中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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构建腰椎间盘突出动物模型的理论与实践
腰椎间盘突出动物模型均源于椎间盘退变动物模型,但严格意义的腰椎间盘突出动物模型只是随着近年来腰椎间盘突出症的发病率逐年升高才引起人们和医务工作者的重视和深入研究.建立与人类相关性、可比性均较强的腰椎间盘突出动物模型,可为腰椎间盘突出症的深入研究:如发病机制,治疗作用机制等提供良好的实验载体.文章通过对近5年国内外有关腰椎间盘突出动物模型的研究进行总结比较分析,综述了腰椎间盘突出动物模型的研究进展,并对其存在问题和应用前景进行了展望.
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白细胞介素17和重症肌无力
白细胞介素17是一种新的前炎性细胞因子,由新发现CD4+辅助性T细胞-Th17分泌.文章从介绍白细胞介素17的结构和编码基因入手,研究了白细胞介素的受体家族,从而发现白细胞介素17具有促进细胞增生分化、招募中性粒细胞及免疫调节等重要作用,并且与某些自身免疫性疾病过程密切相关.Th17细胞亚群的发现,弥补了Th1/Th2介导效应机制的不足.白细胞介素17可致严重的自身免疫性重症肌无力并且提高乙酰胆碱受体特异性的IgG和IgG2b的数量,说明白细胞介素17诱导自身免疫性重症肌无力的形成,白细胞介素17与重症肌无力密切相关.
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闭合性骨折软组织损伤及修复的评价与处理
;对软组织损伤严重性的判断不仅是对患者评价的一个重要组成部分,而且也影响着闭合性骨折的处理.软组织对钝器伤的反应包括微血管反应和炎症性过程.经免疫力低下的软组织作切口可以导致伤口裂开以及深部感染.因此,充分认识软组织的损伤程度是闭合性骨折得以有效治疗的基础.许多处理方法,包括夹板固定、冷冻疗法、压迫和延期手术,有利于限制软组织进一步损伤,有利于术前软组织的自身快速修复.新近出现的外科技术不仅改善治疗效果,也降低了软组织并发症的发生率.
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基于组织工程皮肤的化学品光毒性检测
组织工程皮肤是指应用生命科学与工程学的原理与技术,研究并开发出的用于修复、维护、促进人体皮肤损伤后功能和形态的皮肤替代物.它有2个主要的应用方向:体内主要运用于各种皮肤创伤的治疗,体外主要作为皮肤模型检测化学品的安全性.化学品的安全性越来越受到人们的重视,光毒性的检测是其中的一项重要内容.鉴于对动物福利和动物保护的日趋重视,近些年出现了多种体外替代检测方法.文章重点综述了基于组织工程皮肤的化学品光毒性替代检测情况,具体涉及组织工程皮肤的介绍、光毒性概念和发生机制、光毒性替代检测、参考化合物选择和结果的判定等方面内容.随着组织工程理论和技术的发展,基于组织工程皮肤的化学品安全性检测的敏感度、特异性和精确度会进一步提高.
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应用生物力学分析棒球运动中的肩关节损伤
棒球投掷运动常可导致不同类型及程度的肩关节损伤.基于此,采用绘图的方式描述棒球运动导致肩关节损伤的力学机制,并从动作技术方面简单形象地说明多种肩关节损伤的形成原因,以及发生这些问题的影响因素.
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脊椎病形成生物力学机制及其生命系统的"熵增原理"
从力学的角度看,脊椎病可谓是脊柱系统某部位受力不当而整体性生理结构改变而生理功能退化病变的一种病理反映,其过程遵循生命系统"熵增原理".由椎动脉型和神经型颈椎病的形成机制可知:由于横突内穿越而过的椎动脉、椎管内通往全身的脊髓和神经的正常结构和功能受到影响必然引起血压等生理指标的紊乱,相关信息的无序程度(混乱)增加.引入生命系统生物信息熵概念是量化表述人体脊椎病形成的有效方法,控制人体脊柱系统的生物信息熵是预防和整治人体脊椎病的有效途径.
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新疆喀什市及周边县乡维吾尔族422人膳食调查
目的:调查分析喀什市维吾尔族膳食营养状况.方法:2005-05/08在新疆喀什市及周边县与乡的维吾尔族人群中进行2型糖尿病遗传资源的收集与保护调查分析.共收集糖尿病家系、非糖尿病家系、散发糖尿病及非糖尿病人总计2 775人.其中随机调查了422人的膳食状况.男208人,女214人.小于20岁占6.4%,20～39岁占40.6%,40～59岁占37.7%, 60岁以上占15.3%.所有患者均经过知情谈话并签署知情同意书.采用入户3日称重法和24 h回忆法对喀什市422人进行膳食调查.结果:喀什市平均每人每日的能量摄入量为9 964.03 kJ,占每日营养素建议摄取量的91.60%,其中蛋白质每人每目的摄入量为66.45 g,占每日营养素建议摄取量的83.06%,脂肪为48.95 g,碳水化合物的摄入量为418.79 g,均低于每日营养素建议摄取量;维生素和微量元素的摄入量普遍缺乏,尤其以钙和维生素A为显著,分别是235.01 mg和21.76 ug,仅占每日营养索建议摄取量的1/4.结论:新疆喀什市维吾尔族特有的饮食结构可能导致了大营养物质摄入比例不合理及各种小营养物质的掇入缺乏,建议试图做相应的调整和改变.
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关节镜下半腱肌和股薄肌双束重建前交叉韧带后膝关节本体感觉的功能评定
背景;前交叉韧带重建是前交叉韧带损伤的主要治疗方案,近年来,前交叉韧带重建后膝关节本体感觉的研究进展迅速.目的:对关节镜下半腱肌和股薄肌双束重建膝关节前交叉韧带后的本体感觉进行评定.设计、时间及地点:病例对照,于2007-08/2008-06在潍坊医学院附属医院骨科完成.对象:用14例关节镜下半腱肌和股薄肌双束重建前交叉韧带的男性患者作为试验组和14例健康男性作为对照组.方法:所有患者前交叉韧带重建都经过12个月神经肌肉康复训练,通过在负重的条件下屈伸运动重现设定的角度来评定关节的位置觉,测试健康的受试者和患者的双膝伸膝运动、屈膝运动关节位置重现偏差.主要观察指标:患者的患侧膝关节、健侧膝关节和健康受试者膝关节在伸膝运动和屈膝运动时主动关节位置重现测试的比较.结果:患者患膝与健膝关节位置重现偏差、患者侧膝与健康者关节位置重现偏差及患者健膝与健康者关节位置重现偏差比较,差异均无显著性意义(P0.05).结论:前交叉韧带重建后12个月的患膝和健康膝关节在承重条件下的位置觉无明显差别.
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青岛地区健康成年人尿酸排泄分数正常值的建立及分析
背景:目前国内缺少关于尿酸排泄分数(fraction excretion of uric acid,FEUA)正常值建立及不同性别、年龄间差异的研究.目的:建立青岛地区健康成年人尿酸排泄分数的正常参考值.设计、时间及地点:调查分析,2007-08/2008-08在青岛大学医学院附属医院完成.对象:选择2007-08/2008-08青岛地区连续居住5年以上的20～70岁的健康者581人,其中男279人,女302人.按年龄分为21～30岁61人,男32人,女29人;31～40岁92人,男40人,女52人;41～50岁173人,男82人,女91人;51～60岁169人,男88人,女81人;60岁86人,男37人,女49人.方法:用特定Sysmex chemix-180型全自动生化分析仪测定581例健康成年人的空腹血清及12 h尿中尿酸、肌酐浓度,计算尿酸排泄分数,用SPSS16.0软件进行统计学处理.主要观察指标:①正常成年人的一般资料及生化指标比较.②血尿酸、尿酸排泄分数性别间比较及尿酸排泄分数的参考值范围.③血尿酸、尿酸排泄分数在不同年龄组间的比较.结果:男性血尿酸高于女性,而尿酸排泄分数低于女性,差异均有显著性意义(P<0.05).各年龄组间尿酸排泄分数差异无显著性意义(P0.05).女性尿酸排泄分数参考值范围为4.039%～10.613%,男性为3.447%～9.915%.结论:初步建立了青岛地区健康成年人尿酸排泄分数的正常参考值.应分别建立男女性尿酸排泄分数正常参考值及促尿酸排泄治疗标准,为高尿酸血症防治工作提供参考.
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下肢痉挛偏瘫患者的步行效率
目的:探索下肢痉挛偏瘫患者步行效率,明确是否存在理想运动频率下能量应用效率高的运动状态.方法:南京医科大学第一附属医院康复病区2005/2006住院的脑损伤后偏瘫男性患者10例,其中脑损伤4例、脑卒中后6例,均有典型偏瘫下肢伸肌痉挛模式,均具备步行200 m的能力.患者平均年龄(43.6±13.7)岁,平均身高(1.69±0.04)m,平均体质量(70.5±9.5)kg.采用三维步态分析系统进行步态分析获得所需要的时间-空间参数步态参数,分别测定自由行走时、80%自然正常步频以及120%自然正常步频下的步行效率和步态指标,然后采用K4b2便携式气体分析系统来测定氧价以评定受试者步行效率.结果:作为肌肉痉挛模型的偏瘫患者自然步频、慢速与快速步频分别为(66.9±15.7),(71.9±12.8)和(106.1±19.0)步/mim步速分别为(33.7±9.5),(25.4±4.9)和(37.5±10.9)m/min,慢速与快速步频组分别与自然步频组的两两比较差异有显著性意义(P<0.05);3组耗氧量分别为(9.3±1.1),(9.2±1.1)和(9.7±1.0)mL/(min·kg);氧价分别为(0.283±0.087),(0.350±0.081)和(0.301±0.082)mL/(min·kg).快慢步频组与自然步频组的耗氧量与氧价两两比较均未出现显著增加(P0.05).结论:早中期偏瘫患者自然步态下耗氧量与氧价与慢速、快速步频的比较未出现显著性改变,提示仅仅短期的康复训练步行效率不能达到理想的生物谐振状态.
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开缝手法治疗伸膝装置创伤性粘连的临床评价:多中心、同期随机对照
背景:课题为国家中医药管理局中医临床诊疗技术整理与研究项目之一,项目完成并通过验收鉴定后,将在基层社区及农村地区进行技术推广.目的:对开缝手法治疗伸膝装置创伤性粘连的疗效进行多中心临床评价.设计、时间及地点:平行对照、分层随机分组、多中心试验,实验于2003-01/2006-10在河南中医学院第一刚属医院、郑州市骨科医院、河南省中医院完成.对象:选择2003-01/2006-10河南中医学院第一附属医院、郑州市骨科医院、河南省中医院3个中心因创伤导致伸膝装置粘连患者240例.随机分为试验组120例,男78例,女42例;平均年龄(42.50±13.93)岁;对照组120例,男71例,女49例;平均年龄(44.19±12.92)岁.方法:试验组采用膝部开缝手法,即四指点穴和拔伸屈膝法,对照组治疗采用<中医筋伤学中的手法.1次/d,治疗30 d,20 min/次.患者对治疗均知情同意.主要观察指标:①两组治疗前后膝关节活动度、关节功能分级评分、膝关节主动屈曲功能评分.②两组中医疗效比较.结果:试验组脱落、剔除19例,合格率84.17%;对照组脱落、剔除17例,合格率85.83%.试验组显效率为87.13%,对照组显效率为68.93%,(P<0.05),试验组显效率优于对照组.两组膝关节活动度、膝关节功能评分、膝关节主动屈曲功能评分、关节功能分级评分比较,试验组优于对照组(P<0.01).结论:开缝手法治疗伸膝装置创伤性粘连,疗效确切,方法安全,具有很强的可操作性和推广价值.
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淫羊藿总黄酮治疗原发性骨质疏松症患者骨密度和骨代谢指标的变化
背景:既往动物实验表明,淫羊藿总黄酮能有效抑制雌激素相关的骨丢失,但是相关的临床报道较少.目的:观察淫羊藿总黄酮对原发性骨质疏松症患者骨密度的影响.设计、时间及地点;随机双盲,阳性对照临床试验,病例来自2005-06/2007-09华中科技大学同济医学院附属协和医院门诊.对象:选择原发性骨质疏松症患者64例,男11例,女53例.方法:64例患者随机分为治疗组和对照组,每组32例,治疗组给予淫羊藿总黄酮045 g/次,3次/d,口服治疗;对照组给予骨疏康颗粒10 g/次,2次/d,口服治疗,疗程均为6个月.主要观察指标:①两组患者治疗前后腰椎(L1～L4),股骨颈,Ward's三角,大转子和左髋的骨密度变化.②两组患者治疗前后血清钙、磷和碱性磷酸酶的变化.结果:64例原发性骨质疏松症患者均进入结果分析.①治疗组腰椎骨密度明显高于对照组(P<0.05),其他部位两组骨密度相比,差异无显著性意义(P0.05).与治疗前相比,治疗组骨密度无明显改变(P0.05),对照组腰椎,股骨颈,大转子和髋部骨密度明显降低(P<0.05,P<0.01).②两组血钙水平均较治疗前明显升高(P<0.05),两组间比较无明显差异(P0.05);治疗组血磷和血碱性磷酸酶水平与治疗前相比无明显变化(P0.05).结论:淫羊藿总黄酮治疗能有效抑制原发性骨质疏松症患者骨密度降低.
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多元线性回归分析人体骨矿含量与腰椎和髋部骨密度
背景:世界卫生组织将双能X射线骨密度仪测量中轴骨(腰椎和髋部)骨密度作为诊断骨质疏松症的"金标准",但其缺点是仅仪提供了面积骨密度,而不是体积骨密度,因此现有的骨密度检查结果评价实际的骨矿含量存在一定的局限性.目的:尝试用体质量指数对面积骨密度进行校正,生成骨密度系数,同时采用多元线性回归分析方法,通过腰椎和髋部骨密度预测人体骨矿含量.设计、时间及地点:前瞻性试验,于2004-10/2008-06在解放军南京军区南京总医院完成.对象:选择在解放军南京军区南京总医院接受双能X射线骨密度检查者20名,均为汉族,未接受过肢体截肢、骨骼移植、人工关节置换、骨折内固定等影响骨矿含量的相关手术.方法:检测受检者腰部、髋部骨密度以及全身骨矿含量.测量受检者身高、体质量,计算体质量指数,经体质量指数校正后的骨密度称为骨密度系数,其计算公式为:骨密度系数=骨密度/体质量指数×10.由体质量校正后的骨矿含量称为骨矿含量系数,其计算公式为:骨矿含量系数=骨矿含量/体质量×10.主要观察指标:测量腰椎、髋部骨密度及全身骨矿含量,以全身骨矿含量为应变量,腰椎和髋部骨密度为自变量,进行多元线性回归分析.结果:全身骨矿含量与腰椎、髋部骨密度之间具有相关性(P=0.000):骨密度经过体质量指数校正,全身骨矿含量经体质量校正之后,其相关性更加显著(P=0.000).校正后可以得出人体骨矿含量与腰椎和髋部骨密度之间的多元线性回归方程:骨矿含量=(0.065+0.415×G1+0.270×G2)×T/10,式中骨矿含量表示全身骨矿含量,G1表示右髋部骨密度的校正值,G2表示腰椎骨密度的校正值,T表示体质量.使用校正后的多元线性回归方程预测骨矿含量,其结果与骨矿含量的实际值基本吻合.结论:利用腰椎和髋部骨密度能预测全身骨矿含量,骨密度系数有塑成为评价骨密度的新指标.
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神经生长因子对合并神经损伤胫骨骨折早期愈合的影响
背景:正常骨组织和骨痂中有神经生长因子及其受体的表达,同时局部给予外源性神经生长因子对骨折愈合有促进作用,周围神经损伤后的骨折,骨痂质量受明显影响.目的:验证周围神经损伤后局部应用神经生长因子对骨折早期愈合的影响.设计、时间及地点:随机分组设计,对照动物实验,于2007-05/11在解放军济南军区总医院动物实验中心完成.材料:选用健康雄性Wistar大白鼠48只,体质量(220±20)g;神经生长因子注射液,厦门北大之路生物工程有限公司生产,批号20070502.方法:Wistar大A鼠48只分成4组,每组24肢体.①盐水组:胫骨骨折+盐水注射.②神经损伤盐水组:神经损伤+胫骨骨折+盐水注射.③神经生长因子组:胫骨骨折+神经生长因子注射.④神经损伤神经生长因子组:神经损伤+胫骨骨折+神经生长因子注射.先行测量胫骨中点处周径,然后在胫骨上段前侧楔形开槽,再于腹股沟韧带水平切除股神经约10 mm.对侧作胫骨开槽,暴露但不切除神经.股神经切除侧同时行坐骨科经切除约10 mm,对侧作切口暴露.术后盐水组和神经损伤盐水组肌注生理盐水,每侧肢体0.1 mL/d;神经生长因子组和神经损伤神经生长因子组肌注神经生长因子,每侧肢体0.1 mL (0.2 U)/d.主要观察指标:术后2周、4周测量小腿周径、X射线线摄片、标本湿质量、骨痂计量学观察.结果:①神经损伤侧小腿萎缩明显,神经生长因子促进肌肉恢复.②神经损伤侧标本湿质量及骨痂量较对侧多.③2周及4心时,神经损伤盐水组、神经损伤神绎生长因子组骨痂均较对侧多,但类骨质多,缺乏正常骨小梁结构.神经生长因子组、神经损伤神经生长因子组骨痂相对少而质密,骨小梁排列规则.结论:伴有或不伴有神经损伤的骨折,局部注射神经生长因子都可抑制破骨细胞活动,使成骨能力增强,促进骨折愈合.
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Smad4 siRNA对转化生长因子β诱导Ⅰ型胶原表达的作用
背景:近期研究表明,阻断smad传导通路可能成为一个阻断转化生长因子β引起的肝纤维化的新的靶点.目的:验证Smad4小分子干扰RNA(siRNA)对转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原的作用.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2008-10在哈尔滨医科大学药学院完成.材料:肝星状细胞HSC-T6体外培养,siRNA和荧光素酶报告基因采用Lipofectamine试剂转染,以含巨细胞病毒-β-半乳糖苷酶质粒作为转染阳性对照.方法:根据不同处理将细胞分为4组,空白对照组;Smad4 siRNA转染组;转化生长因子β处理组:Smad4 siRNA转染后转化生长因子β处理组,将Smad4 siRNA转染入肝星状细胞后行转化生长因子β刺激.各组分别于培养24 h后收集细胞.主要观察指标:利用荧光素酶报告基因法测定Smad结合转写因子(4XSBE)的活性;反转录-聚合酶链反应法检测Ⅰ型胶原mRNA表达的变化;Western印迹分析观察Smad4蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的变化.结果:Smad4 siRNA有意义的抑制Smad4蛋白表达;Smad4 siRNA抑制转化生长因子β诱导的4XSBE转录报告基因的活性:Smad4 siRNA从mRNA和蛋白水平有效抑制转化生长因子β激活的Ⅰ型胶原的表达.结论:Smad4 siRNA能够有效地阻断转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原表达.
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川芎嗪对肝星状细胞基质金属蛋白酶13和金属蛋白酶组织抑制剂1表达的影响
背景:既往动物实验表明,川芎嗪能降低肝纤维化大鼠血清Ⅲ型胶原、透明质酸及层粘连蛋白水平,延缓肝纤维化的形成,但其具体作用机制尚不清楚.目的:观察川芎嗪对肝星状细胞增殖及基质金属蛋白酶13和基质金属蛋白酶组织抑制因子1 mRNA表达的影响,并探讨川芎嗪抗肝纤维化的可能机制.设计、时间及地点:观察性实验,于2006-11/2007-06在重庆医科大学基础医学研究所完成.材料:盐酸川芎嗪注射液(10 mL∶80 mg),使用时用含体积分数为0.1小牛血清的1640培养基稀释,为巴里莫尔制药(通化)有限公司产品;肝星状细胞株HSC.T6,系SV40转染SD大鼠肝星状细胞而成,其表型为活化的肝星状细胞,由中国医学科学院肿瘤研究所提供.方法:培养肝星状细胞株,传至三四代时增殖明显即可用于实验.实验分为2组,空白对照组:仅加入细胞:药物干预组:分别加入川芎嗪0.01,0.1,1,10,50,100,200,400,600,1 000 mg/L后作用于HSC-T6.主要观察指标:四甲基偶氮唑盐比色法测定肝星状细胞增殖:ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及透明质酸质量浓度;反转录-聚合酶链反应检测基质金属蛋白酶13和基质金属蛋白酶13 mRNA的表达.结果:①与空白对照组相比,川芎嗪100～1 000 mg/L各剂量组作用不同时间的吸光度值均降低(P<0.01).在川芎嗪100-1 000 mg/L这一质量浓度范围内,随着药物质量浓度加大,对细胞的抑制作用增加.②川芎嗪(100,200 mg/L)对Ⅰ、Ⅲ型胶原、透明质酸的产生有抑制作用(P<0.05～0.01),并随着药物质量浓度增加,抑制作用增强.10 mg/L川芎嗪对Ⅰ、Ⅲ型胶原均没有影响,但可以降低透明质酸质量浓度(P<0.05).③100,200 mg/L川芎嗪可促进基质金属蛋白酶13的表达,随药物质量浓度增大,基质金属蛋白酶13/基质金属蛋白酶组织抑制因子1比值增大(P<0.05～0.01).结论:川芎嗪抗纤维化的可能机制是抑制肝星状细胞的增殖:促进基质金属蛋白酶13的表达,从而促进胶原降解,使细胞外基质减少.
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小鼠结缔组织生长因子基因克隆及其真核表达载体构建
背景:研究证实结缔组织生长因子在动脉粥样硬化血管平滑肌中呈高表达,构建结缔组织生长因子真核表达载体以特异性上调结缔组织生长因子在血管平滑肌内的表达是进一步通过细胞及动物实验研究其作用机制的基础.目的:克隆小鼠结缔组织生长因子基因、构建其真核表达载体,并在血管平滑肌细胞中瞬时表达.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2007-09/2008-04在辽宁医学院省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室完成.材料:1个月龄昆明小鼠10只.真核表达载体{pcDNA3.1(+)由辽宁医学院分子生物学实验室保存.方法:以小鼠肾脏总RNA为模板,通过反转录-聚合酶链反应方法获得结缔组织生长因子(CTGF)目的基因,连接到pMD18-T载体上,酶切鉴定测序,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体.主要观察指标:酶切测序鉴定重组体pcDNA3.1(+)-CTGF.将pcDNA3.1(+)-CTGF转入血管平滑肌细胞,Western观察结缔组织生长因子蛋白表达.结果:酶切、测序鉴定证实成功扩增出小鼠结缔组织生长因子目的基因并构建其真核表达载体,Western检测证实,重组体转入血管平滑肌细胞后,细胞内高表达结缔组织生长因子蛋白.结论:成功克隆小鼠结缔组织生长因子目的基因并构建其真核表达载体,重组体能在血管平滑肌中表达.
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银杏内酯B对胶原或二磷酸腺苷刺激血小板活化后一氧化氮含量及血管舒张因子刺激磷酸蛋白磷酸化的影响
背景:研究表明,增龄机体血小扳一氧化氮合成能力下降,导致环磷鸟苷水平降低,进而使血小扳功能亢进,成为血栓易感状态.目的:探讨胶原或二磷酸腺苷不同血小板刺激剂诱导后,银杏内酯B对增龄机体血小板一氧化氮含量、血管舒张因子刺激的磷酸蛋白磷酸化的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-08/2007-12在卫生部老年医学重点实验室完成.材料:13月龄Wistar大鼠5只,36月龄新西兰白兔5只,均由中吲科学院动物所提供.银杏内酯B购自徐州大观园有限公司,批号BN52021,其中银杏内酯B含量为92%,其他8%为银杏内酯A,C,M,J成分.方法:用3.8%枸橼酸抗凝抽取全血,离心分离富血小板血浆.分别将不同浓度的银杏内酯B加入到富血小板血浆中孵育5 min,再加入10 mg/L胶原或5 μmol/L二磷酸腺苷刺激血小板5 min.主要观察指标:使用一氧化氮试剂盒测定一氧化氮含量,Western blot法分析血小板血管舒张因子刺激的磷酸蛋白磷酸化水平,血小板聚集仪测定银杏内酯B对胶原或二磷酸腺苷诱导血小板聚集的抑制效果.结果:800 mg/L银杏内酯B预处理的血小板经胶原刺激活化后,血小板内一氧化氮含量增加62.3%:经二磷酸腺苷刺激活化后一氧化氮含量增加24%.胶原刺激血小板活化时,银杏内酯B可明显提高血管舒张因子刺激的磷酸蛋白的磷酸化水平:二磷酸腺苷刺激血小板活化时,银杏内酯B亦可提高血管舒张因子刺激的磷酸蚩白磷酸化水平,但增加幅度不如前者明显.800 mg/L银杏内酯B几乎完全抑制了胶原诱导的血小板聚集,血小板聚集率仅为2%;但其对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集抑制效果较弱,血小板聚集率达64%.结论:银杏内酯B对胶原刺激血小板活化的抑制作用与一氧化氮/环磷鸟苷通道相关,能够完全阻止胶原刺激的血小板聚集,对二磷酸腺苷刺激血小板活化的抑制效果较差,提示银杏内酯B对胶原、二磷酸腺苷诱导的血小板活化有不同的调节机制.
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阳离子脂质体转染Hela细胞的实验冰
背景;基因载体是基因治疗中重要的影响因素,阳离子脂质体细胞毒性低,转染效率高,是一种很有前景的基因转染载体.目的:评价两种阳离子脂质体介导基因转染宫颈癌细胞的转染效果,优化它们对宫颈癌细胞的转染条件.设计、时间及地点:以Hela细胞为观察对象,分组设计.实验于2008-03/06在大连民族学院生命科学学院国家民委一教育部重点实验室完成.材料:质粒pGFP.N2购自Clontech公司,Hela细胞由大连民族学院的实验室保存.方法;.首先采用DNA延滞实验考察阳离子脂质体与DNA的结合能力,然后用进行细胞转染实验研究脂质体的转染效率,后通过四甲基偶氮唑盐法考察脂质体对细胞的毒性.主要观察指标:采用DNA延滞实验观察阳离子脂质体Lipofectamine 2000和DOTAP与DNA的结合能力,以报告基因(绿色荧光蛋白基因pGFP-N2),分析阳离子脂质体Lipofectamine 2000和DOTAP转染Hela细胞转染效率和细胞毒性.结果:Lipofectamine 2000和DOTAP与DNA均有很强的结合力:以绿色荧光蛋白基因为报告基因,Lipofectamine 200C转染率较高;当Lipofectamine 2000与DNA质量比为3:1时,转染效率高,约72%,是DOTAP转染细胞高活性的2.5倍;在佳转染剂量时,2种试剂的细胞存活率均在75%以上,Lipofectamine 2000的毒性相对较小.结论:对Hela细胞而言,Lipofectamine 2000较DOTAP具有更高的转染效率和较低的细胞毒性.
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原代肾上皮细胞改良培养方法
背景:目前国内对上皮细胞的研究多采用细胞株的方式,但其离体时间长,细胞易产生变异,而原代培养则与体内状态更相近,希望能为组织工程肾脏相关研究提供肾上皮细胞来源.目的:探索原代肾上皮细胞培养的条件和方法.建立一套高效快捷的原代肾上皮细胞培养方案.设计、时间及地点:单一样本观察,开放性实验,于2007-12/2008-03在武汉大学病毒学国家重点实验室分子病毒与癌研究室完成.材料:新生2-4 d SPF级雄性SD大鼠鼠婴12只.方法:取SD大鼠,切取双侧肾脏组织,将其反复剪成约1 mm×1 mm×1 mm块,加入2.5 g/L的胰酶和0.4 g/L乙二胺四乙酸,放入37℃恒温水浴箱消化,30 min后移至200目钢网过滤,去除未消化组织块和细胞团,收集网下悬液1 000 dmin低温离心5 min,用DMEM(pH 7.2)培养基制成细胞悬液,以4×108L-1密度接种于培养瓶中,置CO2培养箱中培养.再将细胞悬液接种到一个培养瓶内,静止培养30min,镜下观察细胞部分贴壁,将培养液连同尚未J贴壁细胞一起吸到另一瓶内,继续培养,重复上述操作一次,纯化肾上皮细胞.主要观察指标:以4×108L-1密度接种于培养瓶中培养.用4 g/L锥虫蓝染色榆测肾上皮细胞的存活率,不着色者为存活细胞.并观察肾上皮细胞的形态学变化、贴壁率.结果:肾上皮细胞存活率为95.20%,4 h约60%的细胞贴壁,12 h 85%以上的细胞已经贴壁.24 h后肾上皮细胞伸出伪足呈梭形、多角形,具有胞核一两个,细胞大小均匀,生长迅速,三四天后形成细胞簇,后肾上皮细胞连接成片生长.结论:该肾上皮细胞培养方法存活率、贴壁率高,是一种可靠的肾上皮细胞培养方法.
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肛门失禁动物模型的造模方法
背景:各种类型人工肛门括约肌的出现,为肛门失禁开创出一条新的治疗途径,同时也存在许多不足之处,仍需要探索和改进.肛门失禁动物模型作为人工肛门体内实验研究的第一步,其重要性不容置疑.目的:探讨一种新型肛门失禁动物模型造模方法的应用价值.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-08/2008-06在广州南方医科大学附属南方医院动物实验中心完成.材料:8月龄健康成年雄性新西兰兔30只,随机分为3组.方法:对照组6只.局部注射药物为生理盐水,术后8周取局部组织做病理检查;罗哌卡因模型组12只,采用局部注射高浓度罗哌卡因的方法构建动物模型;乙醇模型组12只,采用局部注射体积分数为99%乙醇的方法构建动物模型.功能性定位双侧第4荐神经,神经周围注射药物.两组模型组分别于术后4和8周各取6只局部组织做病理检查.主要观察指标:检测实验动物操作前后肛管内静息压力,计算操作前后肛管内静息压力的差值,观察肛门外括约肌及其双侧支配神经的神经肌电图和组织病理学变化.结果:与对照组相比,模型组术后肛管内静息压力明显下降,第4荐神经无冲动传导;电镜扫描显示模型组术后神经变性严重,各模型组间无明显差别;神经周围组织病理结果显示,乙醇模型组纤维成分明显增多,少量炎症细胞浸润,其他组未见明显异常改变.结论:局部注射神经毒性药物破坏肛门外括约肌双侧支配神经可成功制作出紧迫失禁的动物模型.注射高浓度罗哌卡因来伟4作紧迫性肛门失禁动物模型的方法,其短期造模效果确切,且创伤小,但在远期造模效果方面,仍需进一步的研究.注射体积分数为99%的乙醇来制作紧迫性肛门失禁动物模型的方法,其远期造模效果确切且稳定.
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慢病毒载体有效转移并感染心肌成纤维细胞
背景:心肌成纤维细胞过度增殖、胶原合成增多是心肌纤维化的主要病理基础.慢病毒载体系统是一种新型的基因治疗转移系统,能够高效感染分裂期和非分裂期细胞.目的:建立慢病毒载体有效转移并表达于大鼠心肌成纤维细胞的方法,为利用慢病毒载体介导心肌成纤维细胞的基因靶向治疗奠定基础.设计、时间及地点:对比观察,实验予2008-08/10在华中科技大学同济医学院附属协和医院老年病及上海吉凯公司实验室完成.材料:新生1～3日的SD大鼠乳鼠30只;Lentivirus载体、Enhanced Infection Solution(ENi.S)、Polybrene均为上海占凯基因化学技术有限公司产品.方法:采用差速贴壁法培养乳鼠心肌成纤维细胞,在DMEM加入3个梯度Lentivirus感染细胞,将病毒复感染指数为200,20,2的3组细胞,每组分别加入①Lentivirus.②在细胞感染时添加polybrene提高感染效率.⑨在上述基础上加入具有促进病毒感染的细胞增强液(Enhanced Infection Solution(ENi.S)),感染4 d.主要观察指标:①心肌成纤维细胞形态特征.②倒置显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况及感染效率.结果:成功建立心肌成纤维细胞培养模型,当慢病毒对心肌成纤维细胞的复感染指数为20时,可以达到80%的感染效率,然而必须在培养基内加入多聚阳离子转染试剂Polybrene,以提高慢病毒载体的感染效率.结论:慢病毒载体较易感染心肌成纤维细胞,是具有发展潜力的心肌成纤维细胞基因靶向治疗的新载体.
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自免疫椎间盘炎动物模型构建及其免疫反应
背景:椎间盘炎概念的初含义是化脓性感染.而实践中越来越多人开始关注其自身免疫反应因素.目的:通过手术破坏纤维环和软骨终板建立椎间盘炎的动物模型,探讨自免疫状态表达变化过程.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/12在天津医科大学总医院骨科生物力学实验室完成.材料:选择健康成年新西兰大耳白兔50只,雌雄不限,随机分为3组:模型组30只:设立假模型组10只及对照组10只.方法:随机取30只兔麻醉后,暴露L3-4,L4-5,L5-6椎间盘,以自制鹅头穿刺针刺入椎间盘,破坏纤维环和软骨终板建立兔腰椎间盘炎模型.假模型组同模型组取相同手术入路,暴露椎间鼎但不破坏纤维环和软骨终板.模型组与假模型组分别于术后1,2,4,8,12周分批处死动物,取手术区椎间盘标本.主要观察指标:①常规苏木精-伊红染色,形态学比较及淋巴细胞的表达.②应用免疫组织化学技术和免疫荧光技术观察标本CD4阳性、CD8阳性T淋巴细胞,免疫球蛋白IgG、IgM的表达.⑧细菌学培养.结果:光镜下可见模型组椎间盘内、外层纤维环紊乱,失去正常结构,炎症反应以及纤维化.假模型组及对照组则无上述表现.免疫组织化学染色显示模型组CD4阳性淋巴细胞在术后1,2周取材的标本表达较多,CD8阳性淋巴细胞则在术后2,4周取材的标本表达较多.而假模型组则极少量淋巴细胞表达,对照组未见淋巴细胞表达.免疫荧光显示模型组可见于术椎间盘近边缘区免疫球蛋白IgG、IgM呈阳性反应,于1周少量表达,术后2,4,8周大量表达.假模型组及对照组均可见IgG极少量表达,未见IgM表达.细菌培养为阴性.结论:①运用前外侧入路手于术破坏纤维环及软骨终板可以建立椎间盘炎动物模型.②纤维环及软骨终板受破坏后,髓核等自身抗原可与血液循环接触引发机体自身免疫反应,可表现在细胞免疫和体液免疫两办而.③自免疫反应在椎间盘炎的发病机制和病理演变过程以及症状产生过程中起重要作用.
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小鼠生精细胞发育特异基因spafa3的表达分析和克隆纯化冰
背景:雄性哺乳动物生精细胞自发性或诱发性凋亡现象与细胞凋亡相关基因有着密切的联系.spata3是一个新发现的小鼠生精细胞凋亡相关基因.目的:探讨小鼠生精细胞发育特异基因spata3的表达特性,制备高纯度的可溶性GST-SPATA3融合蛋白.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-10/2008-08在山西医科大学生物化学与分子生物学实验室和组织学与胚胎学实验室完成.材料:pMD19-T Simple克隆载体及大肠杆菌菌株E.coli DH5α(TaKaRa公司),表达载体pET-41a(+)plasmid DNA(Novagen公司),大肠杆菌菌株E.coil BL21(DE3)(Solarbio公司);1,2,3,5,8周龄雄性和8周龄雌性BALB/c小鼠.方法:麻醉后颈椎脱臼处死小鼠,取出各小鼠的睾丸组织和8周龄小鼠的火脑、心脏、肝脏、肺、肾脏、脾脏、卵巢、子宫,提取各组织总RNA.通过聚合酶链反应、定量聚合酶链反应和原位杂交研究spata3 mRNA表达及定位:通过构建原核表达载体,诱导并纯化蛋白,制备抗体.主要观察指标:①反转录-聚合酶链反应分析spata3组织特异性表达.②荧光定量聚合酶链反应分析spata3的阶段特异性表达.③spata3 mRNA细胞定位的杂交信号.④SPATA3重组蛋白在原核细胞的表达及其纯化.⑤重组蛋白的Western blot 分析.结果:反转录-聚合酶链反应表明spata3具有显著的睾丸组织特异性表达特征;实时定量聚合酶链反应显示spata3在精子发生后期高表达,可能与精子细胞的变态成形过程密切相关;原位杂交证明spata3转录本主要定位在圆形和长形精子细胞内,进一步提示该基因参与了精子细胞发育后期的形态变化.DNA序列测定和SDS-PAGE分析证明spata3原核表达载体构建成功并可被商效诱导表达;Western blot印迹杂交显示纯化的SPATA3重组蛋白具有高度的特异性.结论:spata3是小鼠睾丸组织特异表达的精子发生相关基因,在圆形和长形精子细胞中处于高水平转录状态;实验获得的高纯度可溶性融合蛋白完全满足后期抗体制备的需要.
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血管紧张素Ⅱ受体在增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成中的作用
背景:新研究发现,血管紧张素Ⅱ与皮肤纤维化病变的发生和发展有关,然而有关血管紧张素Ⅱ受体在人增生性瘢痕成纤维细胞中的表达及作用鲜见报道.目的:观察血管紧张素Ⅱ 1型受体和2型受体在人增生性瘢痕成纤维细胞中的表达,并探讨它们在成纤维细胞胶原合成中的作用.设计、时间及地点:对比观察,于2006-08/2007-11在解放军广州军区广州总医院医学实验中心完成.对象:取住院患者增生性瘢痕18例,男10例,女8例,年龄19～47岁,将增生性瘢痕标本分为两组,每组各9例.正常皮肤7例,取自增生性瘢痕切除患者的正常皮肤.所有取材部位未经任何治疗,标本经无菌取材后分成2份,其中一份用40 g/L多聚甲醛固定后用于免疫组织化学检测,另一份用于成纤维细胞培养.方法:采用免疫组织化学的方法和放射性配体受体结合测定法观察人增生性瘢痕组织中成纤维细胞血管紧张素Ⅱ 1型受体和2型受体的表达,并用体外细胞培养技术观察2种受体在人增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成中的作用.主要观察指标:2种受体在增生性瘢痕组织成纤维细胞中的表达及在人增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成中的作用.结果:①在增生性瘢痕的成纤维细胞可见1型受体和2型受体表达,阳性染色信号较强.放射性配体受体结合测定法显示在培养的增生性瘢痕的成纤维细胞有1型受体和2型受体,受体密度分别为(10.69±2.15),(4.9±1.05)fmol/106个细胞.②在培养的人增生性瘢痕成纤维细胞,血管紧张素Ⅱ明显促进成纤维细胞胶原的合成,1 型受体阻断剂Valsartan明显抑制血管紧张素Ⅱ的这种促进作用,2型受体拮抗剂PD123319明显增强血管紧张素Ⅱ的这种作用.结论:在增生性瘢痕的成纤维细胞表达血管紧张素Ⅱ 1型受体和2型受体,血管紧张素Ⅱ通过激活2种受体对成纤维细胞胶原的合成产生相反的作用,血管紧张素Ⅱ产生和受体表达比例的变化可能影响瘢痕的形成和成熟.
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苦味酸天狼猩红偏振光法检测阴茎白膜损伤愈合过程中胶原纤维类型分布的动态变化
背景:阴茎白膜损伤修复过程中会发生一系列组织形态结构的病理改变,其胶原纤维等结构成分也必然产生相应变化.目的:构建新西兰兔阴茎白膜损伤动物模型,寻找一种简便、快捷、灵敏的观察阴茎白膜损伤愈合过程中胶原类型、分布动态变化的方法.设计、时间及地点:胶原纤维水平平的对比观察实验,于2005-06/2007-10在贵阳医学院组织工程实验室完成.材料:新西兰兔15只,均为雄性.方法:在兔阴茎背侧切除白膜5 mm×5 mm造成缺损制备兔阴茎白膜损伤模型,将切除的白膜原位缝合.分别在损伤后2,6,12周取阴茎白膜,每次5只,以苦味酸天狼猩红染色,应用偏振光显微镜观察.主要观察指标:阴茎白膜损伤愈合过程中胶原纤维面积的动态变化.结果:不同时间点同种纤维含量差异具有显著性意义(P<0.05).损伤后2周时,Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维共同存在,比例相当,胶原排列杂乱,相互交错.损伤后6周时,术区红色和黄色的Ⅰ型胶原纤维明显增加,Ⅲ型胶原纤维的比例下降,排列欠规律.到损伤后12周,粗大而鲜艳的红黄色Ⅰ型胶原成分占据了绝大部分,细小的绿色Ⅲ型胶原纤维数量急剧减少.结论:苦味酸天狼猩红偏振光法不仅能区分Ⅰ,Ⅲ型胶原的类型,还能清晰地显示Ⅰ,Ⅲ型胶原的形态、分布和比例关系,操作简单,特异性强.
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鸡松果体切除年龄与脊柱侧凸发生的关系
背景:大部分制造鸡脊柱侧凸的松果体切除均在孵化后3d内实施,关于或迟或早进行松果休切除后对鸡发生脊柱侧凸是否有影响目前仍不清楚. 目的:分析实施松果体切除的时间与鸡脊柱侧凸的发生率和严重程度之间的关系.同时,对比进行松果体切除后发生侧凸和未发生侧凸的鸡午夜血清褪黑素水平.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-03/2006-08在解放军第二军医大学动物实验中心完成.材料:将60只小绍兴鸡随机分为6组:孵化后第2,4,11,18天施行松果体切除组,每组12只,对照组(n=6)及假手术组(n=6).方法:4个施行松果体切除组分别在孵化后第2,4,11,18天施行松果体切除,假手术组仅暴露松果体、不切除,对照组不进行任何处理.主要观察指标:每月对鸡的脊柱进行一次俯卧位X射线检查.第3个月时,应用ELASA方法检测午夜鸡血清褪黑素水平.结果:在孵化后3个月时,孵化后第2,4,11,18天施行松果体切除的小鸡脊柱侧凸的发生率分别为:66.7%,66.7%,63.6%及66.7%.4组动物的平均Cobb角分别为:32.6°,29.8°,23.8°及22.3°.4组施行松果体切除的小鸡在脊柱侧凸发生率、严重程度以及侧凸的类型上无统计学差异.施行松果体切除鸡的夜间褪黑素浓度明显低于对照组和假手术组(P<0.01),施行松果体切除的发生脊柱侧凸与未发生脊柱侧凸鸡的血清褪黑素浓度无明显差别.结论:孵化18d内的鸡实施松果体切除后脊柱侧凸的发生率为63.6%-66.7%,并且不受施行手术时年龄的影响.施行松果体切除后鸡的血清褪黑素浓度较低,但发生与未发生脊柱侧凸鸡的血清褪黑素浓度无差异.
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针刀干预对L3横突综合征模型大鼠成纤维细胞增殖的影响冰
背景:前期实验关于针刀疗法对第三腰椎横突综合征动物模型的治疗机制研究主是从调控软组织炎性反应为主要切入点,但尚未从软组织损伤修复的角度加以研究.目的:观察针刀疗法对第三腰椎横突综合征模型大鼠组织中成纤维细胞增殖的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-04/05在解放军海军总医院海战伤研究中心实验家完成.材料:健康雄性SD大鼠68只,其中51只用于制备第三腰椎横突综合征模型.方法:68只SD大鼠按照随机数字表法分为4组,每组17只.针刀干预组:于造模后15 d,在麻醉下,用针刀于大鼠第三腰椎横突后半段表皮投影处刺入至深筋膜下,行疏通切割两三刀,出针,按压针孔止血;封闭对照组:在无菌条件下,用0.45 mm×12 mm一次性无菌注射针刺入腰3横突后半段深筋膜下,注入20 g/L利多卡因注射液0.05 mL+地塞米松注射液0.01 mL+维牛紊B12 0.01 mL+氯化钠注射液0.13 mL,出针,按压止血.模型对照组造模但不干预、正常对照组不给予任何干预措施.主要观察指标:于造模后15 d各组取1只大鼠行组织形态学观察;造模后21,30 d,每组各处死8只大鼠,取材后,行苏木精-伊红染色,免疫组织化学检测增殖细胞核抗原的表达,并计算成纤维细胞的增殖指数.结果:68只SD大鼠均进入结果分析.①造模后15 d正常对照组结构正常;其他3组血管充血,并见淋巴小结形成.造模后21 d针刀干预组与封闭对照组大鼠组织内成纤维细胞较少,毛细血管增生扩张,胶原重建开始;模型对照组成纤维细胞较多,胶原分泌增多.造模后30 d模型对照组成纤维细胞增生,可见红细胞散在分布,有增生的毛细血管;针刀干预组与封闭对照组可见纤维组织排列成行;针刀干预组较其他各组胶原纤维形成减少,瘢痕面积小.②造模后21 d正常对照组可偶见增殖的成纤维细胞;封闭对照组与针刀干预组大鼠组织内的成纤维细胞增殖较少;而此时模型对照组可见成纤维细胞增殖较重,胶原分泌增多.造模后30 d正常对照组可少见增殖的成纤维细胞:模型对照组、封闭对照组、针刀干预组成纤维细胞增殖程度均有增强的趋势,但针刀干预组的增殖程度低.③造模后21 d和30 d,针刀干预组的增殖指数与模型对照组相比,差异有非常显著性意义(P<0.01);封闭对照组细胞的增殖指数与模型对照组在30 d时相比,差异有显著性意义(P<0.05).结论:针刀干预对第三腰椎横突综合征模型大鼠的组织修复可能是通过抑制成纤维细胞的增殖水平,从而防止了组织瘢痕挛缩的形成.
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瞬时感受电位基因家族成员TRPV4在大鼠睾丸组织中的表达
背景:瞬时感受电位(transient receptor potential,TRP)通道在人体遍布多种组织和细胞,并参与人体几乎所有的生理功能和许多病理变化.目的;观察瞬时感受电位基因亚家族成员TRPV4在大鼠睾丸组织中的表达.设计、时间及地点:单一样本观察.实验于2007-03/2008-04在广东省人民医院医学研究中心完成.材料:SD大鼠5只;TRPV4引物由上海生物工程技术服务有限公司合成.方法:选用SD大鼠,取20mg睾丸组织,用RNAprep_动物组织/细菌总RNA提取试剂盒提取总RNA,取1μg总RNA,用于合成cDNA.主要观察指标:用常规反转录-聚合酶链反应和免疫组织化学染色检测TRPV4在大鼠睾丸组织中的表达.结果:常规反转录-聚合酶链反应方法检测到在TRPV4的泳道中可见一条带,大小与期望长度符合;免疫组织化学染色可见TRPV4阳性片中较成熟的生精细胞和支持细胞为黄褐色.结论:TRPV4在睾丸组织上有表达,主要表达在较成熟的生精细胞和支持细胞上.
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湖南实施世界首例自体骨髓体外再造下颌骨上种植牙
2009-02-09下午,长沙市口腔医院实施了世界上首例"自体骨髓体外再造下颌骨上种植牙术",这项技术的成功实施不但为常见的牙齿缺失患者带来福音,更为颌骨缺损后自体骨髓体外再造下颌骨的患者送上人类的第三副牙齿.
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桃红四物汤干预激素性股骨头缺血坏死组织局部微血管密度的变化
背景:临床和实验研究多方面证明,以活血化瘀中药治疗股骨头缺血坏死有较好的效果.目的:验证桃红四物汤对激素性股骨头缺血性坏死股骨头局部微血管密度的影响.设计、时间及地点:随机对照实验、重复测量设计,于2006-04/2007-10在福建中医学院中心实验室完成.材料:清洁级SD大鼠40只,雌雄各半,体质量(200±20)g.采用抽签法随机分为空白组4只和模型组36只.桃红四物汤由桃仁、红花、当归、川芎、白芍和熟地组成.方法:模型组每周2次腹腔注射醋酸泼尼松龙24.5 mg/kg,经6周诱导出早期激素性股骨头缺血坏死的模型,空白组每周2次腹腔注射同等剂量的生理盐水.6周后处死空白组4只和模型组4只,进行光、电镜观察,确定造模成功.随后将其余32只模型组大鼠再随机分为治疗组16只和对照组16只,分别灌服桃红四物汤12.3 mL/(kg·d)[相当于生药9.2 g/(kg·d)]和等量生理盐水,于灌胃后第6,8周检测股骨头局部微血管密度的变化.主要观察指标:①股骨头组织超微结构.②苏木精-伊红染色股骨头组织形态学观察.③股骨头局部微血管密度检测结果.结果:光镜观察:激素可使模型组空缺骨陷窝数明显增多,骨小梁细疏,髓腔脂肪细胞增大、增多,与空白组有明显差异(P<0.01).电镜观察:模型组骨细胞数量减少,退变固缩或出现出现脂滴,成骨细胞减少,髓内脂肪细胞增大、增多,空白组骨细胞富含粗面内质网,多聚核糖体多,线粒体发达,嵴结构清晰,核异染色质丰富,核仁可见.股骨头局部微血管密度:治疗组股骨头局部微血管密度逐渐增高,对照组股骨头局部微血管密度较治疗组明显减低,两组相比有明显差异(P<0.01).结论:桃红四物汤可促进激素性股骨头缺血坏死股骨头局部微血管的生长,改善股骨头局部血运,促进坏死股骨头的修复.
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利用人骨髓间充质干细胞在生物反应器中构建小口径血管
背景:目前组织工程生物反应器已对血管、肌腱、软骨、骨、心肌瓣膜、气管、膀胱和干细胞等进行了大量的研究.目的:采用改进的生物反应器系统,应用人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)构建小口径的组织工程血管.设计、时间及地点:单一样本观察,于2005-06/2008-03在华东理工大学机械与动力工程学院和上海组织工程研究与开发中心完成.材料:血管生物反应器为华东理工大学自制;骨髓基质干细胞来自健康志愿者的骨髓.方法:设计一套血管生物反应器系统,采用有限元方法对组织工程小血管托架材料进行分析,从而设计一套用于构建直径为2 mm的小血管托架;收集人的原代骨髓基质干细胞进行体外扩增和培养,选用第3代细胞与聚羟基乙酸酯(PGA)复合后置于血管生物反应器中动态培养;培养4周后,对材料复合物取材.主要观察指标:细胞材料复合物生长状况及hBMSCs-PGA复合物的其他相关榆测.结果:hBMSCs-PGA材料复合物培养4周取材进行大体观察和扫描电镜观察,形成血管样组织,色泽明亮,有一定的弹性,用镊子反复压下血管能够反弹恢复原样;细胞分泌的胶原基质排列较规则,免疫组织化学结果表叫血管含有平滑肌弹性肌动蛋白的成分.结论:改进的血管生物反应器能模拟血管的力学环境,并能利用hBMSCs成功构建组织工程化小血管组织.
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基质细胞衍生因子1α促进皮肤创面的新血管形成
背景:基质细胞衍生因子1α是有促进血管生成作用的CXC类趋化因子,研究发现其在调节一些重要组织/器官的损伤修复过程中有重要作用,但对其在皮肤创伤愈合过程中的作用还不很清楚.目的:观察基质细胞衍生因子1α在创面新生血管形成过程中的作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-06/08在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究六室完成.材料:SPF级昆明小鼠60只,雌雄不拘,体质量25～30g;基质细胞衍生因子1α抗体为美国Santa Cruz Biotechnology 公司产品.方法:建立小鼠背部全层皮肤缺损伤模型,分为3组,即对照组,10mg/L基质细胞衍生因子1α抗体组和20 mg/L基质细胞衍生因子1α抗体组,每组20只.各组分别在创面及创周连续6d注射不同质量浓度的基质细胞衍生因子1α抗体(0,10,20mg/L).主要观察指标:创伤后3,4,5,6,7 d,以半定量反转录-聚合酶链反应检测创面CD146表达情况,并观察创面微血管密度及创面收缩率.结果:伤后各天,10 mg/L抗体组和20 mg/L抗体组CD146 mRNA表达和微血管密度均少于对照组(P<0.05),伤后5,6,7 d,抗体组CD146 mRNA表达和微血管密度多于3,4 d(P<0.05);伤后6,7 d,10 mg/L抗体组创面收缩率低于对照组(P<0.05),伤后5,6,7 d,20 mg/L抗体组创面收缩率低于对照组(P<0.05),抗体组间仅在伤后7d差异有显著性意义(P<0.05).结论:阻断创面基质细胞衍生因子1α作用,能够降低创面新血管化程度,从而可能影响创面愈合速度.
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颈椎治疗过程中骨与椎体的生物力学变化
目的:观察颈椎病患者与正常人、颈椎病患者治疗前后影像学和颈周肌群力学指标变化情况,探讨颈椎稳定性在颈椎病发病中的作用,对颈椎病患者非手术疗法的效果以及颈椎病患者的康复结果进行评定.方法:实验于2005-09/2008-11在上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院和国家中医药管理局推拿生物力学三级实验室完成.将63例颈椎病患者随机分为推拿组和牵引组,30名正常人做对照组.选取年龄性别与对照组相匹配的颈椎病患者30例,比较两者不稳节段发生率、不稳发生节段部位,以及颈肌力学指标,并观察颈椎病患者采用推拿和牵引治疗2周后的颈椎椎体位移以及颈周肌肌力.结果:①与正常人相比颈椎节段出现不稳病例数及节段数均显著升高.②推拿组患者治疗后颈椎不稳病例数和不稳节段数均显著减少.③颈椎病患者颈伸肌和颈屈肌在60(°)/s等速运动状态下峰值力矩(PT)、F/E显著低于正常人群.④推拿手法治疗后颈椎病患者的峰值力矩、主动肌/拮抗肌比值都有显著的改善.结论:①颈椎稳定性和颈椎周围肌群尤其是颈伸肌肌力变化足颈椎病发生和发展的重要因素.②改善颈椎周围肌群尤其是颈伸肌的肌力是颈椎病手法等非手术治疗方法发生作用的关键环节.
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膝骨关节炎的血流变学变化:多因素方差分析及横断面观察
背景:许多研究认为,机体的代谢状况与关节炎有密切关系,而血流变状况是影响机体内组织和细胞代谢的重要因素.目的:观察膝关节骨关节炎与健康人之间血流变学水平的差别,探讨血流变学状态与骨关节炎发生发展的关系.设计、时间及地点:病例-对照,实验从2005年开始在四川大学华西医院进行,并于2008年完成.对象:选择2005/2007在四川大学华西医院康复科门诊就诊的膝关节炎患者30例,男11例,女19例,平均年龄(57.9±6.3)岁;同时征集符合标准的健康者30例为对照组,男16例,女14例,平均年龄(38.0±7.2)岁.按国务院<医疗机构管理条例规定,受试者对测试知情同意.方法:对受试者进行血流变性指标测量.主要观察指标:膝骨关节炎与正常对照组之间血流变的差异.结果:采用多因素分析平衡年龄和性别因素后,结果显示膝关节骨关节炎组的红细胞变形指数和刚性指数高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);其他血液流变学指标差异无显著性意义(P0.05).结论:膝关节骨关节炎患者存在红细胞变形性降低的情况,并可能在骨关节炎发生发展中起到一定作用.
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维生素E对离心运动后大鼠骨骼肌线粒体内丙二醛、超氧化物歧化酶的影响
背景:许多实验表明自由基的增加与骨骼肌运动性损伤有关,而维生素E作为一种抗氧化剂,具有清除自由基的功效,可减轻运动中抗氧化酶所受的自由基损伤,减缓疲劳出现,进而提高运动能力.目的:从细胞线粒体自由基代谢的角度,探讨维生素E对离心运动后大鼠骨骼肌细胞线粒体丙二醛、超氧化物歧化酶的影响,以进一步阐明维生素E抗骨骼肌运动性损伤的内在机制.设计、时间及地点:随机分组,动物实验观察,于2007-05/10在沈阳体育学院国家体育总局重点实验室和中国医科大学重点实验室完成.材料:雄性SD大鼠48只,体质量(304±12)g.随机分为对照组、运动组、生理盐水组、维生素E组,12只/组.方法:维生素E组腹腔注射维生素E胶丸,1.0-102 mg/kg,总量为4 mL/kg,初次注射时间为鼠正式实验前1 d,以后每8 h注射1次,共4次.生理盐水组以生理盐水为对照,注射方式、注射量及运动方式、处死时间同维生素E组.运动组只进行运动,不给予药物或生理盐水,对照组仪为常规饲养,无任何干预.采用一次力竭性下坡跑运动建造大鼠损伤模型,运动结束后,取大鼠右侧肱三头肌.主要观察指标:采用微量测定试剂盒和6010紫外-可见分光光度计测定丙二醛含量及超氧化物歧化酶活力.结果:肱三头肌细胞线粒体各组丙二醛、超氧化物歧化酶在离心运动后24 h均显著增加(P<0.01).与运动组比较,生理盐水组丙二醛、超氧化物歧化酶值均无显著性差异(P0.05),维生素E组丙二显著降低(P<0.01),而超氧化物歧化酶显著增高(P<0.01).结论:补充维生素E可降低骨骼肌细胞线粒体丙二醛的含量,增加细胞线粒体超氧化物歧化酶的活性,提高骨骼肌细胞的抗氧化能力,进而可减轻自由基对肌肉的损伤作用.维生素E对运动性骨骼肌损伤的颅防作用主要是通过维生素E的抗氧化作用完成的.
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软骨利胶囊对骨关节炎小鼠股四头肌收缩蛋RmRNA表达的影响
背景:骨关节炎的病理改变涉及多种关节构成组织,其中骨骼肌的地位日渐引起研究者关注.目的:通过观察骨关节炎C57小鼠骨骼肌收缩蛋白α-肌动蛋白与肌球蛋白重链基因表达状况,探讨柔肝中药软骨制剂利胶囊对收缩蛋白基因表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-09/2007-01在上海市中医药研究院骨伤科研究所完成.材料:选取7周龄清洁级C57小鼠18只,雌雄各半,体质量(20±5)g.软骨利胶囊(柔肝中药制剂),由上海中医药大学中药标准化中心提供.方法:18只C57小鼠按随机数字表随机分为正常组、模型组、软骨利组,每组6只.除正常组外,对小鼠进行运动负荷训练造模.软骨利组给予0.2 mL软骨利溶液(约含2 mg软骨利)灌胃5周,正常对照组和模型组给予0.2 mL生理盐水灌胃5周.主要观察指标:应用反转录-聚合酶链反应检测股四头肌肌α-actin、肌球蛋白重链4种亚型(Ⅰ,Ⅱa,Ⅱd/x,ITb)mRNh表达水平.结果:与空白组比较,模型组α-actin mRNA显著低表达(P<0.05),肌球蛋白重链Ⅱa,肌球蛋白重链Ⅱd/x mRNA低表达(P<0.05).与模型组比较,软骨利干预组α-actin与多种肌球蛋白重链亚型mRNA表达水平上调(P<0.05).结论:柔肝中药制剂软骨利能够促进骨骼肌收缩蛋白基因表达,提示其可改善骨关节炎动物骨骼肌肌力.
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肌动蛋白和Tau蛋白荧光蛋白融合载体的构建、表达及其细胞内定位
背景:肌动蛋白和Tau蛋白分别是微丝和微管的重要组成成分,肌动蛋白和Tau蛋白的分布能否作为微丝和微管的观察指标.目的:构建肌动蛋白和Tau蛋白的红色和绿色荧光蛋白融合表达载体并转染真核细胞,观察其在细胞内的表达和定位情况.设计、时间及地点:单一样本观察实验,于2008-03/08在南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室共同完成.材料:克隆在pcDNA3载体上的肌动蛋白和Tau蛋白真核表达载体pcDNA3-actin和pcDNA3-Tau,以及红色荧光蛋白表达载体pmCherry-C2和绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C2、大肠杆菌株DH5α和小鼠NIH3T3细胞系由南方医科大学病理生理学教研室保存.方法:将克隆在pcDNA3上的肌动蛋白和Tau蛋白亚克隆到红色荧光蛋白载体pmCherry-C2和绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上,然后转染NIH3T3细胞,利用荧光显微镜观察重组载体的表达和细胞内定他.主要观察指标:NIH3T3细胞转染24h后.利用Leica荧光显微镜观察上述重组载体在细胞中的表达和定位情况.结果:重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在NIH3T3细胞中可获得高量表达.融合蛋白发出的红色和绿色荧光均表明,肌动蛋白在细胞质中呈短丝状弥散分布,Tau蛋白以细胞核为中心呈放射状排列.结论:成功构建了肌动蛋白和Tau蛋白的不同荧光蛋白融合表达载体,并在真核细胞中得到有效表达,这为研究细胞骨架在信号分子移位中的作用提供了一个重要的工具.
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糖尿病大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物2含量及磷酸化变化与不同强度运动的关系
背景:运动可提高胰岛素的敏感性和作用效果,其对胰岛素的影响与骨骼肌细胞胰岛素受体底物2的介导功能密切相关.目的:了解不同强度运动对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物2蛋白含量及磷酸化程度的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-04/06在辽宁师范大学体育学院运动人体科学实验室完成.材料:将60只健康SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿痫模型对照组、糖尿病模型运动强度15,20,25,30 m/min组,每组10只.方法:以腹腔内注射链脲左霉素制备糖尿病大鼠模型,正常对照组注射等量的柠檬酸缓冲液.采用15,20,25,30 m/min运动强度对糖尿病大鼠进行干预,1次,d,50 min/次,每周训练6 d,共6周.正常对照组及糖尿病模型对照组不进行运动干预.主要观察指标:以Western blot免疫印迹法检测各组大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物2蛋白含量及磷酸化程度.结果:与糖尿病模型对照组相比,15,20,25,30 m/min不同强度运动组大鼠股四头肌胰岛素受体底物2蛋白含分别升高17%、24.4%、23.4%和21.3%(P<0.05,P<0.01),股四头肌胰岛素受体底物2磷酸化水平分别升高34.7%、37.2%、40.2%和38.8%(P<0.01),但各组仍没有恢复到正常对照组水平.不同运动强度组间大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物2的表达和磷酸化程度无统计学差异.结论:在不同运动强度影响下,糖尿病大鼠骨四头肌胰岛素受体底物2含量均增加,但增加的幅度存在差异,以20 m/min及以上的强度运动效果较好,股四头肌胰岛素受体底物2的磷酸化程度变化不明显.
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亚健康疲劳状态血清对骨骼肌细胞蛋白质表达的影响
背景;前期研究表明亚健康疲劳状态时血清对体外培养骨骼肌细胞的生存活力、细胞超微结构、细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和线粒体能量负荷具有显著影响.目的:进一步运用二维凝胶电泳和质谱技术观察亚健康疲劳状态血时清对骨骼肌细胞蛋白质表达谱的影响.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-03/05在南方医科大学中医证候研究实验室和天津生物芯片技术有限责任公司蛋白质组学实验室完成.材料:亚健康疲劳状态时血清和正常状态时血清为自制:人骨骼肌细胞为Sciencell公司产品.方法:体外培养骨骼肌细胞,随机分为正常组和亚健康组,分别用含30%正常血清和30%亚健康疲劳者血清的DMEM/F12细胞培养液培养72 h,收集细胞,提取细胞总蛋白.主要观察指标:通过PDQuest7.3.0软件分析二:维凝胶电泳图谱,比较各组间蛋白表达量,然后利用质谱制作差异蛋白点的肽谱,确定差异蛋白,通过生物信息学分析所得蛋白的功能.结果:在2组凝胶中有15个蛋白质点显著差异表达,亚健康组中表达升高的蛋白质点有10个,下降有5个,其主要涉及能量代谢,核苷酸合成,细胞修复,应激等相关蛋白.结论:亚健康疲劳状态时血清可影响人骨骼肌细胞相关蛋白的表达.
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前列地尔预处理对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的早期和延迟性保护效应
背景:研究证实缺血预处理对于心肌具有抗缺血再灌注损伤的保护作用.近来实验显示缺血预处理对于骨骼肌具有保护作用.目的:比较前列地尔预处理及经典缺血预处理对在体大鼠骨骼肌缺血/再灌注损伤的早期和延迟保护效应.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-03/10在辽宁医学院附属第一医院实验室完成.材料:前列地尔脂肪乳剂由北京泰德制药有限公司提供;实验动物选用健康雄性的SD大鼠30只,体质量(275±25)g.方法:30只大鼠制成切断患肢皮肤、肌肉和神经,仅保留股动静脉的动物模型,随机均分成5组.假手术对照组:只穿线不结扎,股动脉旷置50 min;缺血再灌注组:缺血60 min,再灌注20 mira经典缺血预处理组,缺血前反复4个循环的缺血5 min/再灌注5 min;前列地尔预处理早期保护组:缺血前5 min经尾静脉注射前列地尔2 mL(剂量0.50 ug/kg);前列地尔预处理延迟保护组:缺血前24 h尾静脉注射前列地尔2 mL(剂量0.50 u g/kg).主要观察指标:光镜观察骨骼肌结构的变化,同时用黄嘌呤氧化酶法测定血清的超氧化物歧化酶活性和用硫代巴妥酸法测定丙二醛含量.酶组织化学法测定过氧化氢酶活性.测定血清诱导型一氧化氮合酶和一氧化氮活性.结果:与缺血再灌注组相比,前列地尔预处理及经典缺血预处理均有保护骨骼肌超微结构和抗氧化效应,经典缺血预处理组、前列地尔预处理早期保护组及延迟保护组明显降低缺血再灌注后的骨骼肌丙二醛浓度(P<0005)和升高超氧化物歧化酶活性(P<0.05),过氧化氢酶活性(P<0.05)、一氧化氮合酶和一氧化氮活性(P<0.05).结论:前列地尔预处理对在体大鼠骨骼肌缺血,再灌注损伤具有早期和延迟保护效应,能模拟经典缺血预处理骨骼肌保护效应,且早期保护作用强于延迟作用,一氧化氮参与延迟保护机制.
