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黄芪甲苷对宫颈癌细胞株放射敏感性的影响及相关机制
目的:探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV)对宫颈癌细胞株Hela的放射敏感性影响并讨论其可能机制.方法:采用MTT法检测黄芪甲苷对Hela细胞生长的抑制作用,克隆形成实验和流式细胞术分别检测Hela细胞的放射敏感性和细胞周期,Tunel法检测Hela细胞凋亡能力,Western blot检测Hela细胞中p-EGFR、EGFR与p-Akt、Akt蛋白表达水平变化.结果:黄芪甲苷抑制Hela细胞的生长,且60 μg/mL时抑制作用大;60 μg/mL黄芪甲苷联合放射治疗后,Do和Dq值显著小于单独放射时的值,拟合的生存曲线左移,且降低放射诱导的细胞G2/M期阻滞,促进细胞凋亡;黄芪甲苷可显著下调EGFR与Akt的磷酸化水平,EGFR与Akt总蛋白表达水平不变.结论:黄芪甲苷具有增加宫颈癌细胞株Hela放射敏感性的作用,可能与细胞周期G2/M期阻滞和DNA损伤修复蛋白表达水平降低有关.
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外源性S100A8在体外抑制HeLa细胞的增殖和侵袭
目的 探讨外源性S100A8对宫颈癌细胞系HeLa的增殖、凋亡、克隆形成及迁移和侵袭的影响.方法 MTT法检测细胞增殖活性;Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞技术检测细胞周期;平板集落形成实验检测细胞集落形成;划痕和Transwell侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭.结果细胞培养3d时,浓度为100、300和1000 mg/L的GST-hS100A8组的A值较GST组减少13.64%、19.29%和25.06% (P ＜0.05);在浓度为100 mg/L时,GST-hS100A8组呈时间依赖性减少(P＜0.05);GST-hS100A8组在第3天时细胞凋亡率较GST组增加5.18倍(P＜0.05),同时,出现峰值为(19.9±0.76)%的凋亡峰,而对照组没有凋亡峰;GST-hS100A8组的集落形成率较GST组减少30.2% (P＜0.005);划痕愈合率较GST组降低30.1% (P ＜0.05);穿膜细胞数减少48.9% (P＜0.05).结论 外源性S100A8可能具有抑制宫颈癌的作用.
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膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响
目的 探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响.方法 将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响.结果 干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P＜0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P＜0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P＜0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P＜0.05).结论 靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力.
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He-Ne激光照射对HeLa细胞Fas、bcl-2、NF-κB基因表达的作用
目的 探讨He-Ne激光对HeLa细胞Fas、bcl-2、NF-κB基因表达的作用.方法 将HeLa细胞接种于小鼠背部脾区皮下,24h后采用24mW He-Ne激光器照射小鼠脾区(瘤区),然后采用免疫组化方法观测Fas、bcl-2、NF-κB的表达.结果 激光照射组瘤块重量、bcl-2、NF-κB表达明显低于非激光照射组,而Fas表达明显高于非激光照射组,组间比较,差异有显著意义(P＜0.05).结论 He-Ne激光具有促进HeLa细胞调亡信号形成,从而发挥抗肿瘤免疫效应.
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RNA干扰FAK表达抑制宫颈癌细胞侵袭、迁移能力的研究
目的 探讨黏着斑激酶(FAK)表达量降低对宫颈癌细胞侵袭、迁移能力的影响以及机制研究.方法以宫颈癌HeLa细胞为研究对象,转染RNA干扰载体,实验分3组:空白对照组(未做任何处理的细胞)、阴性对照组(细胞转染对照载体FAK-pGenesil-Ctrl)、干扰组(细胞转染重组质粒FAK-pGenesil-siRNA).Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力,Western blot法检测细胞中的FAK、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达量.结果 干扰组细胞中FAK蛋白的表达量低于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05);干扰组细胞的迁移、侵袭数少于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05);干扰组细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的表达量低于空白对照组和阴性对照组,但E-cadherin蛋白的表达量高于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05).结论 RNA干扰FAK的表达量可以降低宫颈癌HeLa细胞的侵袭、迁移能力,其作用机制可能是通过影响细胞上皮间质转化相关因子MMP-2、MMP-9、E-cadherin蛋白的表达量.
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甜菜红素下调HeLa细胞线粒体丙酮酸代谢旁路蛋白编码的转录
目的 探讨甜菜红素对HeLa细胞增殖及与丙酮酸代谢和糖酵解的关系.方法 在体外培养HeLa细胞,贴壁后加入0、62.5和500 mg·L-1甜菜红素,48 h后收获细胞分别进行细胞计数和低温保存.以人基因组为参考,将冷冻细胞进行高通量转录组测定和计算,并利用互联网数据库,选取其糖酵解、丙酮酸代谢和柠檬酸循环部分进行分析,以研究甜菜红素对HeLa细胞增殖、糖酵解与氧化途径蛋白质编码转录本表达的影响.结果 二个浓度的甜菜红素均抑制培养HeLa细胞的增殖,并且影响培养细胞的转录本reads数.HeLa细胞表达的蛋白编码转录本有74种,其中reads数大于1和reads数小于1但处理间差异显著的共40种.甜菜红素显著上调HeLa细胞糖酵解限速酶血小板型磷酸果糖激酶(ENST00000381075)和糖异生限速酶果糖-1,6-二磷酸酶1(ENST00000375326)编码蛋白转录本表达,有利于细胞代谢,可能是细胞对甜菜红素的应激反应.甜菜红素对柠檬酸循环的蛋白编码转录表达没有显著影响.然而,甜菜红素显著下调HeLa细胞线粒体乳酸脱氢酶D(ENST00000450168) (LDHD)编码蛋白转录本的表达,并且对磷酸烯醇化丙酮酸羧激酶2(线粒体)(ENST00000396973)(PEP-CK)也呈下调趋势,它们均与丙酮酸代谢有关.结论 甜菜红素抑制HeLa细胞的增殖与线粒体丙酮酸代谢的LDHD和PEP-CK蛋白编码的转录下调有关.
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红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela体外增殖的影响
目的:探讨红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela的体外增殖的影响.方法:采用MTT法测定了不同浓度的红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela的体外抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化.结果:红花注射液浓度越高对Hela细胞抑制作用越好,作用时间越长抑制效果越强,量效关系和时效关系良好;形态学观察到细胞凋亡.结论:红花注射液对人宫颈癌细胞株Hela的细胞增殖有较强的抑制作用.
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双黄连抑制流感病毒诱导MDCK细胞程序化死亡的研究
研究显示,流感病毒在体内可诱导人体的呼吸道上皮细胞凋亡,在体外使宫颈癌细胞(Hela)和狗肾传代细胞(MDCK)凋亡[1,2].近来报道抗流感病毒药物可抑制流感病毒诱导感染细胞凋亡[3].但双黄连是否可抑制流感病毒诱导MDCK细胞凋亡少有报道.我们自2005年7月至2008年6月采用Annexin V及碘化丙啶(PI)双染并应用流式细胞仪检测双黄连对流感病毒诱导MKCK细胞凋亡的影响,报告如下.
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低氘水抑制宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭能力的研究
目的 探讨培养基中氘浓度的下降对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 用含不同氘浓度的培养基培养Hela细胞,分为150×10-6、100×10-6、75×10-6和50×10-6共4组,其中,氘浓度为150×10-6的培养基为对照组,其他为实验组;用四甲基噻唑蓝(MTT)法、划痕实验检测随着培养基中氘浓度下降,Hela细胞增殖和迁移侵袭力的变化;流式细胞术检测含不同氘浓度的培养基对Hela细胞周期的影响;蛋白免疫印迹和免疫组化实验检测含不同氘浓度的培养基对Hela细胞肿瘤相关蛋白p21、Na+/K+-ATPase表达的影响.结果 MTT实验结果显示,随着培养基中氘浓度的降低Hela细胞增殖得到明显的抑制,其中氘浓度为50×10-6的培养基抑制效果明显,相同条件下与对照组相比在72 h抑制率达到39.54％(P＜ 0.01);划痕实验可观察到Hela细胞在氘浓度为75×10-6、50×10-6的培养基中细胞迁移能力得到明显抑制(P＜ 0.05);Hela细胞在氘浓度为75×10-6、50×10-6的培养基中培养24 h后,流式细胞术检测S期明显低于对照组(P＜0.01);Hela细胞肿瘤相关蛋白p21在氘浓度为100×10-6、75×10-6和50×10-6的培养基中的表达与对照组比较,差异均有高度统计学意义(P＜0.01).结论 培养基中氘浓度的下降对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力有明显的抑制作用.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对人宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响
目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响。方法体外培养HeLa细胞，分为对照组和实验组，实验组用不同浓度的EGCG处理24、48、72 h，对照组加入等体积的培养基。采用MTT法测定EGCG对HeLa细胞增殖的影响；倒置显微镜下观察细胞的形态学变化；EGCG(浓度分别为20、40、80μg/mL)处理HeLa细胞48 h后，分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期、分光光度计检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Casepase-3)相对活性、Western blot法检测bcl-2/bax蛋白表达情况。结果 EGCG(浓度10~100μg/mL)能抑制HeLa细胞的增殖，呈剂量和时间依赖性；倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态；浓度为20、40、80μg/mL的EGCG作用HeLa细胞48 h后，细胞凋亡率逐渐上升，分别为12.4%、23.4%、35.4%，明显高于对照组(3.3%)；细胞周期结果显示EGCG能抑制细胞的G1期行进和G1/S转换，降低S期细胞比例；实验组HeLa细胞Caspase-3相对活性分别为(1.36±0.07)、(1.85±0.06)、(2.45±0.07)，均高于对照组(0.93±0.06)，差异均有统计学意义(P<0.05)；bax蛋白表达量升高，而bcl-2蛋白表达量降低，呈剂量依赖性。结论EGCG能抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡，其作用机制可能与增加细胞Casepase-3活性、下调bcl-2基因的表达及上调bax基因有关。 EGCG是一种前景广阔的抗肿瘤药物。
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 Hela 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
多种癌细胞Nesprin 1蛋白的表达
目的 通过比较Nesprin 1在不同癌细胞中的表达程度,为Nesprin 1与多种癌细胞之间的关系做初步探讨.方法 采用Western blotting方法检测Nesprin 1在人宫颈癌细胞(Hela)、人肺癌细胞(H-125)、人乳腺癌细胞(HCC-1937)、人膀胱癌细胞(5637)、人肝癌细胞(HepG2)、人胃癌细胞(BGC-823)、人结肠癌细胞(HCT 116)、人食管癌细胞(Eca-109)、小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(Raw 2647)等癌细胞当中的表达.结果 各癌细胞组GAPDH均有表达,Nesprin 1各组表达量不同,从强到弱顺序为HCC-1937＞H-125＞HCT116=Eca-109＞RAW2647＞BGC-823＞HepG2＞Hela＞5637,其中人膀胱癌细胞5637的表达不明显.结论 Nesprin 1蛋白可在多种癌细胞中表达,膀胱癌细胞中表达不明显.
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人GRP94基因慢病毒载体构建及稳定表达GRP94蛋白的人宫颈癌HeLa细胞株筛选及鉴定
目的:构建人葡萄糖调节蛋白94(GRP94)基因慢病毒载体,筛选稳定表达GRP94蛋白的人宫颈癌细胞株,筛选GRP94结合蛋白,为探讨GRP94对宫颈癌的调控作用提供细胞模型.方法:采用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增GRP94基因片段,连接到慢病毒载体pLVX-IRES-Puro中,获得重组载体.瞬时转染293T细胞,采用Western blot法检测GRP94蛋白表达量.pLVX-FLAG-GRP94重组质粒通过与包装质粒共转染293T细胞,获得重组慢病毒.以慢病毒感染HeLa细胞,筛选并鉴定稳定表达GRP94蛋白的细胞株.用稳定表达FLAG-GRP94的HeLa细胞株,银染后利用质谱筛选结合蛋白,并经免疫共沉淀验证.结果:重组慢病毒载体经双酶切和基因测序比对鉴定正确.HeLa细胞经慢病毒感染、药物筛选后获得的稳定表达株中GRP94蛋白表达量高于野生型HeLa细胞(P＜0.01).成功钓取出一种与肿瘤发生发展密切相关的SND1蛋白.结论:成功构建了GRP94基因慢病毒载体pLVx-FLAG-GRP94,并筛选出稳定表达GRP94蛋白的HeLa细胞株,为进一步明确肿瘤的发生、发展机制奠定了基础.
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吲哚草酰胺衍生物YB-15对Hela细胞生长抑制的研究
[目的]研究吲哚草酰胺衍生物YB-15对Hela细胞的作用.[方法]体外培养宫颈癌细胞Hela,应用MTT法测定半数抑制浓度(IC50),荧光染色观察细胞凋亡及绘制7 d内的生长曲线观察生长情况,间接免疫荧光染色观察化合物对微丝管蛋白形态的破坏情况.[结果]吲哚草酰胺衍生物YB-15能明显抑制Hela细胞的生长,IC50约为1.25×10-6 mol/L;1×10-6 mol/L吲哚草酰胺衍生物YB-15作用24 h即可明显诱导Hela细胞的凋亡;[结论]吲哚草酰胺衍生物YB-15对人类宫颈癌细胞有极强生长抑制和诱导凋亡作用.
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PSD－007光动力对人子宫颈癌Hela细胞体外杀伤效应研究
目的：探讨不同剂量癌光啉（PSD －007）及不同激光照射能量对人宫颈癌 Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法通过采用不同质量浓度的PSD－007、不同激光照射能量介导的光动力作用于Hela细胞，采用噻唑蓝（M T T ）比色法测定细胞的光密度（OD ）值，计算细胞存活率；6．25μg／ml的 PSD －007作用于Hela细胞，以不同能量的激光照射，DAPI染色观察细胞凋亡形态学改变。结果与空白对照组相比， PDT对Hela细胞有明显的杀伤效应，并呈现出剂量依赖性。当光敏剂PSD－007浓度＞12．5μg／ml ，光照能量＞4．8J／cm2，PDT治疗组间细胞存活率差异无统计学意义。细胞形态学观察到不同光照能量处理细胞后，MCF－7细胞呈现典型的凋亡形态特征。结论 PSD －007对体外人宫颈癌细胞系 Hela细胞具有光动力杀伤效应。特定光源下，光敏剂质量浓度及光照能量密度是影响PSD－007效应的主要因素。
关键词： 光动力疗法 宫颈癌细胞 Hela 癌光啉PSD -007 -
桂枝茯苓丸对人宫颈癌荷瘤小鼠免疫调节机制的实验研究
[目的]探讨桂枝茯苓丸对人宫颈癌荷瘤小鼠脾脏Th1/Th2细胞因子表达水平的影响.[方法]以人宫颈癌系Hela接种于BALB/c小鼠右后大腿皮下,建立宫颈癌荷瘤小鼠模型,分组后分别给予生理盐水、桂枝茯苓丸、顺氯氨铂.测定抑瘤率及小鼠胸腺指数、脾脏指数;流式细胞术检测细胞因Th1(IL-2)/Th2(IL-10)的表达水平.[结果]桂枝茯苓丸和顺氯氨铂对小鼠宫颈癌Hela瘤体均有明显抑制作用,能提高荷瘤小鼠脾脏指数与胸腺指数.桂枝茯苓丸治疗组,Th1细胞因子IL-2水平显著升高,Th1/Th2比值明显高于模型组,而且向正常值漂移.[结论]桂枝茯苓丸有逆转宫颈癌荷瘤小鼠Th1向Th2漂移的作用,能恢复Th1表达的优势,从而为桂枝茯苓丸通过免疫调节作用治疗宫颈癌提供实验依据.
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阳离子脂质体转染Hela细胞的实验冰
背景;基因载体是基因治疗中重要的影响因素,阳离子脂质体细胞毒性低,转染效率高,是一种很有前景的基因转染载体.目的:评价两种阳离子脂质体介导基因转染宫颈癌细胞的转染效果,优化它们对宫颈癌细胞的转染条件.设计、时间及地点:以Hela细胞为观察对象,分组设计.实验于2008-03/06在大连民族学院生命科学学院国家民委一教育部重点实验室完成.材料:质粒pGFP.N2购自Clontech公司,Hela细胞由大连民族学院的实验室保存.方法;.首先采用DNA延滞实验考察阳离子脂质体与DNA的结合能力,然后用进行细胞转染实验研究脂质体的转染效率,后通过四甲基偶氮唑盐法考察脂质体对细胞的毒性.主要观察指标:采用DNA延滞实验观察阳离子脂质体Lipofectamine 2000和DOTAP与DNA的结合能力,以报告基因(绿色荧光蛋白基因pGFP-N2),分析阳离子脂质体Lipofectamine 2000和DOTAP转染Hela细胞转染效率和细胞毒性.结果:Lipofectamine 2000和DOTAP与DNA均有很强的结合力:以绿色荧光蛋白基因为报告基因,Lipofectamine 200C转染率较高;当Lipofectamine 2000与DNA质量比为3:1时,转染效率高,约72%,是DOTAP转染细胞高活性的2.5倍;在佳转染剂量时,2种试剂的细胞存活率均在75%以上,Lipofectamine 2000的毒性相对较小.结论:对Hela细胞而言,Lipofectamine 2000较DOTAP具有更高的转染效率和较低的细胞毒性.
关键词： Lipofectamine2000 转染 细胞毒性 Hela 阳离子脂质体 -
宫颈癌细胞系中HPV病毒感染与P16和E-cadherin表达的相关性分析
目的 探讨宫颈癌细胞系中HPV感染状态与P16和E-cadherin表达之间的相关性.方法 应用免疫细胞化学染色、免疫荧光、Western-blot以及RT-PCR的方法检测HeLa、SiHa和C33A三个细胞系中P16和E-cadherin的表达情况.结果 HPV阳性的两个细胞系HeLa和SiHa中P16的表达呈强阳性而E-cadherin的表达呈弱阳性,HPV阴性的细胞系C33A中P16的表达为弱阳性而E-cadherin呈强阳性表达.结论 宫颈癌细胞系中HPV的感染与P16的表达呈正相关而与E-cadherin的表达呈负相关.
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BML-111下调c-Met抑制Hela细胞迁移和侵袭的研究
目的:探讨BML-111下调c-Met抑制Hela细胞迁移和侵袭的影响.方法:将Hela细胞分为3组:空白组、BML-111组;BML-111+Boc-2(c-Met特异性阻断剂)组,BML-111组与BML-111+Boc-2组分别转染100μg/L的BML-111、100μg/L的BML-111和100μg/L的Boc-2,采用MTT实验、细胞侵袭与转移实验观察细胞增殖、迁移和侵袭状况,采用Western blot实验分析NF-κB、c-Met、P53的蛋白表达状况.结果:BML-111的加入明显抑制Hela细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),而Boc-2的加入有利于抵抗BML-111的抑制作用(P<0.05).BML-111的加入促进P53的表达,抑制NF-κB、c-Met的表达(P<0.05);而加入Boc-2处理后,NF-κB、c-Met、P53表达与BML-111组比较差异也有统计学意义(P<0.05).结论:BML-111可以对Hela细胞迁移、增殖与侵袭进行有效抑制,其机制可能是通过下调NF-κB、c-Met的表达来实现的.
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宫颈癌细胞通过分泌TSLP促进自身细胞活力
目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对宫颈癌细胞活力的自分泌调节作用.方法:体外培养宫颈癌细胞株HeLa和CasKi,分别收集培养24、48和72小时的培养上清,ELISA法检测培养上清中TSLP的分泌水平;流式细胞术分析HeLa和CasKi细胞表面TSLP受体(TSLPR)的表达水平;再用MTT法分别检测HeLa和CasKi细胞经人重组细胞因子TSLP(1、10和100 ng/ml)处理24、48和72小时后细胞活力的水平变化.结果:HeLa和CasKi细胞均呈时间依赖性分泌TSLP(P＜0.01),且HeLa细胞在24和48小时分泌TSLP的水平高于CasKi细胞(P＜0.01或P＜0.05);HeLa和CasKi细胞TSLPR阳性表达率分别为23.61±1.30和27.07±2.13,前者低于后者(P＜0.05);此外,10或100 ng/ml TSLP作用HeLa和CasKi细胞48小时或72小时均能上调其细胞活力(P＜0.05).结论:宫颈癌细胞可能通过TSLP自分泌作用促进自身的活力,进而利于宫颈癌细胞的生长,因而参与宫颈癌的发病和进展.
关键词： 胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP) 宫颈癌 Hela Caski 细胞活力 -
没食子酸诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的机制
目的 体外观察没食子酸对人宫颈癌Hela生长及凋亡的影响,探讨其抗肿瘤作用. 方法 体外培养 Hela细胞,用不同浓度的没食子酸作用为实验组,同时设对照组,以CCK8法测细胞增殖抑制作用、流式细胞仪检测p53和Bcl-2蛋白表达情况,扫描电镜下观察细胞形态的改变.结果 不同浓度没食子酸作用Hela细胞24 h增殖抑制显著(P<0.05),其抑制效应具有剂量依赖性,同时诱导Hela细胞凋亡、上调p53基因表达、下调Bcl-2基因表达(P<0.05). 结论 没食子酸可抑制Hela细胞的生长且随药物剂量的增加而升高,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞的基因调控有关.
