱发肥大细胞脱颗粒、释放炎性递质的影响.方法:采用全骨髓贴壁法分离和纯化大鼠骨髓间充质干细胞,收集培养第3代的骨髓间充质干细胞上清液获取干细胞分泌因子.分离培养大鼠腹腔肥大细胞,分别以大鼠抗卵蛋白血清特异性被动致敏腹腔肥大细胞和用Compound48/80非特异性致敏肥大细胞.结果与结论:干细胞因子、酮替芬均能抑制特异性和非特异性诱发肥大细胞脱颗粒和释放类胰蛋白酶,与模型对照组相比差异有显著性意义(P < 0.05),但干细胞因子抑制特异性和非特异性诱发肥大细胞脱颗粒和释放类胰蛋白酶的效果均不如酮替芬组(P < 0.05).结果表明干细胞分泌的细胞因子具有稳定肥大细胞膜,减轻其脱颗粒、释放炎症递质的作用.
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尾静脉移植人脂肪干细胞在脑缺血大鼠脑内的存活
背景:间充质干细胞移植可显著改善缺血性脑血管病神经功能.目的:观察尾静脉途径移植人脂肪源间充质干细胞对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响.方法:制作局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为实验组和对照组,实验组在造模后3 d尾静脉注射5×106脂肪源间充质干细胞,对照组不进行细胞移植.结果与结论:两组大鼠神经功能缺损行为学评分随着细胞移植后时间延长均逐渐降低.移植后第14,21天,实验组大鼠行为学评分较对照组显著降低(P < 0.05),且实验组改善程度明显优于对照组(P < 0.01);移植的人脂肪源间充质干细胞在局灶性脑缺血大鼠血管周边和缺血周边区聚集并存活.说明尾静脉移植的脂肪源间充质干细胞可在宿主脑内存活,并改善神经功能.
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利用多位点Gateway技术构建小鼠平滑肌肌动蛋白α基因启动子慢病毒载体
背景:平滑肌肌动蛋白α基因是相对局限于在血管平滑肌细胞中表达的少数几个基因之一,公认是血管平滑肌细胞表型转化的标志.目的:利用多位点Gateway技术构建慢病毒载体pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α控制绿色荧光蛋白基因的表达.方法:设计合成含有attB位点的小鼠平滑肌肌动蛋白α基因启动子引物,构建pUp-平滑肌肌动蛋白α;通过LR反应将pUp-平滑肌肌动蛋白α和pDown-绿色荧光蛋白(含att位点的绿色荧光蛋白入门克隆)连接到目的载体pDEST-puromycin,得到pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α-绿色荧光蛋白表达载体;经PCR和测序鉴定,将载体质粒瞬时转染C2C12细胞系,并且用免疫荧光染色检测基因的表达.结果与结论:成功构建pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α-绿色荧光蛋白报告基因载体,测序结果表明启动子序列正确;细胞转染实验以及免疫荧光检测证实构建的报告基因载体可以反映平滑肌肌动蛋白α基因的表达情况.
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转化生长因子β1在大鼠骨髓间充质干细胞移植修复梗死心肌中的作用
背景:大量研究显示,骨髓间充质干细胞是通过旁分泌作用,促使移植部位大量肌纤维母细胞聚集,分泌大量胶原蛋白,从而使梗死后心脏得到有利修复,并改善心脏收缩舒张功能.目的:探讨转化生长因子β1在大鼠骨髓间充质干细胞修复梗死心肌过程中的作用.方法:①体外实验:模拟心肌梗死后微环境培养大鼠骨髓间充质干细胞,检测其分泌肿瘤坏死因子α、血小板衍生生长因子、转化生长因子β1浓度.②体内实验:将大鼠Brdu标记的骨髓间充质干细胞、转化生长因子β1、PBS分别移植到梗死后心肌内,免疫细胞化学染色、PCR、Wester-blot等方法检测移植后大鼠心肌胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ形成的差异.结果与结论:心肌梗死后微环境下培养大鼠骨髓间充质干细胞14 d可检测到培养基内有高浓度转化生长因子β1.移植骨髓间充质干细胞、转化生长因子β1大鼠心肌部位可检测到肌纤维母细胞的聚集及胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达.结果显示大鼠骨髓间充质干细胞移植梗死心肌后,可促进胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ的生成,从而改善心脏收缩功能,其中骨髓间充质干细胞所分泌的转化生长因子β1可能发挥重要作用.
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表皮干细胞与毛囊干细胞生物学特性的比较
背景:获取更合适的组织工程皮肤种子细胞可使皮肤功能得到更好的修复.目的:分离、培养表皮干细胞和毛囊干细胞,并比较两种细胞的生物学特性.方法:体外分离培养2月龄新西兰兔表皮干细胞和毛囊干细胞,取生长良好的第2,3,6代细胞观察其生物学特性.结果与结论:毛囊干细胞较表皮干细胞贴壁快,具有更高的增殖活性.免疫组化及荧光定量PCR检测显示毛囊干细胞β1整合素、角蛋白19蛋白及mRNA表达均明显高于表皮干细胞.提示作为皮肤组织工程的种子细胞,毛囊干细胞较表皮干细胞更具优势.
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乌司他丁联合脐带间充质干细胞移植脊髓损伤大鼠后肢运动功能和运动诱发电位的变化
背景:乌司他丁能减轻炎性反应、清除氧自由基,对中枢神经系统损伤具有保护作用,能有效地提高脊髓损伤后移植细胞的存活率.目的:观察乌司他丁联合脐带间充质干细胞移植对脊髓损伤大鼠后肢功能的影响.方法:Wistar大鼠建立脊髓损伤动物模型后随机分成4组:空白对照组尾静脉注射培养液+腹腔注射生理盐水,细胞移植组尾静脉注射脐带间充质干细胞,乌司他丁组腹腔注入乌司他丁,联合组尾静脉注射脐带间充质干细胞,同时腹腔注入乌司他丁.结果与结论:移植4周后联合组下肢运动功能优于细胞移植组和乌司他丁组(P < 0.05),细胞移植组和乌司他丁组优于空白对照组(P < 0.05).移植后4周,PKH26标记的阳性细胞数联合移植组多于细胞移植组,细胞移植组多于乌司他丁组和空白对照组(P < 0.01).移植后8周,联合组大鼠体感诱发电位及运动诱发电位的潜伏期、波幅明显优于其他3组(P < 0.05或P < 0.01).提示乌司他丁联合应用脐带间充质干细胞移植可促进脊髓损伤大鼠神经突触的再生,改善其肢体运动功能和电生理功能,其效果优于单独应用乌司他丁或脐带间充质干细胞.
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单侧、双侧髂骨取血及取血量与骨髓单个核细胞浓度与早期股骨头坏死治疗效果的关系
背景:以单侧、双侧髂骨取血及取血量是否会影响骨髓单个核核细胞的浓度呢?目的:观察自体骨髓单个核细胞浓度差异对移植治疗早期股骨头坏死的疗效影响.方法:回顾性分析髓心减压加自体单个核细胞移植股骨头坏死患者120 例/168 髋临床资料,其中单侧髂骨取血200 mL,27 例/39 髋,单侧髂骨取血300 mL,29例/40 髋;双侧髂骨取血200 mL,30 例/42髋,双侧髂骨取血300 mL,34 例/47 髋.髂骨取血后在细胞分离机将骨髓血梯度离心,细胞分离前后行单个核细胞计数,髓芯减压后移植注入骨坏死区.随访12~36 个月,观察治疗前后患者CT 影像学及髋关节Harris 评分改变.结果与结论: 单侧及双侧髂骨取血200 mL 分离后所得单个核细胞计数与取血300 mL比较,差异均无显著性意义(P >0.05),但双侧明显高于单侧(P < 0.01).各组髋关节功能Harris 评分,移植前比较差异无显著性意义(P > 0.05),移植后Harris 评分及优良率显著提高(P < 0.05,P < 0.01).与单侧髂骨取血组比较,双侧髂骨取血移植后髋关节功能Harris 评分提高,差异有显著性意义(P < 0.01).说明髓芯减压加自体骨髓单个核细胞移植是治疗早期股骨头缺血性坏死安全有效的方法之一;双侧髂骨取血所分离单个核细胞浓度明显侧高于单侧,且短期随访临床疗效较好.
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pIRES-骨形态发生蛋白2质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞后的持续表达
背景:重组人骨形态发生蛋白2已被广泛应用于骨组织工程治疗骨缺损或骨不连,但是直接应用外源性骨形态发生蛋白2修复骨缺损效果不理想.目的:观察转染pIRES-骨形态发生蛋白2的大鼠骨髓间充质干细胞持续合成并分泌骨形态发生蛋白2的情况.方法:全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,脂质体介导下将真核表达质粒pIRES-骨形态发生蛋白2导入大鼠骨髓间充质干细胞.结果与结论:ELISA结果显示,随着pIRES-骨形态发生蛋白2转染时间的延长,大鼠骨髓间充质干细胞分泌的骨形态发生蛋白2逐渐增多,至转染后10~12 d达高峰,转染后15 d,仍可见较多骨形态发生蛋白2的表达.说明转染pIRES-骨形态发生蛋白2的大鼠骨髓间充质干细胞可持续稳定分泌骨形态发生蛋白2.
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血管内皮生长因子基因修饰骨髓间充质干细胞移植心肌梗死大鼠:高压氧干预促进治疗性血管生成
背景:骨髓间充质干细胞移植入缺血心肌后梗死区周边心肌的缺血、缺氧、炎性反应、细胞凋亡等病理变化严重影响到移植骨髓间充质干细胞的存活,而高压氧能显著改善其缺氧状态.目的:对心肌梗死模型大鼠缺血心肌局部移植血管内皮生长因子修饰的骨髓间充质干细胞,在移植后对大鼠进行高压氧干预,探讨其对骨髓间充质干细胞移植后所获得的治疗性血管生成效应的影响.方法:将真核表达载体pcDNA3.1(-)/人血管内皮生长因子165转染大鼠骨髓间充质干细胞,再移植至心肌梗死模型大鼠的缺血区组织,移植前细胞行CM-DiI标记.移植后2周每日对大鼠行高压氧治疗干预.移植1个月后行心脏B超测量其左室射血分数,组织化学苏木精-伊红染色和Ⅷ因子染色并评价新生血管密度.结果与结论:CM-DiI能有效标记骨髓间充质干细胞,标记率近100%.细胞移植1个月后高压氧干预的大鼠射血分数、再生血管密度较均明显增高(P < 0.05).证实,高压氧干预能显著促进移植血管内皮生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞的心肌梗死大鼠所获得的治疗性血管生成作用,对心脏功能有明显改善作用.
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经鼻腔长期输送骨髓基质细胞改善大鼠缺血再灌注性脑损伤
背景:经鼻腔黏膜给药是一种可以克服血脑屏障、减少外周不良反应、效能高的脑内给药方式.目的:验证经鼻腔长期输送骨髓基质细胞治疗大鼠缺血再灌注性脑损伤的可行性.方法:贴壁培养法分离大鼠骨髓基质细胞.缺血再灌注脑损伤大鼠随机分成实验组和对照组.实验组经鼻腔滴入骨髓基质细胞,对照组同法给予磷酸盐缓冲液,隔天1次,共4周.每周进行1次行为学评价,后1次行为学评价后进行脑病理学检测.结果与结论:与对照组比较,从第2周开始神经病学严重程度评分和Morris水迷宫实验检测结果表明实验组行为学逐步改善(P < 0.05,P < 0.01).与行为学改善相一致,缺血再灌注导致对照组CA1区海马细胞数量减少了66%,而实验组CA1区细胞丢失明显要少,只丢失了25% (P < 0.01).说明了经鼻腔长期输注骨髓基质细胞具有改善大鼠缺血再灌注脑损伤的作用.
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脂肪间充质干细胞分化为内皮细胞并体外构建组织工程心脏瓣膜
背景:组织工程心脏瓣膜是利用组织工程技术将种子细胞种植于瓣膜支架上所构建的一种人工瓣膜,目前国内外研究主要集中于种子细胞来源及支架选择上.目的:探讨人脂肪间充质干细胞体外向内皮细胞诱导分化后的细胞作为种子细胞,脱细胞猪主动脉瓣膜作为支架体外构建组织工程心脏瓣膜的可行性.方法:利用吸脂术采集脂肪组织,分离、培养脂肪间充质干细胞,流式细胞仪鉴定细胞表型;免疫细胞化学方法及RT-PCR检测细胞分化标志物;应用Triton X-100 联合胰蛋白酶的方法制备脱细胞猪主动脉瓣支架,将体外培养扩增的诱导分化后的内皮细胞种植于支架上构建组织工程心脏瓣膜,光镜及电镜下观察组织工程心脏瓣膜的组织学结构.结果与结论:脂肪组织分离培养的脂肪间充质干细胞向内皮细胞诱导分化后表达CD31、CD34、CD144、Ⅷ因子和内皮型一氧化氮合成酶等内皮细胞特异性抗原;脱细胞猪主动脉瓣膜支架脱细胞完全,弹力纤维及胶原纤维保持完整;构建的组织工程心脏瓣膜可见支架上排列连续的单细胞层.提示脂肪间充质干细胞在体外向内皮细胞诱导分化后已初步具有内皮细胞功能,在脱细胞猪主动脉瓣膜支架上生长良好,可以在体外初步构建组织工程心脏瓣膜.
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豚鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及成骨诱导
背景:利用骨髓间充质干细胞的取材灵活性及快捷性,对已掌握的培养技术及成骨诱导进一步探索性研究.目的:通过建立豚鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养法,探讨豚鼠骨髓间充质干细胞表型特征以及多项分化潜能.方法:利用贴壁培养法分离纯化豚鼠骨髓间充质干细胞,传代扩增,流式细胞分析检测细胞表面分子CD29、CD44、CD45的表达.分别采用成骨诱导培养液和成脂诱导培养液定向诱导骨髓间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞分化.结果与结论:原代分离的骨髓间充质干细胞在接种后96 h贴壁,细胞形态为椭圆形,多角形及短梭形,8 d时细胞呈长梭形并达到90%单层融合.经传代扩增,细胞进一步纯化,细胞形态为均一的长梭形并呈漩涡状排列,而且生长速率加快.流式细胞检测 CD29、CD44阳性率分别为95.7%和65.7%.不同诱导剂定向诱导后,经油红O、茜素红S、碱性磷酸酶染色、免疫组织化学Ι型胶原酶鉴定,P3代骨髓间充质干细胞分别向脂肪细胞及成骨细胞分化.结果表明,通过贴壁筛选方法,体外分离培养的豚鼠骨髓间充质干细胞具有很强的增殖能力,并保持稳定的表型特征及多向分化潜能.
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高糖高脂对人脐带间充质干细胞增殖及凋亡的影响
背景:研究证实,间充质干细胞移植进入糖尿病患者体内后,疗效受多种因素影响,其中血糖、血脂起着关键作用.目的:模拟糖尿病患者体内高糖高脂环境,进一步验证高糖高脂对体外培养脐带间充质干细胞的影响.方法:葡萄糖和软质酸不同浓度分别体外干预人脐带间充质干细胞,分为对照组、低糖组、低脂组、低糖低脂组、高糖组、高脂组及高糖高脂组.干预48 h后通过CCK-8方法酶标仪测定细胞增殖,Annexin-V/PI方法流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况.结果与结论:在高糖高脂的条件下,短期培养后细胞增殖及凋亡明显改变,与对照组相比,人脐带间充质干细胞增殖率明显减低(P < 0.01)、凋亡率明显增高(P < 0.01),且随着血糖血脂浓度的增加,人脐带间充质干细胞增殖率明显受到抑制,凋亡率明显上升;低糖低脂组和高脂组均抑制细胞增殖(均P < 0.05),促进细胞凋亡(均P < 0.01),高糖则促进人脐带间充质干细胞生长(P < 0.01).结果提示,糖尿病患者体内处于高糖高脂状态,将抑制脐带间充质干细胞的生长.在间充质干细胞移植之前,控制患者血糖血脂水平,将更有利于干细胞在体内发挥作用.
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骨形态发生蛋白2体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化
背景:目前研究者尝试使用各种细胞因子、中药单体和组织裂解液等诱导剂作用于其分化过程,用以修复梗死的心肌组织.目的:探索骨形态发生蛋白2 在大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞过程中的作用.方法:分离培养SD 大鼠骨髓间充质干细胞.应用含有骨形态发生蛋白2 的培养基定向诱导培养(对照组为普通培养基培养) 72 h,其后换用普通培养基继续培养4 周.结果与结论:初分离的细胞经纯化培养后,显示CD29 阳性、CD34 阴性,符合骨髓间充质干细胞的特征,生长曲线显示各代细胞生长规律相近.经骨形态发生蛋白2 体外诱导培养后,细胞形态狭长,排列紧密、方向一致.分化后的细胞均阳性表达C-TnI、C-TnT 、desmin、α-sarcomeric actin 和P38MAPK.空白对照组则基本不表达以上蛋白.提示骨形态发生蛋白2 可以诱导大鼠骨髓间充质干细胞体外定向分化为心肌样细胞,是骨髓间充质干细胞体外心肌分化的一种新的有效诱导剂.
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兔骨髓间充质干细胞与羊膜的共培养
背景:近年来利用组织工程技术构建软骨以修复软骨缺损已经取得较大进步.骨髓间充质干细胞在软骨组织工程研究中作为一种常见的种子细胞被广泛应用.目的:以人羊膜作为细胞支架负载兔骨髓间充质干细胞,观察羊膜的生物相容性.方法:将兔骨髓间充质干细胞接种于人脱细胞羊膜上,体外共培养后进行形态学观察,以四甲基偶氮唑盐比色法观察骨髓间充质干细胞增殖活性,评价羊膜的组织相容性.应用4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色法观察细胞存活和凋亡情况.结果与结论:骨髓间充质干细胞在羊膜上生长较好,细胞活力增强,4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色结果示仅有少量细胞凋亡.提示羊膜是一种具有良好生物相容性的支架材料,可以促进骨髓间充质干细胞增殖.
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损伤肝组织匀浆与骨髓间充质干细胞的分化
背景:目前认为,骨髓间充质干细胞能否分化为肝细胞与微环境关系密切.方法:分别用正常和损伤肝脏组织匀浆诱导骨髓间充质干细胞分化,在第0,3,7,10,14,21 天用RT-PCR 和Western blot 法检测甲胎蛋白、白蛋白的表达.结果与结论:骨髓间充质干细胞在正常及损伤的肝脏组织匀浆诱导下均表现为类上皮样改变.两组均从第3 天开始检测到甲胎蛋白的表达,并在第7 天左右达到高峰,之后表达逐渐减少,第14 天时量很少;在第7 天检测到白蛋白的表达,且随时间延长表达量逐渐增加,mRNA 水平与蛋白水平表达一致.表明肝细胞在诱导培养下逐渐从幼稚到成熟.但正常和损伤肝组织匀浆诱导的肝细胞甲胎蛋白和白蛋白的表达量差异无显著性意义(P > 0.05).结果说明急性酒精性肝损伤组织匀浆可以诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化,其诱导效果与正常肝脏组织匀浆相近.
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成人骨髓多能成体祖细胞生物学性状及向成软骨样细胞的诱导分化
背景:骨髓多能成体祖细胞具有比骨髓间充质干细胞更强的分化潜能和扩增能力并具有胚胎干细胞样的多向分化潜能,但分化为成软骨样细胞的研究目前少见报道.目的:观察成人骨髓成体多能祖细胞的体外培养条件、生物学特性及其向成软骨样细胞分化的可能性.方法:观察体外培养成人骨髓成体多能祖细胞的形态、生长情况,并鉴定;以分化培养基诱导成人骨髓成体多能祖细胞向无软骨细胞分化.结果与结论: 光学显微镜下观察培养的成人骨髓多能成体祖细胞体积偏大,长多角型,数个细长伪足,细胞核大,细胞质丰富,细胞增殖能力旺盛;可见转录因子4、阶段特异性胚胎表面抗原1表达,未见T 细胞表面黏附分子CD44,CD45,CD133 和主要组织相容性抗原系统Ⅱ的表达;诱导分化后,分化细胞经甲苯胺蓝染色后呈异染性,可表达Ⅱ型胶原.证实,实验成功体外培养了成人骨髓多能成体祖细胞,骨髓多能成体祖细胞在一定诱导条件下具有向成软骨样细胞分化的潜能.
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骨髓间充质干细胞诱导分化为神经干细胞过程中端粒酶的表达
背景:端粒酶在细胞分化及活化过程起重要作用.目的:检测骨髓间充质干细胞诱导分化为神经干细胞过程中端粒酶的表达.方法:采用PCR-ELISA 端粒酶检测方法检测SD 大鼠骨髓间充质干细胞传代培养前6 代细胞中端粒酶的表达;将传代培养的第3 代SD 大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为神经干细胞,传代培养至第6 代,检测各代细胞中端粒酶的表达.以人胚肾细胞系293 细胞蛋白提取物作为阳性对照,以灭活细胞蛋白提取物为阴性对照.结果与结论:端粒酶在传代培养的前6 代骨髓间充质干细胞中呈阳性表达,为阳性对照组的9.4%~30.9%,第3 代表达高;在诱导分化为神经干细胞传代培养的前5 代呈阳性表达,为阳性对照组的5.4%~33.1%,第3 代和第4 代表达高.说明端粒酶是细胞分化、增殖的一个重要因素.
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快速浓集自体脂肪干细胞促进移植异体骨早期血管化
背景:目前可满足骨修复的组织工程骨的快速构建方法尚不成熟,植入物早期血管化仍是研究热点.目的:将快速浓集自体脂肪干细胞直接置于植骨周围,通过正电子发射型计算机断层显像/CT直观观察其对植入异体骨的早期血管化影响,从而探索一种可用于临床的快速组织工程骨构建方法.方法:将45只雄性新西兰大白兔随机等分为异体骨组、复合组和自体骨组,分别在腰5,6横突间植入同种异体髂骨条、同种异体髂骨条复合快速浓集自体脂肪干细胞和自体髂骨条,各组于植入后1,3,5周注射18F-NaF,通过正电子发射型计算机断层显像/CT对各组动物进行扫描显像,对比各组植骨区标准摄取值.结果与结论:异体骨兔植骨区中段放射性分布低,血供及代谢未见明显改善,而复合快速浓集自体脂肪干细胞组植骨区18F-NaF的标准摄取值均不同程度地高于异体骨组(P < 0.05),提示快速浓集自体脂肪干细胞可促进植入骨的早期血管化,有效改善植骨区的血供和代谢,为临床快速构建组织工程骨提供了一种新思路.
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骨髓间充质干细胞体外调控肝星状细胞死亡受体5的表达
背景:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体可以通过上调死亡受体5 蛋白的表达诱导大鼠肝星状细胞凋亡.目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞对肝星状细胞死亡受体5 和Caspase-3 蛋白表达的影响,探讨骨髓间充质干细胞诱导肝星状细胞凋亡及其机制.方法:贴壁筛选法培养、纯化SD 大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3 代使用;大鼠原代肝星状细胞和肝纤维原细胞系冻融后传代使用.应用6 孔培养板,建立上下双层细胞共培养体系,常规培养.将细胞分为4 组:①空白对照组:肝星状细胞和骨髓间充质干细胞分别单独培养.②阴性对照组:肝纤维原细胞与肝星状细胞共培养(模拟星状细胞体内生长环境).③骨髓间充质干细胞与肝星状细胞共培养组.④实验组:1.5 mg/L TRAIL 多克隆抗体与骨髓间充质干细胞作用6 h 后,不换液,再与肝星状细胞共培养.结果与结论:在共培养组中肝星状细胞的增殖降低,凋亡增加,且肝星状细胞死亡受体5、Caspase-3 蛋白的表达均显著升高,并呈时间依赖性,且与其他组比较差异有显著性意义(P < 0.01).实验组Caspase-3 和死亡受体5 蛋白的表达在共培养的各个时间段均低于共培养组,与共培养组比较差异有显著性意义(P < 0.01).提示骨髓间充质干细胞与肝星状细胞共培养能抑制肝星状细胞的增殖,促进肝星状细胞的凋亡,其机制可能为骨髓间充质干细胞旁分泌肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体通过上调Caspase-3 和死亡受体5 蛋白的表达实现的.
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成骨诱导脂肪基质细胞在骨组织工程体内成骨中的作用
背景:以往研究认为,经过成骨诱导后的脂肪基质细胞通过转化为成骨细胞分泌骨基质进而修复骨缺损,然而并没有明确结论证实.目的:将经过体外成骨诱导的脂肪基质细胞复合支架材料分别植入骨缺损区和非骨区,根据是否成骨,验证经过成骨诱导后的脂肪基质细胞是否转化为成骨细胞.方法:取12 月龄犬背部皮下脂肪,经胶原酶消化法获得单个核细胞,将培养的第3 代细胞与双相磷酸钙陶瓷形成复合物.在犬下颌骨两侧制备长20 mm、高10 mm 的箱状缺损,拔除术区牙齿,将细胞支架复合物植入一侧术区,空白侧留作对照;另外在犬背部皮下肌肉区植入细胞支架复合物及骨诱导性磷酸钙陶瓷材料,术后6 周及12 周经组织学检测骨缺损修复情况.结果与结论:脂肪基质细胞复合双相磷酸钙陶瓷在骨缺损区成骨,在肌肉区未形成新骨;骨诱导性磷酸钙陶瓷在肌肉区形成新骨.提示成骨诱导并不能将脂肪基质细胞转化为成骨细胞,其确切机制有待进一步研究.
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5-氮胞苷诱导兔脂肪干细胞分化为心肌样细胞的特定基因表达
背景:采用生物学技术将脂肪干细胞进行心肌内移植,修复损伤心肌组织是近年来心血管病研究领域的一大热点.脂肪干细胞经诱导分化后的特定心肌基因表达尚无全面的研究报道.目的:观察兔脂肪干细胞经5-氮胞苷诱导分化为心肌样细胞后心肌特异性基因的表达.方法:取第2 代脂肪干细胞,加入2.5,5,10,20,40,80 μmol/L 5-氮胞苷经24 h 作用后,用完全培养液对其继续进行培养,4 周后再观察细胞生长和形态学的改变.待诱导1,2,3,4 周,利用RT-PCR 技术检测心钠素,脑钠素,α-骨骼肌动蛋白的基因表达.结果与结论:5-氮胞苷诱导1 周,其细胞大多呈紧密平行排列,其体积有所增大,梭形细胞比例相对有所下降,40,80 μmol/L 组细胞形态变化明显.诱导第4 周时,40,80 μmol/L 组细胞折光性减弱,细胞活性减弱,细胞死亡数继续增加.RT-PCR 检测心钠素,脑钠素,α-骨骼肌动蛋白的基因表达呈逐渐增加趋势;10 μmol/L 组各基因的表达明显高于其他各组(P < 0.05).结果提示兔脂肪干细胞经5-氮胞苷诱导分化的细胞具有心肌细胞的某些基因的特异性表达.
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子宫内膜中的成体干细胞
背景:近年来子宫干细胞尤其是子宫内膜干细胞研究有了新的突破,多个学者用不同方式证明了子宫内膜干细胞的存在.目的:介绍子宫干细胞存在的依据、位置及表面标志物.方法:应用计算机检索1995-01/2010-12 清华同方数据库相关文章,检索词为"子宫内膜干细胞",并限定文章语言种类为中文.同时计算机检索PudMed 数据库相关文章,检索词为"endometrium stem cell",并限定文章语言种类为English.共检索到文献233 篇,终纳入符合标准的文献30 篇.结果与结论:近年来子宫内膜干细胞的分离与鉴定研究有了很大的进展,但子宫内膜干细胞的特异性标志物仍在探索中.文章就克隆形成能力、标记滞留细胞实验及组织重建能力等多种方法对子宫内膜干细胞存在的可能性,存在部位以及可能的表面标志物等进行了综述.
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不同来源干细胞移植治疗糖尿病足分析
背景:糖尿病足患者多伴有肢体远端血管缺血,临床治疗效果一直不是很满意,自体干细胞移植是近几年来兴起的一种安全有效治疗方法.目的:对干细胞治疗糖尿病足研究的文献资料趋势进行多层次探讨分析.方法:以电子检索方式对CNKI 数据库学术期刊2003/2011 收录有关干细胞治疗糖尿病足研究的文献进行分析,采用检索词为"干细胞;糖尿病足",运用数据库的分析功能和Excel 软件图表的功能分析数据特征.采用自体骨髓干细胞、自体造血干细胞或脐血干细胞等方法移植治疗糖尿病足,将细胞通过肌内注射或血管输注的方式注入下肢缺血部位,治疗后比较肢体疼痛、冷感、皮肤温度、间歇性跛行、溃疡愈合程度和血管造影等结果,判断细胞移植的治疗效果.结果与结论:在CNKI 数据库学术期刊2003/2011 收录的文献中,共检索到125 篇与干细胞治疗糖尿病足研究相关的文献.文献量呈逐年上升趋势,文献的主要内容显示了糖尿病足、干细胞移植、移植等.干细胞移植以自体细胞来源为主,主要应用骨髓干细胞和造血干细胞两种.通过干细胞移植可以使糖尿病足患者的症状减轻,疼痛得到缓解,下肢血管造影有不同程度的新生侧支血管形成,对改善糖尿病足患者的下肢缺血起到一定作用.
