首页 > 文献资料
-
Hela培养上清液对hUVEC细胞增殖的影响
目的 研究子宫颈癌细胞(Hela)的培养上清液对人脐静脉内皮细胞(hUVEC)增殖的影响.方法 以Hela细胞培养上清液和DMEM培养基的等比例混合液培养的hUVEC细胞为实验组,以纯DMEM培养基培养的hUVEC细胞为对照组.MTT法检测细胞增殖情况的变化;流式细胞术检测细胞周期的改变;PCR法检测CDK和CyclinD调控基因的表达情况.结果 hUVEC经Hela细胞培养上清液作用96 h后,细胞数明显增加,S期细胞的比例明显上升,CDK和CyclinD调控基因表达明显上调.结论 Hela细胞培养上清液能明显促进人脐静脉内皮细胞的增殖,其机制之一可能是通过上调CDK和CyclinD调控基因来诱导更多的细胞进入S期,从而导致细胞的快速增殖.
-
鱼藤素对宫颈癌HeLa细胞生存活力和凋亡的影响
目的 探讨鱼藤素对人宫颈癌HeLa细胞生存活力和凋亡的影响.方法 将不同浓度(0、10、100、500、1 000 nmol/L)的鱼藤素作用于HeLa细胞24、48和72 h,磺基罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法检测细胞的生存活力:Hoechst 33258染色法观察细胞形态变化;Annexin V-FITC双标法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 鱼藤素对HeLa细胞的生存活力具有明显抑制作用,且呈现出时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测发现鱼藤素对HeLa细胞有诱导凋亡并使细胞周期阻滞在G0/G1期的作用.结论 鱼藤素在体外能有效抑制HeLa细胞的生存活力并诱导其凋亡.
-
十溴联苯醚对宫颈癌细胞体外增殖的影响
目的 探讨十溴联苯醚(PBDE-209)对宫颈癌HeLa细胞体外增殖的影响.方法 观察HeLa细胞经不同浓度PBDE-209暴露后发生的形态学变化,并用MTT方法检测细胞存活率改变,采用免疫荧光化学方法检测细胞增殖核抗原Ki67表达变化,流式细胞术观察HeLa细胞细胞周期的分布变化.结果 随着浓度升高,细胞增殖明显,细胞间隙变小.MTT方法检测发现PBDE-209促进HeLa细胞增殖,细胞增殖率的升高呈时间和浓度依赖效应,200 nmol/L PBDE-209作用24、48和72 h后细胞增殖率分别是阴性对照组的1.2、1.5和1.8倍(P＜0.05).Ki67表达强度随着PBDE-209浓度升高而增强.流式细胞术检测发现200 nmol/L PBDE-209作用72 h后,G0/G1期细胞比例下降了8％,而S期细胞比例升高了7％,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 低浓度PBDE-209暴露使HeLa细胞G0/G1期细胞减少,S期细胞增加,从而促进细胞增殖.
-
苦参碱对宫颈癌HeLa细胞JAK-STAT通路负调控机制研究
目的:观察苦参碱对宫颈癌HeLa细胞中JAK-STAT信号通路的负性调控作用.方法:以不加药细胞为对照组,实验组加入不同浓度苦参碱(0.5、1.0、2.0 mg/mL)作用24 h,Western blot法检测SHP2、SOCS3、PIAS1蛋白表达、Real-Time PCR检测SHP2、SOCS3、PIAS1的mRNA表达.结果:与对照组比较,各给药组细胞SHP2、SOCS3蛋白及mRNA表达显著上调(P＜0.05),其作用呈浓度依赖性;各组PIAS1蛋白及mRNA表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:苦参碱通过上调HeLa细胞中SHP2、SOCS3蛋白及mRNA水平,负性调节JAK-STAT信号通路活性,抑制宫颈癌HeLa细胞增殖.
-
三种重构型人caspase-8促宫颈癌HeLa细胞凋亡的效率
背景与目的:细胞凋亡是一种进化上高度保守的细胞死亡方式,将高活性的促凋亡分子靶向性地导入肿瘤细胞而诱导肿瘤细胞凋亡是肿瘤基因治疗的潜在策略.在证实了大、小亚基次序颠倒的重构型人caspase-8具有持续的诱导宫颈癌细胞HeLa凋亡活性的基础上,本研究旨在分析3种重构型人caspase-8(Casp8CD、Rev8和Rev8L)促HeLa细胞凋亡的效率,探讨重构型人caspase-8作为诱导肿瘤细胞凋亡候选分子的可行性.方法:脂质体法将Casp8CD、Rev8和Rev8L基因的pIRES2-EGFP真核表达载体转染入人HeLa和MCF-7细胞,用荧光显微镜观察目的基因的表达及其促凋亡效应,MTT法和细胞计数法检测3种重构型人caspase-8基因表达产物的促凋亡效率.用生物信息学方法分析Rev8和Rev8L分子大、小亚基间连接肽段的柔性.结果:荧光显微镜观察结果表明,3种重构型人caspase-8基因在HeLa和MCF-7细胞中得到表达,其中Rev8和Rev8L基因的表达能有效促进被转染细胞的凋亡,细胞表现为凋亡性容积减少(AVD).MTT结果显示,Rev8和Rev8L基因转染组在转染后20 h,A 570值即开始明显降低(与对照组相比).细胞计数结果表明,转染后24 h,Casp8CD、Rev8和Rev8L基因转染组的细胞死亡率分别为16.9%、52.3%和47.7%,而转染后48 h各组相应的细胞死亡率分别为12.9%、51.6%和61.2%.生物信息学分析结果显示,Rev8和Rev8L基因表达产物大、小亚基间的连接肽也具有较好的柔性.结论:Rev8和Rev8L分子具有相似的促细胞凋亡效应和效率,而Casp8CD基因的过表达也无明显的促HeLa细胞凋亡活性.
-
Furin抑制剂α1-PDX对宫颈癌HeLa细胞生长、转移和成瘤的影响
目的：研究α1-PDX对宫颈癌细胞株HeLa细胞生长、转移及成瘤的影响并探讨其机制。方法α1-PDX转染HeLa细胞，通过MTT细胞增殖实验，Boyden细胞迁移和侵袭实验观察HeLa细胞的生长,迁移和侵袭能力。采用蛋白印迹法检测细胞Furin及产物膜性Ⅰ型金属蛋白酶（MT1-MMP）蛋白量的变化，荧光酶底物实验检测Furin活性。制作HeLa细胞致瘤裸鼠模型研究肿瘤体内生长。结果细胞增殖实验结果显示，与对照组相比24 hα1-PDX组HeLa细胞体外生长抑制18.4%，差异有统计学意义（P<0.01）；细胞迁移和侵袭实验结果显示，α1-PDX处理组穿过滤膜和基质胶的HeLa细胞数量均明显少于对照组（P<0.01）；HeLa/PDX可显著降低Furin的活性和MTI-MMP的蛋白水平。HeLa/PDX致瘤裸鼠的成瘤机率及皮下肿瘤体积明显小于对照组。结论α1-PDX可有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的生长、转移及成瘤能力，机制可能与降低Furin活性及产物MTI-MMP的表达有关。
-
小鼠微小RNA miR-22真核表达载体的构建及功能初步研究
目的 从基因组DNA扩增miR-22前体对应的基因组片段并克隆到pIRES2-EGFP,构建miR-22的真核表达载体.方法 利用PCR技术从基因组DNA扩增miR-22前体对应的基因组片段,克隆到质粒pUCm-T,测序正确后构建到真核表达载体pIRES2-EGFP中,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定,并进行序列测定.脂质体Lipofectamin 2000法转染Hela细胞后G418筛选获得稳定转染克隆,提取总RNA,通过RT-PCR方法对neo片段进行鉴定,采用Northern blot技术检测miR-22的表达.结果 PCR扩增得到的334 bp片段与预期的miR-22前体对应的基因组片段序列一致;成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/miR-22,测序结果正确.重组质粒转染Hela细胞后,经G418筛选成功获得阳性克隆.Northern blot分析显示miR-22在Hela细胞内高效表达.结论 本实验成功克隆了miR-22的前体对应的基因组片段,构建其真核表达载体,并在Hela细胞内获得高表达,为深入研究微小RNA miR-22的功能奠定了基础.
-
异黄酮类化合物F11抗癌活性的实验研究
目的 研究经结构修饰后的异黄酮类化合物F11是否具较好的体外、体内抗癌活性.方法 采用MTT法,以5,7,4'-三羟基异黄酮(genistein, GEN)作为对照,研究化合物F11对Hela细胞的抗增殖作用;采用荷瘤裸鼠模型,以GEN和环磷酰胺作为对照,研究化合物F11在体抗癌效应.结果 MTT实验结果显示,在相同的作用浓度下,F11处理组Hela细胞形态异常改变,死细胞明显增多,细胞存活率显著低于GEN作用组(P＜0.05).荷瘤动物实验结果表明与GEN相比,F11对Hela细胞裸鼠移植瘤的生长有显著的抑制作用(P＜0.01),效果与环磷酰胺相当,且未观察到毒副反应.结论 异黄酮类化合物经过特定结构修饰,可显著增强其抗癌效应,有值得进一步研究开发的潜在价值.
-
宫颈癌细胞株survivin mRNA表达的分子信标检测
目的:探讨宫颈癌细胞株中survivin mRNA表达分子信标荧光显像的检测.方法:体外培养宫颈癌细胞株HeLa和SiHa,滴加100nM的survivin mRNA分子信标,荧光显微镜下观察荧光强度,并用western blot及免疫组化方法对其表达进行验证.结果:两种Survivin mRNA MB在HeLa和SiHa中观察到了强荧光信号,且SiHa荧光信号强于Hela.结论:分子信标技术可成功检测宫颈癌细胞survivin mRNA的表达,为宫颈癌的早期诊断提供了又一可能的手段.
-
和厚朴酚对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨和厚朴酚抑制人官颈癌Hela细胞增殖及诱导其凋亡的作用.方法 利用MTT检测和厚朴酚在不同浓度和时间下对Hela细胞增殖的影响;用流式细胞术、Hoechst 33258荧光染色和DNA ladder检测和厚朴酚作用下Hela细胞的凋亡.结果 MTT结果显示和厚朴酚可明显抑制Hela细胞的增殖,且抑制率存在剂量和时间依赖性;流式结果表明10μg/mL和20 μg/mL和厚朴酚作用细胞24 h后,凋亡细胞的比例分别为22.5%和62.2%,而对照组为8.7%;和厚朴酚处理过的Hela细胞,经Hoechst 33258染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化,在DNA琼脂糖凝胶上可见特征性的梯状条带.结论 和厚朴酚具有抑制Hela细胞增殖和诱导凋亡的作用.
-
脂质体介导c-myc反义寡核苷酸诱导HeLa细胞凋亡的实验研究
目的体外研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,寻求提高肿瘤细胞放射敏感性的方法.方法免疫组化、流式细胞术、半定量RT-PCR法鉴定ASODN的有效性;Giemsa染色、流式细胞术检测凋亡指数(AI)、DNA ladder检测细胞凋亡.结果转染后,免疫组化结果显示C-MYC蛋白表达降低;半定量RT-PCR结果显示c-myc mRNA表达较空白对照组及阴性对照组明显减弱(P＜0.05).Giemsa染色可见凋亡小体;流式细胞术结果显示转染后凋亡指数为(10.29±0.66)%,转染ASODN(c-myc)联合放射的凋亡指数为(16.83±0.57)%,均明显高于空白对照组(1.79±0.19)%(P＜0.05);DNA ladder呈现具有凋亡特征的梯带.结论本实验所设计的ASODN能有效地抑制c-myc基因的表达;转染ASODN(c-myc)能够显著增加HeLa细胞凋亡,从而提高肿瘤细胞的放射敏感性.
-
转染bcl-2反义寡核苷酸诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的体外实验研究
目的:体外研究bcl-2反义寡核苷酸对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,旨在寻求提高肿瘤细胞放射敏感性的方法.方法:(1)免疫组化、半定量RT-PCR法鉴定ASODN的有效性.(2)Giemsa染色、流式细胞术凋亡指数(AI)、DNA Ladder检测细胞凋亡.结果:(1)转染后,免疫组化结果示Bcl-2蛋白表达降低;半定量RT-PCR结果显示bcl-2 mRNA表达较对照组明显减弱(P＜0.05).(2)转染后,Giemsa染色可见凋亡小体;流式细胞术结果显示转染后AI为:6.60±0.70%,明显高于对照组1.79±0.19%(P＜0.05);DNALadder呈现具有凋亡特征的梯带.结论:(1)本实验所设计的ASODN能有效地抑制bcl-2基因的表达.(2)转染ASODN(bcl-2)能够显著增加Hela细胞凋亡.进而有望通过转染ASODN提高肿瘤细胞的放射敏感性.
-
葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖研究
目的 探讨葛根素(puerarin)对人子宫颈癌细胞株HeLa的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制.方法 MTT法检测不同浓度葛根素(0,12.5,25,50)处理48 h对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞术检测葛根素对HeLa细胞凋亡的影响.Western blotting 检测葛根素对HeLa细胞Wnt,β-catenin ,Bax,Bcl-2,p53和p21表达水平影响.结果 葛根素对 HeLa细胞增殖有明显的抑制作用,呈明显的剂量-效应依赖性;葛根素明显促进HeLa细胞凋亡;Western blotting检测显示,经葛根素处理72 h后,Wnt,β-catenin ,Bcl-2,p53和p21表达明显下降,呈浓度依赖性.结论 葛根素可诱导HeLa细胞增殖抑制和凋亡, 其作用机制与抑制Wnt/β-catenin 信号通路相关.
-
人CCR7真核表达载体构建及对HeLa细胞HLA-I表达的影响
目的: 构建人CCR7真核表达载体, 建立稳定转染CCR7的HeLa细胞株, 初步探讨肿瘤细胞表达HLA-I类分子表达改变及相关机制.方法: 从人脾脏cDNA扩增出CCR7, 装入pDsRed2-N1, 脂质体转染HeLa细胞.CCR7配体CCL21作用后, 流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞表达HLA-I的表达, 萤虫素酶报告基因系统检测NF-κB活化.结果: 经PCR、酶切和测序证实, 含CCR7真核表达载体成功构建.G418筛选后获得稳定表达CCR7蛋白的HeLa细胞.FCM证实HeLa细胞表达HLA-I类分子水平增高, 萤虫素酶报告基因系统证实NF-κB活化明显.结论: 成功构建人CCR7真核表达载体, CCR7促进肿瘤细胞表达HLA-I类分子, 诱导肿瘤细胞NF-κB活化.
-
重构型人caspase-8基因的表达及其对HeLa细胞生长的影响
目的克隆人caspase-8催化结构域基因片段,并将其改建成2种大、小亚基基因次序颠倒的重构型人caspase-8基因,转染HeLa细胞,观察重构型人caspase-8基因的表达及其对HeLa细胞生长的影响.方法用RT-PCR法,克隆人caspase-8催化结构域基因片段,经重组PCR改造,构建大、小亚基基因次序颠倒的重构型人caspase-8基因.将其克隆入绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体pIRES2-EGFP,转染HeLa细胞,用荧光显微镜和倒置显微镜镜观察细胞的形态和结构.结果用RT-PCR法,成功地克隆了人caspase-8催化结构域基因片段,构建了3种重构型人caspase-8基因及其真核表达载体.转染HeLa细胞后,重构型人caspase-8基因的表达可导致HeLa细胞死亡.结论重构型人caspase-8基因在HeLa细胞中的表达可以有效地引起HeLa细胞死亡.
关键词： 重构 人caspase-8 pIRES2-EGFP Hela -
粉防己碱对宫颈癌细胞周期影响及其机制研究
目的:研究粉防己碱对HeLa细胞的抗肿瘤作用,并探讨其分子机制.方法:用MTT法检测粉防己碱对HeLa细胞增殖的影响.流式细胞仪检测细胞周期分布.Western blot 法检测粉防己碱处理前后HeLa细胞中Chk1/2蛋白表达情况.结果:粉防己碱对HeLa细胞的增殖抑制作用呈时间浓度相关性并可引起S期阻滞,粉防己碱作用后HeLa细胞Chk1/2蛋白的表达较对照组减少.可能与细胞周期阻滞的分子机制相关.结论:粉防己碱可以抑制宫颈癌HeLa的增殖,其诱导S期阻滞的分子机制可能与Chk1/2蛋白相关.
-
Survivin短发夹状RNA对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响
目的:观察survivin基因短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响.方法:通过脂质体介导的细胞转染技术将含人survivin基因shRNA的重组真核表达质粒pSilencer2.1-s2转染宫颈癌细胞系HeLa,G418筛选阳性克隆,半定量PCR、Western blot分别检测survivin mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期变化,流式细胞仪、Hoechst染色观察细胞凋亡情况.结果:G418筛选34天后出现阳性克隆,与转染阴性对照质粒(HeLa-NC)、空载质粒(HeLa-U6 neo)及未转染(HeLa)细胞比较,转染pSilencer2.1-s2质粒者survivin mRNA和蛋白表达明显下降,表达抑制率分别为:62.8%和60.1%;细胞增殖受到抑制,高细胞生长抑制率为:(57.8±2.1)%(P<0.05);细胞周期发生显著变化,细胞被阻滞于G0/G1期,占(72.7±3.1)%(P<0.05),G2/M期明显减少,占(5.1±2.9)%(P<0.05);细胞凋亡率为:(29.2±1.4)%,明显升高(P<0.05).结论:Survivin基因shRNA可通过下调HeLa细胞中survivin的表达,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡.
-
芹菜素通过 PI3K/Akt 信号通路诱导 Hela 细胞凋亡
目的：初探芹菜素（Apigenin）对人宫颈癌细胞 Hela 的抑制机制。方法：MTT 法检测 Apigenin 对 Hela细胞的增殖抑制作用，实时无标记细胞分析技术测量 Apigenin 对 Hela 细胞生长曲线的影响。Western blot 检测 Apigenin 对 Hela 细胞中 PI3K/ Akt 信号通路的影响。结果：与阴性对照组相比，Apigenin 能显著抑制 Hela细胞的增殖（P <0.01），当药物浓度为20μmol/ L 时抑制率达到（80.5±5.3）%，IC50值为（6.8±0.8）μmol/ L。细胞生长曲线反映，Apigenin 减缓了 Hela 细胞的增殖，对数期细胞经20μmol/ L Apigenin 处理后，细胞数量迅速下降。Western blot 结果显示，Apigenin 能显著抵抗 IGF -1引起的 Akt 激活但并不能降低 PI3K 的磷酸化水平。同时 Apigenin 还能降低 Bcl -2/ Bax 比例，提高 Caspase -3活性，启动细胞线粒体凋亡。结论：Apigenin可以通过 PI3K/ Akt 信号通路促进 Hela 细胞的凋亡。
-
流式细胞术检测九节龙皂甙对Hela细胞凋亡的诱导作用
0 引言 细胞凋亡(Apoptosis)是一种生理性细胞程序化死亡，与肿瘤的发生、发展密切相关，已成为当前肿瘤研究的新热点. 九节龙皂甙是从川产九节龙全草中提出的单体[1]，我们观察九节龙皂甙诱导Hela细胞凋亡，采用流式细胞术(flow cytometry, FCM)进行分析，结果如下：1 材料和方法1.1 细胞系及细胞培养 人宫颈癌细胞株(Hela)为上皮样癌细胞，本校403研究所 提供. 细胞培养方法见参考文献[2].1.2 细胞凋亡的诱导和分析 实验组分别以1.56～50.0 μg*mL-1 九节龙皂甙(本校药物研究所提供)作用Hela细胞(106*mL-1) 0～72 h，未经过药物处理的细胞为阴性对照 组，加入等量培养液（100 mL*L-1胎牛血清的RPMI 1640培养液）中细胞常规培养，按作 用不同时间，分别收集细胞，经PBS洗涤2次，加入-4℃ 700 mL*L-1乙醇固定过夜， 离心收集细胞，再经PBS洗涤后，依次加入膜穿孔剂，溴化乙锭(PI)和Rnase 4℃染色30 min，350 目筛网过滤，Epics-profileⅡ流式细胞仪(美国Coulter公司)上进行DNA含量及细胞周期分析.
-
小鼠肌肉组织特异性微小RNA miR-133a腺病毒表达载体的构建及表达
目的 制备小鼠肌肉组织特异性微小RNA miR-133a的腺病毒表达载体并观察其在HeLa细胞的表达.方法 利用PCR技术从小鼠基因组DNA扩增miR-133a前体对应的基因组片段,克隆到质粒pAdTrack-CMV,而后以同源重组的形式插入到腺病毒表达载体,由人胚肾293细胞包装,获得有感染能力的重组腺病毒颗粒.重组腺病毒感染HeLa细胞后,利用Northern blot检测miR-133a成熟分子的表达.结果 ①成功构建穿梭质粒pAdTrack-miR-133a;②成功构建重组腺病毒质粒pAdeasy-miR-133a;③293细胞包装获得有感染能力的重组腺病毒;④转染的HeLa细胞能够高效表达成熟miR-133a.结论 构建了小鼠miR-133a的腺病毒表达载体,证实其转染HeLa后的表达,为后续研究miR-133a的功能打下了基础.
